Sunteți pe pagina 1din 15

Capitolul 6

6
NUCLEUL
Nucleul este o structur intracitoplasmatic prezent n
toate celulele eucariote cu excepia hematiilor adulte (fig. 6.1).

Fig. 6.1. Poziia i conexiunile nucleului n celul

Nucleul ndeplinete dou funcii importante:


93

Capitolul 6

- depoziteaz majoritatea informaiei genetice din


celul (conine circa 98% din ADN-ul celular);
- controleaz i regleaz activitatea celulei.
Nucleul este alctuit din matrice sau suc nuclear,
cromatin sau cromozomi, nucleoli i anvelop nuclear (fig.
6.2.). n compoziia nucleului intr ADN, ARN, dou tipuri de
proteine (histone i non-histone), diferii compui organici i
anorganici. Lipidele i glucidele exist n cantiti foarte mici,
prezente doar n anumii componeni nucleari.

Fig. 6.2. Structura nucleului

Nucleul este centrul coordonator al celulei eucariote,


funcionnd ca un computer chimic prevzut cu un program
(ADN) i memorie (ARN). Ca centru informaional, nucleul
coordoneaz toate reaciile chimice de desfurare a proceselor
vitale prin controlul sintezei proteinelor enzime celulare, iar
organizarea celulei prin sinteza proteinelor de structur. n
fluxul informaional exist trei puncte cheie: replicarea ADN,
transcripia ARN i traducerea mesajului genetic. Autoreplicarea
94

Capitolul 6

i transcripia se efectueaz n nucleu, iar traducerea


mesajului n citoplasm.
Anvelopa nuclear
Anvelopa nuclear este o membran dubl prevzut cu
pori. Membrana extern a nveliului nuclear continu cu RE
rugos, membrana intern e lipsit de ribozomi. n locurile unde
foia intern continu cu cea extern se formeaz porii nucleari,
iar spaiul dintre membrane este numit perinuclear (20-40nm) i
comunic cu RE. Porii reprezint circa 10% din toat suprafaa
nveliului nuclear (la mamifere).
Complexul porului nuclear
Complexul porului este compus din porul propriu-zis de
form octagonal cu un diametru de 60 nm, trei inele (annulus)
cu diametrul de 120 nm. Inelul e format din opt granule proteice
globulare cu diametrul de 15 nm care dau form o octagonal. n
centru e prezent granula central cu rol de diafragm fin, care,
conform unor ipoteze, de fapt reprezint molecule sau particule
n tranziie. Canalul porului are lungimea de 15 nm i diametrul
de 9 nm. Porul nuclear interacioneaz cu matricea nuclear prin
intermediul unor filamente cu diametrul de 4-8 nm, care se
termin cu o extremitate pe inelul intern. (fig. 6.3).
Funcia porilor: prin intermediul lor se realizeaz n
special transportul macromoleculelor din nucleu n citoplasm i
invers:
(i)
din citoplasm sunt importate n nucleu proteine ale
matricei nucleare, enzime de sintez a acizilor nucleici,
proteine ce fac parte din componena cromatinei, proteine
ribozomale;
(ii)
din nucleu n citoplasm se export precursorii
ribozomilor, particule formate din complexe de ARNm cu
proteine speciale, ARNt.
95

Capitolul 6

Fig. 6.3. Structura porului nuclear

Matricea nuclear
Matricea nuclear este denumirea atribuit scheletului
de natur proteic care nglobeaz cromatina i nucleolii i care
se sprijin pe membrana nuclear. Ea are un rol esenial n
organizarea nucleului i sinteza ADN sau ARN, n medierea
semnalelor hormonale, diviziune i alte funcii nucleare.
Matricea nuclear este compus din dou pri:
matricea nuclear propriu-zis reprezentat de scheletul
sau reeaua proteic i alctuit din proteine stabile cu mas
molecular mare;
fraciunea labil a matricei care este legat lax de reeaua
proteic i conine proteine solubile cu mas molecular
mic, molecule organice mici, substane anorganice i ap.
Cea mai mare parte din proteinele ce intr n alctuirea
matricei nucleare (att n matricea propriu zis, ct i n fracia
labil) este reprezentat de aa-numitele proteine nehistonice, la
care se adaug i enzimele nucleare. Proteinele nehistonice sunt
o familie de proteine foarte heterogene att ca mas molecular,
ct i ca particulariti chimice. Spre deosebire de histone, o
96

