PROCESE BIOTEHNOLOGICE LA NIVEL MICROPILOT

4.1. Bioreactorul de laborator: descriere şi mod de operare

Procesul de bază în biotehnologie este procesul biologic (bioproces), iar spaţiul în care se
desfăşoară acesta se numeşte bioreactor. În bioreactor, transformarea materiei prime este
realizată de către sistemul enzimatic al microorganismelor vii, în condiţii optime de dezvoltare
(pH, temperatură, concentraţia substratului, a oxigenului, agitare) pentru a sintetiza produsul
finit.
În prezent există o mare diversitate de bioreactoare, care diferă prin sistemul de operare (în
regim discontinuu, semicontinuu sau continuu), tipul materiei prime şi felul produselor ce
urmează a fi sintetizate. Alegerea bioreactorului potrivit pentru un anumit proces tehnologic se
realizează în funcţie de o serie de factori predeterminanţi, cum ar fi:
- natura microorganismului implicat;
- proprietăţile mediului de cultură;
- parametrii biochimici ai procesului;
- amplasamentul bioreactorului.

Descrierea bioreactorului de laborator tip BIOFOR 1

Caracteristici tehnice ale bioreactorului:
- capacitatea vasului: - capacitatea totală 7 l;
- capacitatea utilă 4 l;
- masa bioreactorului: 80 kg;
- temperatura de sterilizare: 121oC;
- presiunea de sterilizare: 2 bari;
- temperatura de lucru: 20 – 40oC;
- presiunea de lucru: 1,2 - 1,5 bari;
- debit de aer: 240 Nl aer/oră*;
- turaţie: 100-600 rotaţii/min.1
Bioreactorul de laborator BIOFOR 1 are o construcţie modulară, fiind format din:
- corpul bioreactorului (vasul de biosinteză);
- modulul suport (figura 4.1).

Corpul bioreactorului (1) este alcătuit din două tronsoane, unul din sticlă şi celălalt din
metal. Pe capacul aparatului se găsesc montate mai multe buşoane (2) care vor fi utilizate: primul
pentru umplere şi celelalte două pentru traductorii de pH şi oxigen (3, 4). Tot pe capacul
bioreactorului se mai află montate şase racorduri: două pentru inocul, unul pentru ieşirea aerului,
altul pentru prelevare probe (6) şi restul pentru traductorii de temperatură şi nivel. În centrul
capacului este montat, printr-o cutie de etanşare, un racord de aerare (7) care ajunge la
aproximativ 3 cm de baza vasului. Pe suprafaţa interioară a vasului se află montat un sistem de
şicane (8). Corpul de biosinteză este aşezat pe modulul suport (9), format dintr-un cadru metalic
pe care sunt dispuse sistemele de măsură şi reglaj, sistemul de agitare şi motorul electric.
Temperatura mediului de biosinteză este controlată şi reglată cu ajutorul unui traductor de
temperatură (10), un sistem de

*Nl aer = Normal litri aer = litri aer / 5 litri mediu de fermentaţie.
termostatare şi o rezistenţă electrică (11). Agitatorul acţionat magentic se găseşte la partea
inferioară a vasului (12).

12

Figura 4.1. Reprezentarea schematică a bioreactorului Biofor 1.

Bioreactorul se montează pe o masă special amenajată în laborator şi se racordează la

compresor. Încărcătura de germeni din aerul folosit în procesele aerobe este redusă într-o primă
fază prin comprimarea şi încălzirea aerului, iar ulterior prin filtrare.

Modul de operare al bioreactorului BIOFOR 1

Bioreactorul de laborator BIOFOR 1 face parte din categoria reactoarelor biologice, în care
se desfăşoară procese de fermentaţie, în sistem discontinuu (“batch”).
Înainte de utilizarea bioreactorului într-un proces de biosinteză se efectuează proba de mers
în gol şi proba de mers în sarcină, pentru a verifica modul de funcţionare a sistemului
(funcţionare fără zgomote sau frecări, care ar putea defecta sistemul de agitare).
Proba de mers în gol are loc timp de aproximativ 10 minute şi dacă totul decurge normal este
urmată de proba de mers în sarcină. În acest caz se va umple vasul reactorului cu apă, procedând
din nou la pornirea agitării, la turaţia aleasă. Trecerea de la o turaţie la altă turaţie superioară se
va face progresiv pentru a nu deregla sistemul de agitare. Concomitent cu agitarea se va porni şi
rezistenţa electrică şi se va verifica termostatarea lichidului din vas la temperatura aleasă. După
circa 20 de minute, dacă nu s-a constatat nici o neregulă în funcţionare, instalaţia se va opri şi se
va pregăti pentru efectuarea unei şarje de biosinteză.
 Figura 4.2. Bioreactorul de laborator tip Biofor 1.

Înainte de efectuarea unei şarje de biosinteză se procedează la sterilizarea bioreactorului gol

şi a anexelor acestuia.
Vasul bioreactorului se demontează şi se sterilizează gol în autoclav, la 121 oC, timp de 20
minute. Împreună cu bioreactorul se sterilizează şi filtrul de aer. De asemenea, se sterilizează cu
abur instalaţia de aer.
După răcire, vasul de fermentaţie se umple cu mediu de biosinteză şi se sterilizează prin
autoclavare la temperatura şi timpul indicat în tehnologia adoptată. La finalul autoclavării, după
răcirea mediului la temperatura de lucru, se va verifica eficienţa sterilizării prin prelevare de
probe (în mod aseptic) şi însămânţarea acestora pe mediu de cultură (geloză simplă, YPG).
În continuare, vasul de fermentaţie al bioreactorului răcit la temperatura de 20 – 40oC se
aşează pe masa de laborator şi se realizează montajul acestuia în modulul suport, asigurând o
bună funcţionare a sistemului.
După realizarea acestor operaţii pregătitoare procesul tehnologic poate fi iniţiat prin
inocularea microorganismului specific tehnologiei şi fixarea parametrilor de lucru: aerare,
termostatare, debit de aer.
La încheierea procesului se va decupla instalaţia şi se va proceda la descărcarea, spălarea şi
igienizarea utilajului. Vasul de fermentaţie spălat şi igienizat se va şterge cu tifon uscat, se vor
curăţa toate racordurile şi se vor unge cu vaselină siliconică suprafeţele de etanşare, pregătind
astfel vasul pentru un nou experiment.
Figura 4.3. Bioreactorul de laborator cu monitorizare și control al proceselor asistate de
computer
 Test 8  
1. Precizaţi factorii de care trebuie să se ţină seama la alegerea bioreactorului pentru un
proces tehnologic de biosinteză.

2. Descrieţi bioreactorul de laborator tip BIOFOR 1.

3. Explicaţi de ce înainte de utilizarea bioreactorului se efectuează proba de mers în gol şi

proba
de mers în sarcină.

4. Completaţi spaţiile libere din frazele următoare:

a) Capacitatea utilă a bioreactorului BIOFOR 1 este................................;

b) Proba de mers în gol se efectuează timp de.....................şi dacă totul a decurs normal se va
trece la..........................................................................., care durează
………………………....…...;

c) Vasul bioreactorului se sterilizează gol deoarece

………………………….......................…………………………..……………..…………………
…………….......................…………………………………………..……………………………...
....................…………………………..……………..……………………………….......................
………….………………..……………..………………………………........................

5. Raportaţi debitul de aer al bioreactorului Biofor 1 în litri aer / litri mediu / minut.