Lucrri practice Fiziologie I

EXPLORAREA SERIEI LEUCOCITARE

1. NUMRTOAREA LEUCOCITELOR
Mduva hematogen este considerat actualmente ca fiind unul dintre cele mai mari organe ale corpului uman adult, dimensiunile sale fiind comparate cu cele ale ficatului. n mod normal, 75% dintre celulele hematopoietice aparin seriei mieloide, iar 25% aparin seriei eritrocitare. Mduva hematogen conine: celule stem pluripotente sunt celule de origine ale tuturor liniilor sanguine ; au capacitate de autoregenerare i difereniere. celule progenitoare hematopoietice, angajate, care vor da natere diferitelor tipuri de celule sangvine : celule progenitoare mieloide, din care deriv eritrocitele, o parte din leucocite (granulocitele neutrofile, eozinofile, bazofile i monocitele) i trombocitele . celule progenitoare limfoide, din care rezult limfocitele B i T. Celulele adulte aparinnd seriei leucocitare vor aciona mpreun n vederea aprrii organismului mpotriva agresiunii infecioase (virale, bacteriene sau parazitare). SERIA LEUCOCITAR este format din 3 linii celulare: 1. SERIA GRANULOCITAR cuprinde elemente polinucleare cu granulaii neutrofile, acidofile i bazofile sub form de: granulocit nesegmentat (granulocitul tnr) are nucleul n form de potcoav; granulocit segmentat (granulocitul adult) are nucleul segmentat. Cu ct celula este mai matur, cu att are mai multe segmente. n funcie de tipul granulaiilor prezente n citoplasm sunt difereniate mai multe tipuri de granulocite: a). Granulocitul segmentat neutrofil are citoplasma slab acidofil (roz-palid), cu granulaii neutrofile specifice, mici, punctiforme i numeroase; nucleul este segmentat n 2-5 lobi legai ntre ei prin puni fine de cromatin. Are urmtoarele roluri: n microfagocitoz - reprezint funcia principal n aprarea organismului contra infeciilor (reprezint prima linie de aprare prin nglobarea i distrugerea de particule din mediul extracelular). rol secretor pentru: transcobalamina-I (1-globulina care transport vitamina B12), interleukine (IL1 cu rol n inducerea febrei), prostaglandine. b). Granulocitul segmentat eozinofil - are n citoplasm granule mari, egale, eozinofile (portocalii) iar nucleul su prezint 2 segmente. Are urmtoarele roluri: n fagocitoz: factorii care determin chemotaxia eozinofilului sunt: complexele imune antigen-anticorp (dein rolul major n reaciile imune), fibrina, enzime proteolitice, histamina. Eozinofilele pot fagocita i bacterii sau fungi, dar sunt mai puin atrase de acestea dect neutrofilele. n aprarea antiparazitar: chiar dac nu poate fagocita paraziii, eozinofilul se ataeaz de acetia i elibereaz la exterior granulaii care conin o substan cu o puternic aciune citotoxic (PBM -proteina bazic major). n bolile alergice.

Lucrri practice Fiziologie I c). Granulocitul segmentat bazofil - conine granulaii caracteristice bazofile care ocup toat citoplasma, uneori suprapunndu-se peste nucleu; nucleul este incomplet segmentat. Are urmtoarele roluri: n fagocitoz, dar la o scar mai redus. n degranulare, cu eliberarea la exteriorul celulei a numeroi mediatori, fenomen cu importan n patogenia i diagnosticul unor afeciuni alergice dar avnd i rol chemotactic pentru neutrofile i eozinofile. 2. SERIA LIMFOCITAR. Dup mrime limfocitele pot fi: mici, medii i mari in funcie de gradul de maturare i reprezint componenta celular major din esuturile limfatice. Forma limfocitelor este rotund sau uor ovalar, cu diametrul de 612 m. Nucleul este mare i ocup cea mai mare parte a celulei fiind intens colorat. Citoplasma este slab bazofil (albastru-deschis). Limfocitele au urmtoarele roluri: n rspunsul imun, declanat de ptrunderea n organism a unor celule strine sau a unor macromolecule proteice. Acest rspuns este caracterizat prin producia de anticorpi de ctre limfocitele B (imunitate umoral) i de produi celulari citotoxici eliberai de ctre limfocitele T (imunitate celular) . 3. SERIA MONOCITAR. Monocitele sunt cele mai mari celule din seria leucocitar, cu un diametru cuprins ntre 10 - 25 m i sunt specializate n aprarea organismului. Nucleul este nesegmentat, reniform i nu prezint nucleoli. Citoplasma este abundent i intens bazofil (albastru nchis). Seria monocitar include: - precursorii din mduva hematogen - monocitele din snge - macrofagele din esuturi Monocitele ndeplinesc urmtoarele roluri: n macrofagocitoza particulelor coloidale, a celulelor degenerate; n rspunsul imun ca i celule accesorii (prezentatoare de antigen).

