1

Universitatea de Medicin i Farmacie

Carol Davila,, Bucureti
Facultatea de Farmacie



LUCRARE DE LICEN

Controlul calitii produsului farmaceutic
Movalis 15 mg/1,5 mL soluie injectabil



Coordonatori tiinifici:
Asist. Univ. Drd. Adina Cimpoieu
Conf. Dr. Maria Brc
Absolvent
Anca-Ioana Lpdat






- 2014 -


2
Cuprins

Introducere...............................................................................................................................4
I. Parte general......................................................................................................................6
I.1. Meloxicam proprieti fizico-chimice i farmacologice................................................6
I.1.1. Proprieti fizico-chimice....................................................................................6
I.1.2. Proprieti farmacologice....................................................................................6
I.1.2.1. Proprieti farmacocinetice..............................................................................6
I.1.2.2. Proprieti farmacodinamice............................................................................8
I.1.2.3. Proprieti farmacotoxicologice ......................................................................9
I.1.3. Prevederile Farmacopeei Britanice 2009 privind meloxicamul.........................12
I.1.4. Prevederile Farmacopeei Americane privind meloxicamul...............................16
I.2. Stadiul actual al cunoaterii privind analiza cantitativ a meloxicamului...................23
A. Metode spectrofotometrice.....................................................................................23
B. Metode HPLC.........................................................................................................27
C. Alte metode.............................................................................................................30
I.3. Metode spectrofotometrice UV-VIS n controlul medicamentului ............................32
I.3.1. Aspecte generale................................................................................................32
I.3.2. Aparatura............................................................................................................34
I.3.3. Aplicaii ale spectrofotometriei UV-VIS n controlul medicamentului.............36
I.4. Soluii injectabile - prevederi monografii FR X, Farmacopeea European 0520.........41
I.4.1. Farmacopeea Romn ediia X..........................................................................41
I.4.2. Farmacopeea European ediia 6.......................................................................44

II. Parte experimental............................................................................................................49
II.1. Soluii injectabile cu meloxicam nregistrate pe piaa farmaceutic internaional..49
II.2. Controlul calitii produsului farmaceutic Movalis 15 mg/1,5 mL soluie
injectabil.........................................................................................................................49
II.2.1. Determinarea aspectului soluiei injectabile de Movalis..................................50
II.2.2. Determinarea culorii soluiei injectabile de Movalis........................................51
II.2.3. Determinarea uniformitii volumului fiolelor cu soluie injectabil
de Movalis...................................................................................................................52


3
II.2.4. Identificarea meloxicamului din soluia injectabil de Movalis
15 mg/1,5 mL...............................................................................................................54
II.2.4.1. Identificarea meloxicamului prin spectrofotometrie n UV...............54
II.2.4.2. Identificarea meloxicamului prin reacia de culoare cu FeCl
3
........58
II.2.5. Verificarea influenei excipienilor asupra dozrii meloxicamului din
soluia injectabil de Movalis utiliznd metoda HPLC...............................................59
II.2.6. Dozarea meloxicamului din soluia injectabil de Movalis 15 mg/1,5 mL
prin spectrofotometrie n UV......................................................................................74
II.2.6.1. Determinarea linearitii i stabilirea domeniului de linearitate........74
II.2.6.2. Determinarea cantitativ a meloxicamului din soluia injectabil
de Movalis prin metoda spectrofotometric elaborat...................................77
II.2.6.3. Verificarea repetabilitii metodei elaborate......................................79
II.2.6.4. Determinarea stabilitii soluiilor obinute din meloxicam
substan de referin i respectiv din Movalis soluie injectabil..................81

Concluzii.................................................................................................................................90
Bibliografie.............................................................................................................................92


4
Introducere

Antiinflamatoarele reprezint una dintre cele mai frecvent utilizate clase de
medicamente. Studii statistice au artat c 15% din populaie folosete regulat
antiinflamatoare nesteroidiene. Prescrierile anuale de AINS sunt la valori nalte: 70 milioane
n SUA, 20 milioane n Anglia sau 10 milioane n Canada.
Utilizarea cronic a AINS crete de pn la 10 ori rata de apariie a complicaiilor,
spitalizrilor i deceselor datorate bolii ulceroase. n SUA peste 100.000 de pacieni sunt
spitalizai anual pentru complicaii digestive datorate utilizrii AINS, iar rata anual a
deceselor prin complicaii gastrointestinale este de peste 15.000.
Mecanismul de aciune principal al antiinflamatoarelor nesteroidiene este reprezentat
de blocarea ciclooxigenazei (COX), cu inhibarea sintezei de mediatori proinflamatori
(leucotriene, tromboxani, prostaglandine). Descoperirea ciclooxigenazei 2 (COX2) n 1991,
a contribuit la nelegerea i aprofundarea mecanismelor de aciune a antiinflamatoarelor
nesteroidiene. COX2 mediaz secreia de prostaglandin, spre deosebire de COX1, care
apare n secreia fiziologic iar inhibiia acestuia din urm este responsabil de efectele
adverse cum ar fi iritaia gastric i efectul toxic renal. La ora actual se caut
antiinflamatoare care s acioneze cu predilecie asupra COX2.
Meloxicamul este un antiinflamator nesteroidian de generaia a II-a care inhib selectiv
COX2. Este o enolcarboxamid din clasa oxicamilor cu proprieti antiinflamatoare,
analgezice, antipiretice i uricozurice.
S-a observat tendina de a evita administrarea antiinflamatoarelor pe cale oral datorit
efectelor adverse multiple i nlocuirea acestei ci pe ct posibil cu o alt cale de
administrare. De cele mai multe ori, de exemplu, pentru tratarea afeciunilor reumatismale
severe se prefer administrarea injectabil, astfel medicamentul este complet absorbit.
Biodisponibilitatea relativ a meloxicamului dup administrare intramuscular comparativ
cu administrarea pe cale oral este de aproximativ 100%. Meloxicamul injectabil se folosete
n tratamentul simptomatic iniial i de scurt durat al poliartritei reumatoide exacerbate
acut i spondilit anchilozant atunci cnd tratamentul nu poate fi administrat pe cale oral
sau rectal.
n lucrarea de fa ne-am propus controlul calitii produsului farmaceutic Movalis 15
mg/1,5 mL soluie injectabil, plecnd de la prevederile monografiei Iniectabilia din FR X.
Partea teoretic a lucrrii cuprinde date din literatura de specialitate cu privire la
proprietile fizico-chimice i farmacologice ale meloxicamului, stadiul actual al cunoaterii


5
privind analiza cantitativ a meloxicamului, dar i prevederile prevzute n Farmacopeea
Romn ediia a X-a i cea European ediia 6 privind preparatele injectabile.
Avnd n vedere faptul c meloxicamul n form injectabil nu are monografie, n
partea experimental am folosit datele din literatura de specialitate pentru elaborarea unor
metode noi de analiz care pot fi utilizate cu rezultate bune la determinarea calitativ i
cantitativ a substanei active analizate. Am efectuat urmtorii parametrii de control:
determinarea aspectului soluiei injectabile, determinarea uniformitii volumului fiolelor
soluiei injectabile de Movalis, identificarea i dozarea meloxicamului din soluia injectabil
prin spectrofotometrie n UV i verificarea influenei excipienilor din soluia injectabil
asupra dozrii meloxicamului folosind metoda HPLC.



6
I. Parte general
I.1. Meloxicam proprieti fizico-chimice i farmacologice
I.1.1. Proprieti fizico-chimice
Meloxicamul, un derivat de oxicam, este un AINS
cu grupare acid enolic. Denumirea chimic a
meloxicamului este 4-hidroxi-2-metil-N-(5-metil-2-
tiazolil)-2H-1,2-benzotiazin-3-carboxamid-1,1-dioxid.
Are masa molecular 351,4.
Formula sa empiric este C
14
H
13
N
3
O
4
S
2
.
Din punct de vedere al proprietilor fizice,
meloxicamul are structur cristalin, de culoare galben
deschis, practic insolubil n ap, cu o solubilitate crescut n acizi i baze puternice. Este
foarte puin solubil n metanol. Meloxicamul are un coeficient de partiie aparent (log P)
app
=
0.1 n n-octanol/tampon pH 7.4. Valorile pKa ale meloxicamului sunt 1.1 i 4.2
[http://www.rxlist.com/mobic-drug.htm].
Soluia injectabil este o soluie limpede, de culoare galben cu tent verde, fr
particule strine [RCP].
Soluiile stoc la -20C sunt stabile pentru cel puin 30 de zile. Aplicarea congelrii si
decongelrii nu pare s afecteze probele [Zang H, Choi HK 2008].
Probele de plasm nu au fost afectate de 3 cicluri de congelare-decongelare i au fost
stabile pentru cel puin 1 lun prin depozitare la -70C; decongelarea probelor i meninerea
lor la temperatura camerei timp de 6 ore nu a avut nici un efect [Bae JW et al. 2007].
Solubilitatea sczut a meloxicamului la pH acid poate sugera existena unor efecte
secundare gastrice mult diminuate in comparaie cu alte AINS. La pH-uri sczute,
meloxicamul este mult mai lipofilic decat AINS cele mai apropiate ca structur: piroxicamul
i tenoxicamul [Luger P. et al. 1996].

