MARKERI BIOLOGICI MORFOLOGICI, STRUCTURALI I ULTRASTRUCTURALI UTILIZAI PENTRU EVALUAREA IMPACTULUI ANTROPIC ASUPRA ECOSISTEMELOR

Utilizarea biomarkerilor n cuantificarea impactului antropic asupra diverselor ecosisteme a fost relativ recent introdus n cercetarea tiinific pe plan mondial. Iniial, conceptul de biomarker cuprindea doar metabolii, enzime sau alte substane ce puteau fi utilizate pentru stabilirea gradului de interaciune dintre unele substane chimice i sistemele biologice. n ultimii ani, aceast categorie de indicatori a nceput s se extind, nglobnd pe lng markerii biochimici i o serie de markeri structurali i n special ultrastructurali, cuantificabili, ce pot ntregi tabloul interaciunii complexe dintre diferitele substane chimice i organismul viu. Ei pot confirma expunerea unui organism individual sau a unei populaii la diferite substane chimice. Procesul de selectare i apoi de validare a biomarkerilor necesit o grij deosebit fa de sensibilitatea i specificitatea lui n a cuantifica gradul de interaciune ntre organismul viu i substanele strine la care acesta a fost expus. Dac biomarkerii prezint o corelare semnificativ (temporar i spaial) cu modificrile evidente ce apar n diferite ecosisteme sub influena poluanilor, atunci ei vor putea fi utilizai pentru detectarea fazelor incipiente de afectare, nainte ca modificrile vizibile s fie evidente (Cape, 1989, cf. I.Gostin, 2007). Odat identificai, biomarkerii pot fi utilizai n populaii pentru screening (determinri randomice) sau pentru monitoring (determinri dirijate la aumite intervale de timp pentru a observa o dinamic a rspunsului specific). Direciile principale de cercetare pe plan mondial vizeaz evidenierea rspunsului adaptativ la al indivizilor la modificrile ce au loc n mediu sub influena agenilor poluani. Aceasta se manifest la diferite niveluri: morfologic, structural i ultrastructural (fluctuaii ale simetriei, modificri la nivelul cloroplastelor, mitocondriilor, variaii ale parametrilor nucleolari numr, dimensiuni, procentul de celule cu nucleoli heteromorfici); biosintetic, ce poate fi evideniat prin studii biochimice (determinri enzimatice catalaz (CAT) i peroxidaz, superoxid dismutaz (SDO), acetil colinesteraz (AcHE), sau determinri ale unor proteine considerate indicatori ai rspunsului adaptativ).

Exist n prezent intenia de a standardiza ca biomarkeri modificri structurale ce apar la nivelul organelor att la animale, ct i la plante. Aspectele ultrastructurale ale impactului polurii asupra organismelor vii au fost studiate sub dou aspecte: de evideniere a modificrilor ce apar la nivelul diferitelor organite celulare n condiii de mediu modificate, sau de furnizare a unor biomarkeri ultrastructurali pentru cunatificarea gradului de afectare a ecosistemului (Schramm et al., 1998, Wai, 2000, cf. I.Gostin, 2007).

5.1.Markeri morfologici Stabilitatea structural sau homeostazia se refer la capacitatea unui individ de a manifesta un fenotip constant n anumite condiii de mediu (Graham et al., 1993). Stabilitatea structural redus poate fi consecina aciunii unei game variate de factori de mediu i/sau genetici (Valentine et al., 1973, Yablokov, 1986, Clarke, 1992, 1993, cf. I.Gostin, 2007). Asimetria fluctuant (FA), asimetria directional (DA) i antisimetria (AS) sunt cunoscute ca cele mai frecvente tipuri de asimetrii morfologice legate de interaciunea cu factorii de mediu. Fiecare din acestea se caracterizeaz prin combinaii diferite de medii i variante ale parametrului R L (unde R = jumtatea dreapt a unui organ vegetativ i L = jumtatea stng). Asimetria direcional (DA) este caracterizat printr-o distribuie normal a parametrului R L, unde media difer semnificativ de 0. Antisimetria (AS) este asociat cu o curb bimodal a parametrului R L. Asimetria fluctuant (FA) se manifest cnd diferenele de dezvoltare dintre cele dou jumti presupus simetrice ale unui organ vegetal sunt distribuite randomic. Aceast din urm form de asimetrie este propus ca indicator al stresului indus de factorii de mediu (Leary i Allendorf, 1989). n pararel, asimetria fluctuant a fost utilizat pentru a estima instabilitatea structural a unui organ sau chiar a unui organism cu simetrie bilateral care, n urma perturbarilor n dezvoltarea sa, este incapabil s produc un fenotip determinat. Variaiile fenotipice ale indivizilor unei specii pot fi compartimentate n trei categorii: cu cauz genetic, produse de mediu sau produse de interaciunea genotip-mediu (Lajus et al., 2003 cf. I.Gostin, 2007). La plante, simetria fluctuant a fost utilizat pentru a evalua instabilitatea structural a florilor sau a frunzelor.

