Preparatul microscopic permanent

Preparatul microscopic permanent

Reprezinta modalitatea de examinare a unor celule , fragmente de tesut sau organ , carora li s-au suprimat procesele vitale prin fixare - permite examinarea la microscopul optic a principalelor caracteristici ale celulelor si a modului lor de organizare.

Preparatul microscopic permanent

Un preparat microscopic este alcatuit din: 1. obiect de examinat subtire si transparent 2. mediu de fixare transparent 3. lama si lamela

Preparatul microscopic permanent

Scopul relizarii unui preparat microscopic permanent este de a conserva structurile celulare si raporturile dintre ele pe un timp nelimitat.
Este folosit in : clinica laborator de anatomie patologica medicina legala cercetare in scop didactic

Etapele obtinerii preparatului microscopic permanent

1.

2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

Recoltare Fixare Spalare Includere Sectionare Colorare sau impregnare Montare Etichetare

1.RECOLTAREA
Este operatia prin care obiectul de examinat este prelevat de la omul sau animalul viu sau dupa sacrificarea animalului sau de la cadavru. Poate fi bioptica sau necroptica

Recoltarea bioptica
- se recolteaza de la om sau animalul viu

si se practica in scop diagnostic. Se realizeaza prin : 1. raclare 2. punctie bioptica 3. aspiratie 4. interventie chirurgicala

Recoltarea necroptica
- dupa sacrificarea animalului si se

practica in laboratoare in scop de cercetare sau didactic. - recoltarea de la cadavrele umane se practica in laboratoarele de amatomie patologica si medicina legala in scopul de a confrunta datele de anatomie clinica si tanatogenetice.

Recoltarea
Conditiile unei bune recoltari: 1. cat mai aproape de momentul decesului pentru a evita procesele de autoliza. 2. dimensiunea piselor sa nu depaseasca 5 mm 3. calitatea instrumentelor bine ascutite pentru a evita zdrentuirea si pierderea paralelismului dintre planuri 4. adecvat in functie de tipul organului ; se vor evita modificarile de volum, forma si relief.

2. FIXAREA
- etapa decisiva in obtinerea unui

preparat microscopic permanent. - un proces fizic sau chimic prin care sunt oprite cat mai rapid procesele vitale celulare pastrandu-se cu alterari minime volumul , forma , relieful si raporturile spatiale si moleculare .

FIXAREA
Prin fixare urmarim : 1. Conservarea tesuturilor 2. Prevenirea pierderii de constituenti celulari 3. Cresterea diferentierii optice a structurilor celulare 4. Marirea consistentei tesuturilor in scopul de a facilita trecerea lor prin celelalte etape ale tehnicii si mai ales pentru sectionare

FIXATORII
Clasificare a. Dupa natura lor: 1. fizici 2. chimici b. Dupa reactia pe care o au cu proteinele solubile 1. coagulanti 2. necogulanti

FIXATORII
Fixatorii chimici: 1. simpli 2. amestecuri fixatoare

FIXATORII CHIMICI
Fixatori simpli mai des utilizati : acetona , acid tricloracetic , formol , acidosmic , alcool metilic Amestecuri fixatoare: - introduse in practica datorita afinitatii inegale pentru diversele elemente structurale

Amestecuri fixatoare:
1. dupa compozitia chimica a. apoase b. alcoolice 2. Dupa scopul urmarit a. Universale (topografice) b. Citologice

Mecanismul fixarii
insolubilizarea prin precipitare a unor constituenti celulari proteine , glucide , saruri minerale, lipide 2. formarea de compusi de aditie intre fixator si unii constituenti celulari 3. coagularea proteinelor
1.

CALITATILE UNUI BUN FIXATOR

1. patrunde bine in tesuturi

2.

stabilizeaza tesuturile pastrand nealterate caracterul si distributia constituentilor celulari 3. nu provoaca artefacte 4. nu deformeaza tesutul 5. nu dizolva constituenti

CALITATILE UNUI BUN FIXATOR distruge microorganismele 7. extrage enzimele autolitice inactivate 8. confera consistenta 9. produce diferentiere optica 10. nu-si modifica compozitia 11. ieftin , netoxic , neinflamabil , neiritant
6.

TRATAMENTE POSTFIXARE
1.

2. 3.

decalcifierea disocierea pieselor mordansarea

4.INCLUDEREA
Este procedeul prin care se realizeaza conditii optime care sa permita sectionarea piselor in sectiuni subtiri de ordinul m , transparente si cu fete plane astfel incat sa poata fii examinate la microscop.

INCLUDEREA
Mase de incluziune : 1. Dupa modul de realizare al includerii : a. Penetreaza celula b. Ramane in spatiul intercelular 2.Dupa solubilitatea in apa a. anhidre , ex. parafina , celoidina , paraplastul b. apoase ,ex . gelatina , polietilenglicol

Incluziunea la parafina etape premergatoare

a. deshidratare alcool in concentratii crescande incepand cu 50 fiecare in 3 bai succesive.

Incluziunea la parafina etape premergatoare

b. clarificare indepartarea alcoolului din piesa cu ajutorul unor reactivi numiti clarificatori , miscibili cu parafina , care fac ca piesa sa devina translucida. Se efectueaza cu alcool anilic sau cu hidrocarburi benzenice.

Incluziunea la parafina etape premergatoare

c. impregnarea patrundere a piesei cu parafina topita si solidificarea in bloc prin racire pentru a oferi o consistenta omogena. d. turnarea blocurilor blocul inglobat se monteaza pe un port-obiect

5. SECTIONAREA
Piesa inclusa sau inghetata se taie in felii subtiri de ordinul micronilor cu ajutorul unui aparat numit microtom.

5. SECTIONAREA
Sectionarea la microtomul ptr. parafina presupune urmatorii timpi pregatitori: 1. modelarea blocului pentru sectionare 2. lipirea blocului pe portobiect 3. sectionarea propriu-zisa 4. etalarea si lipirea sectiunilor

6. COLORAREA
- se urmareste cresterea contrastului intre elementele tisulare sau celulare prin modificarea indicilor de refractie ai substratului morfologic cu ajutorul colorantilor. Tehnica de colorare depinde de natura fixatorului si de tesutul pe care se aplica.

7.MONTAREA
- protejarea sectiunilor fragile de

eventualele deteriorari, conservarea coloratiei si asigurarea unui mediu optic omogen si transparent necesar examinarii microscopice. Se face intre lama si lamela in diferite medii de montare initial fluide.

MONTAREA
Mediile de montare pot fii : 1. Apoase: glicerina, sirop Apathy 2. Anhidre: balsam de Canada, colofoniu

8. ETICHETAREA
Pe fiecare lama se noteaza tipul celular sursa de recoltare fixatorul metoda de colorare data efectuarii