I.1.2. Proprieti farmacologice
I.1.2.1. Proprieti farmacocinetice
Absorbie
Dup administrare intramuscular, meloxicamul este complet absorbit.
Biodisponibilitatea relativ comparativ cu administrarea pe cale oral este de aproximativ
Figura 1. Structura chimic a
meloxicamului


7
100%. Nu este necesar ajustarea dozei la trecerea de la administrarea intramuscular la
administrarea oral. Absorbia dup administrare p.o. este puin influenat de alimente.
Dup injectarea intramuscular a unei doze de 15 mg meloxicam, concentraia plasmatic
maxim de aproximativ 1,6- 1,8 g/ml se atinge n 1 6 ore.

Distribuie
Meloxicamul este legat n proporie foarte mare de proteinele plasmatice, n special de
albumin (99%)(cu preferin n sange, ficat, rinichi). Acest procent mare de legare duce la
restricionarea volumului de distribuie. Meloxicamul trece n lichidul sinovial atingnd
concentraii cu valori de aproximativ jumtate din cele plasmatice. Volumul de distribuie
este mic, de exemplu aproximativ 11 L dup administrare i.m sau i.v. i arat o variaie
interindividual cuprins ntre 7 20%. Volumul de distribuie dup administrarea de doze
multiple de meloxicam administrate oral (7,5 mg i 15 mg) este de aproximativ 16 L, cu
coeficienii de variaie variind ntre 11-32% [RCP].
n literatur s-a observat o concentraie mai mare a meloxicamului n esutul inflamat
dect n zonele neafectate de inflamaie [Muller M. et al. 1997].

Biotransformare
Meloxicamul sufer biotransformare hepatic marcat. n urin au fost identificai
patru metabolii diferii, care sunt toi inactivi din punct de vedere farmacodinamic.
Principalul metabolit, 5-carboximeloxicam (60% din doz), se formeaz prin oxidarea
unui metabolit intermediar 5-hidroximetilmeloxicam, care este excretat, de asemenea, ntr-o
proporie mai mic (9% din doz). Studiile in vitro arat c CYP 2C9 joac un rol important
n aceast cale metabolic, cu o contribuie minor din partea izoenzimei CYP 3A4.
Activitatea peroxidazic a pacientului este probabil responsabil pentru ali doi metabolii,
care reprezint 16%, respectiv 4 % din doza administrat. [RCP]
Meloxicamul este metabolizat prin reacii din faza I, fr a fi detectai metabolii
conjugai ai acestuia [Hui X. et al. 2001].

Eliminare
Meloxicamul este excretat predominant sub form de metabolii care se elimin n
proporii egale prin urin i materiile fecale. Mai puin de 5% din doza zilnic se elimin
nemodificat prin materiile fecale, n timp ce prin urin se excret numai urme ale
compusului iniial.


8
Media timpului de njumtire plasmatic prin eliminare variaz ntre 13 i 25 ore
dup administrare oral, i.m. i i.v.
Valorile medii ale clearance-ului plasmatic total sunt ntre 7 - 12 mL/min, dup
administrarea oral, intravenoas sau rectal a unei doze unice.

Liniaritate/non-liniaritate
Dup administrare oral sau intramuscular, s-a dovedit c meloxicamul are proprieti
farmacocinetice liniare la doze terapeutice cuprinse ntre 7,5 mg pn la 15 mg [RCP].
Afeciunile care nsoesc procesul inflamator pot influena farmacocinetica
meloxicamului n oricare dintre etape n sensul grbirii sau ncetinirii proceselor, cu apariia
efectelor adverse sau toxice ori a pierderii efectului terapeutic [Turck D. et al. 1995; Schmid
J.et al. 1994].

I.1.2.2. Proprieti farmacodinamice

Meloxicamul este un medicament antiinflamator nesteroidian (AINS) din familia
oxicamilor cu proprieti antiinflamatoare, analgezice i antipiretice. Meloxicamul a
demonstrat o important activitate antiinflamatoare n toate modelele standard de inflamaie
[RCP].
Ca i n cazul altor AINS, mecanismul de aciune principal este reprezentat de blocarea
ciclooxigenazei (COX), cu inhibarea sintezei de mediatori proinflamatori (leucotrieneLT,
tromboxanTX, prostaglandinePG). Formarea mediatorilor proinflamatori pornete de la
hidrolizarea glicerofosfolipidelor membranare, sub aciunea fosfolipazei A2 PLA2 (dar i a
fosfolipazei C), care duce la formarea de acid arahidonic. Acidul arahidonic este ulterior
metabolizat pe dou ci: cea a ciclooxigenazei (COX) i cea a lipooxigenazei (LOX). COX
catalizeaz ciclizarea oxidativ a acidului arahidonic, cu formarea de precursori ai
prostaglandinelor i tromboxanilor. Aciunea LOX asupra acidului arahidonic determin
formarea de hidroperoxizi, din care se vor sintetiza ulterior leucotriene. Toi aceti mediatori
proinflamatori PG, LT, TX sunt grupai sub denumirea de eicosanoide.
Prin blocarea COX, AINS blocheaz formarea de PG, ceea ce explic efectul lor
antiinflamator, analgezic i antipiretic (inflamaia, durerea i febra fiind mediate de PG la
nivelul esuturilor inflamatorii, nocireceptorilor i respectiv hipotalamusului).
Majoritatea AINS sunt inhibitori neselectivi ai COX, ceea ce reprezint un dezavantaj
deoarece inhibarea COX-1 duce la apariia de efecte adverse. Meloxicamul este un inhibitor


9
puin selectiv COX-2 care prezint mai puine reacii adverse digestive, dar nu are efecte
antiagregante plachetare [http://www.mymed.ro/antiinflamatoarele-nesteroidiene-ains.html].


Indicaii terapeutice: n tratamentul simptomatic iniial i de scurt durat al poliartritei
reumatoide exacerbate acut, i spondilit anchilozant atunci cnd tratamentul nu poate fi
administrat pe cale oral sau rectal. [RCP]
Artroza (osteoartrit).

I.1.2.3. Proprieti farmacotoxicologice
Ca reacii adverse prezint la nivel:
SNC: ameeli, letargie, tremor, cefalee, nervozitate, stare de ru, oboseal, insomnie,
depresie, convulsii.
Cardio-vascular: hipertensiune, angin, insuficien cardiac, infarct de miocard,
hipotensiune, palpitaii, aritmii, tahicardie.
ORL: tinitus, pierderea auzului.
Gastro-intestinal: pancreatit, grea i vrsturi, colit, boal de reflux gastro-esofagian,
diaree, constipaie, dispepsie, crampe, xerostomie, rar poate produce ulceraii, perforaii
gastrointestinale, hemoragii.
Genito-urinar: nefrotoxicitate - disurie, hematurie, oligurie, azotemie.
Hematologice: discrazii sanguine, efect protrombotic, anemie, hemoragii prelungite.
Dermatologice: rash, urticarie, fotosensibilitate, eritem polimorf.
Sistemice: angioedeme, anafilaxie, creterea transaminazelor.

Tabelul I. Reacii adverse ale sol.inj. de Movalis n funcie de frecvena apariiei

Frecvena
apariiei
Reacii adverse
Tulburri
hematologice si
limfatice

Mai puin
frecvente
anemie
Rare
modificri ale numrului celulelor sanguine
(incluznd modificri ale formulei leucocitare),
leucopenie, trombocitopenie
Foarte rare agranulocitoz
Tulburri ale
sistemului imunitar
Mai puin
frecvente
reacii alergice, altele dect reaciile anafilactice
sau anfilactoide


10
Cu frecventa
necunoscut
oc anafilactic, reacii anafilactice, reacii
anafilactoide
Tulburri psihice

Rare tulburri ale dispoziiei, comaruri
Cu frecven
necunoscut
stare confuzional, dezorientare
Tulburri ale
sistemului nervos
Frecvente cefalee
Mai puin
frecvente
ameeli, somnolen
Tulburri oculare Rare
conjunctivite, tulburri de vedere, incluznd
vedere nceoat
Tulburri acustice i
vestibulare
Mai puin
frecvente
vertij
Rare tinitus
Tulburri cardiace
Rare palpitaii
A fost raportat insuficien cardiac, asociat tratamentului cu
AINS.
Tulburri vasculare
Mai puin
frecvente
hipertensiunea arterial,
eritem tranzitor al feei
Tulburri respiratorii,
toracice i mediastinale
Rare
declanarea de crize de astm bronic la persoane
cu alergie la aspirin sau la alte AINS.
Tulburri gastro-
intestinale
Frecvente
dispepsie, grea, vrsturi, dureri abdominale,,
diaree
Mai puin
frecvente
hemoragie gastro-intestinal ocult sau
manifest, stomatit, gastrit, constipaie,
flatulen, eructaii
Rare colit,ulcer gastroduodenal, esofagit
Foarte rare perforaii gastro-intestinale
Ulcerele, perforaiile sau hemoragiile gastro-intestinale pot fi
uneori grave i au potenial letal mai ales la pacienii vrstnici
Tulburri
hepatobiliare
Mai puin
frecvente
modificri ale parametrilor funciei hepatice
(cum sunt creterea valorilor serice ale
transaminazelor sau ale bilirubinei)
Foarte rare hepatita
Afeciunii cutanate i
ale esutului
subcutanat
Mai puin
frecvente
angioedem, prurit, erupii cutanate
Rare
Stevens-Johnson, necroliz epidermic toxic,
urticarie
Foarte rare dermatit de tip bulos, eritem multimorf
Cu frecven
necunoscut
reacii de fotosensibilizare
Tulburri renale i ale
cilor urinare

