LUCRAREA 3.

SCHEMA DIAGNOSTICULUI BACTERIOLOGIC

Nr.crt.
1
2

METODE
DIRECTE
Recoltarea
produsului
patologic
Examenul
direct al
produsului
patologic

BACTERIOLOGIE

VIRUSOLOGIE

PARAZITOLOGIE

Diferita in functie de
pp recoltat

Diferita in
functie de pp
recoltat
1. examen
macroscopic-nu

Diferita in functie de
pp recoltat

2. examen
microscopic
o evidenierea
incluziilor
virale
microscopie
optic
o microscopie
electronic

1. examen
macroscopic

1. examen
macroscopic
2. examen
microscopic
microscopie optic
o preparat nativ
o coloraie negativ
o coloraie simpl
o coloraii compuse
3. evidenierea
antigenelor
bacteriene prin
metode serologice
4. detectarea ADNului microbian
(reacii de
hibridizare,
amplificare genic
PCR)

Cultivare

Izolarea
germenului n
cultur pur
nsmnarea
si cultivarea
pe medii de
cultur

Examen
coproparazitologic:

2. examen
microscopic
o metode directe
preparat

nativ, n
ser
fiziologic
preparat

nativ n
soluie lugol
frotiu

colorat
3. reacii antigen- o metode de
anticorp
examinare n strat
(evidenierea
gros
antigenului)
o metode de
concentrare
4. detectarea
o metode
ADN-ului larvoscopice
reacii de
o amprenta anal
hibridizare,
amplificare
3. detectarea ADNgenic
ului - reacii de
(PCR)
hibridizare,
amplificare genic
(PCR)
Cultivarea
Cultivarea
virusurilor
paraziilor
nsmnarea
culturi
se face
celulare, pentru paraziii
linii
unicelulari pe medii
celulare
nclzite la 37C,

Identificare

inoculare la
animale de
laborator

Identificarea
germenului izolat
din cultur pur
1. cercetarea
caracterelor de
cultur si
morfotinctoriale
2.cercetarea
caracterelor
biochimice si de
metabolism

1sau mai multe zile

animale
animale de
de
laborator
laborator
oul de
gin
embrion
at
Identificarea
virusului izolat
1.prin examen
microscopic
2. modificrile
caracteristice
aprute pe
culturile
celulare,
OGE
animale
de
experien

3.determinarea
structurii
antigenice prin:
3. reacii
reacii

de aglutinare antigenreacii

de
anticorp
precipitare
reacii

de umflare a
capsulei
4. tehnici de
detectare a ADN
microbian

5. Determinarea
patogenitii
germenului izolat
prin:
o teste in vitro
o teste in vivo (boala
experimental)
Antibiograma DA
METODE

1.reacii antigenanticorp

2. tehnici de
detectare a ADN
microbian

4. detectare a
ADNului
-reacii de
hibridizare,
amplificare
genic (PCR)

INDIRECTE
6

1. detectarea
anticorpilor din
serul bolnavilor
(anticorpii se
urmresc n
dinamic)

1. detectarea
anticorpilor din
serul bolnavilor
o Seroconversia:
cresterea
titrului de
anticorpi n
probele de ser
recoltate la
interval de 10-14
zile
o (demonstrarea
unei infecii
recente, actuale

1. Detectarea
anticorpilor din
serul bolnavilor
o anticorpii se
urmresc n
dinamic
reacii biologice
cutanate de
diagnostic
(IDR) - rar

Alt model schema simplificata:

Caractere generale:
Diagnosticul de laborator consta in:
I. Diagnosticul bacteriologic
1. Recoltarea produselor patologice;
2. Examnarea macroscopic si microscopic (prin examen direct) al produsului patologic;
3. Insamintarea si izolarea;
4. Citirea si interpretarea rezultatelor;
5. Cercetarea caracterelor de patogenitate:
- teste de patogenitate in vitro;
- teste de patogenitate in vivo.
6. Cercetarea sensibilitatii la actiunea bacteriofagilor;
7. Cercetarea sensibilitatii la antibiotic si chimioterapice.
II. Diagnostic imunologic

RECOLTAREA SI TRANSPORTUL PRODUSELOR PATOLOGICE

Recoltarea i transportul produselor patologice
Obinerea unui rezultat corect la examenul microbiologic impune respectarea unor reguli
referitoare la:
- modul de recoltare al produsului patologic (PP);
- metodele de conservare;
- modalitile de transport.
La recoltarea produselor patologice trebuie rspuns la urmtorul chestionar:

Ce se recolteaz? n care produse patologice se pot gsi bacteriile suspectate?

