INFECIILE

ZOOANTROPONOZ
E.

MICROBIOLOGIA I
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
AL ANTRAXULUI, TULAREMIEI,
BRUCELOZEI I PESTEI

1.

2.

3.

Zooantroponozele reprezint maladii ale

animalelor care pot fi transmise oamenilor
n rezultatul unui contact direct sau
indirect cu populaii animale infectate.
Unele din aceste infecii - antraxul,
tularemia, pesta, bruceloza fac parte din
categoria infeciilor extrem de periculoase.
Sunt foarte contagioase (receptivitate
general)
Sunt capabile s provoace nu doar
epidemii, ci i pandemii
Provoac infecii cu evoluie foarte grav

Microbiologia i diagnosticul de
laborator al antraxului
Clasificarea:
Familia Bacillaceae
Genul: Bacillus
Specii: Bacillus anthracis (patogen, agentul
antraxului)
Bacillus cereus (intoxicaii alimentare),
Bacilus polimyxa, Bacillus subtilis, Bacillus
brevis (produceni de AB) bacili antracoizi
Bacillus anthracis a fost prima bacterie la care a fost
demonstrat rolul ei n patogenia unei infecii.
n 1877, Robert Koch a izolat microorganismul n
cultur pur, demonstrnd capacitatea lui de a
forma endospori i a produs antraxul experimental
inoculndu-l la animale.

Caracterele morfobiologice ale

B.anthracis
Bacil mare (5-6 m x 1 m), cu extremitile
drepte (tiate), gram-pozitiv, imobil
(antracoizii sunt mobili), n produse
patologice se prezint sub form de lanuri
scurte, iar n cultur lanuri lungi (tulpin
de bambuc).
Tulpinile virulente formeaz capsul
polipeptidic (acidul D-glutamic).
Sporul este ovoid, n poziie central, nu
deformeaz celula. Sporogeneza are loc n
cultur, n sol i n esuturi i exsudate din
animale moarte (n prezena oxigenului),
dar nu n snge sau esuturi de animale vii.

Caractere de cultur
B.anthracis nu este exigent nutritiv, cultiv pe medii
uzuale. Facultativ-anaerob, t optim 35-37
grade, pH 7-7,4.
Peste 24 ore de incubare formeaz colonii R, mari,
cu contur neregulat, opace, plate, uscate,
rugoase (coam de leu, cap de meduz).
Nehemolitice pe geloz-snge (antracoizii sunt
hemolitici). Pe geloz-ser, n exces de CO2,
formeaz colonii S (producerea capsulei). Pe
mediu cu 0,5-1 UI de penicilin B.anthracis
formeaz lanuri din forme globulare - colier de
perle (proprietate absent la antracoizi).
n bulion peptonat formeaz flocoane la fundul
eprubetei, cu supernatantul clar.
B.anthracis este sensibil la fagul gamma.

The following figures (5, 6, and 7) from the CDC are reliable images of Bacillus anthracis grown as described in the figure legends.

Caractere biochimice
Activitate proteolitic lichefiaz gelatina n
form de brad inversat, coaguleaz i
peptonizeaz laptele, diger serul coagulat,
nu produce H2S.
Activitate zaharolitic fermenteaz unele
glucide: glucoza, maltoza, zaharoza,
tregaloza, etc. Nu fermenteaz lactoza i
arabinoza.
Rezistena n mediul extern: formele
vegetative sunt slab rezistente, sporii
rmn viabili n sol decenii, se distrug la
fierbere n 30 min.


1.

Factori de patogenitate
Capsula polipeptidic (poli-D-glutamat),
codifict de plasmida pX02. Inhib
fagocitoza i puterea bactericid a sngelui.
Capsula joac un rol important n etapele
iniiale ale infeciei. Formarea capsulei are
loc in vivo i in vitro, pe medii cu ser i n
atmosfer cu 5 % CO2.

