1

Biofizica - Conf. Dr. Constanta GANEA - Curs 10.4

Elemente de radiobiologie

Radiobiologia studiaz efectele biologice ale radiaiilor ionizante (radiaiile cu E > 10 eV). Radiaiile ionizante sunt de dou tipuri: a) radiaii corpusculare: , , neutroni, protoni, deuteroni b) radiaii electromagnetice: x, a) Radiaiile reprezint nuclee de heliu, alctuite din 2 protoni i 2 sunt electroni (-) sau

neutroni, au sarcina +2 i masa 4 u.a.m. Radiaiile

pozitroni (+) care provin din nucleu n urma dezintregrrii acestuia. Protonii, neutronii i deuteronii sunt particule care apar prin dezintegrarea nucleului sau n urma unor reacii nucleare. b) Radiaiile x (Roentgen) se pot produce n tuburile Coolidge prin frnarea unor electroni accelerai (dar ele exist i n radiaiile cosmice). Radiaiile apar n urma unor dezintegrri radioactive sau se pot produce prin frnarea unor electroni accelerai n sincrotroane. Deci, radiaiile ionizante apar, n general, atunci cnd este prezent o surs de radiaii oarecare, fie dispozitiv tehnic, fie substan radioactiv. O surs radioactiv este caracterizat prin activitatea ei. n cazul substanelor radioactive, activitatea se definete ca fiind viteza de dezintegrare, adic numrul de nuclee dezintegrate n unitatea de timp: = - dN/dt Introducnd expresia legii dezintegrrii radioactive: N = N0e-t, rezult: = - d(N0e-t)/dt = N0e-t = N Expresia = N reprezint o alt form a definiiei activitii radioactive.

Se definete T1/2 timpul de njumtire, alt noiune important n radiobiologie, ca fiind timpul dup care jumtate din numrul de nuclee sau dezintegrat. Din N = N0e-t, cu N = N0/2, rezult N0/2 = N0e-t i: T1/2 = ln 2/ Timpul de njumtire este o caracteristic important a unui radionuclid. Unitatea de msur a activitii radioactive este Bequerel-ul (Bq). 1 Bq = 1 dez/s (dezintegrare pe secund) O unitate tolerat este Curie (Ci): 1 Ci = 3,7 1010 Bq Pentru o substan dispersat n aer sau ap, activitatea se msoar pe unitatea de volum: 1 Bq/m3 sau 1 Bq/l.

Dozimetria radiaiilor ionizante

Efectele radiaiilor ionizante se apreciaz cu ajutorul unui sistem de dozimetrie. Acest sistem include mai multe aspecte, n funcie de tipul de radiaie i de sistemul care este iradiat. Se disting urmtoarele tipuri de doze: doza incident, doza absorbit i doza biologic. Doza incident de radiaie ntr-un punct se apreciaz n funcie de numrul de ioni produi n aer n acel punct:

D = Q/V
Q sarcina electric total (ioni de acelai semn) - densitate V volum Unitatea de msur a dozei incidente este C/kg i reprezint doza care produce ntr-un kg de aer aflat n acel punct un numr de ioni de acelai semn avnd sarcina total de 1 Coulomb. O unitate tolerat este Roentgen-ul (r): 1 r = (1/3876) C/kg

Prin raportarea dozei la timpul de iradiere se obine debitul dozei, d: d = D/t care se msoar n C/kgs sau r/s Doza de radiaie absorbit ine seama de existena n punctul considerat a unui material care absoarbe energia radiaiei. Se definete ca fiind energia (W) absorbit de unitatea de mas, m, din acel material: Dabs = W/m Unitatea este 1 Gy (Gray) = 1 J/kg Deci, doza absorbit este de 1 Gy atunci cnd 1 kg de material absoarbe 1 J de energie. O unitate tolerat este rad-ul: 1 rad = 10-2 Gy Debitul dozei, Dabs /t, se msoar n Gy/s sau n rad/s. Din aciunea radiaiilor nucleare asupra structurilor vii s-a observat c, n general, diversele tipuri de radiaii produc aceleai efecte. Exist, ns, o deosebire ntre ele, n sensul c unele radiaii cu o energie mai mic pot produce efecte biologice similare sau chiar mai importante dect radiaii cu energii mai mari. Aceast observaie a determinat introducerea n radiobiologie a noiunii de efectivitate biologic. Efectivitatea biologic este, deci, un parametru carac teristic fiecrui tip de radiaie. n aprecierea efectului radiobiologic se folosete mrimea numit efectivitate biologic relativ (EBR) notat cu . Aceast mrime reprezint raportul dintre efectivitatea biologic a unei radiaii oarecare i efectivitatea biologic a unei radiaii standard. Ca radiaie standard a fost aleas radiaia Roentgen de energie 200 keV. Efectivitatea biologic relativ a unei radiaii fa de esutul normal este dat de raportul dintre energia absorbit de esut la iradierea cu radiaia respectiv i energia absorbit de esut la iradierea cu radiaia standard. Cteva valori: - radiaiile x, i electroni = 1 - neutroni termici - neutroni rapizi, protoni - particule =5 = 10 = 20

