Lucrri practice Fiziologie I

SimNERV. STUDIUL PROPRIETILOR NERVULUI MOTOR PERIFERIC

SimNerv este un program de simulare pe calculator a experimentelor efectuate pe nervul motor periferic, privind excitabilitatea i conductibilitatea nervului. Acest program reprezint o cale alternativ, modern i accesibil, n abordarea experimentele efectuate pe animalul de laborator. Nervul ischiatic izolat de broasc, obinut printr-o tehnic prezentat n imagini video, este excitat cu stimuli electrici izolai, iar potenialele de aciune generate sunt nregistrate cu ajutorul a doi electrozi de suprafa cuplai la un osciloscop catodic. Programul reproduce o condiie experimental esenial, i anume heterogenitatea rspunsului preparatelor biologice n condiii experimentale. Pentru interpretarea corect a rezultatelor obinute trebuie s se in seama i de faptul c experimentul se efectueaz pe nerv, iar acesta reprezint un ansamblu de fibre nervoase cu excitabilitate diferit.

1. ORGANIZAREA LABORATORULUI SimNERV

Laboratorul SimNERV cuprinde componentele prezentate n Fig.1: CUTIA CU ELECTROZI - permite fixarea pe un suport a nervului ischiatic izolat. Este dotat cu 2 electrozi de excitare - de culoare albastr i galben i 2 electrozi de culegere - de culoare verde i roie. Cutia ofer posibilitatea de deplasare a electrozilor pe o scal gradat cu lungimea de 10 cm. Suprafaa de culoare alb, cuprins ntre 5 i 6 cm, este suprafaa destinat pmntrii i are ntotdeauna potenialul 0 - orice electrod plasat pe aceast suprafa devine electrod indiferent. STIMULATORUL - genereaz stimuli electrici la parametri de durat (Duration), amplitudine (Amplitudine) i interval de stimulare (Delay) ce pot fi stabilite prin deplasarea pe vertical a unui cursor. Fiecare din aceti parametri pot fi amplificai prin deplasarea pe orizontal a cte unui cursor Multiplier. Stimulatorul mai permite stabilirea modalitii de aplicare a stimulului (MODE) - Single/Twin, stabilete polaritatea electrozilor de stimulare (POLARITY) - Normal/Invert i poate asigura o anumit perioad de laten ntre momentul aplicrii excitaiei i nregistrarea imaginii pe osciloscop (TRIG) - Normal/Delay. Tasta STIMULUS/On permite lansarea excitaiei cu parametrii stabilii n prealabil. OSCILOSCOPUL - permite nregistrarea grafic a parametrilor durat/timp ce in de aplicarea excitantului (CHANNEL 1) i de potenialul de aciune al nervului (CHANNEL 2). Pentru etalonarea nregistrrii, osciloscopul prezint 3 butoane dou pentru amplitudine [mV/Div] i unul pentru durat TIMEBASE [ms/Div]. Diviziunea este reprezentat de ptratul cu latura de 5 cm, corespunztor caroiajului de pe ecran. Osciloscopul suprapune imaginile obinute prin experimente repetate atta timp ct este activat tasta Store i permite golirea ecranului cnd este activat tasta Clear Screen. CUTIA PETRI cuprinde dou fragmente de nerv ischiatic plasate n soluie Ringer. MOSORUL DE A este utilizat pentru aplicarea ligaturilor pe nerv.

Lucrri practice Fiziologie I

Fig.1. Organizarea Laboratorului SimNerv

2. PREGTIREA EXPERIMENTULUI SimNERV

Pentru efectuarea experimentelor privind excitabilitatea i conductibilitatea nervului motor periferic este necesar n prealabil pregtirea laboratorului, respectnd urmtoarele etape: se deschide camera de experiment; se plaseaz nervul pe suportul camerei; se activeaz POWER/On pentru stimulator i osciloscop; se stabilete modalitatea Single (MODE) de stimulare; se stabilete polaritatea Normal (POLARITY): Electrod rou verde albastru galben Funcie explorator (Ve) indiferent (V0) culegere monopolar de referin (Vr) culegere bipolar excitator activ excitator inactiv

se stabilete varianta NORMAL (TRIG) pentru timpul de laten a excitaiei; se repoziioneaz canalul CH1 n partea inferioar i CH2 n poriunea mijlocie a ecranului osciloscopului. se etaloneaz nregistrarea: CHANNEL 1 (CH1) - 500 mV/Div; CHANNEL 2 (CH2) - 2 mV/Div; TIMEBASE - 1 ms/Div

OBSERVAIE - etalonarea condiioneaz aspectul grafic al potenialelor.

Lucrri practice Fiziologie I

3. ETAPELE EXPERIMENTULUI SimNERV

3.1. STIMULUL PRAG OBIECTIV - se urmrete stabilirea amplitudinii prag pentru o durat de aciune dat i demonstrarea fenomenului de recrutare a fibrelor nervoase. Secvena de lucru permite nregistrarea grafic a potenialului minim corespunztor activrii celor mai excitabile fibre ale nervului i a potenialului maxim corespunztor activrii tuturor fibrelor nervului (Fig.2). Recrutarea reprezint activarea progresiv a fibrelor nervoase, odat cu creterea amplitudinii de stimulare.