Utilizarea asimetriei fluctuante ca indicator al calitii unui anume habitat este util mai ales n cazul speciilor ce manifest o larg rspndire, care tolereaz o multitudine de condiii de mediu (specii cosmopolite) (Hodar, 2002). Calitatea unui habitat se refer la capacitatea acestuia de a furniza condiii ct mai favorabile pentru existena indivizilor i a populaiilor unei specii (Krausman, 1999 cf. I.Gostin, 2007). Printre cauzele cunoscute care determin asimetria fluctuant la plante enumerm: temperatura, nutrienii, variaia intensitii luminoase, factori genetici (mutaii, hibridizri), influena poluanilor (Moller si Swaddle, 1997). Investigaiile asupra asimetriei fluctuante sunt uor de realizat, necostisitoare i de aceea sunt frecvent folosite pentru monitorizarea nivelului de stres n diverse ecosisteme (Kozlov et al., 1996, Hochwender si Fritz, 1999, cf. I.Gostin, 2007). Principala problem n utilizarea asimetriei fluctuante este dificultatea decelrii modificrilor induse de factori genetici de cele produse de agenii poluani. Stresul indus de mediu trebuie s aib o intensitate suficient de mare pentru a produce modificri ale FA. Teoretic, asimetria fluctuant ar trebui s fie cu att mai intens cu ct factorii de stres se manifest mai pregnant. ns de cele mai multe ori, condiiile adverse de mediu pot afecta procesul de evoluie a speciei, selectnd genotipurile cele mai rezistente, care se adapteaz cel mai uor noilor condiii. De aceea n mediile mai stresante se regsesc adesea indivizi mult mai simetrici, care sunt mai bine adaptai (Moller i Swadlle, 1997). 5.2.Markeri structurali i ultrastructurali Emisia de poluani atmosferici (rezultat n urma activitii industriale, domestice sau sociale) poate crea probleme organismelor vegetale datorit gazelor toxice cu care acestea vin n contact. La nivel ultrastructural apar numeroase modificri la nivelul aparatului vegetativ i de reproducere. Acestea nsoesc modificrile morfologice cum ar fi clorozele i necrozele adiacente i constau n distrugerea pigmenilor clorofilieni, degenerarea tilacoizilor i liza plastidelor (Lendzian si Unsworth 1983, Psaras i Christodoulakis 1987, cf. I.Gostin, 2007). Dac poluanii gazoi ptrund n plante prin ostiolele stomatelor, componentele ploii acide penetreaz frunzele din cuticul. Ploaia acid poate modifica structura cerii epicuticulare i a altor caracteristici ale suprafeei foliare, influennd astfel aderena apei la suparafaa apei i ptrunderea apei de ploaie n esuturile acesteia. Tipul de cear epicuticular, arhitectura suprafeei cuticulare, tipul de peri tectori, forma celulelor epidermice constituie caracteristici ale

