METODE DE STERILIZARE

SI DEZINFECTIE

Tehnici elementare de lucru

in laboratorul de microbiologie
DEFINITII
Sterilizarea: metode de distrugere sau indepartare a tuturor
microoorganismelor, inclusiv a endosporilor bacterieni, a
micobacteriilor, a virusurilor neanvelopate si a fungilor.

Dezinfectia: distrugerea formelor vegetative ale microorganismelor,

dar nu obligatoriu a sporilor, a micobacteriilor si a virusurilor nude.

Prezervarea: prevenirea multiplicarii unor microorganisme in produse

farmaceutice, alimenatre, etc.

Asepsia: ansamblul masurilor prin care prevenim contaminarea unor

materiale si organisme, in primul rand omul, cu microorganisme.

Antisepsia: ansamblul procedeelor utilizate la nivelul mucoaselor

pentru a lupta contra unei infectii microbiene de suprafata.
 Factori care influenteaza eficienta
antimicrobiana
Intensitatea si timpul de actiune: timpul de omorare a
microorganismelor variaza invers proportional cu intensitatea
agentilor antimicrobieni.

Influenta mediului: substantele organice, turbiditatea, duritatea apei,

pH-ul.

Gradul de rezistenta a microorganismelor: diferente intre specii

sau in cadrul aceleasi specii.

Concentratia microorganismelor: pentru aceeasi intensitate a

agentului, timpul de omorare creste proportional cu conc. acestora
prin efectul populational.
 AGENTI FIZICI

Caldura
Uscata (deshidratare/oxidare)
Umeda (coagularea proteinelor)
Frigul
Desicarea
Presiunea osmotica
Radiatiile
Filtrarea
Caldura uscata
Incalzirea la rosu (ansa
bacteriologica)

Flambarea (trecerea prin flacara)

Incinerarea (arderea cu reducere

la cenusa)

Sterilizarea prin aer cald (Etuva:

160C 2h/180C 1h)
Indicaii: sticlrie de laborator,
vase din porelan, instrumentar
chirurgical metalic, pulberi inerte
termostabile, substante uleioase
Controlul eficientei sterilizarii

Indicatori chimici

Indicatori biologici
benzi de hartie de filtru
B.subtilis
Caldura umeda

Temperaturi <100C
- 63C/30min
- 72C/15sec
pasteurizarea
Temperaturi = 100C
fierberea
tyndalizarea
Temperaturi >100C
autoclavarea
 Autoclavarea
Sterilizare prin vapori sub presiune
Mecanism de aciune:
- Denaturarea proteinelor
- t vaporilor de ap ntr-un spaiu
nchis creste proporional cu
presiunea:
0,5 atm 115C
1 atm 121C
2 atm 134C
- Indicaii: sterilizarea materialului
infecios din laborator, medii de
cultur termostabile, instrumente
chirurgicale, halate, cmpuri
operatorii, etc.
- Contraindicaii: material plastic,
piele, blan
Controlul eficientei sterilizarii
Indicatori chimici Indicatori biologici
mediu de cultura inclus, cu
B.stearothermophilus
ATCC 7953
Frigul
Refrigerarea

Congelarea

Socul rece
Desicarea Presiunea osmotica

Liofilizarea
Presiunea osmotica
 Filtrarea

Trecerea unui fluid printr-un corp

poros (10.22 0,025m)

Membrane: acetat de celuloza (filtre

Millipore), nitrat celuloz,
policarbonat, teflon

Indicatii: sterilizarea lichidelor

termolabile, sterilizarea aerului
pentru crearea unui mediu aseptic in
boxe cu flux de aer laminar HEPA
(High-efficiency particulate air)
Radiatiile
R. ionizante X,
Ionizeaza apa si
distrug ADN-ul celular
Penetraie mare
Indicatii:seringi plastic, manusi
chirurgicale, materiale de sutura,
catetere

R. neionizante UV
Afecteaza replicarea
ADN-ului celular
Penetratie slaba (260nm)
Lampa germicid: sterilizarea
suprafeelor de lucru
netede, curate, sanitizarea
saloanelor, slilor de operaie
METODE CHIMICE

Antiseptice si dezinfectante
Diferenta:
Antiseptic: se foloseste pe
tegumente si mucoase
Dezinfectant: se foloseste pe
suprafete inerte
Diferentierea:
curat si murdar
Curat: lipsa substantelor organice
(spalare cu apa si sapun)
Murdar: prezenta substantelor
organice
Dezinfectante uzuale in laboratorul clinic
DEZINFECTANTE INDICATII
HIPOCLORITI Dezinfectia suprafetelor, borcane,
pipete
DERIVATI FENOLICI Dezinfectia suprafetelor, borcane,
pipete
FORMALDEHIDA Dezinfectia suprafetelor, boxelor
(f.gaz); inactivare de suspensii
bacteriene (solutie)
GLUTARALDEHIDA Dezinfectia suprafetelor

DETERGENTI CATIONICI Spalarea si dezinfectia

suprafetelor
IODOFORI Sol. dezinfectante pentru pipete
 DEZINFECTIA

TESTE DE EFICIENTA

Coeficientul fenolic: cu cat este mai activ un compus fenolic in

comparatie cu fenolul pur

Test Rideal-Walker (cu substante pure)

Test Chick-Martin (in prezenta de substante organice)
Coef.CM<Coef.RW
 Circuitul materialelor in laborator
Este interzis
ca materialele contaminate
sa paraseasca laboratorul sau sa patrunda in ariile cu activitatecurata

Colectare materialele contaminate

(conteinere mari)

Colectare materialelor contaminate

intepatoare
(conteinere mici)

Recipiente cu solutii dezinfectante

 Tehnici elementare de lucru

Prelevatele patologice pot fi insamantate

Direct: sange, exudate seroase, puroi(omogene); fecale

(emulsionabile)

Dupa o prealabila prelucrare:

- Decontaminare: spalare cu solutie salina izotona (sputa, fecale),
tratarea cu hidroxid de sodiu (sputa)
- Concentrare: centrifugarea produselor fluide sau omogenizate
- Omogenizare: sputei cu N-acetil-cisteina
Tehnici elementare de lucru
Epuizarea inoculului cu ansa
pe placi cu mediu agarizat
Obtinerea culturii pure
 Tehnici elementare de lucru
Obtinerea de Dispersia
colonii izolate
Tehnici elementare de lucru

Insamantare automata
 Tehnici elementare de lucru

Insamantarea in medii lichide

Insamantarea cu firul drept a

coloanei de agar nutritiv moale
 Tehnici elementare de lucru

Insamantarea pe medii solidificate

in coloana dreapta si panta

Insamantarea cu firul drept a

coloanei de agar nutritiv moale
Tehnici elementare de lucru