Mai puin
frecvente
retenie de sodiu i de ap, hiperkaliemie,
modificri ale parametrilor funciei renale
(creteri ale creatininemiei i/sau ale
concentraiei serice ale ureei)
Foarte rare
insuficiena renal acut n special la pacienii
care prezint factori de risc
Tulburri generale i la
nivelul locului de
administrare
Frecvente
induraie la locul injectrii, durere la locul
injectrii
Mai puin
frecvente
edeme, inclusiv edeme ale membrelor inferioare


11
Contraindicaii:
Acest medicament este contraindicat n urmtoarele situaii :
- sarcin n trimestrele II i III (poate provoca nchiderea prematur a canalului arterial),
alptare;
- copii i adolesceni cu vrsta sub 18 ani;
- hipersensibilitate la meloxicam sau la oricare dintre excipieni sau hipersensibilitate la
substane cu activitate similar, de exemplu AINS, aspirin. Meloxicamul nu trebuie
administrat pacienilor cu astm bronic, polipi nazali, edem angioneurotic sau urticarie ca
urmare a administrrii de acid acetilsalicilic sau alte AINS.
- hemoragie gastro-intestinal manifest sau perforaie, datorit unui tratament anterior cu
AINS;
- ulcer gastro-duodenal activ sau recent/perforat (evidenierea sau diagnosticarea a dou sau
mai multe episoade distincte de ulceraie sau hemoragie);
- insuficien hepatic sever;
- insuficien renal sever la pacieni netratai prin dializ;
- hemoragie gastro-intestinal manifest, sngerri recente cerebrovasculare sau evidenierea
unor tulburri hemoragice sistemice;
- insuficien cardiac sever
- tulburri ale hemostazei sau tratament concomitent cu anticoagulante (contraindicaie
legat de calea de administrare) [RCP].

Precauii: sarcin, copii, afeciuni hemoragice, afeciuni gastro-intestinale, afeciuni
hemoragice, hipersensibilitate la ali ageni antiinflamatori, vrstnici, C
CR
< 25 mL-min.
Interaciuni: meloxicamul crete concentraia litiului i crete aciunea aminoglicozidelor,
hidantoinelor, diureticelor, anticoagulantelor orale. Scade efectul inhibitor al
antihipertensivelor inhibitoare ale enzimei de conversie a angiotensinei i scade aciunea
beta-blocantelor. Colestiramina crete elimiarea meloxicamului. Cresc aciunea
meloxicamului: fenitoina, sulfonamide, salicilai. La asociere cu cilclosporina prezint
nefrotoxicitate.
Farmacografie: Administrare lent, intramuscular profund. O doz de 15 mg injectat o
dat pe zi. (Nu trebuie depit doza de 15 mg pe zi).
Mod de prezentare: Soluie injectabil 15 mg/1,5 mL, cutii cu 5 sau 10 fiole. [Cristea A.N.,
2012; Dobrescu D. et al, 2013; Negru M. et al, 2013]


12
I.1.3. Prevederile Farmacopeei Britanice privind meloxicamul din tablete
Structur
C
14
H
13
N
3
O
4
S
2

Aciune si utilizri
Inhibitor de ciclooxigenaz, analgezic, antinflamator.
Preparare
Meloxicam tablete
Definiie
Meloxicam este 4-hidroxi-2-metil-N-(5-metil-1,3tiazol-2-il)-2H-1,2-benzotiazin-3-
carboxamid-1,1-dioxid.
Conine mai mult de 99,0% i mai puin de 100,5% din C
14
H
13
N
3
O
4
S
2
, calculat prin
raportare la substana uscat.
Caracteristici
Este o pulbere de culoare galben pal. Practic insolubil n ap, puin solubil n
aceton, solubil n dimetilformamid, foarte puin solubil n etanol (96%) i n metanol.

IDENTIFICARE
A. Spectrul de absorbie n infrarou (Anexa II A) trebuie s corespund cu spectrul de
referin al meloxicamului (RS 374).
B. Absorbia luminii (Anexa II B) n intervalul 240 nm - 450 nm a unei soluii 0,0015%
m/v n metanol indic un maxim de absorbie la 354 nm. Absorbana la lungimea de
und 354 nm este aproximativ 0,8.

DETERMINRI
Claritatea soluiei
O soluie 5% m/v n dimetilformamid trebuie sa fie limpede, Anexa IV A.
Substane nrudite
Se aplic metoda cromatografiei de lichide, Anexa III D, folosind urmatoarele
soluii:
(1) Se prepar o soluie 0,4% m/v din substanele de determinat n amestec cu 50 volume
de metanol (40 %) i 3 volume de hidroxid de sodiu 0,4 M i se dilueaz o parte din
aceast soluie cu un volum egal de metanol (40%).


13
(2) Se dilueaz 1 volum de soluie (1) la 100 de volume de metanol (40%) i apoi se
dilueaz 1 volum din aceast soluie la 10 volume cu metanol (40%).
(3) n acelai mod cu soluia (1) se prepar o soluie folosind standardul de impuriti al
meloxicamului BPCRS n locul substanei de determinat.

CONDIII CROMATOGRAFICE
a) Se folosete o coloana cromatografica de inox (15cm x 4,6mm) cu octadecilsilil
silicagel pentru cromatografie (5m) (InertsilODS2 este potrivit).
b) Se folosete un gradient de eluie liniar i faza mobil descris mai jos.
c) Se folosete un debit de eluie de 1 mL pe minut.
d) Se folosete o temperatur a coloanei de 45C.
e) Se folosete lungimea de und de detecie 260 i 350mn.
f) Se injecteaz 10 L din fiecare soluie.
g) Pentru soluia (1) se las cromatograful s funcioneze timp de 20 de minute sau pn
ce impurittile Chas au eluat.

FAZA MOBIL
Faza mobil A: o soluie 0,1% m/v de dihidrogen ortofosfat de potasiu adus la pH 6,0 cu
soluie diluat de hidroxid de sodiu.
Faza mobil B: metanol.
Tabelul II. Compoziia fazei mobile n funcie de timp
Timp (minute) Faza mobil A (% v/v) Faza mobil B (% v/v)
0 60 40
2,5 60 40
12 30 70

VALIDITATEA SISTEMULUI
Determinarea nu este valid dect dac, la fiecare lungime de und, cromatograma
obinut cu soluia (3) este similar cromatogramei corespondent dat de standardul pentru
impuriti al meloxicamului BPCRS.

LIMITE
n cromatograma obinut cu soluia (1) la 350 nm:
- aria oricror picururi ce corespund impuritaii A i impuritii C s nu fie mai mare dect
jumatate din aria picului din cromatograma obinut cu soluia (2) la 350 nm (0,1 % din


14
impuritatea A, lund n considerare factorul de corecie de 2,0 i 0,05% pentru
impuritatea C)
n cromatograma obinut cu soluia (1) la 260 nm:
- aria oricrui pic ce corespunde impuritaii B s nu fie mai mare dect aria picului din
cromatograma obinut cu soluia (2) la 350 nm (0,1 %)
n ambele cromatograme obinute cu soluia (1) la 350 nm i la 260 nm:
- aria oricror alte picuri secundare s nu fie mai mare dect aria picului din
cromatograma obinut din soluia (2) la 350 nm (0,1 %)
Se calculeaz procentajul coninut de impuritile A i C la 350 nm, procentajul coninut de
impuritatea B la 260 nm i procentajul obinut de oricare alte picuri secundare la lungimea
de und cu un rspuns mai nalt. Coninutul total al oricror astfel de impuriti nu trebuie s
fie mai mare de 0,3 %.

Metale grele
2,0 g corespund cu testul limit C pentru metale grele, Anexa VII (10 ppm).
Standardul se prepar folosind 2 mL din soluia standard principal (10 ppm Pb).
Pierdere prin uscare
Prin uscare la mas constant la 105 C nu trebuie s se piard mai mult de 0,5% din
greutate. Se folosesc 3 g.
Cenua sulfatat
Nu trebuie s fie mai mare de 0,1 %, Anexa IX A. Se folosete 1 g.

DOZARE
Se dizolv 0,25 g ntr-un amestec de 50 mL acid acetic anhidru i 5 mL acid formic
anhidru i se utilizeaz metoda titrarii n mediu anhidru, Anexa VIII A, determinand punctul
de echivalen potentiometric. Fiecare mL de acid percloric VS 0,1 M este echivalent cu
35,14 mg de C
14
H
13
N
3
O
4
S
2 .


