Disciplina de Microbiologie UMF Tg.

Mure LP9

Diagnosticul de laborator n difterie

Corynebacterium diphtheriae Produsul patologic fals membran, secre ie faringian, secreie nazal la purttori secreie conjunctival , vulvar, din pl gi

Recoltarea se face cu 3 tampoane 1. Cu primul tampon se efectueaz 3 frotiuri frotiu colorat Gram pentru observarea morfologiei i dispozi iei spaiale C. diphtheriae bacil Gram pozitiv, uor ncurbat, cu capetele mciucate, dispus caracteristic (litere chinezeti, chibrituri aruncate pe mas) frotiu colorat Neisser pentru evidenierea corpusculilor metacomatici BabeErnst C. diphtheriae prezint corpusculi metacromatici la capete frotiu colorat Giemsa pentru diagnosticul diferen ial cu angina fuso-spiralar pe frotiu se evideniaz fusobacterii i forme spiralate (Treponema vincenti ) 2. Tamponul al doilea se ns mneaz pe mediul de mbogire OCST incubare 12-18 ore, dup care se izoleaz pe medii caracteristice 3. Tamponul al treilea se descarc pe medii de cultur folosite pentru izolare identificare mediul Lffler colonii caracteristice circulare uor crenelate alb-g lbui geloz snge colonii albe-gri perlate friabile mediul Gundel Tietz se difereniaz cele trei tipuri de bacil difteric tipul gravis colonii negre de tip R plate cu margini crenelate centrul mamelonat cu striaiuni radiare ca o floare de margaret tipul mitis colonii negre de tip S tipul intermedius colonii de tip S-R bulion tipul gravis formeaz pelicul la suprafarestul mediului rmne clar tipul mitis tulbur uniform mediul tipul intermedius formeaz inel la suprafa depozit i tulbur uniform mediul
-1-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP9

caractere biochimice producerea de H2S se studiaz pe mediul PISU (cu cistein) fermentarea zaharurilor n funcie de fermentarea monozaharidelor (glucoz maltoz i zaharoz) bacilii difterici se pot ncadra n specie (C. diphtheriae hoffmanii xerosis) n funcie de fermentarea polizaharidelor (dextrin amidon i glicogen) se face ncadrarea C. diphtheriae n tip (gravis mitis i intermedius)

caractere de patogenitate - cercetarea producerii de exotoxin difteric teste n vivo teste in vitro testul Elek reac ie de precipitare n gel

se toarn geloz peste o hrtie de filtru impregnat n ser antidifteric se insmneaz n striuri tulpinile de cercetat dac o tulpin produce exotoxin difteric (Ag) aceasta este eliberat n mediu i apare o band de precipitare

testul Ramon reacie de floculare prin care se dozeaz putere toxic a toxinei

Diagnosticul indirect IDR Shick IDR de neutralizare Se injecteaz strict intradermic 1 unitate de toxin Dac organismul nu are anticorpi toxina i exercit efectul i la locul inoculrii apare un eritem organism receptiv. Dac organismul are anticorpi acetia vor neutraliza toxina deci nu apar modificri la locul inoculrii organism imun Reacii de hemaglutinare pasiv - determinare cantitativ a antitoxinelor

-2-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP9

Diagnosticul de laborator al tuberculozei

Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium bovis Produsul patologic n tuberculoza pulmonar sput, aspirat bronic, lichid pleural, spltur gastric n tuberculoza renal urina (toat cantitatea de urin emis dimineaa) n tuberculoza genital secre ie vaginal, cervical, sperm, secre ie prostatic n tuberculoza articular, osoas lichid sinovial, puroi n tuberculoza ganglionar material din puncie ganglionar, puroi n meningita tuberculoas LCR Examen direct frotiu colorat Ziehl-Neelsen bacili lungi i subiri, uor ncurbai, roii (acido-alcolorezisteni), fondul preparatului fiind albastru Izolare pe mediul Lowenstein-Jensen incubare la 37C, pn la 90 de zile Identificare caractere morfotinctoriale (vezi examenul direct) factorul cord caractere de cultur tipul uman are o cretere eugonic, favorizat de prezena glicerinei crete n 2-3 sptmni colonii de tip R, neregulate, uscate, conopidiforme, ca firmiturile de pine coloniile se detaeaz uor de pe mediu i se emulsioneaz greu n ser fiziologic n mediu lichid formeaz la suprafa un v l gros ce se ntinde mai repede tipul inoculare la animale de experien cobaiul antibiograma se efectueaz pe mediul Lowenstein n care au fost incluse tuberculostatice 4. Diagnostic indirect Intradermoreacia Mantoux se inoculeaz intradermic tuberculin purificat (PPD, 2 unit i) este o IDR alergic - dac persoana nu a venit n contact cu germenele (nu a fost bolnav, nu a fost vaccinat), atunci la locul inoculrii nu apare nici o reac ie - dac persoana a mai venit n contact cu germenele (a fost sau este bolnav, a fost vaccinat), atunci la locul inoculrii se declaneaz o reac ie alergic tardiv (dat de implicarea imunitii celulare), urmat de apari ia unui eritem i a unei induraii locale. - reac ia se interpreteaz n funcie de mrimea i intensitatea induraiei
-3-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP9

Diagnosticul de laborator n infecii cauzate de germeni din genul Candida

Produsul patologic scuame de tegument, fragmente de unghie, secre ie din leziuni, puroi - n afec iuni cutanate i ale fanerelor sput n infecii respiratorii materii fecale n infec ii digestive urin n infec ii urinare, balanite secreie vaginal n vaginite LCR, snge - n infecii generalizate Examenul direct preparat nativ frotiuri colorate Gram, cu albastru de metilen, Giemsa - blastospori celule mari (3-5), sferice sau ovoide, nmugurite, Gram pozitive - pseudomicelii celule alungite aezate cap la cap, nedesprinse dup diviziune - clamidospori celule sferice cu dublu contur, mai mari dect blastosporii, se observ doar la specia C. albicans Izolare - pe mediul Sabouraud - incubare la 30-37 C, 24-48 de ore Identificare caractere morfotinctoriale (vezi examenul microscopic) caractere de cultur - colonii de tip S, alb-g lbui, cremoase, mari, cu suprafaa mat, miros de drojdie zimograma identificare pe baza studierea fermentrii zaharurilor auxonograma - identificare pe baza studierea asimilrii zaharurilor testul filamentrii rapide pentru identificarea speciei C. albicans - cultura de cercetat se nsmneaz n plasm sau ser de iepure - apar prelungiri filamentoase germ tubes, foarte rapid n 3 ore - se evideniaz la MO prin preparat nativ formarea clamidosporilor - pentru identificarea speciei C. albicans C. albicans formeaz clamidospori dac se cultiv pe medii speciale (PC, PBC, Tween80) fungigrama testarea sensibilit ii la antifungice

-4-