Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
CAPITOLUL 9
NUCLEUL ORGANIZAREA I ROLUL NUCLEULUI
Componentele invelisului nuclear si rolul acestuia n transportul
Nucleul are forme diferite n raport cu forma celulei astfel la celulele sferoidale este
sferic, la cele alungite elipsoidal, la celulele turtite discoidal etc.
n celulele cu activitate crescut de sintez a proteinelor nucleul are forme foarte
diferite fiind chiar ramificat (glandele sericigene ale fluturilor). n marea majoritate a
cazurilor, celulele au un singur nucleu, dar se pot gsi i celule binucleate (condrocitele
cartilajului costal de cobai, hepatocitele, neuronii simpatici; megacariocitele i osteoclastele
au i ele mai muli nuclei.
Hematiile mamiferelor sunt n schimb anucleate.
Volumul nucleului este proporional cu al celulei, iar nucleii aceluiai esut de la
indivizii aceleiai specii au mrimi constante. n multe cazuri au loc i endomitoze
(multiplicarea numrului de cromozomi, fr s se dezorganizeze membrana nucleului) n
urma crora nucleii nedivizai au un volum mai mare, corespunztor gradului de ploidie (n
ficat, neuronii Purkinje, esutul excitoconductor al inimii).
1. Inveliul nuclear este o structur complex fiind alctuit din dou membrane
nucleare, o lamin nuclear i complexul porilor nucleari (NPC).
Nucleul este nconjurat de 2 membrane concentrice: membrana intern i membrana
extern. Membrana extern se continu cu reticulul endoplasmatic, astfel nct spaiul spatiul
dintre membranele nucleare (extern i intern) comunic direct cu lumenul reticulului
endoplasmatic.
Membranele nucleare sunt asociate cu enzime ale reticulului endoplasmatic i sunt
similare functional cu membranele RE. De asemenea, pe membrana nuclear extern sunt
ataai ribozomii, spre faa citoplasmatic.
Note de
curs1
Biologie celulara si moleculara
Note de
curs2
Biologie celulara si moleculara
Pe de o parte, ARN sintetizat n nucleu trebuie s fie exportat n citoplasm, unde are
loc sinteza proteic. Pe de alt parte, factorii de transcripie trebuie transportai de la locurile
de sintez, din citoplasm, n nucleu.
Figura 9.2 Structura porului nuclear (1-membrana nuclear, 2-inel extern, 3-spi, 4-
co, 5-fibrile)
n acest fel, reglarea traficului de proteine i ARN, prin complexele porilor nucleari
determin compoziia nucleului i joac un rol important n expresia genelor.
n funcie de talia lor, moleculele pot traversa complexul porului nuclear prin dou
mecanisme.
Moleculele mai mici de 20 kd trec rapid prin nveliul nuclear din citoplasm n
nucleu i invers. Aceste molecule difuzeaz pasiv prin canalele deschise (pline cu ap), din
complexul porului nuclear. Majoritatea proteinelor i ARN sunt molecule prea mari pentru a
trece prin aceste canale i de aceea nu pot circula liber ntre nucleu i citoplasm. Aceste
macromolecule trec prin complexul porului nuclear datorit unui proces activ, prin care
aceste molecule sunt recunoscute i transportate selectiv ntr-o singur direcie.
Moleculele mari sunt transportate prin canale specializate din complexul
porului membranar, care n prezena unui stimul adecvat se deschid, atingnd 25nm n
diametru, i permit astfel trecerea subunitilor ribozomale.
Se consider c n alctuirea complexului porului nuclear intr peste 100 de proteine
distincte, din care numai o mic parte a fost identificat.
Proteinele transportate n nucleu, dintre care menionm:
ADN polimerazele
Factorii de transcripie
Factorii de clivare
controleaz structura i funciile genomului. Aceste proteine sunt dirijate spre nucleu
prin secvene de aminoacizi specifice numite semnale de localizare nuclear (NLS), care le
orienteaz pasajul prin complexul porului nuclear.