15
IMPURITI
A. 4-hidroxi-2-metil-2-H-1,2 benzotiazin-1,1-dioxid 3-carboxilat de etil

B. 5-metil-2-amino-1,3-tiazol

C. N-[(2Z)-3,5-dimetil-1,3-tiazol-2(3H)-iliden]-4-hidroxi-2-metil-2H-1,2-benzotiazin-3-
carboxamid-1,1-dioxid

D. N-[(2Z)-3-etil-5-metil-1,3-tiazol-2(3H)-iliden]-4-hidroxi-2-metil-2H-1,2-benzotiazin-3-
carboxamid-1,1doixid

E. 4-hidroxi-2-metil-2H-1,2-benzotiazin-3-carboxilat de metil-1,1-dioxid

[British Pharmacopoeia, 2009]


16
I.1.4. Prevederile Farmacopeei Americane privind meloxicamul
USP- buletin revizuit
Oficial , 1 martie 2012

C
14
H
13
N
3
O
4
S
2

Masa molecular: 351,40
4-hidroxi-2-metil-N-(5-metil-2-tiazolil)-2H-1,2-
benzotiazin-3-carboxamid-1,1-dioxid [71125-38-7].

DEFINIIE
Meloxicamul conine 99,0% NLT i 100,5% NMT din meloxicam (C
14
H
13
N
3
O
4
S
2
), calculat
cu raportare la substana uscat.

IDENTIFICARE
A. Absorbie n infrarou <197K>
B. Absorbie n ultraviolet <197U>
Lungimea de und: 240-450 nm
Soluia de prob: 10 g/mL n metanol

DOZARE
Mod de lucru:
Solutia A: amestec de soluie de acetat de amoniu 0,1% (m/v) ajustat cu soluie de
amoniac 10% la pH 9,1.
Faza mobil: metanol i Soluia A (21:29)
Solvent: metanol i hidroxid de sodiu 1 N (250:1)
Soluie pentru validarea sistemului: cte 0,08 mg/mL pentru fiecare dintre
Meloxicam USP RS si USP Compusul nrudit cu Meloxicamul A RS. Se prepar prin
dizolvarea in 50% din volumul balonului cotat cu Solvent i diluarea cu ap la volum.
Soluie standard: 0,2 mg/mL din Meloxicam USP RS. Se prepar prin dizolvarea n
50% din volumul balonului cotat cu Solvent i se dilueaz cu ap la volum.
Solutie de prob: 0,2 mg/mL din Meloxicam. Se prepar prin dizolvarea n 50% din
volumul balonului cotat cu Solvent i se dilueaz cu ap la volum.




17
Sistemul cromatografic
(vezi Cromatografie <621>, Validarea sistemuli)
Metod: Cromatografie de lichide
Detector: UV 360 nm
Coloan: 4,6 mm x 15 cm;
Temperatura coloanei: 45
o
C
Debit de eluie: 1mL/min
Volumul de injecie: 10 L

Validarea sistemului
Proba: Soluie de validare a sistemului
[Not: timpii de retenie relativi pentru Compusul nrudit cu meloxicamul A i pentru
meloxicam sunt 0,7 si respectiv 1,0]
Condiii de validare
Rezoluia: NLT 3,0 ntre compusul nrudit cu meloxicamul A i meloxicam
Factor de retenie: NMT 2,0 pentru picul meloxicamului.
Deviaia standard relativ: NMT 2,0 %.

Analiza
Probe: Soluie standard i Soluie de prob
Se calculeaz procentajul meloxicamului (C
14
H
13
N
3
O
4
S
2
) din poriunea de Meloxicam
analizat:
Rezultat = (r
U
/r
S
) x (C
S
/C
U
) x 100
r
U
= rspunsul picului pentru meloxicam din Soluia de prob
r
S
= rspunsul picului pentru meloxicam din Soluia standard
C
S
= concentraia Meloxicamului USP RS din Soluia standard (mg/mL)
C
U
= concentraia Soluiei de prob (mg/mL)
Criteriu de acceptare: 99,0 % - 100,5 % din substana uscat

IMPURITI
REZIDUU LA CALCINARE <281>: NMT 0,1 %
METALE GRELE, Metoda II <231>: NMT 10 ppm
IMPURITI ORGANICE, PROCEDEUL 1


18
Utilizai Procedeul 1 sau Procedeul 2, n funcie de procesul de fabircaie folosit.
Solutia A: soluie de fosfat monobazic de potasiu 0,1 % (m/v) adus la pH 6,0 cu
hidroxid de sodiu 1N
Solutia B: Metanol
Solvent: Metanol i hidroxid de sodiu 1N (50:3)
Faza mobil: vezi tabelul III
Tabelul III. Compoziia fazei mobile n funcie de timp
Timp (min) Soluie A (%) Soluie B (%)
0 60 40
2 60 40
10 30 70
15 30 70
15,1 60 40
18 60 40

Soluia de validare a sistemului: cte 0,08 mg/mL din Meloxicam USP RS, Compusul
nrudit cu meloxicamul A USP i Compusul nrudit cu meloxicamul B USP RS.
Se prepar prin dizolvarea in 10% din volumul balonului cotat cu Solvent si se
dilueaz cu ap la volum.
Soluie stoc standard: 0,6 mg/mL din Meloxicam USP RS.
Se prepar prin dizolvarea n 0,25% din volumul balonului cotat cu Solvent i se
dilueaz cu metanol la volum.
Soluie standard: 0,012 mg/mL din Meloxicam USP RS n metanol din Soluia
standard stoc.
Soluie prob: 4 mg/mL din Meloxicam. Se prepar prin dizolvarea n 25% din
volumul balonului cotat cu Solvent si se dilueaz cu metanol la volum.

Sistemul cromatografic:
Metod: Cromatografie de lichide
Detector: UV la 260 si 350 nm (lungime de und variabil sau detector cu ir de
diode)
Coloana: 4,6 mm x 15 cm; 5 m
Temperatura coloanei: 45
o
C
Debit de eluie: 1mL / min
Volumul de injectie: 5 l


19
Validarea sistemului
Probe: Solutie de validare a sistemului si Solutie standard
[Nota: timpii relativi de retenie sunt prezentai in tabelul 2]

Condiii de validare
Rezolutie: NLT 3,0 intre Compusul nrudit cu meloxicamul A si meloxicam la 350
nm; NLT 3,0 intre Compusul nrudit cu meloxicamul B si meloxicam la 260 nm,
Solutie de validare a sistemului
Deviatia standard relativ: NMT 10%, Solutie standard

Analiza
Probe: Solutie standard si Solutie proba
Se calculeaz procentajul fiecarei impuritati in portiunea de Meloxicam analizat:
Rezultat = (r
U
/r
S
) x (C
S
/C
U
) x (1/F) x 100
r
U
= raspunsul picului pentru fiecare impuritate din Solutia proba
r
S
= raspunsul picului pentru meloxicam la 250 nm din Solutia standard
C
S
= concentratia Meloxicamului USP RS din Solutia standard (mg/mL)
C
U
= concentratia Solutiei de proba (mg/mL)
F = factorul relativ de rspuns (vezi tabelul 2)
Criteriu de acceptare: vezi tabelul IV.

Tabelul IV.
Substana
Timp de
retenie
relativ
Lungimea de
und (nm)
Factor de
rspuns
relativ
Criteriu de
acceptare, NMT
(%)
Compus nrudit cu
meloxicamul B
a

0,4 260 1,0 0,1
Meloxicam 1,0 260/350 - -
Compus nrudit cu
meloxicamul A
b

1,4 350 0,5 0,1
Metil-meloxicam
c
1,7 350 1,0 0,05
Etil-meloxicam
d
1,9 350 1,0 0,05
Impuritate individual
necunoscut
- 260/350 1,0 0,1
Totalul impuritilor - - - 0,3

a
2-amino-5-metil-tiazol

b
4-hidroxi-2-metil-2H-1,2-benzotiazin-3-carboxilat de etil-1,1-dioxid.



20
c
N-[3,5-dimetil-tiazol-2(3H)-iliden]-4-hidroxi-2-metil-2H-benzo[e][1,2]tiazin-3-
carboxamid -1,1-dioxid

d
N-[3-etil-5-metil-tiazol-2(3H)-iliden]-4-hidroxi-2-metil-2H-benzo[e][1,2]tiazin-3-
carboxamid-1,1doixid

IMPURITI ORGANICE, PROCEDEUL 2
Dac un produs corespunde cu acest test, etichetarea arat c ndeplinete condiiile de la
Impuriti organice, Procedeul 2.

Soluia A i soluia B: se procedeaz ca n indicaiile de la Procedeul 1.
Faza mobil: vezi tabelul V.
Tabelul V. Compoziia fazei mobile n funcie de timp
Timp (min) Soluia A (%) Soluia B (%)
0 45 55
25 45 55
30 30 70
40 30 70
45 45 55
50 45 55

Solventul B: metanol i ap (2:3)
Solventul A: Solventul B i hidroxid de sodiu 0,4 N (50:3)
Soluie standard A stoc: 50 g/mL din Meloxicam USP RS n Solventul A. Se dilueaz 2 mL
din aceast soluie cu Solventul B la 10 mL.
Soluie standard B stoc: se transfer cte 5 mg din Compusul nrudit cu meloxicamul B USP
RS i Compusul nrudit cu meloxicamul C USP RS ntr-un balon cotat de 100 mL. Se adaug
6 mL hidroxid de sodiu 0,4 N i se centrifugheaz n baia cu ultrasunete timp de 2 minute. Se
adaug 40 mL de metanol la soluia rezultat, se centrifugheaz n baia cu ultrasunete timp
de 2 minute i se dilueaz cu ap la volum.
Soluie standard: se transfer cte 1 mL din Soluia stoc standard A i Soluia stoc standard
B ntr-un balon cotat de 10 mL, se dilueaz cu Solventul B la volum i se amestec.
Soluie prob: se dizolv 20 mg Meloxicam n 10 mL de Solvent A i se dilueaz cu Solvent
B la 20 mL.




