23/01/2015

Lumea microorganismelor
Microorganisme celulare:
3 atribute ale vieii:

Bacteriologie general
Conf. univ. Dr. Olivia Dorneanu

Capacitatea de a sintetiza proteine

Capacitatea de a produce energie
Informaie genetic

bacterii, fungi, protozoare

Microorganisme acelulare:
Doar informaie genetic
virusuri

Structura bacteriei

Structura bacteriilor
- structuri obligatorii Citoplasma bogat n ribozomi (sediul sintezei proteice)
Nucleoplasma 1 cromosom, ADN d.c. - sediul informaiei
genetice
Membrana citoplasmic respiraia celular; digestie;
transport transmembranar; biosintez (fosfolipide, perete
bacterian)
Lipsesc organite celulare (lizozomi, mitocondrii, aparat Golgi)

Structura bacteriilor
- structuri obligatorii perete bacterian
rigid forma bacteriei

rezistent protecie

23/01/2015

Peretele bacterian condiioneaz colorabilitatea bacteriilor n

coloraii difereniale:
* Gram

Frotiu colorat Ziehl-Neelsen

* Ziehl-Neelsen

Structura bacteriilor
- structuri facultative -

Capsula - ligand (mucoase, celule eucariote, bacterii,

suprafee inerte), rol n virulen
Flageli mobilitate
Pili (fimbrii) - asigur aderarea la receptori specifici de pe
suprafeele celulare (mucoase)
Spori - forme de rezisten n condiii defavorabile de mediu

nmulirea bacteriilor (diviziune)

23/01/2015

Cultivarea bacteriilor
Medii de cultur = soluii apoase ale unor substane
nutritive
s fie steril - pentru a cultiva exclusiv microorganismele din
produsul investigat
s fie nutritiv
s asigure presiunea osmotic (n general, medii izotone) i pH
(n general, 7-7,5)
s fie transparent - pentru a facilita urmrirea culturii

Clasificarea mediilor de cultur

Dup consisten:
lichide (bulioane) repartizate n eprubete sau baloane
nu permit separarea bacteriilor dintr-un amestec
utilizate pentru nsmnarea produselor patologice
monobacteriene (LCR, snge)
Ex. bulion nutritiv

solide
repartizate cel mai frecvent n plci Petri
permit separarea bacteriilor dintr-un amestec obinerea de
colonii izolate (cultur pur)
obinute prin adaos de agar / coagularea proteinelor
utilizate pentru nsmnarea produselor patologice
pluribacteriene (exsudat faringian, materii fecale)
Ex. agar nutritiv

Condiii fizico-chimice
Temperatura de incubare (37 C)
Atmosfera de incubare (aerob, anaerob, CO2)

Clasificarea mediilor de cultur

Dup scopul utilizrii
mbogite - satisfac exigenele nutritive pentru o gam larg
de bacterii; ex. agar-snge
Difereniale - difereniaz ntre ele bacterii cu aspect al culturii
identic pe alte medii de cultur
Selective inhib parial dezvoltarea bacteriilor de contaminare a
prelevatelor

Colonie = mas de cultur, vizibil cu ochiul liber pe suprafaa unui

mediu de cultur solid, rezultat prin multiplicarea unei singure celule
bacteriene sau a unui grup de celule, numit unitate formatoare de
colonii / UFC
Colonie = cultur pur

Numirea tiinific a bacteriilor

nume latinizate
familie - -aceae
e.g., Enterobacteriaceae; enteron - intestin

gen - -um, -us

e.g., Clostridium; closter fus
e.g., Staphylococcus; staphyle ciorchine de strugure,
coccus - boab

specie numele genului + un adjectiv

e.g., Staphylococcus aureus
e.g., Neisseria gonorrhoeae

Identificarea unei bacterii

Metode de depistare a bacteriilor

1.

Microscopia analiza morfologiei i structurilor

Cultivarea izolarea repicarea n culturi pure
identificare
Depistarea acizilor nucleici microbieni
Reaciile antigen-anticorp

Caractere microscopice

2.

