Initierea unei culturi de calus

Calusul este un tesut vegetal nediferentiat, dezvoltat in cultura in vitro, la nivelul

explantelor ce contin celule definitive. Intrarea acestor celule in diviziune activa este indusa de
prezenta auxinelor in mediul de cultura, cum sunt: acidul indolil acetic (AIA), acidul 2-4
diclorfenoxiacetic (2,4-D), acidul naftalen acetic (ANA), acidul indolil butiric (IBA) si altele.
Auxinele determina fenomenul dediferentierii celulare, adica revenirea celulelor definitive la
starea lor meristematica – de diviziune activa.
Ca explante se utilizeaza cotiledoane si hipocotil de la plantule rezultate prin germinarea
aseptica a semintelor, dar si fragmente foliare, petiol, internodii caulinare, uneori radacini, toate
cultivate pe mediul solid, aditionat cu hormoni auxinici.

Mod de lucru

Se utilizeaza mediul Murashige-Skoog solidificat cu agar 7 g/l si autoclavat. In stare

lichefiata, mediul se aditioneaza cu 2 mg/l acid indolil acetic (AIA), sau aceeasi cantitate de acid
2-4 diclorfenoxiacetic (2,4-D) si se repartizeaza in cutii Petri.
Materialul vegetal – cotiledoane de floarea soarelui, recoltate de la plantule germinate
steril.
Se recolteaza steril (cu pensa si bisturiu incalzite la rosu in flacara becului de gaz si
racite) cotiledoanele de la plantulele germinate anterior pe mediu artificial de cultura, in conditii
sterile. Se taie in bucati mici intr-o cutie Petri si se inoculeaza pe mediul solidificat, repartizat in
cutiile Petri fragmente cotiledonare de 3-5 mm, folosind pense si bisturie sterilizate la flacara
becului de gaz si racite. Operatiile de desfasoara in hota cu flux de aer steril – aparatul care
realizeaza conditiile aseptice pe tot parcursul operatiilor de lucru.
Cultivarea inoculilor
Inoculii obtinuti se cultiva in camera de crestere, la temperatura de 25˚C si fotoperioada
16 ore lumina / 8 ore intuneric. Se urmareste aparitia tesutului nediferentiat, calusul.
Ulterior, dupa ce calusul atinge dimensiunea de 2-3 cm, se recolteaza steril si se initiaza
cultura proaspata pentru multiplicare tisulara sau pentru initierea culturii de celule in mediu
lichid.

Lucrul la hota cu flux de aer steril

Camera de crestere a inoculilor vegetali

Calus (tesut nediferentiat) dezvoltat din cotiledoane