21
Sistemul cromatografic
(vezi Cromatografie <621>, Validarea sistemului.)
Metod: cromatografie de lichide
Detector: UV cu lungime de unda variabil la 260 nm i 350 nm sau detector cu ir de
diode
Coloana: 4,6 mm x 25 cm; 5 m
Temperatura coloanei: 45
o
C
Debit de eluie: 1mL/min
Volumul de injectie: 20 L

Validarea sistemului
Prob: Soluie standard
[Not: timpii de retenie relativi sunt prezentai n tabelul VI]

Condiii de validare
Deviatia standard relativ: NMT 5,0% pentru Compusul nrudit cu meloxicamul C la 350
nm i NMT 5,0% pentru Compusul nrudit cu meloxicamul B la 260 nm.

Analiza
Probe: Soluie standard si Soluie prob
Se calculeaz procentajul fiecarei impuritati in portiunea de Meloxicam analizat:
Rezultat = (r
U
/r
S
) x (C
S
/C
U
) x 100
r
U
= raspunsul picului pentru fiecare impuritate din Soluia prob
r
S
= raspunsul picului pentru Compusul nrudit cu meloxicamul corespunztor din Soluia
standard
C
S
= concentratia Compusul nrudit cu meloxicamul USP RS corespunztor din Soluia
standard (mg/mL). [Not: folosii concentraia Meloxicamului USP RS pentru
impuritile necunoscute.]
C
U
= concentratia Soluiei de prob (mg/mL)
Criteriu de acceptare: vezi tabelul VI.


22
Tabelul VI.
Substan
Timp de retenie
relativ
Lungimea de und
(nm)
Criteriu de
acceptare, NMT
(%)
Meloxicam 1,0 260/350 -
Compus nrudit cu
meloxicamul B
a

0,8 260 0,1
Compus nrudit cu
meloxicamul C
b

3,2 350 0,1
Impuritate individual
necunoscut
- 260/350 0,1
Toate impuritile - - 0,3
a
2-amino-5-metil-tiazol

b
Izopropil-4-hidroxi-2-metil-2H-1,2-benzotiazin-3-carboxilat-1,1-dioxid.

TESTE SPECIFICE
PIERDERE PRIN USCARE <731>
Analiz: se usuc o prob la 105C timp de 4 ore.
Criteriu de acceptare: NMT 0,5%
CONDIII SUPLIMENTARE
STANDARDE DE REFERINE USP <11>
Meloxicam USP RS
Compus nrudit cu Meloxicamul A USP RS
4-hidroxi-2-metil-2H-1,2-benzotiazin-3- carboxilat de etil-1,1-dioxid.
Compus nrudit cu Meloxicamul B USP RS
2-amino-5-metil-tiazol.
Compus nrudit cu Meloxicamul C USP RS
Izopropil-4-hidroxi-2-metil-2H-1,2-benzotiazin-3-carboxilat-1,1-dioxid.
[United States Pharmacopoeia, 2012]



23
I.2. Stadiul actual al cunoaterii privind analiza cantitativ a
meloxicamului

A. Metode spectrofotometrice
1. Dozarea spectrofotometric a meloxicamului din produse farmaceutice utiliznd
procedeul n flux continuu pe o serie de probe
Metodele se bazeaz pe formarea unui complex [2MX/Fe(III)] de culoare verde ntre
meloxicam (MX) si Fe(III), n mediu metanolic. Graficele de calibrare rezultate din
msurarea absorbanei la lungimea de und 570 nm sunt liniare pe domeniul 2,0-200 i 5,0-
250 mg/L, cu limita de detecie 0,47 mg/L, respectiv 0,72 mg/L. De asemenea, este
prezentat o metod spectrofotometric cu flux de injecie care presupune msurarea
absorbanei medicamentului n prezena NaOH 0,1 M la 362 nm. Curba de calibrare este
liniar pe domeniul 0,5-20 mg/L, avnd o limit de detecie de 0,04 mg/L. Metodele se
aplic analizei de rutin a meloxicamului din forme farmaceutice. [Garc

a M.S. et al, 2000]

2. Dozarea spectrofotometric i fluorimetric a meloxicamului din forme dozate prin
formarea complexului cu safranina T
Metodele se bazeaz pe msurarea spectrelor de difereniere la lungimea de und 339,9-
384,7 nm (A) i pe formarea unui complex ntre meloxicam i safranina T cu msurarea
absobanei la 518 nm (C) i msurarea fluorescenei la 582 nm (D). Pentru a optimiza
formarea complexului au fost studiate toate variabilele. Legea Beer a fost respectat pe
domeniul de concentraie 2-10 g ml
1
(metoda A), 1-10 g ml
1
(metoda B), 4,0-12 g
ml
1
(metoda C) i 0,4-1,2 g ml
1
(metoda D). Limitele de detecie au fost 0,11; 0,07; 0,10;
0,33 i 8,74 10
3
g ml
1
pentru metodele A,B,C, respectiv D. Metodele propuse au fost
aplicate cu succes n dozarea meloxicamului din tablete i supozitoare.[Ekram M.H., 2002]

3. Dozarea spectrofotometric a meloxicamului dup reacia cu FeCl
3
(metoda A) i
reactivul Folin Cioclteu (metoda B)
Meloxicamul formeaz cu clorura feric i cu fericianura de potasiu un complex stabil
de culoare verde, prezentnd un maxim de absorbie la lungimea de und 770 nm (metoda


24
A), liniaritatea fiind verificat pe domeniul de concentraie 0,25-2,5 g mL
1
.Metoda B se
bazeaz pe formarea unui complex colorat n albastru la tratarea meloxicamului cu reactivul
Folin Cioclteu, prezentnd un maxim de absorbie la 740 nm. Complexul ce are n structur
gruparea cromofor, repect legea lui Beer n domeniul de concentraie 5-15 g ml
1
. [Reddy
M.N. et al, 2001]

4. Validarea unei metode spectrofotometrice n UV a meloxicamului din tablete
Pentru analiza meloxicamului din tablete a fost dezvoltat o metod
spectrofotometric UV simpl, exact i sensibil. Determinrile s-au fcut n tampon borat
100mM (pH 8,5), iar absorbana s-a msurat la 363 nm. Metoda dezvoltat a fost validat,
respectnd stabilitatea, linearitatea, precizia, exactitatea, selectivitatea, sensibitatea i
robusteea. Metoda a fost aplicat pentru determinarea meloxicamului din ase preparate
farmaceutice, incluznd dou forme dozate. Datele obinute prin aceast metod au fost
comparate cu datele din literatur obinute prin electroforez capilar. S-a concluzionat c
metoda dezvoltat a fost adecvat controlului calitii meloxicamului din preparatele
farmaceutice. [Nemutlu E., Kir S.2004]

5. Dozarea spectrofotometric UV-VIS a meloxicamului ca atare i din forme
farmaceutice
S-au dezvoltat dou metode simple, precise, rapide i sensibile pentru dozarea
meloxicamului ca atare i din tablete prin spectroscopie n UV (metoda A), n vizibil
(metoda B). n metoda A meloxicamul a fost analizat la 269 nm folosind ca solvent NaOH
0,1 M. Liniaritatea a fost determinat n domeniul de concentraie 5-30 g/mL cu un
coeficient de corelaie de 0,9995. n metoda B s-a folosit ca solvent soluia de NaOH 0,1 M
i ca agent cromogenic clorura feric 5%, iar cromogenul rezultat colorat n verde a fost
msurat la lungimea de und 476 nm, avnd domeniul de liniaritate 50-250 g/mL i
coeficientul de corelaie 0,9986. [Dhandapani B.et al.,2010]

6. Dezvoltarea i validarea unei metode spectrofotometrice pentru determinarea
cantitativ a meloxicamului ca atare i din forme farmaceutice dozate
Pentru determinarea cantitativ a meloxicamului ca atare i din forme farmaceutice
dozate au fost dezvoltate i validate dou metode UV simple, precise i economice.