Importul proteic prin complexul porului nuclear se desfoar n dou etape :
Note de
curs3
Biologie celulara si moleculara
1- n prima etap, n lipsa ATP, proteinele care conin semnale de localizare nuclear
se leag la complexul porului nuclear, dar nu trec prin por. Apoi, semnalele de localizare
nuclear sunt recunoscute de un receptor proteic intracitoplasmatic numit importin.
Subunitatea a importinei se leag la NLS, iar subunitatea mediaz asocierea cu
complexul porului nuclear.
2- A doua etap necesit ATP (adenozin trifosfat) i GTP (guanozintrifosfat). Pentru
translocare este necesar o mic protein care leag GTP numit Ran (Tabel 9.1).
Unele proteine rmn n nucleu dup importul din citoplasm. Altele, numite proteine
navetiste se plimb constant ntre nucleu si citoplasm. Aceste proteine sunt cele care
funcioneaz ca transportori pentru alte molecule (de exemplu ARN), proteine care
coordoneaz funciile nucleare i citoplasmatice (exemplu, preoteinele care regleaz
activitatea factorilor de transcripie).
Activitile unor proteine nucleare sunt controlate prin diferite mecanisme. ntr-un
astfel de mecanism de reglare, factorii de transcripie se asociaz cu proteine citoplasmatice
care mascheaz semnalele de localizare nuclear i pentru c semnalele nu mai sunt
recunoscute, aceste proteine rmn n citoplasm.
Proteina
Importina a Nucleu
Importina b + Ran +GTP
Note de
curs4
Biologie celulara si moleculara
Acizii ribonucleici sunt transportai prin nveliul nuclear sub forma complexelor
ARN-protein. ntruct transportul se face prin complexe ribonucleoproteice, semnalele care
dirijeaz exportul nuclear pot fi localizate pe proteina legat la ARN sau pe ARN.
Pre-ARN (precursorul ARN m) i ARNm se asociaz, n timpul prelucrrii n nucleu i
n eventualitatea transportului n citoplasm, cu un set de cel puin 20 de proteine formnd
ribonucleoproteine nucleare heterogene (hnRNP). Cel puin una din aceste proteine hnRNP
este o protein navetist care conine un semnal de export nuclear ce-i permite s funcioneze
ca transportor pentru ARNm n timpul exportului acestuia n citoplasm.
ARN r este asamblat cu proteinele ribozomale n nucleu, iar subunitile ribozomale
rezultate sunt transportate n citoplasm cu ajutorul unor semnale prezente pe proteinele
ribozomale.
ARN nuclear de talie mic sau sn ARN (small nuclear ARNs) funcioneaz n interiorul
nucleului i nu n citoplasm ca ARNm, ARNt i ARNr, participnd la prelucrarea ARN.
Acesti ARN sunt transportai iniial n citoplasm, unde se asociaz cu proteinele formnd
molecule de snRNP funcionale care apoi se rentorc n nucleu. Proteinele care se leag la
captul 5 al unor snARN par a fi implicate n exportul snARN n citoplasm, pe cnd
secvenele prezente pe proteinele snRNP determin pasajul snRNP din citoplasm n nucleu.
(Cruce, 1999)
2. Nucleolul apare ca un corpuscul globulos la microscopul optic, cu diametrul de
0,5m. Este o poriune din nucleu unde sunt transcrise genele ARNr i sunt asamblate
subunitile ribozomale. Numrul nucleolilor variaz n funcie de intensitatea produciei de
ribozomi, nucleolul fiind sediul biogenezei ribozomale, mrimea lor reflect intensitatea
produciei de ribozomi.
Lipsesc n celulele care nu au sintez proprie de proteine (exp. celulele embrionare).
Nucleolii sunt bine vizibili n celulele care cresc rapid (celulele canceroase), dar i n
celulele care sintetizeaz o mare cantitate de proteine.
n celulele tinere i celulele secretorii, nucleolii sunt mari i multipli, iar n celulele
canceroase ajung pn la 10-12 cu forme monstruoase. n celulele btrne, cu activitate
metabolic redus, nucleolul este mic i unic.
Nucleolul apare nconjurat de un nveli de heterocromatin care variaz ca i grosime
de la un tip celular la altul i reprezint ADN-ul nucleolo-asociat numit i pars chromosoma.