Efectivitatea biologic a unei radiaii variaz cu felul i gradul efectului biologic, cu specia organismului iradiat, cu esutul iradiat i cu o serie de ali factori ce in de debitul dozei. Doza biologic, B, se definete ca fiind produsul dintre D (doza absorbit) i efectivitatea biologic relativ :

B=D
Unitatea pentru doza biologic se numete Sievert (Sv) i reprezint doza de radiaie care face ca 1 kg de esut s absoarb n punctul respectiv 1/ Jouli de energie. De exemplu, 1 Gy de r.x. corespunde unei doze biologice de 1 Sv, iar 1 Gy de radiaii corespunde unei doze biologice de 20 Sv. O unitate tolerat este 1 rem = 10-2 Sv. n biologie, o deosebit importan o prezint debitul dozei biologice, b = B/t, deoarece nu este indiferent dac doza respectiv este primit ntr-un interval de timp mai lung, de ex. 1 an, sau mai scurt, de ex. 1 minut. Debitul dozei biologice se msoar n Sv/s sau rem/s. Se mai poate calcula doza biologic integral, absorbit de ntreg organismul, Bi. Bi = B m i se msoar n Svkg sau remkg

Interaciunea radiaiilor ionizante cu materia vie

Aceast interaciune are loc n mai multe faze: 1. Faza reaciilor elementare 2. Faza reaciilor chimice 3. Faza modificrilor funcionale i structurale. n faza 1, de durat foarte scurt (10 -15 s) se produce excitarea i ionizarea atomilor i moleculelor, se formeaz radicali liberi (procese radiochimice) i molecule scindate. Aceast faz este foarte puin afectat de temperatur i viteza reaciilor produse nu depinde de timp. Faza 2 poate dura de la fraciuni de secund pn la cteva ore i viteza reaciilor care-i sunt caracteristice depinde de temperatur (faza

termosensibil). Atomii i moleculele excitate sau ionizate, precum i radicalii liberi formai, reacioneaz ntre ele sau cu alte sp ecii atomice i moleculare. Faza 3, care poate dura pn la civa ani, duce la apariia leziunilor observabile. Pentru a nelege natura reaciilor elementare din faza 1, trebuie mai nti s fie nelese mecanismele generale de interacie a radiaiilor cu materia.

Interaciunea primar a radiaiilor ionizante cu materia

Prima etap a acestei interaciuni o constituie excitrile i ionizrile. n cazul particulelor ncrcate electric ( , , protoni), ionizarea se produce direct, n timp ce fotonii sau neutronii acioneaz prin punerea n micare a unor particule ncrcate electric, care la rndul lor vor produce ionizarea. Electronii scoi din atomi sau molecule n acest fel, numii electroni primari, produc ionizarea primar. Dac ei au suficient ene rgie pentru a scoate la rndul lor ali electroni se produce ionizarea secundar. Radiaii direct ionizante. Radiaiile ionizante corpusculare ncrcate electric interacioneaz cu cmpurile coulombiene ale electronilor i nucleelor atomilor constitueni, cednd o parte din energia lor pentru a produce excitri i ionizri. Se definete transferul linear de energie (TLE) ca fiind energia cedat de ctre o particul incident pe unitatea de lungime a traiectoriei sale i se msoar n keV/m. Expresia sa se poate scrie: TLE = WiN Wi - energia transferat la o ionizare N numrul de perechi de ioni formai pe unitatea de lungime Particulele grele (, protoni) au o putere de ionizare mai mare i sunt repede ncetinite prin disiparea energiei. Parcursul distana medie strbtut de particul depinde de puterea ei de ionizare.