25
Meloxicamul prezint un maxim de absorbie la 360 nm (Metoda A) i respectiv la 338 nm
(Metoda B). Legea Beer a fost respectat pe domeniul de concentraie 5-25 g/mL pentru
ambele metode. Metoda dezvoltat a fost validat innd cont de prevederile ICH
(International Conference on Harmonization), dovedindu-se a fi exact i precis. [Ananth V.
et al, 2011]

7. Dozarea spectrofotometric indirect a meloxicamului, tenoxicamului i
piroxicamului n forme farmaceutice
A fost propus o metod spectrofotometric indirect simpl i sensibil pentru
analiza meloxicamului (MX), tenoxicamului (TX) i piroxicamului (PX) n stare pur i din
preparate farmaceutice prin analiza cu flux de injecie. Metoda se bazeaz pe reacia de
oxidare a acestor medicamente cu un exces cunoscut de N-bromsuccinimid n mediu acid,
urmat de reacia cu acidul cloranilic. Valorile absorbanelor cresc liniar cu creterea
concentraiei medicamentelor. Sistemul a respectat legea Beer pe domeniul de concentraie
10-160, 20-200 i 10-160 g/mL pentru MX, TX i respectiv PX. Excipienii i aditivii nu au
interferat cu determinrile. Metoda a fost aplicat cu succes pentru dozarea MX, TX i PX n
diverse forme farmaceutice. Rezultatele obinute prin metoda propus au fost n concordan
cu cele gsite n metodele HPLC oficiale. [Al-Momani I.F., 2006]

8. Dozarea spectrofotometric a meloxicamului dup complexarea acestuia cu Al
3+

Meloxicamul este un antiinflamator nesteroidian care are ca mecanism de aciune
inhibiia selectiv a ciclooxigenazei-2. Meloxicamul are proprieti antiinflamatoare,
analgezice i antipiretice. Pentru determinarea cantitativ, a fost dezvoltat o metod
spectrofotometric prin cuplarea meloxicamului cu Al
3+
pentru a forma un compus colorat
stabil care prezint un maxim de absorbie la lungimea de und 375 nm. Metoda a prezentat
o bun liniaritate pe domeniul de concentraie 5-30 g/prob (coeficient de corelaie r =
0,9998). Limita de detecie (LD) a fost de 0,68 g/prob, iar limita de cuantificare (LQ) 2,25
g/prob. Au fost stabilite precizia sistemului (RSD =1,3794%), precizia metodei
(RSD=1,6045%) i exactitatea metodei (regsire medie 100,5% pe domeniul 97,7-102,7%).
[Mndrescu M. et al., 2009]




26
9. Dozarea spectrofluorimetric a meloxicamului i tenoxicamului n prezena
produilor lor de degradare
S-au dezvoltat, o metod spectrofotometric i una spectrofluorimetric pentru
determinarea meloxicamului (I) i tenoxicamului (II) n prezena produilor lor de
degradare: 5-metil-2-aminotiazol (III), acid benzotiazin carboxilic (IV) pentru meloxicam i
2-amino-piridin (V) i metil-4-hidroxi-2-metil-2H-tienol[2,3-e]-1,2-tiazin-3-carboxilat-1,1-
dioxid (VI) pentru tenoxicam. Ambele metode se bazeaz pe reacia de cuplare a acestor
medicamente cu clorhidratul de 3-metilbenzotiazolin hidrazona n prezena sulfatului de
amoniu ceric n mediu acid. Complecii rezultai sunt stabili i prezint un maxim de
absorbie la lungimea de und 450 nm pentru meloxicam i respectiv 465 nm pentru
tenoxicam. Metoda a fost aplicat pe domeniul de concentraie 2-20 g/mL. Metoda s-a
dovedit a fi indicatoare a stabilitii, deoarece nu s-au observat interacii cu produii de
degradare.
Pe aceelai principiu a fost dezvoltat o metoda fluorimetric pentru determinarea
meloxicamului i tenoxicamului n prezena produilor lor de degradare, intensitatea
fluorescenei fiind masurat la lungimea de und de 360 nm.
Aceasta metod a fost aplicat pe domeniul de concentraie 1-10 g/mL pentru
ambele medicamente, avnd acurateea medie de 99,880,49 i respectiv 99,901,02.
Metodele propuse au fost aplicate cu succes pentru dozarea celor doi oxicami, sub
forma de pulbere ca atare, din mixturi preparate n laborator coninnd procente diferite de
produi de degradare i din forme farmaceutice dozate. [Taha E.A. et al, 2002]

10. Determinarea spectrofotometric a meloxicamului i clorhidratului de tertacaina n
prezena produilor lor de degradare
Meloxicamul a fost determinat n prezena produilor si de degradare (5-metil-2-
aminotiazol)(III) i acid benzotiazin carboxilic (IV) prin dou metode. Aceste metode sunt
derivata spectrofotometric de ordinul nti la 338 nm i metoda densitometric TLC la 365
nm. Metodele au fost aplicabile pe domeniul de concentraie 5-20 g i 2-10 g, cu o
acuratee medie de 99,66 0,91% i respectiv 99,99 0,70%. [Bebawy L.I., 1998]





27
11. Determinarea spectrofotometric a meloxicamului ca atare i din formele sale
farmaceutice prin reacia cu nitroprusiatul de sodiu i 1,10-fenantrolina
Pentru determinarea cantitativ a meloxicamului ca atare i din formele sale
farmaceutice s-au dezvoltat dou metode spectrofotometrice simple i selective. Prima
metod se bazeaz pe reacia de transfer de electroni a meloxicamului cu nitroprusiatul de
sodiu n prezena tamponului amoniacal iar maximul de absorbie se nregistreaz la 363 nm
(Metoda A). A doua metod se bazeaz pe formarea unui complex cu clorura feric, urmat de
cuplarea cu 1,10-fenantrolina, iar maximul de absorbie se nregistreaz la 343 nm (Metoda
B). Ambele metode respect legea lui Beer pe domeniul de concentraie 4-20 g/mL pentru
Metoda A i respectiv 10-50 g/mL pentru Metoda B. Coeficienii de corelaie ntre
absorban i concentraiile corespunztoare de medicament au avut valori bune (0,9955-
0,9973). Deasememea au fost determinate limitele de detecie i de cuantificare pentru
ambele metode. S-a evaluat precizia n cadrul aceleiai zile i n zile diferite i acurateea
metodelor aplicate. [Gurupadayya B.M. et al.2013]

B. Metode HPLC
1. Dozarea meloxicamului din comprimate prin spectrofotometrie UV i cromatografie
de lichide de nalt performan
Pentru dozarea meloxicamului din comprimate s-au dezvoltat metode bazate pe
spectrofotometria UV i cromatografia de lichide de nalt performan (HPLC). Metoda
HPLC a folosit o coloan C18 cu faz invers, avnd ca eluent un amestec de acid
trietanolacetic 0,05 M, tetrabutilamoniu i acetonitril cu detecie n UV la 360 nm, folosind
ca standard intern isoxicamul. Metoda UV s-a bazat pe determinarea absorbanei unei soluii
acide de medicament la 341 nm. S-au comparat parametrii: liniaritate, sensibilitate, precizie
i acuratee. Ambele metode au fost simple i rapide. Metoda HPLC a fost mai precis i cu
acuratee mai mare, n timp ce metoda UV a fost mai rapid. [ Joseph-Charles J.,Bertucat M.,
1999]





28
2. Metod HPLC indicatoare a stabilitii pentru determinarea meloxicamului ca atare
i din forme dozate
Scop: Prezentul studiu a fost realizat pentru a dezvolta o metod HPLC cu faza invers
indicatoare a stabilitii pentru determinarea meloxicamului din substana ca atare i din
preparate comerciale care s fie validat, rapid, simpl i economic.
Mod de lucru: analiza cromatografic cu faz invers s-a realizat pe o coloana C18 Hi Q Sil
cu acetonitril - ap - acid acetic glacial [55:40:5 (v/v/v)], debit de 1 mL/min cu detecie la
lungimea de und 355 nm. S-au efectuat teste de validare a sistemului, eseniale pentru a
asigura desfurarea eficient a metodei. Medicamentul a fost supus unor studii de degradare
accelerat n condiii de aciditate, bazicitate sau oxidative. Metoda a fost validat pentru
acuratee, precizie, reproductibilitate, specificitate, robustee, limit de detecie i limit de
cuantificare, conform cu prevederile ICH (International Conference on Harmonization).
Rezultate: Pentru meloxicam s-a obinut un singur pic avnd timpul de retenie 6,8 0,01
min. Valorile regresiei polinomiale pentru graficele de calibrare au demonstrat liniaritate
bun (r= 0,9995) pe domeniul de concentraie 4-20 g/ mL, iar ecuaia regresiei liniare a fost
y= 57257,38 x +3443,07. Acurateea a fost cuprins ntre 99,27 i 100,78%. Meloxicamul a
prezentat un pic de degradare mic n condiii de aciditate, cu timpul de retenie 2,24 min.
Limita de detecie a fost 360 ng/mL i limita de cuantificare 510 ng/mL.
Concluzie: metoda propus a avut o rezoluie bun pentru meloxicam i produii si de
degradare. Testele de validare a sistemului i analizele statistice fcute demonstreaz c
metoda este precis, exact i reproductibil deci poate fi folosit la analiza de rutin a
meloxicamului ca atare i din preparate farmaceutice. [Farzana S.B., Pradeep R.V., 2009]


Tabelul VII. Date din literatura de specialitate privind diferite metode HPLC
Nr.
Crt
Metoda
de
analiz
utilizat
Tip de prob
utilizat
Tip de
coloan
Faza mobil/ rata
fluxului
Detector,
lungimea
de und
Avantajele
metodei
Obs./
Referine
1.
HPLC cu
faz
invers
Meloxicam ca
atare i din
preparate
farmaceutice
C18 Hi Q
Sil
Acetonitril: ap:
acid acetic glacial
[55:40:5] (%v/v/v)
1mL/min
355 nm
Metod
rapid, simpl,
economic,
precis, exact
i
reproductibil
[Farzana
S.B.,
Pradeep
R.V.,
2009]