frunzei care sunt n strns legtur cu sensibilitatea diverselor specii de plante la poluarea atmosferic. Anatomia frunzei i caracteristicile micromorfologice ale plantei sunt trsturi importante pe baza crora se poate stabili gradul de sensibilitate la agenii poluani. Metalele grele sunt cunoscute ca fiind foarte puin mobile, ceea ce nseamn c, odat ajunse ntr-un ecosistem, se elimin extrem de greu din acesta. O parte sunt absorbite de ctre plante prin intermediul rdcinilor i se acumuleaz n esuturile lor, fiind preluate prin consum de ctre animalele ierbivore, iar ulterior de ctre cele carnivore. Datorit slabei lor mobiliti, metalele grele se concentreaz la nivelul fiecrui nivel trofic, respectiv concentraia lor n plante este mai mare dect n sol, n animalele ierbivore mai mare dect n plante, n esuturile carnivore mai mare dect la ierbivore, concentraia cea mai mare fiind atins la capetele lanurilor trofice, respectiv la rpitorii de vrf i implicit la om. Acest fenomen poart numele de bioacumulare. Unele metale cum ar fi Ag, Au, Hg, Pb sunt foarte toxice pentru plante, toxicitatea lor manifestndu-se i la concentraii mici. Altele, precum Cu, Zn, Fe sunt microelemente, eseniale pentru ca mecanismul secundar s se desfoare n condiii normale. Cr i Pb nu sunt eseniale, ns sunt toxice pentru celulele plantelor (Panda et al., 2003). Cromul exist n natur sub forma Cr III i Cr VI, forma hexavalent fiind mai toxic dect cea trivalent. Cromul intr n componena multor pigmeni i aceasta este sursa potenial de poluare n natur. Efectele negative pe care le are asupra plantelor se manifest prin apariia de cloroze, reducerea creterii, inhibarea germinrii, degradarea pigmenilor, inducerea stresului oxidativ (Barcelo si Poschenrieder, 1996 cf. I.Gostin, 2007). Att cromul ct i plumbul pot cauza modificri ale cloroplastelor n celulele asimilatoare (Choudhury si Panda, 2005 cf. I.Gostin, 2007). Determinarea cantitii de metale grele din plante ofer date concrete despre acumularea acestora la nivelul organismului vegetal, efectele lor asupra metabolismului sunt diferite, n funcie de gradul de sensibilitate al fiecrei specii. Pentru a verifica semnificaia pe care o anumit cantitate de metale grele o are fa de o specie dat este indicat s se efectueze determinri ale coninutului de polifenoli din organele vegetative. Fenolii pot fi utilizai ca biomarkeri ai polurii, deoarece particip la reacia de rspuns a plantelor care acumuleaz metale grele, acionnd ca antioxidani capabili s neutralizeze radicalii liberi produi de acestea. Frunzele plantelor ce cresc n zone contaminate cu metale grele conin cantiti de fenoli mult mai crescute dect frunzele celor din zone neafectate de poluare. Ei pot fi utilizai ca indicatori ai polurii n stadii precoce, nainte de a fi vizibile modificri morfologice, structurale i chiar

ultrastructurale. Pentru a studia la nivel celular rolul polifenolilor n cazul plantelor ce acumuleaz metale grele se efectueaz un tip special de fixare ce combin glutaraldehida cu cafeina pentru a precipita aceti compui n celule. Astfel, ei apar la microscopul electronic cu transmisie (TEM) ca fiind electrono-deni, opaci. Deoarece compuii secundari de metabolism joac un rol semnificativ n cadrul interaciunilor ce au loc ntr-un ecosistem, trebuie luat n considerare rolul diferiilor factori de stres care influeneaz cantitatea i compoziia lor deoarece modificrile se propag inevitabil i la alte specii din lanul trofic (Loponen et al., 2001 cf. I.Gostin, 2007). Produii secundari de metabolism au localizri precise n compartimente la nivel subcelular, acestea fiind legate de proprietile lor chimice, precum i de rolul jucat n fiziologia plantei. Glicozidele fenolilor sunt localizate n medii hidrofile, cum ar fi vacuolele i apoplastul, n timp ce agliconii se regsesc n regiuni lipofile (Sakihama et al., 2002 cf. I.Gostin, 2007). Ali compui fenolici solubili pot fi localizai n citoplasm sau chiar n nucleu (Stefanowska et al., 2002 cf. I.Gostin, 2007). Deoarece distribuia i acumularea produilor secundari de metabolism n celule este condiionat uneori i de factorii de mediu, localizarea fenolilor, n cazul celulelor expuse polurii cu metale grele depinde de modificrile pe care acestea le induc la nivel ultrastructural. Numeroase studii efectuate pe diferite specii de plante au artat grade diferite de afectare ale acestora, ca urmare a supunerii la aciunea poluanilor atmosferici, i, deci, nivele diferite de sensibilitate.