Fig.2. Potenialul minim i maxim al nervului culegere monopolar.

TEM DE LUCRU reproducei graficele obinute pe canalul CH2 i notai amplitudinea corespunztoare a excitantului pentru fiecare nregistrare; observai i explicai creterea progresiv n amplitudine a potenialului de aciune. TEHNIC se plaseaz electrozii - verde la 1 cm, albastru la 3 cm, galben la 5,5 cm i rou la 9 cm; pentru durata stimulrii se fixeaz cursorul vertical DURATION la 2 ms i cursorul orizontal Multiplier/DURATION la 1x; pentru amplitudinea stimulrii se fixeaz cursorul orizontal Multiplier/AMPLITUDINE la 10x; se stimuleaz repetat nervul (activnd tasta STIMULUS/On) crescnd progresiv amplitudinea (deplasarea cursorului AMPLITUDE) cu 10 mV/determinare, pn la nregistrarea unui potenialul de aciune minim al nervului; se activeaz tasta Store a osciloscopului; se continu stimularea progresiv pn n momentul n care amplitudinea potenialului nu se mai modific, reprezentnd potenialul de aciune maxim al nervului; 3.2. CONDUCEREA POTENIALULUI DE ACIUNE NEURONAL OBIECTIV - se urmresc aspectele grafice ale conducerii potenialului de aciune prin nervul motor, n funcie de modalitatea de culegere i poziia electrozilor pe suprafaa nervului. TEM DE LUCRU 3

Lucrri practice Fiziologie I Reproducei schematic poziiile electrozilor pe suprafaa nervului pentru fiecare din cele 4 situaii experimentale; Copiai graficele obinute i explicai aspectul grafic al potenialelor de aciune. TEHNIC se activeaz tasta Clear Screen i se inactiveaz tasta Store a ecranului osciloscopului; se aplic stimuli cu durata de 2 ms i amplitudine de 200 mV obinui prin fixarea cursorilor verticali i orizontali n urmtoarele poziii: - DELAY - 2 ms, Multiplier - 1x; - DURATION - 2 ms, Multiplier - 1x; - AMPLITUDINE - 2 mV, Multiplier - 100x; OBSERVAIE - diferena de potenial (V) reprezentat pe ecranul osciloscopului este diferena ntre potenialul de la nivelul electrodului rou (VR) i cel de la nivelul electrodului verde (VV); CULEGEREA MONOPOLAR Se obine utiliznd electrodul explorator (rou) i electrodul indiferent (verde) plasai astfel: (a) pentru obinerea unui potenial monofazic pozitiv (Fig.3.A)- verde la 1 cm, albastru la 3 cm, galben i rou la 5,5 cm; Vm = VR(0) - VV(-) Vm(+) faz pozitiv (b) pentru obinerea unui potenial monofazic negativ (Fig.3.B) - rou la 1 cm, albastru la 3 cm, galben i verde la 5,5 cm; Vm = VR(-) - VV(0) Vm(-) faz negativ

(A) potenial monofazic pozitiv (B) potenial monofazic negativ Fig.3. Potenialul neuronal obinut prin culegere 2.2. CULEGEREA BIPOL monopolar CULEGEREA BIPOLAR Se obine utiliznd electrodul explorator (rou) i electrodul de referin (verde) plasai astfel: (a) pentru obinerea unui potenial bifazic cu prima faz pozitiv (Fig.4.A) i a doua negativ - verde la 1 cm, albastru la 3 cm, galben la 5,5 cm i rou la 9 cm; I faz: Vb = VR(+) - VV(-) Vb(+) faz pozitiv II faz: Vb = VR(-) - VV(+) Vb(-) faz negativ (b) pentru obinerea unui potenial bifazic cu prima faz negativ (Fig.4.B) i a doua pozitiv - verde la 1 cm, galben la 5,5 cm, albastru la 7 cm i rou la 9 cm. I faz: Vb = VR(-) - VV(+) Vb(-) faz negativ 4

