Organizarea materialului

genetic la eucariote

1
ADN eucariotic
Este
localizat:

În nucleu

În
mitocondri
i

2
 ADN eucariotic
ADN nuclear:
• Molecule lungi liniare;
• Sub formă de cromatină ↔ cromozomi;
• Doar 10% este ADN genic, restul ADN –
necodant;
• Activitatea genelor nucleare depinde de:
– Momentul ontogenetic;
– Tipul celulei

!!! Necesitatea unui mecanism de păstrare a MG

pentru o activitate optimă în spaţiu şi timp
3
 Nucleul

Anvelopa nucleară:
• membrana nucleară externă
• membrana nucleară internă
• spaţiul perinuclear
• lamina nucleară
• complexul porului nuclear

Cromatina
• eucromatina
• heterocromatina

Nucleolii

Carioplasma
• partea labilă
• nucleoscheletul
4
5
 Nucleul

Păstrează ~ 98% din MG celular;

Asigură compactizarea funcţională a ADN:

• eucromatina – MG activ pentru transcripţie;
• heterocromatina – MG inactiv pentru transcripţie.

Controlul activităţii celulei prin expresia diferenţiată a genelor:

• transcripţia şi processingul ARN;

Controlul diviziunii celulare şi transmiterii IG de la cel la cel:

• replicarea ADN şi mitoza

Biogeneza ribozomilor

6
7
8
9
10
Porul Nuclear

11
 Transportul prin porii nucleari
mediat de carioferine = importine și exportine
• Import (din citosol în
nucleu):
– Proteine histone
– Proteine nonhistone
– dNTP, NTP
– Proteine ribozomale
• Export (din nucleu în
citosol):
– ARNm
– ARNt
– ARNsc
– RNP 40S; RNP 60S
12
13
 profaza
CROMATINA telofazaCROMOZOMII

• Cromatina – materialul genetic parţial compactizat

în timpul interfazei celulei;
• Cromozomul – materialul genetic maximal
compactizat în timpul mitozei.
• Compoziţia chimică:
– 30% ADN + 40% proteine histone + 25% proteine
nehistone + 5% ARN

14
 Cromatina = cromozomul
ADN cromozomial – ce deţine, păstrează,
transmite şi realizează IG;
• Molecule lungi liniare;
• Molecule heterogene:
– Secvenţe codificatoare (gene):
• Active - transcrise;
• Neactive - netranscrise.
– Secvenţe necodificatoare:
• Structurale – telomerii, centromerii, sateliţii;
• Reglatoare

15
16
 Cromatina = cromozomii
Proteine histone:
• Globulare
• Bazice, bogate în Lys şi Arg;
• Există 5 clase: H1, H2A, H2B, H3, H4
• Funcţia:
– compactizarea ADN – nivelul nucleosomic
– reglarea nespecifică a expresiei genice

Tipul Amonoacizii Nr.

Configuraţia proteinei
histonelor reprezentativi aminoacizi
H1 Lys 215 NH2 COOH
H2A Leu, Lys 129 NH2 COOH
H2B Ser, Pro, Lys 125 NH2 COOH
H3 Arg, Cis 135 NH2 COOH
H4 Arg, Lys 102 NH2 COOH

17
Proteinele histone
ADN + histone =
nucleosom

a. Miezul nucleosomic:
2H2A
octamer
2H2B
histonic
2H3
2H4
b. 200p.n. ADN nucleosomic
c. H1 – stabilizează
complexul DNP 18
19
20
21
 Proteine nehistone
• Proteine extrem de heterogene;
• Enzime nucleare:
– p/u replicare (primaza, ADN-pol., ADN-ligaza);
– p/u reparaţie (endonucleaze, ADN-pol);
– p/u transcripţie (ARN-pol, factori transcripţie);
– p/u processing-ul ARN (ribozime);
– p/u biogeneza ribozomilor (P. ribozomale)
• Proteine situs specifice (SAP, zinc-finger P);
• Proteinele scafoldului – axului cromozomial
22
23
Helix-Turn-Helix

Zinc finger 24
 ARN cromozomial

• Reprezentat de transcripţi primari

• Reprezentaţi de microARN – componenţi ai
enzimelor nucleare.

25
Nucleul în diferite etape ale ciclului celular

26
 Nivele de compactizare a MG

I nivel –
II nivel –
nucleosomic IV nivel –
solenoid = III nivel –
= filament cromosomul
fibra de bucle
de metafazic
cromatină;
cromatină;

27
 Nivele de compactizare
a MG se deosebesc prin:
- gradul de scurtare a firului de
ADN;
- grosimea f. de cromatină;
- mecanism de formare;
- grad de activitate
transcripţională;
- perioada ciclului celular.

28
29
 I nivel - filamentul de cromatină:
Filamentul
polinucleozomic de 11nm;

Gradul de compactizare –
x6 ori;

• interacţiunea ADN- cu proteinele histone

Mecanismul de formare:
bazice+

Transcripţia ADN este

posibilă.

30
 Modificarea histonelor:
• metilarea H3 (Lys4) – expresie activă a genei
• metilarea H3 (Lys9) – atenuarea transcripţiei
• acetilarea histonelor – relaxarea cromatinei, facilitarea
transcripţiei
• dezacetilarea histonelor – condensarea cromatinei,
inactivarea transcripţiei
• fosforilarea H1 – supracondensarea cromatinei
• defosforilarea H1 – decondensarea cromatinei

31
II nivel – solenoidul
Fibra de cromatină de
30 nm;

Gradul de condensare
– x40 ori;
• Fosforilarea H1 
Mecanismul de superspiralizarea filamentului
polinucleosomic – câte 6
formare: nucleosomi per spiră;

Transcripţia ADN-ului
este blocată.