Bacteriile patogene poate fi cutat:
- la pori de intrare;
- n organe int;
- n focare metastatice nespecifice;
- n cile de rspndire (snge i ganglioni);
- n cile de eliminare (intestin, ci urinare)
Bacteriile pot fi depistate prin cutarea antigenelor bacteriene n:
- umori;
- snge;
- urin;
- exsudate: LCR, sput.
Cine poate recolta? Recoltarea produsului patologic este efectuat de medicul clinician
i/sau asistent.
Ct se recolteaz? Cantitatea produsului prelevat trebuie s fie suficient.
Cnd se recolteaz? La prelevarea probelor se ine seama de anumite reguli. Recoltarea
se face:
- dup pregtirea prealabil a pacientului;
- dup informarea pacientului n legtur cu analiza ce urmeaz a fi efectuat i
cu modul corect de efectuare;
- n recipiente pentru recoltare curate, sterile, de unic folosin i adaptate
investigaiei. Recipientele de transport se nchid ermetic pentru a preveni contaminarea
mediului i a personalului care manipuleaz produsele patologice;
- ct mai aproape de debut;
- naintea administrrii antibioticului;
- ct mai rapid posibil, corect, aseptic;
- pe recipient se noteaz numele pacientului i proveniena sa, tipul produsului
patologic:
n ce scop se face recoltarea? Trebuie s se precizeze ce examene de laborator se solicit.
Transportul produsului patologic la laborator se face:
- ct mai repede pentru a preveni degradarea produsului patologic;

- folosind medii de transport care asigur o bun supravieuire a bacteriilor.

La transport, produsul patologic trebuie s fie nsoit de un bilet de trimitere completat
corect.
n cazul examenului virusologic:
- produsele patologice se transport n recipiente nchise ermetic, pe ghea,
nsoite de formular de cerere de analiz completat corespunztor, imediat dup recoltare;
- dac produsele nu pot fi prelucrate imediat trebuie congelate rapid la -70C,
pentru ca unele virusuri sunt deosebit de labile i i pierd viabilitatea/infectivitatea rapid
(citomegalovirus, varicela - zoster virus, virusul respirator sinciial);
- trebuie s se evite congelarea produselor patologice la -20C, deoarece virusurile
i pierd viabilitatea.
Ce produse patologice pot fi recoltate?
Produsele patologice sunt reprezentate de:
- exsudat faringian;
- secreie nazal;
- secreie nazo-faringian;
- sput;
- snge;
- Lichid cefalorahidian LCR;
- urin;
- secreie vaginal;
- secreie uretral i prostatic;
- materii fecale;
- bil;
- puroi;
- secreie conjunctival;
- exsudate din caviti nchise.
Modul de recoltare a celor mai frecvente produse patologice, n funcie de situsul
anatomic
Nr. Produs
crt. patologic

Examen bacteriologic

Examen virusologic

1.

Cnd se recolteaz: nainte de tratament

- Se terge ferm mucoasa

Exsudat

faringian

2.

Exsudat
nazal
(Secreie nazal)

3.

Secreia nazo faringian

4.

Sput

antibacterian. nainte de ingestia alimentelor sau

toaleta cavitii bucale.
Cantitate recoltat: un tampon sau 2 tampoane
n cazurile speciale;
Transport: < 2 ore
Mod de recoltare se deprim baza limbii cu un
apstor steril; se terge ferm cu un tampon, dar
nu brutal, amigdalele i peretele posterior al
faringelui, zone inflamate, ulcerate sau
depozitele purulente.
Tamponul este introdus n tubul protector i apoi
sunt notate datele pacientului.
Examinare trebuie fcut n maxim 3 ore de la
recoltare.
n biletul de trimitere se precizeaz suspiciunea
clinic de angin i stomatit Vincent (depozit
pseudomembranos);
- dac identificarea lui Staphylococcus aureus
este n scop epidemiologic (purttor).
Pacientul sufl nasul.
Mod de recoltare:
- medicul umecteaz tamponul faringian n ser
fiziologic;
- terge, pe rnd vestibulul foselor nazale.
Cantitate recoltat: un tampon pentru fiecare
nara.
Transport: < 2 ore.
Examinarea: la 2-3 ore de la recoltare.
Observaie: exsudatul nazal este recomandat n
principal pentru depistarea purttorilor de
Staphylococcus aureus.
Pacientul este aezat cu capul nclinat pe spate.
Mod de recoltare:
- medicul introduce tamponul nazo - faringian
printr-o nar, pn la peretele posterior al nazo faringelui,
se las cteva secunde, dup care se rotete uor,
apoi se retrage puin, se
reinser, rotete i se retrage definitiv.
Examinarea : la 2-3 ore de la recoltare.