29
2.
HPLC cu
faz
invers
Meloxicam ca
atare, din forme
farmaceutice
dozate i din
plasm uman
C18 Hi Q
Sil
Acetonitril: ap:
acid acetic glacial
1%
[56:34:10]
(% v/v/v)
1mL/min
Detector
UV
362 nm
Metod
simpl,
economic,
sensibil i
selectiv,
precis,
reproductibil
[Shaji J.,
Varkey D.,
2012]
3.
HPLC cu
faz
invers
Meloxicam ca
atare i din
preparate
farmaceutice
C18 Hi Q
Sil
Metanol: ap: acid
ortofosforic [80:
19,9: 0,1] (% v/v/v)

1mL/min
360 nm
Metod
precis,
exact i
reproductibil
[Shaji J. et
al., 2011]
4.
HPLC cu
faz
invers
Meloxicam ca
atare i din
preparate
farmaceutice
Develosil
ODS
HG-5 RP
C18,
(15cm
4.6 mm,
i.d. 5m)
acetonitril: tampon
fosfat (pH 3,4)
[60:40]

1 mL/min
268 nm
Metod
simpl,
specific,
rapid, sigur,
reproductibil
i economic
[Sahoo
N.K. et al.
2014]
5.
HPLC cu
faz
invers
Meloxicam din
plasm uman
C
18
cu
faz
invers
metanol: tampon
fosfat pH 3.2
[60:40]
v/v
346 nm
Metod
simpl, rapid,
specific i
sigur
[Abd
Elbary A.
et al.
2001]
6.
LC-
MS/MS
Meloxicam din
plasm uman
folosind
piroxicamul ca
standard intern
C18
hypersil
gold,
(10 cm x
4.6 mm
i.d,
5 m)
metanol: ap- Milli-
Q: acid formic
[70:30:1] v/v/v
-
Metod
simpl, rapid,
selectiv i
sensibil
[ Ganesh
M. et al.
2013]
7.
HPLC
metod
isocratic
Analiza simultan
a tenoxicamului,
piroxicamului,
meloxicamului,
lornoxicamului
din preparate
farmaceutice
folosind ca
standard intern
isoxicamul
Coloan
Lichrosp
here
RP18
tampon acid
trietanolacetic:
reactiv
tetrabutilamoniu:tet
rahidrofuran:
acetonitril
detector
UV
360 nm
Metod
simpl i
rapid,
sensibil,
precis i
reproductibil
[ Joseph-
Charles J.,
Bertucat
M., 1999]
8. HPLC
Meloxicam din
probe biologice
folosind
piroxicamul ca
standard intern
Lichrocar
t RP-18
(125
4mm)
Metanol: acetonitril:
sol apoas de
diammonium
hidrogenorto-fosfat
(50 mM)
(4:1:5)
1 mL/min
Detector
UV
364 nm
Metod
simpl i
precis
[Velpandi
an T. et al.
2000]



30

C. Alte metode
1. Analiza meloxicamului din tablete prin electoforez capilar zonal
Pentru analiza meloxicamului a fost dezvoltat i validat o metod de dozare prin
electroforez capilar zonal. Influena concentraiei soluiei tampon, pH-ul soluiei tampon,
metanolul ca solvent, temperatura capilarului, voltajul aplicat i timpul de injectare au fost
investigate sistematic ntr-o coloan capilar cu silicagel (diametrul intern 50 m, lungime
44 cm). Rezultate optime s-au obinut folosind tampon borat 100 mM (pH 8,5) ce conine
5% metanol, temperatura capilarului de 25C, voltajul aplicat 20 kV i timpul de injectare de
3 secunde cu injecie hidrodinamic. Lungimea de und de detecie a fost setat la 205 nm.
Ca standard intern s-a folosit diflunisalul. Metoda a prezentat o bun selectivitate, acuratee,
precizie, liniaritate i sensibilitate, lund n considerare evaluarea parametrilor de validare.
Metoda a fost aplicat pentru dozarea a ase preparate farmaceutice incluznd dou forme
dozate. Deviaia standard relativ pentru 7 determinri repetate pentru fiecare prob a fost
mai mic de 0,66%. Rezultatele au fost comparate cu o metod spectrofotometric prezentat
n literatura de specialitate i nu s-au constatat diferene semnificative din punct de vedere
statistic. [Nemutlu E. et al., 2003]

2. Metod turbidimetric pentru determinarea meloxicamului folosind acidul acidul
fosfomolibdenic
Pentru determinarea meloxicamului s-a dezvoltat o metod turbidimetric, bazat pe
reacia meloxicamului cu acidul fosfomolibdenic n mediu de acid clorhidric, cu un maxim
de absorbie la 342 nm. Au fost stabilite condiiile practice de lucru. Metoda dezvoltat a fost
validat. Metoda prezint o bun liniaritate pe domeniul de concentraie 1,0 - 2,6 g/mL
(coeficient de corelaie r = 0,9995). Limita de detecie (LD) este de 0,29 g/mL, iar limita de
cuantificare (LQ) este de 0,95 g/mL. S-a stabilit precizia (RSD =1,79%) i exactitatea
(regsire medie 100,89% pe domeniul 98,45-103,22%). [Murarau A.E. et al., 2010]






31
3. Evaluarea activitatii citotoxice si antiproliferative a complecilor Co(II), Ni(II),
Cu(II) i Zn(II) cu meloxicamul la nivelul celulelor tumorale transformate de ctre
virusuri
Scopul acestui studiu fost de a evalua efectele complecilor Co(II), Ni(II), Cu(II) i
Zn(II) cu meloxicamul asupra viabilitii i proliferrii celulelor tumorale de cultur
transformate de ctre virusuri. Urmatoarele linii celulare permanente au fost folosite ca
sisteme de referin n acest studiu: LSCC-SF-Mc29 (hepatom transplantat la gin indus de
ctre virusul mielocitomatos Mc29) i LSR-SF-SR (sarcom transplantat la oarece indus de
virusul Rousa sarcomatulpina Schmidt-Ruppin). Studiul a presupus evaluarea citotoxicitatii
induse pe linia celular testat. Compuii testai au fost folosii ntr-un domeniu de
concentraie de 20-100 g/mL pentru 48 i 72 de ore. Rezultatele arat c aceti compui
scad semnificativ viabilitatea i proliferarea celulelor tratate, dependent de timp i
concentraie. [Culita C.D. et al., 2012]

4. Oxidarea electrochimic a meloxicamului i determinarea acestuia din tablete
Reacia oxidativ voltametric a meloxicamului la electrodul past de carbon a fost
studiat n prezena soluiilor tampon Britton-Robinson n domeniul de pH 2,0-11,5.
Meloxicamul a prezentat dou picuri voltametrice ce corespund oxidrii funciei amidice i
respectiv funciei enolice. Procesul de oxidare s-a dovedit a fi dependent de pH-ul
electrolitului suport. Folosind voltametria liniar, medicamentul a avut un rspuns
voltametric bine definit n prezena soluiei tampon Britton-Robinson la pH 3,0. Acest proces
a putut fi folosit la determinarea concentraiei meloxicamului n domeniul 5,0 x 10
-7
5,0 x
10
-5
M cu o limit de detecie de 1,6 x 10
-7
M. Metoda a fost aplicat pentru determinarea
medicamentului din forme farmaceutice dozate, fr a interfera cu excipienii i a avut ca
rezultat o deviaie standard relativ acceptabil (RSD = 2,2%). [Radi A. et al. 2001]


32
I.3. Metode spectrofotometrice UV-VIS n controlul medicamentului
I.3.1. Aspecte generale
Spectrofotometria de absorbie n ultraviolet i vizibil este considerat ca una din
metodele clasice de analiz a medicamentelor, fiind o tehnic de analiz simpl, rapid i
relativ ieftin. Aceast metod are la baz absorbia radiaiilor luminoase din domeniul
ultraviolet i vizibil de ctre moleculele substanelor organice, absorbie care are ca rezultat
promovarea electronilor din orbitalii , sau n de la o stare inferioar de energie (de obicei
starea fundamental) la o stare excitat, mai bogat din punct de vedere energetic. Absorbia
luminii n UV-VIS are loc atunci cnd energia acesteia este suficient pentru a produce o
tranziie electronic care este asociat cu schimbri ale strii vibraionale i rotaionale ale
moleculei. Spectrele obinute prin absorbia acestor radiaii poart numele de spectre
electronice. n spectrofotometria de absorbie molecular se msoar absorbana unei probe
funcie de lungimea de und a radiaiei, cnd se obine un spectru care conine informaii
calitative i cantitative.
Din punct de vedere practic, semnificative pentru analiza structural organic sunt
domeniul ultraviolet cuprins ntre 180 i 400 nm i domeniul vizibil situat ntre 380 i 780
nm n care absorb substanele ce apar colorate ochiului uman.
Atunci cnd lumina strbate un strat de lungime l, ce conine o soluie de substan cu
concentraia c, intensitatea acesteia scade exponenial. (figura 2) [Boji M, 2004]

Figura 2. Atenuarea unui fascicul de radiaie I
0
de ctre o soluie absorbant


33
Cantitativ, absorbia luminii este dat de legea Beer-Lambert care spune c
absorbana unei soluii este direct proporional cu grosimea stratului absorbant (l) i cu
concentraia soluiei (c).
A= log (I
0
/I
t
) = = - log T
A = absorbana(extincie, densitate optic)
a = absorbtivitate sau coeficient de absorbie i este o constant pentru un sistem
substan-solvent
l = lungimea stratului absorbant (lungimea cuvei n care se afl soluia)
c = concentraia soluiei
I
0
= intensitatea radiaiei incidente
I
t
= intensitatea radiaiei transmise
T = transmitan = I
t
/I
0
= fraciunea fasciculului incident care nu este absorbit de
prob