2. Exotoxina antraxului, codificat plasmidic

(pX01)
Este constituit din 3 componente:
Factorul I, edematogen (EF), care este o
adenilat-ciclaz. Acumularea de cAMP duce
la modificarea permeabilitii membranare
cu producerea edemului. Inactiveaz PMN
Factorul II, antigen protector (PA), induce
sinteza Ac antitoxici protectori. PA este
responsabil de fixarea toxinei pe receptorii
celulelor sensibile.
Factorul III, letal (LF), responsabil de
efectele letale ale toxinei anthrax. Este o
proteaz Zn++ dependent care induce
producerea citokinelor de ctre macrofage i
limfocite (TNF, IL-1) i stimuleaz reacia
inflamatoare.

Aparte, aceti factori exercit activitate

biologic nesemnificativ la animal. Din
contra, combinaii din doi sau trei factori
toxici determin urmtoarele consecine la
animale experimentale:
PA+LF = activitate letal
PA+EF = produce edem
EF+LF = inactiv
PA+LF+EF = edem i necroz cu efect letal
Acest experiment sugereaz c toxina
antraxului are structur clasic de
citotoxin bacterian de tip A-B cu PA n
calitate de B-fragment (de fixare pe
receptori celulari) i cu factorii EF i LF cu
funcie de fragment A (activ), care
acioneaz n interiorul celulei.

1.

2.

3.

Structura antigenic a
B.anthracis
Ag polipeptidic capsular (induce Ac
neprotectori)
Ag polizaharidice somatice
termostabile (depistate n reacia de
precipitare Ascoli)
Toxina (componentul PA), induce
formarea Ac protectori, neutralizani

Epidemiologia i patogeneza antraxului

Sursa de infecie animalele erbivore bolnave de
antrax (ovine, caprine, bovine, suine). Solul
contaminat cu spori este un rezervor de germeni
important i permanent (80 ani).
Transmiterea:
- prin contact direct cu animalele bolnave sau produse
contaminate (carne, piei, ln, blan, etc), puni i
nutreuri contaminate, cu ptrunderea agentului prin
tegument
- aerogen, prin inhalarea sporilor de B.anthracis
- pe cale alimentar (consum de carne de la animale
bolnave de antrax insuficient prelucrate termic)
n majoritatea cazurilor antraxul se manifest ca boal
profesional a ngrijitorilor de animale, personalului
de la abatoare, ntreprinderi de prelucrare a
produselor animaliere, veterinarilor, zootehnicienilor,
mcelarilor, tbcarilor, etc.

Formele clinice de antrax

I. Antraxul cutanat , pustula malign

(forma cea mai frecvent). Sporii intr printro leziune a tegumentului, germineaz i
prolifereaz la poarta de intrare, cu
dezvoltarea unui edem gelatinos local
caracteristic. n locul penetrrii, peste 12-36
ore de la infecie, apare o papul, care
evolueaz rapid ntr-o vezicul, apoi n
pustul cu coninut sanguinolent. La
spargerea pustulei se formeaz o leziune
necrotic, prezentnd n centru o escar
neagr nconjurat de vezicule satelite.
Leziunea se localizeaz mai frecvent pe
mini, fa, ceaf, etc. Ptrunderea n snge
determin diseminarea sistemic a bacteriei.

II. Antraxul pulmonar apare la

inhalarea sporilor de B. anthracis , care
sunt nglobai de macrofagele
alveolare unde ei germineaz i se
multiplic, determinnd o pneumonie
foarte grav. Urmeaz infectarea
ganglionilor limfatici mediastinali cu
dezvoltarea unei necroze hemoragice.
Pacientul manifest febr, stare de
ru, mialgie, tuse neproductiv. Din
ganglionii limfatici infecia poate trece
n snge. Decesul poate surveni n 24
h.