Se recolteaz la internare.
Mod de recoltare: se efectu periajul dinilor,
cltirea energic a gurii i gargar cu ap steril.
Pacientul tuete i expectoreaz ntr-un
recipient steril (cu gtul larg i cu un capac care
se nchide ermetic).
Tuse spontan, intens, supravegheat.
Cantitatea recoltat: 1-2 ml prob purulent.
Tuitori cronici, TBC: toat sputa de la
expectoraia matinal sau
expectorat n interval de 1 - 2 ore
Tuse slab productiv: stimularea expectoraiei
Transport: < 2 ore.

faringian cu un tampon
uscat;
- se aeaz tampoanele
ncrcate n mediu
de transport;
- se pstreaz produsul
patologic pe ghea;
- izolarea virusurilor de pe
tampoane este mai puin
eficient dect izolarea din
aspirate sau lavaje, dar
recoltarea cu tamponul este
mult mai uor de efectuat;
se transport la laborator pe
ghea.

- Se rotete tamponul
umectat cu mediu de
transport n cavitatea nazal;
- tampoanele ncrcate se
aeaz n mediu
de transport, acestea se
pstreaz/se transport la
laborator pe ghea

Tamponul inserat pe tij

flexibil se introduce printr-o
nar pn ce se atinge
peretele posterior al nazo faringelui, se
ateapt cteva secunde i se
retrage;
- se recolteaz n primele 5
zile de la apariia
simptomelor;
- se transport la laborator pe
ghea.
Se transport la laborator pe
ghea

5.

Secreie traheal

Secreie
intern

otic

7.

Secreie
extern

otic

8.

Secreii oculare

Observaii: se recolteaz sputa sub directa

ndrumare a asistentei. Se explic pacientului
diferena dintre a expectora i a scuipa. Sputa se
recolteaz dimineaa cnd pacientul face
toaleta bronhiilor. Nu se examineaz probele
de sput adunate n 24 de ore.
Mod de recoltare: secreie aspirat n recipient
steril.
Cantitatea recoltat: > 3 mL.
Transport: < 2 ore.
Observaii: se aspir cu ajutorul unei sonde de
unic folosin, atraumatic, aseptic. Se va
efectua preoxigenarea bolnavului cu fracie
inspiratorie Fi O2 = 1, timp de trei minute.
Mod de recoltare - timpan perforat: se
colecteaz fluidul cu un tampon flexibil cu
ajutorul unui speculum auditiv.
Cantitatea recoltat: tampon cu mediu de
transport sau sistem anaerob. Obligatoriu se
recolteaz doua tampoane din acelai loc.
Transport: < 2 ore.
Observaii: n cazul secreiei aspirate sau
biopsiei se folosete sistemul de transport
anaerob. Culturile de la nivel nazofaringian sau
exsudat faringian nu sunt predictive pentru
agenii etiologici n otita medie.
Mod de recoltare: cu un tampon umezit se cur
conductul auditiv extern. Cu un al II-lea tampon
se recolteaz prin rotire ferm.
Cantitatea recoltat: obligatoriu se recolteaz 2
tampoane.
Transport: < 2 ore.
Observaii: pentru secreia otic externa se va
efectua rotirea riguroas a tamponului.
Conjunctiv
Mod de recoltare:
- se recolteaz cte un tampon separat pentru
fiecare ochi;
- tamponul este umezit n ser fiziologic steril;
- se rotete tamponul i se nsmneaz direct
pe mediile de cultur, majoritatea germenilor
avnd viabilitate redus.
Transport: nsmnare direct pe mediile de
cultura (chocolate, geloz-snge), frotiuri pentru
examenul microscopic direct. Plcile
nsmnate se trimit la laborator < 15 min.
Observaii: se recolteaz nainte de: toaleta feei,
terapie antimicrobian topic sau sistemic; se
recolteaz de la nivelul ambelor conjunctive.
Ochiul neinfectat servete drept control.
Cornee
Mod de recoltare: se racleaz din mai multe arii
ale ulcerului cornean. Se folosete soluie
anestezic local.
Transport: nsmnare direct pe mediile de
cultura (BHI, chocolate), frotiuri pentru

9.

Snge
hemocultur

10.

Lichid
cefalorahidian
(LCR)

11.

