Aplicatii practice

Cultivarea si identificarea
micobacteriilor
Daniela Homorodean
Cultura crescuta pe mediul Lowenstein Jensen, citita la 21 zile

Care sunt pasii de urmat?

 Raspuns
• Descrierea aspectului macroscopic al coloniilor in caietul de lucru

• Exprimarea semicantitativa a cresterii

• Frotiu colorat Ziehl-Neelsen- descrierea morfologiei microscopice, asezarea BAAR

• BAAR prezenti- obligatoriu test imunocromatografic rapid AgMPT64

• Finalizarea rezultatului: Complex M. tuberculosis / Alte micobacterii.

• Intrebare

1. Descrieti morfologia macroscopica a

coloniilor pe mediul LJ care contine glicerol

2. Descrieti morfologia macroscopica culturii

pozitive in mediul lichid
 R1: Morfologia macroscopica a coloniilor pe
mediul LJ care contine glicerol
• Colonii rugoase (R), 1-4 mm diametru, crem-gălbui conopidiforme,
uscate, cu margini bine definite, crenelate, uşor bombate sau uneori
plate (M. tuberculosis, M kansasii). Coloniile tinere, pe mediul bine
hidratat pot fi netede, bombate.
• Colonii netede (S), de 1-2 mm diametru, alb-gălbui (M bovis, M
canetti, M avium, M intracellulare....)
• Culoarea mediului nu este modificată sau cel mult pare discret
decolorata.
• Daca mediul este intens decolorat sau verde-albastrui se va suspecta
contaminare cu alti microbi; se face frotiu pentru verificare. Nu se
face frotiu dacă mediul este lichefiat.
 R2: Morfologia macroscopică a coloniilor
crescute în mediul lichid Middlebrook 7H9.

• mediul ramane limpede si are un depozit fin la fundul tubului;

dupa agitarea tubului lichidul are suspensii granulare de
dimensiuni diferite.

• mediul este tulbure uniform sau se tulbura după agitare.

• Intrebare:

1. Descrieti morfologia microscopica a BAAR in

preparatul microscopic
 R: Morfologia microscopică a coloniilor, color ZN
La prepararea frotiurilor se apreciaza modul de emulsionare; grunjoasă-poate sugera
MT; uniformă-poate sugera NTM sau alţi microbi.

Descrie în caietul de lucru:

• aşezarea BAAR: corzi-serpentine, cu număr mic de BAAR izolaţi (PC); grămezi
de bacili, respectiv bacili aglomeraţi în mai multe zone, fără să se poată
vedea continuitatea corzilor, cu puţini BAAR izolati (PG); BAAR distribuiti
nesistematizat, uniform (PN); PC laxe.
• lungimea BAAR: între 3-6 μm; mai lungi de 7 μm. Verifica daca sunt si
bacilli ramificaţi; de 2 μm sau forme cocoide.
• tinctorialitatea : BAAR coloraţi uniform; BAAR coloraţi granular; BAAR
incomplet coloraţi, albaştri- cianofili.
• Prezenţa altor microbi, singuri sau în asociere cu BAAR.
Cum interpratam Testul imunocromatografic pentru
identificarea complexului M.tuberculosis în cultura ?
Raspuns

• Test AgMPT64 pozitiv

• Test AgMPT64 negativ

Intrebare: Care este conduita?

• Test AgMPT64 pozitiv

• Test AgMPT64 negativ

 RASPUNS:

1. Rezultat pozitiv Ag MPT64 se finalizeaza si se valideaza cultura

M tuberculosis pozitiv

2. Culturile cu rezultat negativ Ag MPT64 se trimit imediat la LNR

pentru identificare de specie.

Se elibereaza rezultat Pozitiv alte micobacterii. Cultura trimisa la LNR

pentru dentificare de specie.
Cultura crescuta pe mediul Lowenstein Jensen, citita la 21 zile

Care dintre culturi considerati ca ar putea fi MTB?

RASPUNS

M tb M tb M tb M abscessus M kansasii M fortuitum M tb