Unii nucleoli conin i o parte amorf- pars amorpha.
Ca structur nucleolul prezint dou pri cu morfologie diferit:
Note de
curs5
Biologie celulara si moleculara
Note de
curs6
Biologie celulara si moleculara
Note de
curs7
Biologie celulara si moleculara
lumea vie, corespunde funciilor materialului genetic, deoarece explic modul n care se
stocheaz, se transmite i se exprim informaia ereditar. Gena nceteaz s mai fie o
entitate "misterioas", are o structur chimic complex i bine definit, iar ADN devine nu
numai esena geneticii ci i un veritabil simbol al vieii. Consecinele pentru practica medical
ale revoluiei determinate de ctre descoperirea structurii i funciei ADN sunt i vor fi att de
spectaculoase nct nu vor avea egal n istoria medicinii.
Acizii nucleici sunt substane chimice macromoleculare alctuite din uniti mai simple
numite nucleotide. O nucleotid este alctuit dintr-o baz azotat, o pentoz (zaharid) i un
radical fosforic.
purinele
Adenina Guanina
NH2 O
6
4 7 N
1
N N HN
2 8
N 5 H2N N NH
NH
3 9
Note de
curs8
Biologie celulara si moleculara
Riboza Dezoxiriboza
pentoze
HO CH2 OH HO CH2 OH
O O
OH OH OH
Bazele azotate purinice i pirimidinice se pot afla sub dou forme, rezultate prin
schimbarea poziiei unui atom de hidrogen, fenomen denumit tautomerie. Existena
tautomeriei are nu numai importan chimic, ci i genetic, deoarece d o explicaie unor
modificri spontane sau experimentale, intervenite n macromeolecula acizilor nucleici.
Datorit tautomeriei au loc schimbri ale moleculei respective n privina capacitii
sale de a intra n reacii chimice. Astfel atomii de oxigen ataai la molecula timidinei i
guaninei n poziia C6 au de obicei forma cetonic (C=O) i numai n cazuri foarte rare se
prezint sub forma enolic (C-OH).
n mod similar atomii de azot ataai inelului purinic i celui pirimidinic se afl sub
forma amino (NH2) i numai n cazuri foarte rare sub forma imino (NH).
Din punct de vedere biologic, faptul c atomii de hidrogen i pstreaz n general
poziia n molecul are importan pentru stabilirea macromoleculei de ADN. Din cauza
fenomenului de tautomerie se produc erorile de imperechere, prin care adenina se
imperecheaz cu citozina, iar guanina cu timina. Aceasta este una din cauzele mutaiilor la
nivel molecular.
Polimerizarea nucleotidelor, n molecula de ADN, se realizeaz prin legturi
covalente 3'- 5' fosfodiester, formate ntre gruparea OH a C3 al deoxiribozei unui nucleotid
i restul fosfat fixat la C5 al nucleotidului urmtor. Se formeaz astfel o caten (lan)
continu, linear (neramificat), care reprezint structura primar a ADN
Acest lucru este esenial deoarece secvena (ordinea) nucleotidelor n lungul catenei
de ADN reprezint informaia genetic codificat, pe baza creia se stabilete ordinea
aminoacizilor n proteine. Sensul de "citire" al informaiei genetice este determinat de
polaritatea 5' - 3' a catenei de ADN . Ea este dat de faptul c poziiile 5'-fosfat a primului
nucleotid i 3'-hidroxil a ultimului nucleotid al catenei sunt libere, neangajate ntr-o legtur
chimic. Orice secven de nucleotide se "citete" n direcia 5' - 3' i se scrie cu captul 5' la
stnga, de ex. 5'-ATGCCTAGATCA-3'. Fiecare caten a ADN este deci o secven orientat,
definit prin nlnuirea nucleotidelor.
Informaia genetica
Note de
curs9
Biologie celulara si moleculara
Informaia ereditar este codificat, fiind scris ntr-un limbaj foarte simplu, cu
ajutorul unui "alfabet nucleic" ce are numai patru "litere": A, T, G i C (corespunztoare
celor patru tipuri de nucleotide). Folosind aceste elemente de cod se pot scrie "cuvinte" de trei
litere, asamblate ntr-o "fraz" ce alctuiete o gen. La fiecare triplet de nucleotide, numit
codon corespunde pe baza codului genetic, un anumit aminoacid din structura proteinei sau
un "semnal" necesar pentru a ncepe sau termina lectura mesajului.
