Testele de toxicitate

Laborator 3
Testele de toxicitate se realizeaz,
n general, prin utilizarea animalelor de
experien (in vivo), teste de scurt
durat (in vitro) i studii
epidemiologice.
 Teste de toxicitate in vivo
GRUPE (LOTURI) de animale sntoase,
adpostite n condiii adecvate, sunt expuse
la doze cresctoare ale substanei de testat;
 ANIMALELE cele mai utilizate sunt obolanii, cobaii, iepurii i hamsterii. n
unele cazuri se mai utilizeaz cini, porci i primate non-umane sau alte specii.

selecia speciei variaz n funcie de testul de toxicitate ce urmeaz s fie

realizat. n unele cazuri nu este posibil utilizarea celui mai potrivit animal
pentru testare, datorit cheltuielilor crescute cu ntreinerea. De exemplu,
utilizarea maimuelor i a cinilor este restricionat la cazuri speciale, dei ei
reprezint speciile care reacioneaz cel mai asemntor cu omul.
 roztoarele i iepurii sunt speciile de
laborator cele mai utilizate deoarece:
sunt usor de gsit,
costurile cu ntreinerea i hrana sunt reduse,
rezultatele obinute pn n prezent dovedesc
c sunt sigure (demne de ncredere).
animalele trebuie:
s fie stabile genetic,
s provin din aceeai su i specie,
s aib vrst i greutate apropiat.
raia administrat animalelor trebuie:
s ndeplineasc toate cerinele nutriionale,
s fie fr impuriti chimice toxice care ar
putea influena rezultatul testului.
 LOTUL MARTOR:
i se administreaz numai substane n care se
ncorporeaz substana de testat sau nu i se
administreaz nimic.
testele de laborator se realizeaz att asupra
animalelor tratate, ct i a celor martor, fcndu-
se consemnri detaliate pentru fiecare animal.
dup realizarea integral a testului, toate animalele,
inclusiv cele martor constituie subiectul unor
examinri patologice, iar datele obinute sunt
interpretate statistic.

n general, testele de toxicitate in

vivo pot fi clasificate n teste de
toxicitate ACUT,
SUBACUT/SUBCRONIC i
 TESTELE DE TOXICITATE ACUT
(TTA)

sunt, n general, primele teste realizate,

ofer date referitoare la toxicitatea care este
probabil s se produc dup:
o singur expunere
expunere de scurt durat.
cel mai frecvent TTA este determinarea DL 50 (cantitatea
minim dintr-o substan sau medicament care provoac moarte a 50% din
).
animalele de experien