Caractere de cultur

3.
4.

preparate umede mobilitatea, morfologia spirochetelor

preparate colorate morfologie, afinitate tinctorial
exigenele nutritive: nepretenioase i pretenioase;
aspectul coloniilor: diametrul, circumferina, relieful, suprafaa,
culoarea, consistena;
temperatura optim de cultivare;
atmosfera optim de cultivare: aerobe, anaerobe, facultativ
anaerobe, carboxifile, microaerofile;
producerea de pigment difuzibil n mediu.

Teste biochimice
Identificare antigenic

23/01/2015

Din pdv al virulenei, bacteriile pot fi

Nepatogene nu produc infecii la om (nu gsesc n
esuturi i umori condiii fizico-chimice i nutritive
necesare dezvoltrii)
Strict patogene - posed suficiente capaciti invazive
pentru a mbolnvi gazda cu aprare anti-infecioas
normal. Dup vindecare, pacienii pot rmne purttori
sntoi.
Condiionat patogene (oportuniste) produc infecii:
n condiiile unor deficiene ale barierelor antimicrobiene
cnd dobndesc capaciti patogene suplimentare

1.

2.

3.
4.

Contaminare colonizare infecie

contaminare - depunerea unor microorganisme pe o
suprafa
colonizare - multiplicarea microorganismelor pe suprafeele
gazdei fr o reacie detectabil din partea acesteia
(rspuns inflamator etc.)
condiiile de nutriie i fizico-chimice oferite de nveliuri i
adezivitatea specific a microbilor la unele celule selecteaz
contaminanii care vor coloniza anumite zone ale organismului
(microbiota indigen, flora microbian normal)

infecie - ptrunderea i multiplicarea n corp a unui agent

infecios, cu o reacie detectabil din partea acesteia

Zonele organismului uman

n raport cu condiia lor microbiologic
Zone normal sterile

mediul intern (snge, limf, lichid interstiial)

esuturile
cavitile seroase (meningian, pleural, pericardic, peritoneal,
sinoviale articulare)

Zone cu contaminri reduse i tranzitorii, practic sterile

sinusuri i urechea medie
etajul subglotic al cilor respiratorii
cile biliare
cile urinare de la rinichi la uretra proximal
organele genitale interne

Zone contaminate, dar necolonizate

Funciile microbiotei indigene

1. Nutritiv
furnizor de vitamine din grupul B, vitamine E i K
2. De protecie
se opune invadrii suprafeelor de ctre microorganisme
de contaminare curent, inclusiv patogene

stomac
duoden
jejun

Zone normal colonizate

tegument
conjunctiva
ci aerodigestive superioare
ileon terminal, colon
uretra distal
vagin

Disbioze

Importana cunoaterii microbiotei indigene

n practica de laborator

(colonizri microbiene anormale )

1.

administrare de antibiotice

1.

modificarea condiiilor de gzduire

1.

incapacitatea de a digera i absorbi dizaharidele diaree

lipsa igienei bucale + consum crescut de dulciuri placa dentar carii

lipsa sau insuficiena unor bariere antimicrobiene

1.

Antibiotice cu spectru larg Candida

Clindamicin enterocolita pseudo-membranoas (Clostridium difficile)

aclorhidria colonizarea stomacului i duodenului infecii biliare

plgi bacterii condiionat patogene

semnificaia izolrii unei bacterii condiionat

patogene dintr-un prelevat patologic care
provine din caviti naturale impune:

reducerea contaminrii n timpul prelevrii

prevenirea nmulirii contaminanilor pn la
examinare
cunoaterea speciilor microbiene i a proporiei lor
normale n cavitile respective

colonizarea orofaringelui cu bacili gram-negativi la vrstnici i la

pacieni spitalizai pentru boli grave

23/01/2015

Contaminare colonizare infecie

O infecie exogen
se produce cnd coexist:

contaminare - depunerea unor microorganisme pe o

suprafa
colonizare - multiplicarea microorganismelor pe suprafeele
gazdei fr o reacie detectabil din partea acesteia
(rspuns inflamator etc.)