Capitolul 6

mare parte din acest grup de proteine sunt bogate n


triptofan; ele au un turnover foarte rapid, fluctund n limite
foarte largi de la o stare funcional la alta. Enzimele nucleare
catalizeaz n mod special sinteza ADN, ARN i processingul.
Matricea nuclear propriu zis
Matricea nuclear propriu zis sau scheletul nuclear este
format din trei componente:
matricea sau reeaua fibrilar intranuclear, intercromatic
i pericromatic;
componentele nemembranoase ale nveliului nuclear,
formate din lamina densa (lamina fibroasa) intern i
complexele por;
componenta nucleolar sau reeaua fibliral din pars fibrosa
i pars garanulosa a nucleolului.
Lamina densa interna se afl pe faa nuclear a membranei
interne din nveliul nuclear. Se prezint sub forma unei reele
fibrilare conexate la reeaua matricei nucleare, precum i la
componentele fibrilare ale complexului por.
Lamina densa intern a nucleolemei mpreun cu complexul
por formeaz partea scheletului nuclear denumit complex
lamina-por. Complexul este alctuit din fibrile ce realizeaz trei
reele:
(i)
fibrile ale laminei densa interconexate cu fibrile ale
porului, formeaz o reea n planul membranei interne
nucleare sau imediat adiacent acesteia;
(ii)
fibrile intranucleare ataate complexului por orientate
perpendicular pe nveliul nuclear;
(iii) fibrile intranucleare care structureaz regiunea ocupat
de heterocromatina periferic din nucleul intact. Aceast
reea difer de la o celul la alta dup cantitatea de
heterocromatin n nucleul respectiv.
Nucleoscheletul complexului lamina-por conine 2-3%
din totalul proteinelor din nucleu. Este alctuit n principal din
97

Capitolul 6

proteine nehistone (95%), ntre care predomin cele


acide. Pe faa intern a complexului lamin-por se realizeaz
activitatea nucleozid-trifosfatazei, considerat a fi implicat n
transportul ARN ctre citoplasm.
Rolul matricei nucleare
Matricea nuclear menine forma nucleului i stabilitatea
sa n interfaz. Modificrile matricei nucleare sunt strns cuplate
cu funciile nucleului: organizarea cromatinei, replicarea ADN,
transcripia i transportul intranuclear al ARN.
Matricea nuclear poate modula fluiditatea membranei
nucleare, fluiditate necesar la rndul ei funciei matricei
nucleare, n special n cea de transport al subunitilor
ribozomale prin porii nucleari.
Matricea nuclear poate modifica structura cromatinei,
fenomen important pentru realizarea replicrii ADN,
transcripiei ARN (activarea sau inactivarea genelor).
n timpul mitozei 95% din proteinele matricei nucleare
sunt distribuite n citoplasm. n refacerea nucleului dup
diviziune un rol important l joac glicozilarea acestor proteine
la nivelul AG.
n nucleol scheletul ar avea rol de suport pentru
depozitarea subunitilor ribozomale.
Nucleolul
Nucleolul e prezent la toate celulele eucariote cu
excepia celulelor blastomerilor, n care nu are loc biosinteza
proteinelor proprii (fig. 6.4). El conine trei componeni
principali: ADN - 3%; ARN - 7%; proteine - 90%.
Nucleolul nu este separat prin membran de restul
nucleului. Numrul i volumul nucleolilor depinde de etapa
funcional a nucleului (n celulele omului teoretic pot fi
maximal 10 nucleoli mici la nceputul interfazei i un nucleol
mare la sfritul interfazei). Nucleolii ocup circa 30% din
volumul nucleului. Exist un raport determinat ntre volumul
98

Capitolul 6

nucleului i cel al nucleolului numit volum nucleolonuclear. Cu ct mai activ este celula n ce privete sinteza
proteinelor cu att acest raport este mai mare.