Structura secundar
Watson i Crick au propus un model al moleculei de ADN alctuit din dou catene
polinucleotidice, legate ntre ele prin bazele azotate, n mod complementar i nfurate
plectonemic pentru a forma o dubl spiral elicoidal (o elice dubl) orientat spre dreapta,
cu diametrul de 20 i pasul elicei de 34 . Pornind de la faptul c raportul A/T = G/C = 1,
Watson i Crick consider c n molecula de ADN se produce o mperechere "preferenial" a
bazelor care unesc cele dou catene; bazele azotate (situate spre interiorul moleculei) se leag
complementar: o baz purinic se unete cu o baz pirimidinic sau, mai exact A T i G
C (formnd un cuplu sau o pereche de baze, prescurtat pb).
5'-ATGCCAG-3'
3'-TACGGTC-5'.
Note de
curs10
Biologie celulara si moleculara
Cele dou catene ale ADN se nfoar (se mpletesc) plectonemic (una n jurul alteia,
ca "o frnghie", i amndou n jurul unui ax central (imaginar) al moleculei, formnd o
dubl spiral elicoidal coaxial (o elice dubl), orientat spre dreapta (dextrogir). Ea poate
fi comparat cu o "scar n spiral" n care axele fosfoglucidice formeaz marginile scrii iar
perechile de baze, treptele ei. Aceast structur, asociat funciilor majore pe care le
ndeplinete ADN, a fost plastic numit "elicea vieii", fiind un veritabil simbol al lumii vii.
Note de
curs11
Biologie celulara si moleculara
Structura ADN este, n ansamblul ei, perfect regulat, ordonat: diametrul moleculei 2
nm; o tur complet are 3600; pasul elicei 3,4 nm permite dispunerea a 10 perechi de baze
(Figura 9.3).
n configuraia ei spaial, molecula de ADN prezint dou anuri laterale: unul mai
mic i altul mai mare. Ele sunt importante n recunoaterea stereochimic i fixarea pe ADN
a histonelor (la nivelul anului mici) sau a unor molecule proteice reglatoare (la nivelul
anului mare), singurul loc n care bazele sunt accesibile acestor proteine care vor influena
(regla) realizarea funciilor ADN.
ADN-Z intervine foarte probabil n inactivarea unor gene i, deci, n controlul expresiei
informaiei genetice. Conversia local B - Z (mai ales n situsurile de reglare a transcripiei)
poate fi realizat prin fixarea mai intens a histonelor sau a altor molecule ce produc represia
genelor sau prin metilarea citozinei din situsurile GC. Astfel, un "viraj la stnga" la nceputul
unei gene determin stoparea activitii ei.
n finalul acestei prezentri este important de subliniat faptul c tranziia ADN B-Z ca i
modificrile conformaionale A - B - C care apar n anumite regiuni ale ADN (cu o secven
special a nucleotidelor), demonstreaz elocvent faptul c molecula de ADN nu are o
structur fix, rigid, ncremenit. n funcie de condiiile de mediu, moleculele ADN snt
flexibile, ntr-o permanent stare dinamic, deformndu-se nencetat; pe drept cuvnt se poate
spune c molecula de ADN (simbolul vieii) "pulseaz sau respir".
Note de
curs12
Biologie celulara si moleculara
Nucleosomii sunt legai ntre ei printr-un segment de ADN liber (60 p.b.), formnd
filamentul cu nucleosomi (Figura 9.4), asemntor unui "irag de mrgele". Aceast structur
(meninut strns prin histona H1, ce leag doi nucleosomi vecini) realizeaz o rat de
"mpachetare" a ADN nativ (dublu helix de 2nm) de circa 10:1.