Un rezervor de infecie
Om
Pacieni cu boli infecioase (acute/cronice)
Purttori sntoi (de ex., persoane cu infecii inaparente,
convalesceni dup o boal infecioas etc.)

condiiile de nutriie i fizico-chimice oferite de nveliuri i

adezivitatea specific a microbilor la unele celule selecteaz
contaminanii care vor coloniza anumite zone ale organismului
(microbiota indigen, flora microbian normal)

Animale
Elemente de mediu

infecie - ptrunderea i multiplicarea n corp a unui agent

infecios, cu o reacie detectabil din partea acesteia
Boal infecioas - agentul infecios determin leziuni care se
traduc prin simptome i semne clinice.
Infecie inaparent - singura reacie a gazdei la invazia
agentului infecios este un rspuns imun, detectabil numai
prin examene de laborator

O cale de transmitere a microbului patogen

O gazd receptiv pentru acest microb

Profilaxia infeciei

Controlul infeciei
Profilaxia infeciei

Neutralizarea surselor de infecie

ntreruperea cilor de transmitere
Protecia gazdei receptive

Tratamentul infeciilor

Vaccinare
Administrare de seruri imune
Administrare profilactic de antibiotice
Izolarea de protecie

Rezistena la agenii antibacterieni a diferitelor tipuri

de microorganisme

Decontaminarea microbian = aciuni de

ndeprtare sau distrugere, parial sau total, a
microbilor contaminani.

Nivel de eficien
al agenilor de decontaminare

Sporii bacterieni

nalt = sterilizare

Micobacterii

Mijlociu = dezinfecie

Virusuri nude
Bacterii gram-negative
Fungi
Bacterii gram-pozitive

eficient

Jos = dezinfecie/
antiseptizare/
decontaminare mecanic

Virusuri nvelite

23/01/2015

Metode de decontaminare
Mecanici splare cu ap i spun
Fizici
Cldura
Cldura uscat
flacr
arderea la rou
flambarea
incinerarea
aer cald etuv (pupinel)

Cldura umed

vapori sub presiune autoclave - sterilizare

tyndallizarea (sterilizarea fracionat)
fierberea dezinfecie
pasteurizarea - prezervare

Radiaii
Ultrasunete
Filtrare

Chimici substane antimicrobiene

Sterilizarea prin aer cald (etuv)

Parametri:
temperatura: 180C
timp: o or sau mai mult pentru materialele
care se nclzesc greu
timp sterilizare = timp uniformizare a temperaturii
(variabil: volumul, tipul
materialului de sterilizat)

+
timp omorre a microbilor

Principii generale de utilizare

aeaz ambalajele cu materialele pentru sterilizare pe
rafturile etuvei, lsnd spaii prin care aerul fierbinte s
circule liber i nchide ua etuvei
programeaz temperatura de sterilizare la 170-180C i
conecteaz etuva la sursa de curent
marcheaz timpul n momentul n care a fost atins
temperatura de sterilizare
menine aceast temperatur timp de 60 minute (sau
mai mult), dup care ntrerupe sursa de curent
scoate materialele sterilizate numai dup rcirea etuvei

(constant)

23/01/2015

Sterilizarea prin vapori de ap sub presiune

(autoclav)
Parametri:
presiunea 1 atm, temperatura 121C, timp 15-30 min
presiunea 2 atm, temperatura 134C
presiunea 0,5 atm, temperatura 115C
timp sterilizare = timp uniformizare a temperaturii
(variabil: volumul, tipul
de sterilizat)

materialului

+
timp omorre a microbilor
(constant)

Principii generale de utilizare

asigur-te c este ap suficient n interiorul autoclavului
introdu materialele de sterilizat n ambalajele lor
nchide capacul, avnd grij ca robinetul de evacuare a aerului s
fie deschis
pune n funciune sursa de cldur i nchide robinetul numai dup
ce te-ai asigurat c aerul din incint a fost evacuat
urmrete realizarea temperaturii de sterilizare i a timpului
corespunztor de meninere a acesteia
dup realizarea celor 2 parametri, ntrerupe sursa de cldur
dup ce presiunea interioar a ajuns la zero, deschide lent
robinetul de evacuare a vaporilor
las materialele sterilizate, pentru uscare, n autoclavul cu capacul
deschis, manipularea lor fiind posibil dup ce temperatura a
cobort sub 80C

23/01/2015

Controlul sterilizrii
Martori fizici
Martori chimici
Martori biologici (spori bacterieni)