Fig. 6.4. Structura nucleolului. Biogeneza ribozomilor

La microscopul electronic se disting 3 zone componente


ale nucleolului:
- componentul granular - particule cu diametrul 15-20
nm, ce reprezint precursorii ribozomali;
- componentul fibrilar - din fibre de ADN de 5 nm (pe
care se sintetizeaz ARNr) i fibre de transcripi;
- componenta amorf a spaiilor dintre fibre i
granule, se gsete la periferia nucleolului.
99

Capitolul 6

Rolul nucleolului este sinteza ARNr i


asamblarea precursorilor ribozomali. Segmentul de ADN
(cromozom) n care se conin gene ce codific pentru ARNr
poart denumirea de organizator nucleolar. La om exist 5
perechi de cromozomi cu organizatori nucleolari care
controleaz formarea nucleolilor la sfritul mitozei (perechile:
13, 14, 15, 21, 22).
Biogeneza ribozomilor: n nucleol are loc sinteza a trei
fracii de ARNr (5,8S; 18S; 28S) i stocarea precursorilor
ribozomali. De pe ADN se transcrie un precursor - ARNr 45S,
care este procesat n trei fracii mai mici (28S; 18S; 5,8S). ARNr
5S este sintetizat n afara nucleolilor. Moleculele de ARNr se
asociaz cu proteine ribozomale sintetizate n citoplasm i
importate n nucleu. Particulele ribonucleoproteice (RNP) sunt
transportate n citoplasm sub form de subuniti ale
ribozomilor (40S i 60S).
Cromatina = cromozomii interfazici
Cromatina este compus din ADN, proteine histone,
proteine nehistone i ARN. Astfel, cromatina poate fi
considerat o nucleoproteid n care proteinele histone i
nehistone interacioneaz att ntre ele, ct i cu ADN-ul.
Cromatina se caracterizeaz prin forma extins i
despiralizat a cromozomilor n interfaz.
La microscopul optic se pot fi observate granule, reele
de filamente i corpusculi numii cariozomi, care se coloreaz
cu colorani bazici. Din punct de vedere al interaciunii cu
coloranii bazici, cromatina se clasific n dou categorii:
eucromatina care se coloreaz slab cu colorani bazici;
heterocromatina care se coloreaz foarte intens cu colorani
bazici.
Eucromatina reprezint regiunea cromatinei care conine
gene structurale i este poriunea funcional activ a ADN-ului,
100

Capitolul 6

de pe care are loc transcripia. Aceasta este slab


condensat i, deci, se replic timpuriu, la nceputul perioadei S
a interfazei.
Heterocromatina reprezint segmente de cromatin inactiv
genetic, care nu se supune transcripiei. Este mai puternic
condensat i se replic tardiv n faza S. Se disting dou tipuri
de heterocromatin: constitutiv i facultativ. Heterocromatina
facultativ reprezint secvene care n anumite condiii se pot
despiraliza i transforma n eucromatin. Heterocromatina
constitutiv conine ADN repetitiv sau satelit. Acest tip nu se
transform niciodat n eucromatin. Localizarea segmentelor
heterocromatice n cromozomii omologi este identic.
Organizarea molecular a cromatinei:
ADN (30%-40%) n cei 46 de cromozomi din setul
diploid al celulei somatice umane se conin 46 de molecule
liniare de ADN cu o lungime de 7 X 109 p.b.
Proteine histonice (40%) - polipeptide bazice, ce conin
peste 22% aminoacizi bazici, n special arginin i lizin. Exist
cinci fracii de histone: H1, H2A, H2B, H3, H4 (tab. 6.1).
Proteinele histonice nu au specificitate de esut.
Tabelul 6.1. Caracteristica proteinelor histone