III. Anthraxul digestiv apare n urma

consumului de carne infectat. n
mucoasa intestinal se dezvolt
procese identice cu cele din antraxul
cutanat (enterocolit ulceroas). Poate
urma invazia ganglionilor limfatici
mezenterici i a sngelui.
Clinic: vom i diaree, cu snge n masele
fecale. Invazia sngelui este asociat cu
prostraie profund, oc i moarte.
Meningita poate apare (foarte rar) ca
urmare a oricrei forme de antrax

Diagnosticul de laborator al
antraxului
Se efectueaz numai n laboratoare
specializate cu respectarea unor reguli
stricte de securitate.
Prelevate (n funcie de forma clinic):
exsudat din leziunea cutanat, sput,
snge, LCR, materii fecale, bioptate
din ganglioni limfatici, probe
necroptice, probe de la animalul
suspect i elemente din mediul extern


1.

2.

Examenul microscopic direct

n frotiuri pregtite din prelevate i
colorate Gram sau cu albastru de metilen
se observ bacili mari cu morfologia
caracteristic, izolai sau n lanuri
scurte. Sporii sunt rareori prezeni.
RIF


I.

II.

III.

Examenul bacteriologic
Prelevatele monomicrobiene se
nsmneaz pe geloz i gelozsnge, iar cele polimicrobiene se
nclzesc n prealabil 10 min la 75 grade
C. Sngele n bulion glucozat.
Incubarea la 37 C timp de 24 ore.
Examinarea coloniilor crescute, selecia
celor suspecte i acumularea lor
Identificarea culturii pure acumulate i
diferenierea de antracoizi.

Caracterul
Necesitatea de tiamin la cultivare

B. anthracis

B. cereus

Hemoliz pe geloz-snge

Capsula polipeptidic

Sensibilitate la fagul gamma

Mobilitate

Cultivare pe geloz salin

Testul colierul de perle

Table 1. Differential Characteristics of B. anthracis B. cereus and B. thuringiensis

Examenul biologic
Se inoculeaz cobaii sau oarecii, care sunt
foarte sensibili la infecie. Dup moartea lor
bacilii sunt depistai n frotiuri din organe.
Depistarea Ag polizaharidice termostabile
n prelevate (reacia Ascoli)
Diagnosticul serologic . Ac anti-antrax pot
fi depistai la convalesceni n RP sau RFC
Diagnosticul imunologic (proba cutanat
alergic). Se pune n eviden starea de
hipersensibilizare prin inocularea
intradermic a 0,1 ml de antraxin (extract
din tulpina vaccinant de B.anthracis).
Reacie pozitiv edem i hiperemie cu
diametrul peste 8 mm.

Tratamentul antraxului
- Antibiotice (peniciline, cefalosporine,
fluorochinolone)
- Imunoglobulina antiantrax
Profilaxia specific a antraxului
- Depistarea i izolarea animalelor bolnave,
incinerarea animalelor moarte sau
ngroparea adnc a cadavrelor i
acoperirea lor cu var nestins
- Vaccinarea animalelor
- Imunizarea personalului expus cu vaccin
viu atenuat

Microbiologia i diagnosticul de
laborator al tularemiei
Clasificarea
Familia Francisellaceae
Genul Francisella
Specii: F.tularensis (agentul cauzal al
tularemiei)
F.philomiragia (infecii
sistemice)

Se cunosc 4 biovaruri (subspecii) de

F.tularensis, care difer dup activitatea
biochimic, virulen i rspndire
geografic:
F.tularensis tularensis (nearctica) (tip A;
foarte virulent, rspndit n America de
Nord)
F. tularensis holarctica (palearctica) (tip B;
mai puin virulent, cu rspndire n Europa)
F. tularensis mediasiatica: virulen similar
cu F. tularensis holarctica
F. tularensis novicida: virulen redus,
cauzeaz infecie numai la gazde
imunocompromise. Izolat n SUA.

Prima descriere a tularemiei a fost realizat

n Japonia n 1837. Denumirea agentului
provine de la regiunea Tulare, California,
unde, n 1911, n timpul unei epizootii printre
veveriele de pmnt, a fost izolat tulpina
bacterian i apreciind aportul Dr Edward
Francis, care, n 1928, studiaz i descrie
agentul cauzal i patogeneza maladiei prin
experien personal n peste 800 cazuri.
F tularensis are rspdire ubicvitar,
parazitnd peste 100 specii de animale
slbatice (n special roztoare), psri i
insecte i persist n apa din zonele unde se
ntlnesc aceste animale. Toate mamiferele
fac o septicemie cu prezena bacteriilor n
toate esuturile.

