METODE DE BIOLOGIE

MOLECULARA FOLOSITE IN
ROMANIA PENTRU DIAGNOSTICUL
TUBERCULOZEI
LPA
Daniela Homorodean
Întrebări la începutul sesiunii de curs:
Care din următoarele afirmații privind metodele de biologie
moleculara nu este adevărată?

1. Metodele folosite in Romania pot identifica doar ADN-ul Complexului MTB.

2. Sunt disponibile in reteaua de lab teste care permit identificarea simultana a
speciilor si a rezistentei.
3. LPA sunt teste care presupun hibridizarea AND pe benzi de nitroceluloza.
 Planul prezentarii

Metodele de biologie moleculara folosite in Romania

Principiul LPA

Cerinte de organizare a spatiului pentru LPA

Etapele efectuarii LPA, rezultate, interpretare, erori si evitarea lor

Eliberarea rezultatelor
 Accesul la metodele de diagnostic modern
Cadrul legislativ

1. Ghid metodologic de implementare a PNPSCT. Ord. M. 1171/21.09.2015

2. Strategia Naţională de Control al Tuberculozei în România 2015-2020.

H.G. 121/ 25.02. 2015.

Proiecte

1. “Imbunatatirea starii de sanatate a populatiei din Romania prin cresterea

capacitatii de control a Tuberculozei”. Programul RO 19.01 finantat din
Mecanismului Financiar Norvegian 2009-2014.

2. GFATM
 Indicatori de performanta pentru lab TB
•ABG: 80% din cazuri in primele 28 zile de la recoltarea sputei

•ABG- repetata la C+ la 4 luni de la Dg

•Acces la metodele moleculare pt detectarea CMTB

•Acces la metodele moleculare pt detectarea RMPr, INHr

 Testele de biologie moleculara

• Identifica mutatiile din genomul MTB asociate cu

rezistenta la diferite substante anti-TB
 AVANTAJELE MBM
• Managementul programatic al TB rezistente pt rapiditate si
standardizarea testelor

• Primul pas in identificarea rapida a TB MDR

• Aprobate si recomandate de OMS, care a emis ghiduri de

introducere la nivel national.
 Metode de biologie moleculara

• LPA : hibridizare liniara- GenoType (HAIN-MTBDRplus, HAIN-

MTBDRsl)

• RT-PCR : amplificare in lant (PCR, PCR in timp real) –

GeneXpert/ ULTRA

• reduc timpul de confirmare a TB sau/si a TB MDR la 24-48

de ore.
Aprobate de OMS in 2008 pt detectarea MDR la cazurile M+ sau doar C+

Nu inlocuiesc metodele actuale standardizate pt detectarea CMTB si a

profilului de rezistenta, doar le completeaza.

Utile doar pentru CN

GenoType- necesare amenajari si instruiri speciale.

Sunt costisitoare.
 GenoType - LPA
Tipuri de kituri disponibile in Romania

• Detectare simultana CMTB resist RMP, INH/ Agl-FQ (LNR)

• Identifica specii din Complexul MTBC (LNR)
• Identifica specii NTM (CM, AS)/ indirect- direct (LNR)
• Identifica specii NTM si markeri de rezistenta la macrolide si
aminoglicozide la specii implicate in patologie (LNR)
 GenoType MTBDR- LPA
1. GenoType MTBDRplus (Hain Lifescience GmbH,
Nehren, Germany), aplicabil culturilor sau produselor
patologice
• detecteaza simultan CMTB, INHr si RMPr

2. GenoType MTBDRsl (2009) direct/ indirect

• detecteaza CMTB, rezistenta la Q, AG- in culturi sau
produse M+
• detecteaza TB-XDR
 LPAs
Dezavantaje, limitari

• LPA - test direct la CN si test indirect (cultura) pt monitorizare

•
• Necesare conditii de biosiguranta nivel 3

• Necesare amenajari: cel putin 3 incaperi diferite

• Personal instruit
Extractie- Denaturare
Amplificare- Hibridizare
Preparare amestec nucleotide- PNM
Limitari

• Detecteaza doar MDR/XDR, necesara ABG conventionala pt profilul

complet de rezistenta.

• Cultura conventionala este necesara pentru monitorizarea tratamentului

cazurilor MDR.

• Potrivite pt folosire la nivel central si regional, cu potential de

descentralizare, cu asigurarea infrastructurii corespunzatoare.
GenoType MTBDRplus
Rezultat MDR-TB, MTBDRplus
 GenoType NTM-DR
• Detect. rezistenta la AGL si macrolide a culturilor speciilor
NTM (5 h)
• Specii NTM:
• M avium
• M intracellulare
• M chimaera
• M chelonae
• M abscessus subsp abscessus
• M abscessus subsp massiliense
• M abscessus subsp bolletii
• Rezistenta intrinseca / rezistenta dobandita
• Diferentiaza M intracellulare de M chimaera
ASIGURAEA CALITATII

CIC– obligatoriu pentru fiecare kit nou,

- LPA- fiecare zi de lucru
- Xpert- kit pentru CIC

CEC national
- obligatoriu pentru toate lab care lucreaza testele
- completeaza rezultatele pentru CEC la culturi si ABG

CEC, international – efectuat de LSR pentru LNR

IMBUNATATIREA CALITATII