Urin

examenul microscopic direct. Plcile

nsmnate se trimit la laborator < 15 min.
Recoltare n recipiente speciale pentru
Hemocultur:1 set = 1 flacon aerob + 1 flacon
anaerob.
Se recomand recoltarea sngelui din 2 locuri
diferite
Volum recoltat: 10 ml (1-3 ml la copii)
Recoltarea pentru hemocultur, presupune lipsa
tratamentului cu antibiotice, altfel exist riscul
ca germenii s nu creasc.
Tehnica de recoltare: se procedeaz la
antiseptizarea tegumentului cu iod (betadine),
apoi cu alcool 70%; se ateapt uscarea zonei
antiseptizate dac acest interval nu poate fi
respectat, probele trebuie pstrate la 4C imediat
dup recoltare. Recoltarea sngelui se face cu ac
i siring i se transfer n flacoane. Se
inoculeaz fiecare flacon fr a depi semnul
de pe etichet.
Transport: se folosesc flacoane pentru sistemul
automat (BactAlert). Se impune decontaminarea
dopurilor la flacoanele de hemocultur cu alcool
70%. Se inoculeaz fiecare flacon fr a depi
semnul de pe etichet. Transportul trebuie fcut
imediat. Nu se refrigereaz.
Observaii: Sepsis acut: 3 seturi, 3 venopuncii
separate, la interval de 10 minute, nainte de a
ncepe antibioticoterapia. Endocardita acut: 3
seturi, 3 venopuncii separate n primele 1-2 ore
de evoluie; se recomand nceperea terapiei.
Endocardita subacut: 3 seturi, 3 venopuncii
separate la interval de 15 minute n prima zi.
Dac rezultatul la 24 ore este negativ, recoltai
nc trei seturi. Endocardita n timpul
tratamentului cu antibiotice: 3 seturi, 3
venopuncii separate, zilnic, 3 zile succesiv. Se
recolteaz imediat naintea nceperii urmtoarei
doze de antibiotic. Nu se recolteaz cnd
concentraia seric a antibioticului este maxim.
Febra de origine necunoscut: 2-3 seturi,
venopuncii separate la interval de cel puin o
ora. Dac rezultatul la 24-36 ore este negativ, se
repet recoltarea.
LCR se recolteaz prin puncie lombar n
condiii stricte de asepsie.
Produsul patologic nu se refrigereaz (Neisseria
meningitidis).
Pacientul trebuie educat (explicat pe nelesul
fiecrui bolnav) pentru prevenirea contaminrii
probei
Momentul prelevrii: prima urin de diminea.
Recoltarea urinei se face:
- dup cel puin 3-4 ore de la miciunea
anterioar;

n cursul diagnosticului
serologic: se recolteaz
snge n vacutainere
fr anticoagulani (dop
rou).
Sngele recoltat se transport
fr
refrigerare, la temperatura
camerei.
Serul este separat n
laborator.
n cazul determinrii
statusului imun: se
recolteaz o singur prob;
pentru detectarea infeciilor
acute se recolteaz probe
perechi, o prob de snge n
perioada de stare a bolii i o
prob n starea de
convalescen, la interval de
10-14 zile ntre probe.

Recoltarea se face n primele

7 zile de la
debut;
- se transport la laborator pe
ghea.
Se recolteaz jetul mijlociu
n recipient
steril cu capac filetat;
- se transport imediat la
laborator pe ghea;
- recoltarea se face n
primele 2 sptmni de

12.

Secreiile
genitale - la
femei

13.