Caracterele morfobiologice ale

F.tularensis
Morfologia:F.tularensis reprezint o
cocobacterie foarte mic (0.2-0.5 m
x 0.7-1.0 m), gram-negativ, uneori
se coloreaz mai intens la poli,
pleomorf, imobil, asporogen,
tulpinile virulente posed capsul.

Caractere de cultur: bacteria nu poate fi

cultivat pe medii uzuale. Pentru izolare se
utilizeaz medii mbogite:
- mediul Francis (geloz+snge de iepure
+cistein +glucoz)
- Mediul McCoy, cu glbenu de ou
- Geloz-ciocolat
Cultivarea se efectueaza la 35 - 37 grade, n
aerobioz. Peste 2-4 zile apar colonii S,
mici (1 - 2 mm n diametru), albe-cenuii,
transparente, mucoide, cu marginile
regulate i suprafaa lucioas.

Caractere biochimice:
F.tularensis este catalazo+ i oxidazo-,
nu descompune ureea, produce H2S,
unele biovaruri fermenteaz glicerolul.
Rezistena n mediul extern
Mi/organismele pot supravieui perioade
ndelungate de timp n ap, nmol,
cadavre de animale (mediu umed).
F.tularensis este distrus la 56 grade
n 10 minute, dar congelarea permite
conservarea bacteriei.

Factorii de patogenitate nu sunt nc

bine definii:
1. Pili (adeziune)
2. Capacitatea de a penetra n
macrofage, supravieuind i
multiplicndu-se n interiorul
celulelor pn la moartea lor
(parazitism facultativ intracelular)
3. Capsula (rol protector)
4. Endotoxina (LPZ)

Epidemiologia i patogeneza
tularemiei

Sursa de infecie animale bolnave sau

cadavre de animale, transmiterea de la om
la om nu are loc.
Rezervorul principal mamifere mici i medii
(iepuri, veverie, obolani, oareci,
roztoare acvatice, lemingi). Omul, pisicile,
cinii, anumite specii de psri, peti i
amfibii pot fi gazde accidentale
Vectori insecte (tuni, nari, cpue )
Pori de intrare tegumentul (chiar intact),
mucoasele, conjunctiva

Deer ticks

Transmiterea:
- Contact cu animale infectate, cadavre sau
cu apa contaminat (lacuri, bazine, etc)
- Aerogen prin inhalare (vntori...)
- Alimentar, prin consum de ap sau
alimente infectate
- neptura artropodelor hematofage
Francisella tularensis este una dintre cele
mai virulente bacterii. Cteva zeci de mi/o
(10-50) pot provoca suferine grave.

Patogeneza i
formele clinice de tularemie
Francisella tularensis este o bacterie
facultativ intracelular. Iniial
infecteaz macrofagele, cu
diseminarea mi/o i afectarea diferitor
organe, inclusiv plmnii, ficatul,
splina, ganglionii limfatici. Un rol
important n patogeneza leziunilor l
joac hipersensibilitatea tardiv.

Formele clinice de tularemie sunt n

relaie cu calea de ptrundere:
- Forma ulceroganglionar (70-85% de
cazuri), penetrarea agentului patogen prin
tegument sau mucoase. Mi/o se multiplic
local i determin apariia, peste 3-5 zile
de la expoziie, a unei papule n locul de
inoculare. Peste cteva zile se transform
n pustul, care se ulcereaz rapid. Ulcerul
are 2 - 4 cm n diametru i marginile
neregulate. Uneori ulcerul poate fi acoperit
cu o crust neagr (asemntoare cu
escara n antrax).

Bacteriile se rspndesc spre ganglionii

limfatici regionali, unde cauzeaz
limfadenite necrotice, nconjurate de
infiltrate granulomatoase (bubonul
tularemic). Ganglionii limfatici afectai
devin fluctuani, uneori crend canale de
drenare n tegument. Mi/o pot disemina
hematogen infectnd multiple organe, cu
dezvoltarea septicemiei.
- Forma ganglionar se manifest prin
afectarea ganglionilor limfatici regionali,
leziunea de la poarta de intrare lipsete.