Fig.2. Snge periferic normal. Frotiu colorat MGG. 1. granulocit neutrofil segmentat; 2. granulocit eozinofil; 3. granulocit bazofil;

Lucrri practice Fiziologie I 4. limfocit; 5. monocot PRINCIPIU Metoda manual: numrtoarea direct la microscop a leucocitelor dintr-un volum cunoscut de snge, diluat ntr-o proporie cunoscut. Celulele se numr n dispozitive speciale numite hemacitometre (camere de numrat). Metoda automat ( metod de impedan electric): o suspensie de leucocite dintr-un volum cunoscut de snge, trec printr-un orificiu. Un curent electric constant este aplicat ntre electrozii de platin aflai de-o parte i de alta a orificiului. Deoarece fiecare celul este nonconductoare ea va produce la trecerea prin orificiu o modificare brusc de tensiune = un puls. Aceste pulsuri vor fi numrate electronic. VALOAREA NORMAL valoare medie a numrului de leucocite: 4000-10000/ mm3 la adult: 5000 9000 leucocite/mm3 la copil (pn la 18 ani): 4500 13000 leucocite/mm3 VARIAII FIZIOLOGICE numrul de leucocite crete (leucocitoz) la sugari, n sarcin, dup un efort fizic, n perioadele postprandiale, la altitudine, stres emoional etc.; numrul de leucocite scade (leucopenie) la vrstnici, n somn, la surmenaii fizic; VARIAII PATOLOGICE numrul de leucocite crete (leucocitoz) n boli infecioase, leucemii, alergii, etc. numrul de leucocite scade (leucopenie) n distrugeri ale mduvei hematoformatoare dup tratament cu radiaii ionizante, medicamente citostatice, etc.

2. FORMULA LEUCOCITAR
DEFINIIE Formula leucocitar reprezint distribuia procentual a diferitelor tipuri de leucocite pe un frotiu de snge periferic. Formula leucocitar se determin prin metode clasice sau metode automate. PRINCIPIU Metoda manual: se numr la microscopul optic, folosind obiectivul cu imersie, 200 de leucocite de pe un frotiu din sngele periferic colorat May-Grnwald-Giemsa (MGG) pe care se pune o pictur de ulei de cedru. Se identific tipurile de leucocite pe baza criteriilor morfologice (aspectul nucleului, granulaii citoplasmatice) i se determin raportul procentual ntre acestea. Metoda automat: se izoleaz i se efectueaz automat raportul procentual dintre tipurile de leucocite din sngele periferic, n funcie de volum, prezena granulaiilor citoplasmatice i complexitatea segmentrii nucleului, cu obinerea histogramelor . FORMULA LEUCOCITAR NORMAL Leucocite Adult Copil Neutrofile 56-68% 25-40% Eozinofile 1-3% 1-4% Bazofile 0-1% 0-1% Limfocite 20-40% 50-70% Monocite 4-10% 4-8%