Secreiile
genitale - la
brbai

- dup toaleta riguroas a organelor genitale

externe cu ap cldu i spun;
- din jetul mijlociu fr ntrerupere fluxului;
- n recipiente sterile speciale pentru
recoltarea urinei.
Cantitatea necesar: 10-20 ml.
Pentru nou-nscui se folosesc pungi sterile din
material plastic.
Se mai poate preleva urin prin puncie
suprapubian sau prin cateter:
Examenul microbiologic al urinei trebuie
efectuat n cel mult 2 ore de la prelevare
indiferent de modul de recoltare.
Vaginite: se recolteaz din fundul de sac vaginal,
cu tampon steril care apoi se introduce n mediu
de transport;
- se efectueaz dou frotiuri.
Transport: < 2 ore.
Observaii: n cazul suspiciunii infeciei cu
Trichomonas vaginalis, un tampon se imerseaz
n tub steril cu 1 mL soluie salin izoton
(37C), pentru examen microscopic (preparat
proaspt ntre lam-lamel.
Cervicite: se recolteaz cu un tampon steril; se
ndeprteaz mucusul de la nivelul cervixului;
cu un alt tampon se recolteaz produsul
patologic prin introducerea i rotirea n canalul
cervical; se asigur evitarea contaminrii probei
cu flora vaginal; se efectueaz dou frotiuri.
Bartolinite: se preleveaz secreia purulent de
la nivelul orificiului conductului glandular.
Cantitatea recoltat > 1 mL.
Transport: sistem anaerob.
Endometrite: se badijoneaz cu alcool iodat
exocolul i canalul cervical; se introduce un
cateter; se aspir lichid endometrial.
Observaii: puroiul aspirat prin puncie (abces)
se nsmneaz pe medii aerobe i anaerobe.
La fetie: se efectueaz tamponarea secreiei de
la nivelul vulvei.
Cu ajutorul unui cateter se introduc n
vagin 2 ml ser fiziologic steril, apoi se
colecteaz lichidul de spltur;
- se efectueaz dou frotiuri.
Produsul patologic nu se refrigereaz (Neisseria
gonnorhoeae).
Uretrite:
- se recolteaz secreie uretral spontan sau
provocat cu tampon steril, care se introduce n
mediu de transport:
Cantitatea recoltat: tampon cu mediu de
transport; se efectueaz dou frotiuri;
pentru examenul microscopic.
- se poate recolta i urin - primul jet.
Transport: 2 ore.
Observaii - examinarea uretrei i prelevarea

boal; pentru CMV se

recolteaz oricnd pe durata
boli;
- se transport la laborator pe
ghea.

Se transport la laborator pe
ghea.

Se transport la laborator pe
ghea

14.

Materii fecale:
Coprocultur

15.

Lichide

probelor se fac la cel puin dou ore dup

miciune. Pacienii cu scurgere discret vor
reduce lichidele pn n ziua urmtoare i
prelevarea se face nainte de miciunea matinal.
In cazul suspiciunii infeciei cu Trichomonas
vaginalis, prelevarea se va face naintea
miciunii matinale; tamponul se imerseaz n tub
steril cu 1 mL soluie salin izoton (37C),
pentru examen microscopic fr ntrziere.
Probele destinate cultivrii gonococilor se
nsmneaz imediat pe medii speciale, la 37C.
Prostatite:
- se recolteaz secreia prostatic dup
masaj prostatic ejaculare i colectare n recipient
steril.
Cantitatea recoltat: tampon cu mediu de
transport; doua lame pentru examenul
microscopic.
Transport: < 2 ore.
Scaun emis spontan.
Defecarea se face n containere de unic
utilizare de carton sau material plastic. Se
recolteaz:
- cu tampon/linguria coprorecoltorului;
- poriuni lichide, mucoase,
sanguinolente, volumul prelevat fiind de 3 - 5
cm3;
- prelevare rectal;
- cu sonda Nelaton:
- umectarea sondei n ser fiziologic
Steril;
- penetrarea sfincterului anal prin
rotare lent;
- introducere intrarectal 15 cm;
- adaptarea unei siringi sterile de 10 mL;
- se efectueaz 1 - 2 aspiraii;
- introducerea aspiratului n tub steril cu
dop, cu mediu de conservare lichid.
Pentru depistare Clostridium difficile se face
recoltarea de scaun diareic (lichid sau moale) n
recipient curat, fr mediu de transport.
Ascit, bil, lichid sinovial, pericardic,
peritoneal, pleural
Mod de recoltare: se dezinfecteaz tegumentul
cu betadine, 3 badijonri succesive cu
respectarea timpul de aciune al antisepticului;
se aspir cu ac steril/ chirurgic, se ndeprteaz
iodul cu alcool 70%.
Cantitatea recoltat: ntotdeauna trebuie trimis
fluid ct de mult posibil. Niciodat nu se
recolteaz tampon mbibat n lichid.
Transport: < 15 minute.
Observaii: recoltarea se face n flacoane pentru
sistemul automat: se ndeprteaz capacul
flacoanelor; se dezinfecteaz capacele de
cauciuc cu alcool 70%; se inoculeaz fiecare

Scaun emis spontan.

Se recolteaz probe n
primele 2 - 3 zile de boal;
nu se folosesc conservani,
medii de transport, nu se
recolteaz cu tamponul
deoarece o mare parte
din virusuri se absoarbe pe
tampon:
Metode de conservare:
- refrigerare la 4oC;
- congelare la -70oC. Se
folosesc containere sterile.
Cantitatea de prob:
5 - 10 cm3.

10

flacon, fr a depi semnul de pe etichet.

Pentru culturi se recomand recoltarea i
transportul direct n flacoane de hemocultur.

11