Radiaii indirect ionizante (x i ) n cazul radiaiilor electromagnetice, x i , absorbia energiei de ctre substan se face conform legii generale exponeniale: I = I0 e-x I intensitatea fasciculului emergent de radiaii I0 intensitatea fasciculului incident de radiaii - coeficientul de absorbie care depinde de natura materialului strbtut i de tipul radiaiei x stratul de substan strbtut Se definete grosimea de njumtire d1/2 (grosimea stratului de substan dup care jumtate din fotonii incideni sunt absorbii): d1/2 = ln 2/ Pentru radiaiile cu energia W = 1 MeV grosimea de njumtire n plumb (Pb) este d1/2 = 0,88 cm.

Efecte indirecte. Radioliza apei Tot n faza 1-a pot aprea radicali liberi i fragmente de molecule. Radicalii liberi sunt atomi, molecule sau fragmente de molecule care au n structura lor un electron nepereche (electron cu spin necompensat). Dat fiind c n materia vie apa se afl ntr-o proporie mare, radioliza apei prezint un deosebit interes. Reacia global de radioliz a apei este: H2O H + OH Etapele procesului de radioliz. Sub aciunea radiaiilor apa poate pierde sau fixa un electron (ionizare): H2O H2O+ + eElectronul smuls prin ionizare va atrage pe parcurs moleculele de ap din jur, hidratndu-se. Acest electron, nconjurat de dipolii apei, se numete polaron, electron solvatat sau electron hidratat. n urma ciocnirilor cu moleculele de ap, energia lui sc ade pna la valoarea energiei de agitaie

termic. n cele din urm el se alipete unei molecule de ap, conform reaciei: H2O + e- OH - + H Ionul H2O+ se disociaz astfel: H2O+ H+ + OH n acest mod, traiectoria particulei va fi nconjurat de radica li liberi, radicalii OH fiind distribuii mai strns n jurul ei, n timp ce radicalii H au o distribuie mai larg. Radicalii liberi, fiind specii atomice sau moleculare foarte reactive, dispar destul de rapid, reacionnd fie ntre ei, fie cu produii rezultai. De exemplu: H + H H2 OH + OH H2O2 H + OH H2O n plus, n prezena O2: O2 + H H2, iar aceti radicali se combin: HO2 + HO2 H2O2 + O2 HO2 + H H2O2 HO2 i H2O2 sunt mai nocivi avnd via mai lung dect H i OH. Radioliza apei depinde de natura radiaiei, de energia ei i de prezena O2. De exemplu, radiaiile x i nu descompun apa n absena O2. Studii in vitro i chiar in vivo (pe bacterii) au evideniat numeroi radicali liberi care se formeaz i n moleculele organ ice excitate, n organismele vii. Moleculele excitate R-R se pot transforma n radicali liberi: R-R R + R Energia absorbit n procesul de excitare poate migra n interiorul moleculei, producnd o ruptur la nivelul legturii celei mai slabe sau poate fi transferat altei molecule, care va fi afectat ca i cum ar fi fost iradiat direct: M1* + M2 M1 + M2* Pentru radiologie este important formarea de peroxizi organici, datorit radicalilor liberi. Mecanismul este urmtorul (Latarjet): RH + HO R + H2O

R + O2 RO2 RO2 + RH RO2H + R Aceti peroxizi pot persista mult timp dup iradiere i sunt responsabili n cea mai mare parte de efectele ntrziate ale radiaiilor. O importan deosebit pentru radiobiologie o prezint reacia dintre radicalii liberi rezultai din radioliza apei i gruprile SH care constituie gruprile active a numeroase enzime. Pentru a aprecia ponderea deinut de efectul direct i cel indirect se poate iradia proba n stare lichid i congelat. Dac n stare congelat efectele sunt mai mici dect n cea necongelat, aciunea a fost predominant indirect, iar gheaa a mpiedicat difuzia radicalilor liberi. Sumariznd: dac moleculele iradiate (acizi nucleici, enzime, hormoni, vitamine etc.) sufer leziuni (modificri) datorit absorbiei energiei radiaiei, aciunea este direct i efectul este efect primar. Dac moleculele se afl n soluie sau mpreun cu alte molecule, pot primi energia prin transfer sau pot interaciona cu radicalii liberi ai moleculelor. Se spune c radiaiile au avut o aciune indirect i efectul produs este efect secundar. Un al treilea tip de interaciune, dat fiind c iradierea unui organ poate induce efecte i n alte organe sau esuturi din organism, este aciunea la distan. Aciunea direct depinde de doza absorbit, de temperatura preparatului iradiat, de prezena O2, prezena altor molecule, coninutul n ap al preparatului, pH-ul soluiei etc. Aciunea direct, indirect i la distan produc efectul radiobiologic.