Lucrri practice Fiziologie I II faz: Vb = VR(+) - VV(-) Vb(+) faz pozitiv

(A) potenial bifazic prima faz pozitiv

(B) potenial bifazic prima faz negativ

Fig.4. Potenialul neuronal obinut prin culegere bipolar

3.3. LEGILE CONDUCERII PRIN FIBRA NERVOAS OBIECTIV - se evideniaz dou din legile conducerii prin fibra nervoas, i anume conducerea bidirecional i integritatea fibrei nervoase. TEM DE LUCRU reproducei schematic poziiile electrozilor pe suprafaa nervului i a celor dou ligaturi i copiai n caiete graficele obinute nainte i dup aplicarea fiecrei ligaturi; explicai modificrile de aspect grafic al potenialelor n urma aplicrii ligaturilor. TEHNIC se activeaz tasta Clear Screen; se utilizeaz stimuli cu durata de 2 ms i intensitatea de 200 mV (secvena 2); se plaseaz electrozii - verde la 1 cm, albastru la 3 cm, galben la 5,5 cm i rou la 9 cm i se obine un potenial bifazic cu prima faz pozitiv i a doua negativ; pentru aplicarea ligaturilor se execut click pe mosorul de a i innd apsat butonul din stnga al mouse-ului se fixeaz firul de a pe nerv, n locul de aplicare a ligaturii; se efectueaz prima ligatur n poziia 7 cm (ntre electrodul albastru i cel rou) potenialul devine monofazic pozitiv; se deplaseaz ligatura n poziia 2 cm (ntre electrodul albastru i cel verde) potenialul devine monofazic negativ; se aplic dou ligaturi simultan n cele dou poziii menionate. 3.4. PERIOADA REFRACTAR I PERIOADA EXCITABIL NEURONAL OBIECTIV - evidenierea excitabilitii periodice a nervului care determin ca rspunsul la excitaie s depind de faza potenialului de aciune n momentul aplicrii stimulului (Fig.4): un stimul care cade n perioada refractar absolut (PRA) nu determin nici un rspuns; un stimul care cade n perioada refractar relativ (PRR) determin un rspuns cu amplitudine redus; 5

Lucrri practice Fiziologie I un stimul care cade n perioada cu excitabilitate normal (PE) determin un rspuns cu amplitudine maxim.

Fig.4. Rspunsul nervului la dubla stimulare, n funcie de intervalul ntre stimuli i fazele potenialului neuronal.

TEM DE LUCRU reproducei n caiete graficele obinute prin stimulare dubl i notai durata intervalului de stimulare corespunztoare. stabilii corelaia ntre intervalul de stimulare i perioadele de excitabilitate ale nervului. TEHNIC se ndeprteaz ligaturile, se activeaz Clear Screen i tasta Store; se plaseaz electrozii - verde la 1 cm, albastru la 3 cm, galben i rou la 5,5 cm; se activeaz tasta Twin/Mode i se crete progresiv intervalul de stimulare, deplasnd cursorul Delay cu 1 msec/determinare; se urmrete momentul apariiei i amplitudinea rspunsului la cel de-al doilea stimul; stimularea se oprete cnd cei doi excitani determin rspunsuri cu aceeai amplitudine. TESTE (CU UN SINGUR RSPUNS CORECT) 1. SimNerv este un program de simulare a experimentelor privind: A. Nervul senzitiv periferic B. Nervul motor periferic C. Muchiul striat scheletal D. Nici un rspuns nu este correct 2. Aspectul grafic al potenialelor neuronale depinde de: A. Etalonarea nregistrrii B. Poziia electrozilor C. Tipul de culegere utilizat D. Toate rspunsurile sunt corecte 3. Pentru o durat de stimulare dat, creterea progresiv a amplitudinii de stimulare permite studiul: A. Potenialului de repaus al nervului B. Legilor conducerii prin fibrele nervoase C. Fenomenului de recrutare a fibrelor nervoase D. Nici un rspuns nu este corect 6

Lucrri practice Fiziologie I 4. Pentru obinerea unui potenial monofazic sunt necesare: A. O culegere monopolar B. O culegere bipolar C. Un electrod explorator i unul de referin D. Un electrod indiferent 5. Pentru obinerea unui potenial monofazic negativ se plaseaz: A. Electrodul explorator la un capt al nervului B. Electrodul indiferent pe suprafaa de pmntare C. Electrodul indiferent la un capt al nervului D. Rspunsurile A i B sunt corecte 6. Pentru obinerea unui potenial bifazic sunt necesare: A. Un electrod explorator B. Un electrod de referin C. Un electrod explorator i unul de referin D. Un electrod indiferent i unul de referin 7. Un potenial neuronal este bifazic dac: A. Culegerea este bipolar B. Culegerea este monopolar C. Ambele rspunsuri sunt corecte D. Nici un rspuns nu este corect 8. Un potenial neuronal este bifazic, cu prima faz negativ dac: A. Culegerea este unipolar B. Electrodul explorator i cel indiferent sunt plasai la capetele nervului C. Electrodul explorator i cel de referin sunt plasai la capetele nervului D. Toate rspunsurile sunt corecte 9. Perioada refractar absolut reprezint perioada n care un stimul: A. Nu determin nici un rspuns B. Determin un rspuns cu amplitudine maxim C. Determin un rspuns cu amplitudine redus D. Nici un rspuns nu este corect 10. Legile conducerii prin fibra nervoas demonstrate prin experimental SimNerv sunt: A. Conducerea bidirecional B. Integritatea fibrei nervoase C. Ambele rspunsuri sunt corecte D. Nici un rspuns nu este corect

Rspunsuri: 1-B, 2-D, 3-C, 4-A, 5-D, 6-C, 7-A, 8-C, 9-A, 10-C