Lucrri practice Fiziologie I

OBSERVAII valorile normale pot prezenta variaii de la un laborator la altul n funcie de metodele i reactivii folosii; la copiii mici, n formula leucocitar predomin limfocitele fa de neutrofilele segmentate. Procentele se egaleaz n jurul vrstei de 5-6 ani, apoi se inverseaz, ajungnd treptat la valorile adultului. VARIAIILE FORMULEI LEUCOCITARE Neutrofilia reprezint creterea numrului de neutrofile peste valoarea normal. Prezena elementelor neutrofile tinere n sngele periferic este dovada unei activiti medulare intense sau a citolizei accentuate. Neutrofilia poate fi: fiziologic: n cursul unor eforturi fizice mari, graviditate, stres; patologic: n infecii acute, intoxicaii endogene (uremie) i exogene, leucemia mieloid cronic, aciunea agenilor fizici (traumatisme, arsuri). Neutropenia reprezint scderea numrului neutrofilelor sub limita normal. Apare dup aciunea unor medicamente (citostatice, tranchilizante, antiinflamatoare, antibiotice), Eozinofilia reprezint creterea numrului de eozinofile; se ntlnete n alergii, parazitoze, afeciuni dermatologice. Eozinopenia reprezint scderea numrului de eozinofile; se ntlnete n stri de hiperactivitate adrenocorticoid. Bazofilia reprezint creterea numrului de granulocite bazofile. Apare n bolile contagioase, leucemia mieloid cronic. Limfocitoza reprezint creterea numrului de limfocite. Limfocitoza poate fi: fiziologic: la copii; patologic: n afeciuni virale acute, mononucleoza infecioas, TBC, leucemia limfatic cronic. Limfopenie reprezint scderea numrului de limfocite. Apare n limfopoieza insuficient, infecii virale, SIDA etc. Monocitoza reprezint creterea numrului de monocite. Apare n mononucleoza infecioas, infecii bacteriene (endocardit, TBC), afeciuni virale (hepatit, grip, rujeol), convalescena infeciilor bacteriene i virale. 3. INVESTIGAREA FUNCIONAL A GRANULOCITELOR Principala funcie a granulocitelor este fagocitoza, precedat de diapedez (trecerea granulocitelor din snge n esuturi prin peretele vascular), care este declanat de numeroi factori chemotactici pozitivi (atrag leucocitele spre focarul inflamator, leziuni tisulare). n practica medical se poate testa, in vitro, funcia fagocitar a granulocitelor prin: indicele fagocitar al particulelor de latex, testul NBT. 1. INDICELE FAGOCITAR AL PARTICOLELOR DE LATEX reprezint proporia la % din granulocitele neutrofile care au nglobat particule de latex. Valori normale: 50% - 55%. 2. TESTUL NBT (NITROBLUETETRAZOLIUM). Nitrobluetetrazolium (NBT) este un colorant galben, care este nglobat i redus de neutrofilele normale la nitroformazan. NBT este un acceptor de electroni i se reduce, iar

Lucrri practice Fiziologie I donorul de electroni este NADPH2 format prin activarea metabolismului leucocitar, n timpul fagocitozei. Testul NBT este un test "in vitro" de utilitate clinic, prin care se evalueaz metabolismul oxidativ al granulocitelor, producerea de radicali liberi ai oxigenului, care asigur funcia bactericid a fagocitelor. Se determin proporia la % a celulelor NBT pozitive, adic a granulocitelor care au nglobat i redus NBT la nitroformazan, precipitat albastru nchis, vizibil n granulocite, colorate cu Giemsa. Valori normale: 1 - 14%. Importana testului NBT n patologia uman Testul NBT este folosit pentru diagnosticul disfunciilor neutrofilului, mai ales ale metabolismului oxidativ, situaii n care reducerea colorantului NBT este insuficient. Creterea testului NBT: n infecii bacteriene (inclusiv tuberculoza miliar, meningita tuberculoas), infecii parazitare, gravide, la pacienii cu arsuri (semnific apariia unei stri septice), etc. Test NBT sczut sau normal, n prezena unei infecii bacteriene: n terapia cu antibiotice (eficacitatea tratamentului este indicat de scderea testului NBT fa de valorile anterioare, uneori n mai puin de 6 ore), infecii localizate, administrarea de corticosteroizi i medicamente imunosupresive, boala granulomatoas cronic, deficiena de mieloperoxidaz sau glucozo 6-fosfat dehidrogenaza a neutrofilului, lupus eritematos sistemic, agamaglobulinemie congenital sau ctigat. Observaie: metabolismul chemiluminiscen. oxidativ leucocitar se poate investiga si prin