Mecanismul prin care se formeaz nucleosomii este nc puin cunoscut. Cert este
faptul c nucleosomii nu sunt structuri statice, rigide, deoarece funciile ADN (transcripia,
replicarea, recombinarea) necesit separarea celor dou catene ale ADN i implicit
modificarea structurii nucleosomului. Ei sunt fixai la o singur caten a ADN ("n faz")
aceiai de la o celul la alta.
Note de
curs13
Biologie celulara si moleculara
Se consider c fiecare bucl sau domeniu (ce conine cteva gene) ar putea fi o unitate
funcional de transcripie i replicaie; buclele au deci att o semnificaie structural ct i
un rol funcional important.
Molecula de ADN sufer astfel o compactare de 10.000 de ori i poate ncape facil n
spaiul mic, de civa microni, al nucleului. Acest fenomen favorizeaz distribuia corect a
materialului genetic n diviziune i asigur funcionarea ADN.
Buclele fibrei de 300 nm se fixeaz neregulat de scheletul proteic. Din loc n loc (n
regiuni de ADN n care predomin secvene cu p.b. A-T) ele formeaz mici aglomerri de
bucle, numite cromomere, separate prin zone mai laxe. Pe msur ce cromosomul profazic se
condeseaz cromomerele mici, vecine, se unesc ntr-o structur mai mare. Aceste cromomere
mari se adun n grmezi i formeaz benzi intens condensate i colorate (benzi G); ele vor fi
separate prin benzi mai puin condensate i mai clare (benzi R).
ADN care formeaz benzile G (sau Q) conine mai multe puncte de ataare, strns
apropiate, iar buclele sunt mai dense, mai compactate; coloranii (Giemsa, Quinacrin) care
au afinitate pentru regiunile SAR bogate n A-T vor da benzi G. In benzile R densitatea
punctelor de ataare este mai mic, buclele sunt mai laxe.
Note de
curs14
Biologie celulara si moleculara
CAPITOLUL 10
TRADUCEREA INFORMAIEI GENETICE
Transferul informaiei din ADN n ARN
Activarea aminoacizilor pentru formarea proteinelor
Iniierea si realizarea sintezei proteinelor
Mecanismele moleculare de aciune a medicamentelor asupra funcionrii
acizilor nucleici si asupra sintezei de proteine
Una dintre cele mai importante funcii ale ADN este aceea de a construi matri pentru
sinteza moleculelor de ARN deoarece numai n acest fel informaia genetic stocat n ADN
poate fi utilizat de ctre celul. Sinteza moleculelor de ARN n nucleu se numete ADN
transcripie.
La majoritatea celulelor de mamifere, doar 1% din secvenele de dezoxiribonucleotide sunt
copiate n secvene de ribonucleotide (ARN) funcionale, moleculele de ARN, produse n acest
fel, sunt folosite de ctre celul n mai multe direcii, fiind de mai multe tipuri:
ARN mesager
La eucariote, majoritatea ARN premesager (produsul primar al transcrierii) care conine
informaia genetic pentru diferite proteine sufer 3 modificri:
1- adiia la captul 5 al ARN premesager a unei secvene 7-metil guanozintrifosfat
numit cap, necesar pentru iniierea traducerii i aezarea ARNm pe ribozomi.
2- clivarea i poliadenilarea ARN premesager (adiia la captul 3 -OH al ARN
premesager a unei secvene poli (A) lung de aproximativ 200 nucleotide, implicat
n stabilitatea intracelular a ARNm).
Note de
curs15
Biologie celulara si moleculara
Mai nti captul 3 este pregtit de o enzim, care taie o anumit secven de
nucleotide din lanul ARN i apoi adaug o serie de adenine (A) care se repet (poli
A).
3-atunci cand n ARN premesager sunt prezente secvene fr rol de codificare numite
introni (neinformaional), care separ secvenele codificatoare (informaionale)
numite exoni, secvenele de transcriere ale intronilor sunt excizate, iar cele ale
intronilor sunt reunite (eng. splicing). n acest proces sunt implicate complexele
moleculare numite spliceosomi reprezentate de snARN i aproximativ 145 de
proteine diferite.