Tipul de
histon
H1
H2A
H2B
H3
H4

Aminoacizii predominani
Lizina
Leucina, lizina
Serina, prolina, lizina
Arginina, conine cistein
Arginina, lizina

Numr
aminoacizi
215
129
125
135
102

Masa
molecular
21500
14000
13775
15320
11280

Funciile histonelor
Proteinele histone stabilizeaz dublul helix de ADN,
inducnd o structur teriar nivel elementar de organizare a
ADN la eucariote. Din punct de vedere funcional ele represeaz
101

Capitolul 6

nespecific transcripia, mpiedicnd unirea ARNpolimerazei la ADN.


Proteinele nonhistone - proteine acide (20%) cu un
coninut mrit de aminoacizi acizi (acid glutamic i acid
aspartic). Sunt heterogene, au o mobilitate mare, ndeplinesc
funcii catalitice n metabolismul ADN-ului i expresia
informaiei genetice (polimeraze, ligaze, topoizomeraze, SAR,
factori de transcripie). O cantitate mare a proteinelor
nonhistonice este prezent n esuturile active, pe cnd histonele
sunt prezente n cantiti egale n esuturile active i inactive.
ARN este prezent n cromatin fiind produsul de sintez de pe
ADN, n special transcripi primari i ARNsn (de ex., ARN din
compoziia primazei, telomerazei, etc.).
Nivelurile de organizare a
cromozomilor
mpachetarea ADN-ului ntr-un cromozom presupune
existena ctorva nivele de organizare sau condensare, fiecare
fiind responsabil de un anumit grad de micorare a lungimii
ADN-ului.
Primul nivel nucleozomic este determinat de
asamblarea ADN-ului cu histonele, ce formeaz filamentul de
cromatin (DNP) cu diametrul 11 nm (fig. 6.5). n cadrul acestui
nivel molecula de ADN se scurteaz de ~6 ori. Fiecare
nucleozom const dintr-un miez histonic (core) format din: 8
proteine: 2H2A, 2H2B, 2H3, 2H4 i o secven de ADN cu o
lungime de 146 pb.
ADN-ul nfoar de ~2 ori octamerul histonic, formnd
un complex stabil nucleozomul. ntre nucleozomi secvena de
ADN- linker are o lungime variabil, de la 8 pn la 114 pb.
Astfel filamentul polinucleozomic de cromatin are aspectul
unui irag de mrgele.

102

Capitolul 6

Fig. 6.5. Structura nucleozomului

Al doilea nivel solenoidul este reprezentat de fibra


de cromatin de 30 nm ce rezult din superspiralizarea
filamentului de cromatin (fig. 6.6). Acest nivel de compactizare
scurteaz molecula de ADN de 40-60 ori.
Solenoidul reprezint o superspiral de dreapta cu ase
nucleozomi per tur (fig. 6.6., B,C). Trecerea cromatinei de la
nivelul I la II i invers este determinat de modificrile chimice
ale histonei H1. Fosforilarea H1 se asociaz cu superspiralizarea
DNP, iar defosforilarea H1 cu despiralizarea solenoidului (fig.
6.6., A). Acest lucru este important n reglarea activitii
genelor. Histona H1 este asociat att cu miezul nucleozomic,
ct i cu segmentul ADN linker i are rol n stabilitatea
nucleozomului.
103

Capitolul 6

Fig. 6.6. Formarea solenoidului al


II-lea nivel de compactizare a ADN

Al treilea nivel
de compactizare este
reprezentat de mpachetri
suplimentare,
formnd structuri mai
complexe
denumite
bucle (300 nm,700
nm).
Acest
tip
structural de cromatin
este bine legat ntr-un
suport structural n
nucleu denumit matrix
nuclear
sau
ax
cromozomial
(scaffold) prin intermediul unor proteine acide
SAR
(Scaffold
Associated
Regions)