semnele aprute dup primele 24 ore pot oferi

indicaii despre efectul substanei n doze mici,
atunci cnd se administreaz o perioad mai lung
de timp.
Parametrii de baz ai TTA:
specia:
obolanii pt.
testele orale i
prin inhalare
iepurii pt. teste dermice
vrsta: aduli tineri
nr. animale: 5 / sex / nivel de doz
dozare:
3 nivele de doze;
expunerile se realizeaz la doze unice sau doze
fracionate
pn la 24 h pt studiile orale sau dermice,
4 h n studiile prin inhalare.
perioada de observaie: 14 zile.
 ca metod de administrare, se alege calea de
expunere pe care omul ar fi expus.
dac expunerea este oral, compusul trebuie
administrat prin gavaj (direct n stomac printr-un tub) mai
degrab dect adm. prin mixare n hran.
n unele cazuri s-a obs c adm. substanei prin
hran a crescut toxicitatea compusului.
n general, toxicitatea compusului este mai mare
cnd compusul este adm. prin gavaj la animalele
nfometate.
 TESTELE DE TOXICITATE
SUBACUTE/SUBCRONICE (TTSA/TTSC)
Toxicitatea acut i DL50, n particular, nu sunt
relevante pentru aditivii alimentari i au valoare
limitat n relaie cu expunerea industrial sau
expunerea agricol la pesticide.
TTSC implic expunerea zilnic sau frecvent la un
compus pt o perioad de pn la 90 zile sau 3 luni.
la obolani TTSC vor dura 90 de zile.
studiile de 14, 21 i 28 de zile = TTSA.
studiile trebuie realizate pe 2 specii: roztoare i
neroztoare, uzual obolani i cini (datorit
disponibilitii lor i a numeroaselor informaii existente
despre ei);
cnd se folosesc obolanii, testul trebuie nceput imediat dup
ftare, a.. observarea se poate realiza de-a lungul perioadei cu
cea mai rapid cretere.
Parametrii de baz ai TTSC i TTSA:
Specia:
roztoare:
obolani, preferai pt teste orale i prin inhalare
iepuri pt teste dermice
neroztoare: de ob. cinii recomandai a 2-a specie.
Vrsta: aduli tineri
Nr. de animale:
10 / sex pt roztoare / nivel de doz
4 / sex pt neroztoare / nivel de doz.
Dozare:
3 nivele de doz + 1 grup martor,
include nivelul dozei toxice + NOAEL,
expunere 90 de zile.
Perioada de observaie: 90 de zile (ca i per. de
expunere)
 Dac se dorete studierea patogenezei i
reversibilitii leziunilor induse sau
biochemo-cinetica, se recomand ca
observaiile s fie fcute:
la intervale de 3 sptmni n timpul expunerii
continuate pn la 3 luni dup ncheierea
expunerii.

n toxicologia alimentar TTSC/TTSA sunt

utilizate adesea pt a deretrmina
val. NOAEL pt subst. Necancerigene
val. MTD (maximum tolerated doze) cel mai nalt nivel
al unei substane din aliment care poate fi dat n
hrana unui animal fr a induce semne evidente
de toxicitate, altele dect cele datorate cancerului.
 TESTE DE TOXICITATE CRONIC
(TTC)
TTC se refer la un efect advers care necesit un anumit
timp pentru a se dezvolta,
TTC este realizat, de ob. n toxicologia alimentar pt a
stabili val. NOAEL, care trebuie utilizate pt:
stabilirea val. ADI (acceptable daily intake),
limitele de toleran ale aditivilor chimici i a
contaminanilor.
se pot utiliza diverse specii, dar, n special,
roztoarele; animalele mai mari (cini, maimue) sunt
utilizate pt probe mai mari de snge.
substana este adm. zilnic pe durata ntregii perioade
de tratament i acoper cea mai mare parte a duratei
de via, ncepnd cu expunerea timpurie.
 Parametrii de baz ai TTC:
specia - 2 specii:
roztoare (obolani)
neroztoare (cini).
Vrsta: aduli tineri
Nr. de animale:
20 / sex pt roztoare / nivel de doz
4 / sex pt neroztoare / nivel de doz
Dozare: 3 nivele de doze,
include nivelul dozei toxice i NOAEL,
expunere, n gen., 12 luni,
FDA cere 24 de luni pt subst. chimice din alimente
Perioada de observaie: 12-24 de luni.
 ca i TTA, calea de administrare n cazul TTSA
i TTC trebuie s fie aceea prin care omul este
probabil s fie expus.
pt. gaze i solveni volatili se recomanda
studiile prin inhalare,
pt. aditivii alimentari, pesticidele i
contaminanii ingerai prin consumul
alimentelor sau a apei se rec. calea oral,
ncorporarea subst. de testat n raie sau apa
de but este un mijloc adecvat de adm., dar
trebuie ca subst. s rmn stabil n
substratul n care se face dozarea.
dac subst. are gust neplcut, adm. se face
prin gavaj sau, n cazul cinilor, prin capsule.
Dup ncheierea TTSA i TTC se
realizeaz:
teste biochimice organice,
msurtori fiziologice,
studii metabolice,
studii hematologice.