Note de
curs16
Biologie celulara si moleculara
ARN transfer
Codonii din lanul de ARNm nu recunosc direct aminoacizii pe care-i specific, deci
grupul de trei nucleotide nu se leag direct de aminoacizi. Acest rol de recunoatere i de adaptor
este asigurat de ARN transfer (ARNt) ce cuprinde 80 de nucleotide care recunosc codonul, dar
prezint i un situs de legare pentru un aminoacid.
ARTt este o molecul cu structur secundar i teriar. Este solubil n citoplasm i
reprezint aproximativ 10-20% din ARN total. Sinteza ARNt are loc sub forma unor precursori
mai mari din care bazele excedentare sunt ndeprtate, iar bazele originare sunt supuse unor
modificri enzimatice ca metilarea, acetilarea, dezaminarea. Unele molecule precursor conin
mai multe tipuri de ARNt din care, printr-un proces de clivare, sunt separate moleculele de ARN
funcionale identice sau diferite.
ARNt are particularitatea de a fi parial bicatenar prin ndoirea n ac de pr i legarea
bazelor complementare ale unei molecule monofilare.
Ca urmare, ARN t prezint o structur secundar, de forma unei frunze de trifoi care
rezult din legarea covalent a unui numr mare de baze , ce formeaz brae (eng. stem) dublu
catenare ntrerupte de zone monocatenare sub form de bucle (eng. loop).
Numrul nucleotidelor este constant n diferite brae i bucle ale moleculei, cu excepia
buclei variabile (funcie necunoscut) i segmentelor i din bucla D.
ARN t conine 6 situsuri funcionale (Figura 10.1) :
1- situsul acceptor de aminoacizi (captul 3 terminal este monocatenar i comun tuturor
tipurilor de ARNt, se termin cu secventa CCA i formeaz situsul de legare aminoacil= situsul
acceptor de aminoacid); gruparea 3OH a ribozei din nucleotidul adenin terminal, servete ca
acceptor , de care se leag covalent un aminoacid. Reacia specific de legare este catalizat de
aminoacil ARNt sintetaza
2- situsul de interaciune (recunoatere) ribozomal-bucla T (bucla TC -=pseudouridina)
formeaz perechi de baze cu secven complementar a ARNr 5S
3-situsul de recunoatere a aminoacil ARNt sintetazei (bucla D alctuit din 6-12 baze
nepereche diferite dela un tip de ARN t la altul)
4- situsul de recunoatere a factorilor care particip la transferul ARNt pe ribozom
Note de
curs17
Biologie celulara si moleculara
Note de
curs18
Biologie celulara si moleculara
Prima reacie este de activare, legarea aminoacidului de ARNt specific se face printr-o
legtur macroergic ceea ce determin apariia unui precursor activat. Energia din legtura
respectiv este folosit pentru formarea legturilor peptidice cu energie joas.
Note de
curs19
Biologie celulara si moleculara
Note de
curs20
Biologie celulara si moleculara
ARNm procariotic este policistronic, adic posed informaia necesar pentru sinteza mai
multor proteine diferite, care vor rezulta din aceeai molecul de ARNm, iar la eucariote ARNm
este monocistronic, adic poart informaia pentru sinteza unei singure proteine.
Note de
curs21
Biologie celulara si moleculara
Sinteza unei proteine este oprit printr-un semnal determinat de prezena codonilor stop:
UAA, UAG, UGA. Proteinele numite factori de eliberare se leag de codonul stop care ajunge n
situsul A al ribozomilor (Figura 9.4). Aceast legare afecteaz activitatea peptidil transferazei i
o determin s adauge o molecul de ap la peptidil-ARNt n locul unui aminoacid. Aceast
reacie desprinde captul carboxil al lanului polipeptidic n cretere, de pe ARNt i ca urmare
lanul polipeptidic este eliberat n citoplasm.
Note de
curs22
Biologie celulara si moleculara
Note de
curs23
Biologie celulara si moleculara
-tratament preventiv n
malarie, toxoplasmoz
actinomicoze
DHF este produs din acidul folic, vitamin ce nu poate fi sintetizat de organismul uman,
dar trebuie introdus din surse exogene, prin alimentaie. Spre deosebire de organismul
eucariotelor, bacteriile nu au nevoie de acid folic ntruct pot s-i sintetizeze DHF din
precursori ai metabolismului propriu.
