Tehnici electrofiziologice

de studiere a bazelor
moleculare ale
bioelectricitatii

Metoda potenialului fixat

Metoda

permite
diferenierea
componentelor ionice ale curentului
transmembranar,
adic
determinarea selectiv a fiecrui tip
de curent ionic.

Cnd
axonul
unui
neuron
este
stimulat electric la unul din capete,
apar urmtoarele componente ale
curentului ionic:
1.Curenii
axiali
sau
longitudinali
datorai propagrii impulsului nervos:
a-curentul axial total n exteriorul
neuronului; I
0
b-curentul axial total n interiorul
neuronului; I
i

Notam ca: I 0 I i
2. Curentul transmembranar pe unitate
de lungime provenit din proprietile
intrinseci
ale
membranei,
cu
urmtoarele componente:
im
a-Componenta capacitiv, pe unitatea
de lungime;
b-Componenta ionic pe unitatea de i
mC
lungime

i mI

Componenta ionic pe unitatea

de lungime include:
(1)curentul de sodiu pe
i Na
unitatea de lungime;
(2)curentul de potasiu pe
unitatea de lungime, ;
iK
(3) curentul de clor (sau
curenii de scurgere "leak" n lb. englez), pe i L
unitatea de lungime.

 Cel

mai adesea intereseaz

curentul de sodiu sau cel de
potasiu.
Cum ne intereseaz curenii
ionici n timpul propagrii
impulsului nervos, rezistena
rm
membranei,
nu este
constant.

Curentul total satisface o ecuaie

care se poate scrie n forma
2
Vm

Vm
1
i m i m1 c m

t
ri r0 x 2
unde ri
i r0 sunt rezistenele
intracelular i respectiv interstiial pe
unitatea cde
m lungime a axonului ,
Vm
este capacitatea electric
pe unitatea de
x potenialul membranei,
lungime, este
t
este distana iar
este timpul.

 Prin

Vm ( t ) i a vitezei de
msurarea lui
propagare, , putem obine i deci i
x /ecuaia
)
valoarea lui Vm ( tdin
de mai sus.
Pentru
o
bun
acuratee
a
msurtorilor
se
procedeaz
la
eliminarea
curenilor
axiali.
Prin
convenie, potenialul de membran
este
diferena
dintre
potenialul
electric la interiorul i cel de la
exteriorul membranei iar sensul pozitiv
al curentului este de la interior la
exterior.

Fixarea spaial (space

clamp)
Cu

ajutorul unei bune instrumentaii

este posibil s stimulm neuronul
simultan
pe
ntreaga
lungime
a
preparatului.
Astfel, potenialul de membran este
identic pe ntreaga lungime a neuronului
la fiecare moment de timp, dac se
insereaz un electrod fin de stimulare n
lungul axului ntregului preparat, n timp
ce un electrod cilindric de aceeai
lungime este n exteriorul preparatului.

 Rezult

c potenialul poate
varia numai pe direcia radial i
curenii ionici apar tot numai dea lungul razei.
Mai
mult,
toate
elementele
membranei
reacioneaz
sincronizat, membrana axonal
comportndu-se ca un ntreg.

 Curentul

membranar se supune

ecuaiei:

Vm
i m i m1 c m
t

Experimentul space clamp. Principiul metodei

(stnga). Modelul electric al membranei axonale
n experimentul space clamp (dreapta). 1membrana,
2-axoplasma,
3-soluie
fiziologic
salin, 4-electrod intern, 5- incinta experimental
(dup Malmivuo i Plonsey, 1995)

Potenialul fixat
(voltage clamp)
Pentru

nlturarea componentei
capacitive se realizeaz fixarea valorii
potenialului electric al membranei.
Daca V=const avem anulata variatia
sa temporala adica derivata este zero.
Astfel rezulta: i
i
m

m1

adic ntreg curentul

transmembranar este dat de
curenii ionici.

n figura anexata se vede

schema
montajului
experimental adecvat.
O treapt dorit de voltaj
este aplicat ntre cei doi
electrozi i se msoar
apoi
curentul
dintre
acetia

Experimentul voltage clamp: (a) principiul

metodei (b) modelul electric al
membranei axonale n experimentul
voltage clamp (dup Malmivuo i Plonsey,

Montajul real cu care s-au efectuat

primele experimente voltage clamp
(modificat,
dup
Malmivuo
i
Plonsey, 1995)