(fig. 6.7 ).
Al patrulea nivel reprezint condensarea i plicaturarea
buclelor
ce
duce
la
formarea
cromatidelor
cromozomului
metafazic.
Fiecare
cromatid are
grosimea de la
700 la 1200
nm, iar ADN Fig. 6.7. Asocierea buclelor la proteinele axei
cromozomiale (Scaffold)
n cromosom
104

Capitolul 6

se scurteaz de ~ 10000 ori.


Datorit
proprietii
cromatinei de a se compactiza n
nucleul celulei umane cu diametrul
de ~4m ncap 46 molecule de ADN
cu lungimea total de circa 2 m.
Cromozomul metafazic este
format din 2 cromatide surori
identice unite prin centromer la
nivelul constriciei primare (fig.
6.8). Constricia primar ct i
perechea de kinetocori (disc
trilamelar din fibre de cromatin
superior organizate) reprezint
Fig. 6.8. Aspectul unui
situsurile
de
ancoraj
ale
cromozom metafazic
microtubulilor fusului de diviziune.
Centromerul reprezint punctul de unire a cromatidelor
i de asamblare a kinetocorilor.

Fig. 6.9. Structura centromerului la drojdii

Centromerul mparte cromozomul n dou brae: braul p proximal, mai scurt; braul q - distal, mai lung. Regiunea
centromeric a cromozomului este format din ADN i proteine
105

Capitolul 6

speciale. ADN centromeric conine secvene repetitive


n tandem i secvene repetitive dispersate cu localizare
pericentromeric, ce intervin n recunoaterea cromozomilor
omologi la conjugare, meninerea celor dou cromatide surori
pn la sfrit de metafaz i separarea lor n anafaz. La drojdii
centromerul are dimensiuni de ~120 pb (fig. 6.9). La eucariotele
superioare regiunea centromeric are dimensiuni mult mai mari,
de ordinul sutelor de mii de nucleotide.
Telomerii reprezint complexe din ADN i proteine
specializate care formeaz capetele cromozomilor eucariotelor.
La procariote toate moleculele de ADN sunt circulare
ceea ce previne degradarea lor enzimatic. La eucariote ADN
are structur liniar, de aceea pentru a asigura protecia de
exonucleaze i individualitatea cromozomilor (mpiedic
reanrajamentele cromozomice) apare o structur specific din
secvene scurte repetate de ADN (tab. 6.2).
Tabelul 6.2 Varietatea secvenelor telomerice

Specia
Macronucleul ciliatelor (Tetrahymena)
Minicromozomul la Trypanosoma
Cromozomii drojdiei Saccharomyces
Cromozomii plantelor (Arabidopsis)
Cromozomii umani

Secvena repetat
CCCCAA
CCCTA
C2-3A(CA)1-3
C3TA3
C3TA2

Captul 3' al moleculei de ADN este mai lung, format


dintr-o secven conservat (GGGGTT)n i formeaz o bucl
prin legturi de hidrogen nespecifice GG (necomplimentare)
(fig. 6.10).

Fig. 6.10. Structura telomerului

106

Capitolul 6

Verificarea cunotinelor:
1. Definii noiunile: por nuclear, organizator nucleolar,
eucromatin, heterocromatin, nucleozom, solenoid, histon,
centromer, telomer, cromatid.
2. Care sunt componenii structurali ai nucleului interfazic?
3. Care sunt particularitile organizrii anvelopei nucleare?
4. Ce rol ndeplinete complexul porului nuclear?
5. Care sunt etapele biogenezei ribozomilor?
6. Care sunt nivelurile de compactizare a cromatinei?
7. Care sunt componenii nucleozomului?

107