Cunoscndu-se aceste elemente particulare ale bacteriilor, n privina sintezei de DHF, au
fost create medicamenete cu efect bacteriostatic (Tabel 10.2) care s nu afecteze celulele umane,
dar care s interfereze selectiv cu biosinteza bacterian a THF.
infectii hepatice)
rifampin Bactericid pentru formele Inhibitor al enzimelor de tipul
gram-negative i ARN polimeraze
grampozitive precum i
pentru micobacterii
(Mycobacterium
tuberculosis i M. Leprae)
rifabutin Idem rifampin si se Efect molecular similar
administreaz cand se creaz rifampin
rezistena la rifampin
Note de
curs25
Biologie celulara si moleculara
CAPITOLUL 11
Note de
curs26
Biologie celulara si moleculara
Stadiul primar n degradarea unei proteine este scindarea specific a ctorva legturi
peptidice, urmat de proteoliza nespecific comun tuturor proteinelor. Se pare c n procesul de
transformare a catenelor polipeptidice au loc nu numai procese de scindare, ci si procese opuse
proteolizei, adic legarea captului C-terminal al unei peptide cu captul N- terminal al altei
peptide obinndu-se lanuri mai mari (fenomen observat n unele activiti bacteriene).
Proteoliza limitat cu ajutorul enzimelor este modul frecvent ntlnit la organismele vii
pentru sinteza proteinelor active.
Exemple :
- activitatea precursorilor enzimelor proteolitice
- procese morfogenetice ale unor virusuri
- mecanisme succesive ce intervin n coagularea sangelui
- mecanisme implicate n formarea diferitelor proteine ca insulina, glucagonul,
colagenul, proteinele virale.
tranziie este numit energie de activare i ea constituie o barier pentru evoluia reaciei
deoarece limiteaz viteza de reacie.
Enzimele celulare se combin cu moleculele biologice i reduc energia de activare a unor
reacii. Prin scderea a energiei de activare pentru o reacie sau alta, enzimele direcioneaz
moleculele biologice pe diferite ci metabolice. Activitatea enzimatic implic legarea lor la
substrat cu formarea unui complex enzim-substrat. Acest etap de legare este o
interaciunea foarte specific.
Situsurile active sunt alctuite din aminoacizi situai n diferite pri ale lanului
polipeptidic. Substraturile iniiale se leag la situsul activ prin interaciuni necovalente, care
includ legturi de hidrogen, legturi ionice i interaciuni hidrofobe.
Multe enzime pe lng faptul c reunesc mai multe substraturi i modific conformaia
substraturilor pentru a le apropia de starea de tranziie, particip direct la procesul catalitic. De
exemplu, chimotripsina este un membru al familiei de enzime serin proteaze, care diger
proteinele prin cataliza hidrolizei legturilor peptidice.
Diferii membri ai acestei familii de enzime (chimotripsina, tripsina, elastaza i trombina)
au specificitate de substrat distinct, deoarece cliveaz legturile peptidice adiacente dintre
diferii aminoacizi.
Astfel, n timp ce, chimotripsina diger legaturile adiacente ale aminoacizilor hidrofobi,
cum ar fi triptofanul i fenilalanina, tripsina diger legturile adiacente aminoacizilor bazici,
cum ar fi lizina i arginina.
Situsurile acestor enzime conin trei aminoacizi- serina, histidina i aspartanul, care
determin hidroliza legturii peptidice.
Substraturile se leag la serin proteaze prin inseria aminoacidului adiacent la situsul de
clivare n interiorul unui buzunar de la nivelul situsului activ al enzimei.
Natura acestui buzunar determin specificitatea substratului pentru diferiti membri ai
familiei de serin proteaze.
Coenzimele
Sunt molecule mici care acioneaz mpreun cu enzimele pentru a amplifica viteza
reaciilor. Aceste coenzime sufer modificri reversibile n reacia n care se implic. Ele sunt
reciclate si pot participa la numeroase reacii enzimatice.
