Numrarea leucocitelor

Principiul metodei:
Sngele diluat n pipete speciale cu ajutorul unui lighid de diluie specific, este
introdus apoi n hemocitometru ntr-un volum bine determinat, unde celulele sunt distribuite
uniform i numrate pe o anumit reea.
Materiale necesare:
-Materiale necesare pentru recoltarea sngelui capilar sau venos.
-Pipeta Potain pentru leucocite format dintr-un tub capilar gradat care prezint dou
notaii, 0,5 i 1 i se continu cu o poriune dilatat , bula de diluie, n care se afl o mic
perl, mobil , alb. Deasupra bulei de diluie se afl notaia 11. Dac sngele este aspirat n
tubul capilar pn la diviziunea 0,5 sau 1 i apoi completat cu lichidul de diluie pn la
notaia 11, se obine o diluie a sngelui de 1/20, respectiv 1/10. Capacitatea total a pipetei
este de 11 volume iar diluia este de 1/10 i 1/20, datorit faptului c un volum de diluant
rmne n tubul capilar i nu dilueaz sngele Partea de sus a pipetei se adapteaz unui tub de
cauciuc, care permite o aspiraie uniform. Dup utilizare pipetele se spal cu ap, apoi cu
alcool i eter, se usuc i se sterilizeaz la cldur uscat.
-Lichidul de diluie trebuie s menin integritatea i s conserve celulele care
urmeaz a fi numrate i s lizeze celelalte tipuri de celule; acesta dilueaz sngele, distruge
hematiile i trombocitele, mpiedic coagularea; trebuie s fie izotonic, pentru a nu determina
hemoliza sau ratatinarea leucocitelor i conine un fixator care s mentin forma celulelor, s
le mpiedice autoliza i aglutinarea. Lichidul de diluie folosit pentru numrarea leucocitelor
este soluia Trk constituit din:
Acid acetic..............1ml
Ap distilat.....................100ml.
Albastru de metilen 1 %...........cteva picturi
-Camera de numrat sau hemocitometrul, lam groas de sticl pe care a fost gravat
o reea cu dimensiuni cunoscute, putndu-se folosi camerele Burker, Burker-Turk, Nageotte
sau Goreaev (vezi pag. Nr.)
- Microscopul optic se folosete utiliznd obiectiv uscat, 20x sau 40x , ocular 10 sau
7i iluminare slab.

Tehnica de lucru:
Se pregtete camera de numrat. Din sngele recoltat se aspir n pipeta Potain
pentru leucocite pn la diviziunea 0,5 sau 1 ( citirea fcndu-se cu pipeta n poziie
vertical). Dac sngele depete uor diviziunea, prin atingerea vrfului pipetei cu o hrtie
de filtru coloana de snge se poate potrivi exact pn la diviziunea dorit.
Se terge sngele de pe pereii exteriori ai pipetei i se introduce pipeta n flaconul cu
lichid de diluie. Se aspir lichidul pn la diviziunea 11. Pipeta se aeaz n poziie
orizontal i se cuprinde ntre degetul mare i cel mijlociu, apoi se agit viguros pentru
omogenizare. Pn la numrtoare pipeta rmne n poziie orizontal.
Umplerea camerei de numrat se face dup agitarea pipetei timp de 2-3 minute i
ndeprtarea primelor picturi din pipet. Vrful pipetei se apropie de marginea lamelei
aplicat pe camera de numrat i se las s intre prin capilaritate o cantitate de lichid asfel
nct reeaua s fie acoperit n ntrgime fr bule de aer sub lamel i fr ca lichidul s trec
n anurile laterale sau lamela s se deplaseze. Dac toate aceste condiii nu sunt respectate
operaia se repet dup tergerea camerei.
Numrarea leucocitelor se realizeaz dup cteva minute, pentru sedimentarea
elementelor pe cadrilaj. Se examineaz camera la microscop i se numr patru sau cinci
cmpuri de 1 mm2. n interiorul acestora se numr elementele din interiorul ptratelor cu
suprafaa de 1/25 mm, cele din interiorul ptrelelor i cele de pe dou margini, mereu
aceleai, de exemplu stnga i sus. pentru a evita dubla numrare a elementelor.
Calcul:
Pentru a stabili numrul elementelor de pe 1 mm se mparte numrul total obinut la 4
sau la 5. Numrul de leucocite dintr-un mmse calculeaz nmulind cifra obinut cu 10
pentru a corecta nlimea camerei (1/10mm) i cu 20 pentru a corecta diluia (1/20) dac
sngele a fost aspirat n pipet pn la diviziunea 0,5. Dac diluia a fost 1/10 se nmulete
cu 10.
Erori n numrarea leucocitelor pot fi erori de recoltare, de pipetare i diluare, datorate
examinatorului, aparaturii i erori inerente metodei.
Variaii fiziologice:

-efortul digestiei poate induce o hiperleucocitoz cuprins ntre 10000 i 20000 leucocite /
mm3. Uneori persoane sensibilizate fa de anumite alimente prezint ca urmare a ingerrii
acestora o leucopenie sub 3000 leucocite / mm3.
-efortul muscular intens i susinut produce hiperleucocitoz pn la 20000 leucocite / mm3.
-nou nscutul are un numr de leucocite cuprins ntre 12000 i 20000 leucocite / mm3.
-la femei n timpul sarcinii se constat o leucocitoz pn la 12000 leucocite / mm 3. n timpul
travaliului numrul acestora poate crete pn la 30000 leucocite / mm3
- exist i leucopenii fiziologice, unele congenitale cu valori ntre 2000-3000 leucocite / mm 3,
unele permanente altele temporare.
Corecia rezultatelor:
n cazul numrtorilor automate numrul de leucocite poate fi uneori fals crescut
datorit prezenei de eritroblati, agregate de trombocite sau fibrin crioglobuline sau
criofibrinogen, eritrocite nelizate etc. Erorile pot fi corectate prin examinarea frotiului de
snge.
n camera de numrat nu se poate face deosebirea ntre leucocite i eritroblati,
numrul gsit reprezentnd suma elementelor nucleate. Eritroblatii se evideniaz cu ocazia
examinrii frotiului de snge, determinndu-se numrul lor la 100 de leucocite. Numrul real
de leucocite se calculeaz din formula:

Nr real de leucocite=

Nrcelulenu cleate / llx100

100 Nreritrobl asti / 100