Forma oculoganglionar apare la

ptrunderea agentului cauzal prin
conjunctiv. Se dezvolt necroza i
ulceraia conjunctivei, cu infiltraie
limfocitar. Din conjunctiv bacteriile
trec n ganglionii limfatici
preauriculari, submandibulari sau
cervicali, provocnd leziuni similare
cu cele din tularemia
ulceroganglionar.

Forma orofaringean
(anginoganglionar)
Mi/o intr prin mucoasa orofaringelui n urma
ingestiei sau inhalrii lor.
Uzual se dezvolt faringite sau tonzilite
exsudative, cu ulceraie ulterioar.
Ptrunderea n ganglionii limfatici cervicali
determin necroz i supuraie.
- Forma tifoidic (abdominal) , cu
afeciuni generalizate. Mi/o ptrund n snge
prin tegument sau mucoase i afecteaz
plmnii i organele reticulo-endoteliale.
Determin frecvent septicemie i oc
- Forma pneumonic, foarte grav. Mi/o
ptrund n plmni aerogen sau hematogen.
-

Diagnosticul de laborator al tularemiei

Se realizeaz doar n laboratoare
specializate
Prelevate: n funcie de forma clinic:
serozitate din leziunea cutanat sau
conjunctiv, exsudat faringian, aspirat
din ganglionul limfatic afectat, sput,
snge.
Metode directe de diagnostic
1. Examenul microscopic direct este
foarte dificil, aproape imposibil. RIF are o
sensibilitate mai mare

2. Examenul bacteriologic. Izolarea

F.tularensis direct din prelevate este
practic imposibil. Uzual se utilizeaz
inocularea prelevatelor la animale
experimentale sensibile (oareci, cobai).
La necropsii se studiaz frotiuri-amprente
din organele afectate (Giemsa, RIF), se fac
nsmnri pe medii speciale (Francis, Mc
Coy). Tulpinile izolate sunt identificate
morfologic, cultural, biochimic, antigenic
(RA cu seruri anti-F.tularensis).

Diagnosticul indirect
1. Serodiagnosticul. Detectarea Ac este un
element esenial n diagnosticul
tularemiei. Ac apar dup ziua a 7 de boal,
ating titrul maxim peste 1-2 luni (1:1000
sau mai mult) i persist mai muli ani. RA
cu suspensie de bacterii omorte este cea
mai utilizat. Titru diagnostic 1:80, cu
creterea lui n dinamic de cel puin 4 ori.
ELISA este posibil.
2. Intradermoreacia cu tularin.
Hipersensibilitatea poate fi testat peste 5
zile de la debutul bolii.

Tratamentul tularemiei
Antibiotice: aminozide (streptomicin,
gentamicin), tetracicline, cloramfenicol,
fluorochinolone, eritromicin (exist i
tulpini rezistente)
Profilaxia tularemiei
- Informarea persoanelor expuse contaminrii
- Supraveghere sanitar
- Vaccinarea contingentelor de risc cu vaccin
viu atenuat asugur imunitatea pe o durat
de 5-7 ani

MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE
LABORATOR AL PESTEI
Familia: Enterobacteriaceae
Genul: Yersinia
Specia: Y. pestis
Biovariante: Antiqua, Medievalis, Orientalis
Descoperit n 1894 de ctre Alexandre Yersin,
n timpul unei epidemii de pest n HongKong.
Pesta este o infecie care a provocat epidemii
grave pe parcursul ultimilor 2000 ani. n
timpul epidemiei din sec. 14, numit Boala
Neagr, au decedat peste 1/3 din populaia
Europei.
n prezent peste 3000 cazuri anual

Caractere morfobiologice
Y. pestis reprezint un bastona
gram-, care se coloreaz mai
intens la poli, imobil, asporulat,
posed microcapsul.