Aciunea radiaiilor ionizante asupra polimerilor

ntr-o prim aproximaie, s-au folosit ca obiecte de studiu polimerii sintetici. S-au constatat dou transformri importante: - reticularea, formarea de noi legturi ntre lanuri, care confer polimerului proprieti noi i care duce la creterea greutii moleculare;

- degradarea ruperea legturilor i formarea unor macromolecule cu greutate molecular mai mic. Dintre biopolimeri au fost mai intens studiate proteinele i acizii nucleici. Mecanismul interaciei radiaiilor ionizante cu materia vie

Efectele radiaiilor ionizante asupra materiei vii

Efectele radiaiilor ionizante pot fi directe i indirecte. n cazul efectelor directe, energia radiaiei este cedat direct unei molecule de interes biologic. Efectele indirecte sunt cele produse atunci cnd energia radiaiei este transferat unei macromolecule biologice prin intermediul unei alte molecule care a interacionat direct (n general apa).

Efecte directe
Se produc prin aciunea direct a radiaiilor asupra unor macromolecule importante pentru sistemele vii: ADN, ARN, proteine, hormoni etc. n urma acestei interaciuni pot avea loc urmtoarele procese: - excitarea sau ionizarea moleculei - molecula excitat revine n starea fundamental prin emisia unei cuante de energie h care poate fi transferat altei molecule sau poate duce la ruperea unor legturi covalente. n urma acestor procese pot s apar i radicali liberi, extrem de reactivi. Efecte la nivelul proteinelor i acizilor nucleici. Proteine se pot produce, n urma proceselor anterioare, modificri ale structurii spaiale a proteinelor prin ruperea unor legturi de hidrogen i a unor puni disulfidice, desprinderea unor lanuri laterale etc. ADN alterri la nivelul bazelor azotate, dimerizarea timinei cu erori de transcriere a codului genetic; rupturi simple sau multiple ale catenei cu peroxidarea capetelor, formare de legturi cu molecule proteice (cross-

10

links). n cazul n care lanul complementar rmne intact, se pot produce, prin mecanisme fiziologice, reparri, dar de obicei nu se produc 100%. Efectele radiaiilor ionizante depind de doz. Ele pot fi apreciate prin procentul de indivizi (celule, organisme etc.) supravieuitori.

Studiul

cantitativ

al

efectelor

radiaiilor

ionizante.

Curbele doz-efect
Pentru a stabili relaiile cantitative ntre doza de radiaii i randamentul procesului indus de acestea se traseaz curbele doz-efect. Aceste curbe reprezint fie proporia de indivizi (molecule, celule, organisme etc.) care au prezentat efectul studiat n funcie de doza administrat (curbe cresctoare), fie proporia de indivizi care au rezistat (supravieuitori) n funcie de doz (curbe descresctoare). Mai utilizat este cel de-al doilea tip. Aceste studii se fac pe populaii cu numr mare de indivizi. Dac se noteaz cu N0 numrul iniial de indivizi, cu N numrul de indivizi supravieuitori i cu D doza de iradiere, se pot obine dou tipuri de curbe doz-efect: a) exponenial b) sigmoid a) Acest tip de curb caracterizeaz cea mai mare parte a mutaiilor, unele aberaii cromozomiale, distrugerea culturilor bacteriene sau a suspensiilor de virusuri. Curba exponenial este reprezentat prin relaia: N = N0e-kD Numrul de supravieuitori scade exponenial cu doza. Aceast relaie exponenial s-a stabilit pe baza teoriei intei. Conform acestei teorii, n organism exist structuri sensibile, inte, a cror distrugere, printr-o singur lovitur, ar duce la moartea celulei. Constanta k se stabilete astfel nct doza D s fie aceea pentru car e numrul de supravieuitori s ajung la 1/e din valoarea iniial. N = N0/e N0/e = N0e-kD0 k = 1/D0 N = N0e-D/D0 N = N0/e = 0,37 N0