Coenzimele servesc ca i transportori pentru diferite tipuri de reacii chimice. Astfel,
coenzima nicotinamid adenin dinucleotid (NAD+) funcioneaz ca un transportor de electroni n
reacii de oxido-reducere.
Multe coenzime transfer grupri chimice adiionale cum ar fi carboxil (biotina) sau grupul
acil (coenzima A) sau sunt derivai ai vitaminelor (NAD+ de la niacina, FAD de la riboflavin).
Note de
curs28
Biologie celulara si moleculara
O modalitate obisnuit de reglare este inhibiia prin feed back sau reglarea alosteric, n
care activitatea enzimatic este controlat prin legarea moleculelor mici la situsuri reglatoare de
pe enzime.
Moleculele reglatoare nu se leag la situsul catalitic, ci la un alt situs alosteric, de pe
protein (allo = altul, steric = situs). Legarea moleculelor reglatoare schimb conformaia
proteinei, care la rndul ei i modific forma situsului activ i activitatea catalitic.
n cazul treonin dezaminazei, enzima care face cataliza transformrii aminoacidului
treonin n izoleucin, legarea moleculei reglatoare (izoleucina= produsul reaciei ) i inhib
activitatea enzimatic. Uneori ns, moleculele reglatoare servesc ca activatori, stimuland enzima
int.
Activitile enzimatice pot fi reglate, prin interaciunea lor cu alte proteine i prin
modificrile covalente, cum ar fi adiia gruprilor fosfat la resturile de serin, treonin, sau
tirozin. Fosforilarea este un mecanism de reglare a activitii enzimatice. Adiia gruprilor
fosfat poate s stimuleze sau s inhibe activitile enzimatice.
De exemplu, celulele musculare rspund la epinefrin (adrenalin) prin clivarea
glicogenului n glucoz oferind o surs de energie pentru stimularea activitii musculare.
Descompunerea glicogenului este catalizat de enzima glicogen fosforilaz, care este activat
prin fosforilare ca rspuns a legrii epinefrinei la un receptor de pe suprafaa celulei musculare.
n schimb, prin fosforilare se inhib activitatea enzimei glicogen sintetaza i se mpiedic
sinteza glicogenului din glucoz. Fosforilarea proteinelor are un rol important, de asemenea, n
procesele de cretere i difereniere celular.
Enzimele P450 polimorfe pot produce abolirea, alterarea cantitativa sau calitativ sau
chiar potenarea unui medicament.
Alele P450 complet inactive au fost descoperite pentru CYP2D6, CYP2C19 i CYP2A6.
Alelele incomplet homozigote duc la absena total a enzimei active i la diminuarea capacitii
de metabolizare. Au fost identificate peste 30 alele i cam 55 variante de CYP2D6 deficiente.
Tabel 11. 1. Enzime citocrom P450 CYP2D6 polimorfe i distribuia global a variantelor
majore de alele.
Note de
curs29
Biologie celulara si moleculara
CYP2C9 constituie una din izoenzimele principale ale citocromului P450 cu rol n
metabolismul medicamentelor. Astfel, CYP2C9 este responsabil de metabolizarea a 5% din
medicamentele prescrise, cele mai importante fiind: glipizida (hipoglicemic oral), fenitoina
(anticonvulsive, antiaritmic) acioneaz la nivel celular intervenind n funcionarea canalelor
ionice, transportul activ, stabilitatea membranelor i derivaii cumarinici (anticoagulani,
compui antineoplazici).
Subiecii cu 13 copii ale genelor CYP2D6 formeaz o cantitate mai mare de metabolii
dect cei cu mai puine gene CYP2D6 active. Se formeaz masiv morfina, la aceti subieci, cnd
iau codein care este metabolizata de CYP2D6.
Note de
curs30
Biologie celulara si moleculara
Efectul opioid al codeinei este corelat cu concentraia plasmatic a morfinei produs prin
metabolizarea codeinei administrate. Codeina este ineficace la doze uzuale, la 7-10% din
populaia alba, din cauza alelelor CYP2D6 nefuncionale, homozigote. Pe de alt parte, la
persoanele cu metabolism ultrarapid, codeina administrat poate produce masiv morfina.
Note de
curs31