BULETINE DE INTERPRETARE S se interpreteze urmtoarele leucograme: 1. M.G. ; sex femin, 30 ani sarcina luna a IV-a 2. P.B. ; sex masculin, 3 ani Nr. Leucocite = 11.000/mm3 Nr. Leucocite = 21.000/mm3 Neutrofile = 77% Neutrofile = 83% Eozinofile = 1% Eozinofile = 4% Bazofile = 0% Bazofile = 1% Limfocite = 28% Limfocite = 55% Monocite = 5% Monocite = 9% 3. S.C. ; sex masculin, 22 ani Nr. Leucocite = 10.000/mm3 Neutrofile = 58% Eozinofile = 12% Bazofile = 0% Limfocite = 25% Monocite = 5% 5. R.P.; sex feminin, 22 ani Nr. Leucocite = 11.000/mm3 Neutrofile = 52% Eozinofile = 1% Bazofile = 6% Limfocite = 35% Monocite = 6% 4. A.M. ; sex masculin, 27 ani Nr. Leucocite = 12.000/mm3 Neutrofile = 76% Eozinofile = 4% Bazofile = 0% Limfocite = 27% Monocite = 12% 6. B.C.; sex feminin, 2 ani Nr. Leucocite = 12.000/mm3 Neutrofile = 25% Eozinofile = 14% Bazofile = 1% Limfocite = 52% Monocite = 8%

Lucrri practice Fiziologie I

TESTE (CU UN SINGUR RSPUNS CORECT) 1. Valoarea normal a leucocitelor n sngele periferic al adultului este: A. <10.000/mm3 B. 150.000 300.000/mm3 C. 5000 9000/mm3 D. 25% 2. Care dintre urmtoarele afirmaii sunt adevrate: A. Creterea numrului de leucocite se numete leucocitoz B. Leucopenia poate fi fiziologic la surmenaii fizic i n somn C. Leucocitoza semnific scderea numrului de leucocite n sngele periferic D. Leucocitoza apare la vrstnici n mod fiziologic 3. Leucocitoza fiziologic este ntlnit: A. La sugari B. n somn C. La vrstnici D. Dup efort fizic 4. Formula leucocitar normal la copil (5 6 ani) prezint: A. Neutrofilie B. Limfocitoz C. Monocitoz D. Limfopenie 5. Granulocitul neutrofil segmentat: A. Are nucleu segmentat datorita condensrii cromatinei nucleare B. Reprezint granulocitul adult C. Aparine seriei linfocitare D. Aparine seriei granulocitare 6. Caracteristic monocitului este : A. Are nucleu reniform B. Nucleul e segmentat n 2-5 lobi cu citoplasm abundent, intens bazofil C. Are rol n microfagocitoza particulelor coloidale D. Are rol n rspunsul imun ca i celul accesorie (prezentatoare de antigen) 7. Care din afirmaiile de mai jos sunt adevrate: A. Eozinofilele intervin n fagocitoza fungilor, bacteriilor, complexelor antigen-anticorp B. Monocitele intervin n procesele inflamatorii (capacitate de aprare mai redus) C. Limfocitele secret IL-1 (substana pirogen) i enzime lizozomale

Lucrri practice Fiziologie I D. Neutrofilele segmentate intervin n apararea antimicrobiana prin microfagocitoz 8. Alegei rspunsul corect: A. Eritrocitele deriv din celule progenitoare mieloide B. Eritrocitele deriv din celule progenitoare limfoide C. O parte din leucocite deriv din celule progenitoare mieloide, la fel ca i trombocitele D. Eozinofilele, bazofilele si monocitele provin din celule progenitoare mieloide 9.Despre formula leucocitar este corect urmtoarea afirmaie : A. Se poate citi de pe curbe de distribuie a leucocitelor B. Se interpreteaz cu ajutorul histogramelor C. Valoarea neutrofilelor n formula leucocitar la adult este 25-40 % D. Valoarea eozinofilelor n formula leucocitar la adult este mai mare dect la copil 10. Alegei rspunsul corect: A. Lecopenia indic o stare de adaptare a organismului la rarefierea aerului ntlnit la marile altitudini B. Monocitoza apare tipic n parazitozele intestinale ale copilului C. Leucocitoza se ntlnete n distrugeri ale mduvei hematoformatoare dup tratament cu radiaii ionizante, medicamente citostatice etc. D. Bazofilia se ntlnete n bolile contagioase,leucemia mieloid cronic Rspunsuri : 1-C, 2-B, 3-A, 4-B, 5-D, 6-D, 7-D, 8-C, 9-B, 10-D