11

Doza D0= D37% definete radiosensibilitatea populaiei studiate. b) Curbele doz-efect de tip sigmoid caracterizeaz efectele r.x. asupra celulelor de mamifere. Prezint o deosebit importan n radioterapie. Curba sigmoid corespunde relaiei: N/N0 = 1 (1 e-D/D0)n unde n reprezint numrul de inte, adic numrul de locuri din celul lovite. Pentru doze mari, ecuaia devine prin trecere la limit: N = N0n e-D/D0 Interpretare: un individ ar trebui s fie atins n n locuri pentru a fi distrus; conform teoriei intei ar trebui atinse simultan n inte. Pentru interpretarea celor dou tipuri de curbe s-au propus dou mecanisme de aciune a radiaiilor asupra sistemelor biologice: a) Curba exponenial - teoria unei inte letale (efectele biologice ale radiaiilor se datoreaz unor lovituri care ating un constituent sensibil al celulei; lovitura este reprezentat de transferul unei anumite cantiti de energie ntr-o int, prin impactul cu radiaia). b) Curba sigmoid teoria a n inte letale. Trebuie s fie lovite n inte simultan penbtru a obine efectul studiat. Factorii care determin tipul de curb sunt: - natura radiaiei - debitul dozei - condiiile n care se face iradierea (temperatura, gradul de hidratare, gradul de oxigenare, pH etc.) Tipuri de iradiere a organismelor 1. Iradiere extern sursa de radiaii se afl n exteriorul organismului. 2. Iradiere intern sursa de radiaii este intern, constnd din radioelemente introduse n organism prin contaminare, pe cale digestiv, respiratorie sau cutanat i prin injectare n scop diagnostic sau terapeutic.

12

Cnd cele dou tipuri de iradiere sunt prezente simultan, iradierea se numete total. Cnd ntreg organismul este supus iradierii, iradierea este global. Sursele de radiaii pot fi: - Surse naturale - radiaia cosmic 30%, radiaia teluric 45-46%, radiaia natural intern - Surse artificiale explozii nucleare, industrie nuclear, iradierea sanitar, iradiere divers (de ex. ecrane radioluminescente), iradiere profesional. Iradierea intern este ntlnit frecvent n practica medical (mai ales n scintigrafie). Consecinele negative ale iradierii depind de timpul de njumtire prin dezintegrare, Tf = T1/2 = ln 2/ i de timpul de njumtire prin eliminare din organism, Tb. Se definete perioada de njumtire efectiv Tef prin: 1/ Tef = 1/Tf + 1/ Tb Cu ct eliminarea este mai ra pid cu att Tb este mai mic i de asemenea T ef. Foarte periculoase sunt radioelementele cu T f foarte mare i Tb foarte lent, de ex, Sr90, radiul, plutoniul, care au o perioad efectiv de ordinul a 10 3-104 zile. Efecte somatice i genetice ale radiaiilor ionizante La iradierea unei populaii celulare se observ o serie de efecte msurabile care, n funcie de mrimea dozei utilizate, apar n ordinea urmtoare: 1. Modificarea ratei de cretere. La doze mari masa culturii celulare crete iniial datorit apariiei unor celule gigante, pentru ca apoi s scad cu creterea dozei. 2. ntrzierea mitozei. Dac celula este iradiat nainte de jumtatea profazei, diviziunea va fi ntrziat. Dac celula primete o doz egal sau mai mare ntr-o etap ulterioar, vor fi influenate mitozele urmtoare.