32
Solenoid

33
Filamentul de cromatină

Solenoid – 30 nm

Fibra nucleosomică
– 10 nm
34
 III nivel - bucle
Buclele pot fi mari sau
mici, relaxate sau
compacte, 300nm grosime;

Grad de compactizare –
x600-1000 ori;

• Ancorarea fibrei de cromatină de 30nm la axa

Mecanism de formare: proteică – scaffold;
• interacţiune specifică SAR – scaffold

Transcripţia genelor este

blocată

35
36
!!! SAR (MAR) - (Scaffold /Matrix Associated Region)
– situsuri specifice de ADN responsabile de
ancorarea fibrei de cromatină la scaffold - axul
proteic cromozomial;
!!! scaffoldul - axul proteic cromozomial – proteine
situs specifice ce interacţionează cu:
- fibra de cromatină;
- lamininele laminei fibrosa de pe suprafaţa
internă a anvelopei nucleare.

37
38
39
40
 IV nivel –
cromozom metafazic

• Grad maximal de compactizare – x10000ori;

• Grosimea cromatidei ~700nm;
• Mecanismul de formare:
– Fosforilarea lamininei --- disocierea anvelopei nucleare;
– Fosforilarea totală a H1 – condensarea cromatinei, plierea
buclelor în jurul axului cromozomial.
• Transcripţia este blocată

41
2 nm

11 nm

30 nm

300 nm

700 nm

1400 nm

42
• Centromer = constricţie primară
• Telomer

43
Centromerul

44
45
Centromerul participă la unirea cromatidelor-
surori după ţie

46
 Centromerul

• Secvenţe de ADN repetitiv, bogate în perechi

A/T
• Heterocromatină constitutivă
• Histona H3 este substituită cu CENP-A
• Asigură unirea cromatidelor surori până în
anafaza diviziunii celulare (P. coezina)
• Asigură ataşarea kinetocorilor
• Intervine în interacţiunea cu fusul de
diviziune

47
Telomerul

48
 Telomerul
• Secvenţe de nucleotide bogate în G/C repetate în
tandem (la H. sapiens - TTAGGG) cu lungimea de
3-20 kb
• Formează bucle la capetele cromozomilor (P TFR1,
TFR2)
• Previne scurtarea cromozomilor în timpul
replicaţiei
• Previne fuzionarea cromozomilor (individualizează
cromozomii)
• Asigură rezistenţă la atacul exonucleazelor

49
50
51
 Perioadele ciclului celular şi nivelul de
organizare a MG
• Interfaza:
– Perioada G1 presintetică; Nivel I
– Perioada S – sintetică; Nivel II
– Perioada G2 – postsintetică; Nivel III
• Mitoza:
– Profaza
– Metafaza
– Anafaza Nivel IV
– Telofaza

52
Clasificarea funcţională a cromatinei:

• Eucromatina:
- segmente de cromatină active transcripţional;
- conţine ADN codant.
• Heterocromatina:
– segmente de cromatină inactive transcripţional,
– conţine ADN necodant;
– conţine ADN codant netranscris în momentul dat
sau celula dată;
– poate fi constitutivă şi facultativă.

53
 Heterocromatina
• Constitutivă:
– Conţine secvenţe de ADN necodificatoare, repititive;
– Reprezintă regiunile centromerice, telomerice, ale sateliţilor,
spaţiatori ai genelor.
• Facultativă:
– Conţine secvenţe de ADN codant, dar inactive;
– Se poate transforma în eucromatină;
– Poate fi autosomală şi sexuală;
– Intervine în:
» Diferenţierea celulară;
» Diferenţierea sexuală;
» Reglarea ontogenezei

54
 Reprezentarea aceluiaşi fragment de cromozom în diferite celule (A, B, C).
E – eucromatina,
Hc – heterocromatina constitutivă,
Hf – heterocromatina facultativă
55
 Nucleolul –
regiunea nucleară responsabilă de biogeneza ribozomilor:

• transcripţia genelor ribozomale cu sinteza ARNr

precursor (45S);
• Processingul ARNr 45S cu formarea a trei fracţii de
ARNr: 5,8S + 18S + 28S;
• Asamblarea complexelor RNP:
– ARNr 18 S + 33 proteine ribozomale = 40S –
subunitatea ribosomală mică;
– ARNr 28 S + ARNr 5,8 S + ARNr 5 S + 49 proteine
ribozomale = 60S – subunitatea ribozomală mare

56
 Etapele expresiei genelor de clasa I
ADN P +1 18S 5,8S 28S T

Transcripţie
proARNr

Processing (autosplicing)

18S 5,8S 28S

ARNr
Asamblarea 40S şi 60S

18S + 33 proteine = 40S 28S + 5,8S + 5S + 49 proteine = 60S

57
58
59
60
 Structura nucleolului:
• Organizatorul nuclelolar – secvenţe de ADN cu
gene p/u ARNr;
• ARNr: transcripţi primari 45S; ARNr 5S, ARNr
5,8S, ARNr 18S, ARNr 28S;
• Proteine ribozomale;
• Proteinele aparatului de sinteză a ARNr;
• RNP 40S şi 60S.

61
 Profaza
Prometafaza
Interfaza
Metafaza
Telofaza
Anafaza

62