13

3. Moartea celular ntrziat sau imediat. La creterea dozei se produce moartea celular, care ns nu este imediat, ci dup o serie de diviziuni. La doze foarte mari se produce moartea imediat. Legea Bergoni- Tribondeau Un esut este cu att mai radiosensibil cu ct este mai puin difereniat i cu ct n el au loc mai multe mitoze. Cea mai sensibil faz este metafaza, urmat de profaz, anafaz, telofaz. Radiosensibilitatea crete pentru: pH> 7, esut hidratat, oxigenat, temperatur ridicat i scade pentru: pH <7, deshidratare, anoxie, frig. Efectele genetice se datoreaz leziunilor cromozomiale din celulele reproductoare. Se manifest la descendeni prin boli genetice, mutaii de obicei nefavorabile- i moarte. n efectele genetice nu exist prag. Orice doz, ct de mic, poate produce un efect. Totui, probabilitatea crete cu doza. Studiile se fac de obicei pe bacterii, Drosophila melanogaster, animale de experien. Studiile pe oameni se fac n urma iradierilor accidentale sau terapeutice (ex. Cernobl). Protecia mpotriva radiaiilor Doza maxim admisibil (DMA) Exist o comisie internaional pentru protecia mpotriva radiaiilor ionizante (CIPR). Aceasta stabilete DMA anual. DMA doza total pe care o poate primi un om ntr-un an fr a suferi o leziune observabil (nu se ine cont de efectele genetice). S-a stabilit DMA pentru fiecare organ sau esut. Cele mai radiosensibile organe la om sunt mduva hematogen i gonadele. DMA anual este de 5 mSv pe an, doz valabil i pentru gonade. Pentru oase i tiroid doza este 30 mSv/an. Din fondul natural se absoarbe 1 mSv/an, iar din cel artificial 0,2 mSv/an. O radiografie abdominal produce 6,2 mSv, iar una pulmonar 0,27 mSv. O doz de 6 Sv duce la moarte n decurs de o lun. Protecia mpotriva radiaiilor

14

Protecia fizic se realizeaz prin: - distana mare fa de surs - timp mic petrecut n apropierea sursei - ecrane protectoare Protecia fa de radiaiile se poate face cu o simpl foaie de hrtie, fa de cu ecrane de plastic i Al, iar fa de x i se poate face parial cu ecrane de Pb. n cazul neutronilor sunt necesare mai multe straturi protectoare: 1 - ap, D2O, grafit primul strat de moderator cu ajutorul cruia sunt ncetinii; 2 bare de cadmiu, Cd, pentru absorbia neutronilor termici Cd117 + n Cd114 + ; 3 ecrane de Pb pentru absorbia . n cazul surselor mixte sunt necesare ecrane mixte: pentru + ecrane cu un prim strat de plastic sau Al (se absorb radiaiile , care sunt electroni sau pozitroni accelerai, i un al doilea de Pb pentru a absorbi ). Protecia chimic Se realizeaz cu ajutorul unor substane chimice radioprotectoare care se administreaz naintea iradierii i care mresc radiorezistena organismului. Au drept scop diminuarea n special a aciunii indirecte a radicalilor liberi prin anihilarea acestora. Trebuie s produc urmtoarele modificri: - s micoreze coninutul n ap, mai ales n organele radiosensibile - s micoreze temperatura organismului i s diminueze metabolismul - s diminueze cantitatea de oxigen intra i extracelular, mai ales n organele radiosensibile - s inhibe sau s fixeze radicalii liberi - s mpiedice organele integratoare din organism s amplifice efectele. Exist dou mari clase de radioprotectori: - hidrosolubili compui cu sulf (cisteamina HS-CH 2-CH2-NH2) cu formula general M-SH. Reacii: M-SH + R RH + MS MS + MS MS-SM

15

- liposolubili (derivai ai pirogalolului i naftolului) care diminueaz concentraia oxigenului intra i extracelular, mpiedicnd formarea peroxizilor lipidici. Alte substane radioprotectoare sunt vitaminele, hormonii, histamina, serotonina.

16

Proteinele pot s sufere scindri ireversibile, ruperi de legturi de hidrogen sau puni disulfidice, desprindere de lanuri laterale sau dimerizri. Enzimele sunt, n majoritate, foarte rezistente la aciunea radiaiilor, dar rezistena lor depinde de condiii: temperatur, pH, prezena oxigenului etc. Gruprile active ale enzimelor pot fi denaturate prin reacia cu radicalii liberi. Acizii nucleici pot suferi: rupturi ale lanului cu peroxidarea capetelor, pierdere de baze azotate, desfacerea legturilor AT, CG, dimerizri cu alterarea transcrierii mesajului, cross-link-uri cu proteinele. Lanu rile se pot autorepara.