Denumirea i valoarea lui a depind de unitatea de concentraie:
c = g/L A = a c l unde a = absorbtivitate i a = g
-1
cm
-1
L
c = mol/L A = cl unde = absorbtivitate molar (coeficient molar de absorbie)
i = mol
-1
cm
-1
L
n analiza farmaceutic, concentraiile i cantitile sunt de regul exprimate n g sau
mg i mai puin n moli i de accea pentru determinri cantitative se lucreaz cu absorbana
specific (A
1%
1cm
), care reprezint absorbana unei soluii cu concentraia de 1 g / 100 mL,
msurat n cuv de 1 cm.
Variaia liniar a absorbiei cu concentraia i cu grosimea stratului traversat explic
utilizarea legii Lambert-Beer n determinri cantitative.
Dac nu exist o dependen liniar ntre absorban i concentraie, condiiile de lucru
sau substana nu respect legea Lambert-Beer
La instituirea unei metode spectrofotometrice trebuie stabilit domeniul de concentraie
n care se respect legea Lambert-Beer (domeniul de liniaritate)

Condiii de aplicabilitate a legii Lambert-Beer:
lumina s fie monocromatic
concentraia substanei s fie mic (< 10
-2
moli/L)


34
temperatura soluiei s fie constant pe timpul determinrii
dac absorbana nu este constant n timp trebuie stabilit intervalul de timp n care
intensitatea coloraiei a atins valoarea maxim i ct timp se menine constant
(citirea fcndu-se n acest interval de timp)
Legea Lambert- Beer nu poate fi aplicat atunci cnd pH-ul soluiei infueneaz
foarte mult absorbia
Legea Lambert-Beer nu se aplic la substane fluorescente sau la suspensii. [Brc
M, 2010]

I.3.2. Aparatura
Spectrele de absorbie se obin cu ajutorul spectrofotometrelor. n figura.....este
prezentat schematic un spectrofotometru de absorbie cu monofascicul, format din patru
componente principale: surs, monocromator, celul n care se introduce proba i detector.

Figura 3. Schema unui spectrofotometru de absorbie

O surs ideal ar trebui s emit o radiaie continu cu intensitate uniform pe un
domeniu larg de lungimi de und.
Elementele de dispersie au rolul de a descompune radiaia n componentele sale i pot
fi prisme, reele de difracie sau interferometre. Un dispozitiv special situat naintea
detectorului, ntrerupe fascicolul luminos i permite detectorului s msoare diferena ntre
cele dou semnale. Exist aparate cu doi detectori care msoar electronic diferena.
Celula (cuva) de absorbie are ferestre ce permit transmiterea radiaiilor fr s se
absoarb nmic.


35
Detectorul trebuie s fie sensibil la radiaia care cade pe el i s fie capabil s prezinte
spectrul pe un display sau un nregistrator. Spectrul poate fi nregistrat ca absorban sau
transmitan procentual n funcie de frecven, numere de und sau lungime de und.
Pentru domeniile UV apropiat i VIS sursele sunt lampa cu filament de tungsten pentru
vizibil i lampa cu descrcare n deuteriu, cu nveli de cuar pentru ultravioletul apropiat. O
surs foarte intes pentru ambele regiuni este lampa cu arc n xenon la nalt presiune.
Lampa produce radiaii pn la valori mai mici de 200 nm. Ferestrele cuvelor pentru probe
sunt din sticl Pyrex pentru vizibil i din cuar topit pentru vizibil i ultraviolet apropiat.
Elementele de dispersie pot fi prisme (din sticl pentru vizivil i din cuar pentru ultraviolet)
sau reele de difracie. Detectorii sunt fotomultiplicatori n care fotonii care cad pe suprafaa
unui metal, cum este cesiu, duc la emisia de electroni (fotoelectroni). Aceti electroni sunt
accelerai sub tensiune i cad pe suprafaa unui alt electrod, de unde n urma ciocnirilor cu
schimb de energie se emit un numr mai mare de electroni secundari, procesul repetndu-se
astfel nct se obine pe anod (ultimul electrod) un curent mare. Se mai pot folosi plci
fotografice sau detectori formai din iruri (barete) de fotodiode, care prezint avantajul de a
putea detecta un domeniu larg de lungimi de und n acelai timp. [Boji M, 2004]
Instrumentele cu care se efectueaz analiza spectral n UV-VIS sunt de mai multe tipuri:
Colorimetrele sunt dispozitive simple, de regul doar pentru domeniul vizibil, care
utilizeaz o singur surs de lumin. Selecia lungimii de und se face de regul manual i
poate fi continu (caz n care colorimetrul este adaptat cu un monocromator i un
dispozitiv de tip micrometric pentru selecia lungimii de und) sau n trepte (situaie n
care selecia se face cu filtre de tip trece band). Cu un colorimetru se pot face doar
citiri la lungime de und fix.
Spectrofotometrele monofascicul permit nregistrarea spectrelor de absorbie pentru o
singur prob. Spectrul de referin se obine prin nlocuirea cuvei cu prob cu o alt
cuv, identic din punctul de vedere al caracteristicilor, n care se afl soluia de referin
i nregistrarea noului spectru. n final, se scade din spectrul probei spectrul de referin.
Spectrofotometrele dublu-fascicul lumina trece simultan sau alternativ prin prob i
referin, fiind nregistrat n absorban diferena dintre cele dou cuve. Aceste
spectrofotometre opereaz dup principiul zero electronic: semnalele care parvin la
detector (cu lumina provenind de la prob, respectiv referin), dup amplificare, sunt
separate i transmise unui sistem poteniometric, care nregistreaz raportul intensitilor


36
lor (ceea ce se traduce, dup logaritmare, n diferena celor dou semnale).
Spectrofotometrele moderne fac aceast conversie printr-un microprocesor adecvat
ncorporat. Spectrofotometrele dublu-fascicul sunt dispozitive cu scheme complexe, care
de regul permit realizarea de analize de mare acuratee.

Figura 4. Schema bloc a unui spectofotometru UV-VIS cu dublu fascicul
S=surs; M=monocromator; P=prob; B=blank; D=detector

Seria V-500 este o serie de spectrofotometre cu dublu fascicul destinate msurtorilor de
absorban n domeniul: 190-1100 nm (V-530); 190-900 nm (V-550, V-560); 190-2500
nm (V-570).
Spectrofotometrele cu ir de diode sunt aparate de tip multicanal. Au avantajul de a
elimina prile mobile ale unui specrofofometru clasic i de a permite realizarea de
spectre simultan la toate lungimile de und. Dezavantajul lor const n faptul c puterea
de rezoluie este nc limitat la circa 2 nm (ceea ce mpiedic analiza benzilor foarte
nguste sau a structurii fine a substanelor). [Brc M., 2010]

I.3.3. Aplicaii ale spectrofotometriei UV-VIS n controlul medicamentului
Spectrofotometria de absorbie UV-VIS este utilizat n special pentru analiza
substanelor aduse n soluie (se recomand soluii diluate). n general, prin
spectrofotometrie de absorbie UV-VIS se realizeaz analize calitative (identificare i
puritate) i analize cantitative.
Pentru analize cantitative este aleas, de obicei, lungimea de und la care coeficientul
de absorbie al compusului de analizat este maxim.

S


37
Analiza calitiativ
Identificare
Identificarea substanelor se face dup curba de absorbie prin comparaie cu cea a unei
substane de referin, pe baza numrului maximelor i minimelor de absorbie i a lungimii
de und a acestor maxime i minime.
Cu ct spectrul are mai multe maxime i minime, cu att identificarea este mai sigur.
Determinarea trebuie completat cu teste chimice suplimentare (fizice, fizico-chimice)
deoarece spectrul singur nu constituie un mijloc sigur de identificare.
Determinarea puritii
Se poate efectua raportul absorbanelor sau diferena lor la dou lungimi de und
(apropiate) A
1
/A
2
; (A
1
A
2
). Valoarea lor trebuie s fie cuprins ntre anumite valori
prevzute n monografia substanei respective.

Analiza cantitativ
Etapele analizei cantitative:
a) Alegerea solventului
Solvenii utilizai n spectroscopie trebuie s solubilizeze proba, s fie transpareni pentru
domeniul de lucru i s aibe o puritate avansat. Pentru fiecare solvent exist o lungime
de und limit de la care se poate folosi.
b) Selectarea lungimii de und - se face prin trasarea curbei care arat variaia
absorbanei funcie de lungimea de und.(fig.5)

Figura 5. Variaia absorbanei (A) funcie de lungimea de und ()
I. se prepar o soluie din solventul folosit+toi reactivii (fr substana de analizat) = Martor.
II. se prepar o soluie cu subst etalon (sr) de concentraie apropriat cu a soluiei de analizat.
III. se face o soluie etalon cu concentraie > dect a sol de analizat.


38
Se nregistreaz spectrele de absorbie ale celor 3 soluii.
Curbele de absorbie ale soluiilor II i III au aceeai alur cu maxim de absorbie la
aceeai la care solventul are absorbana minim.
c) Verificarea respectrii legii Lambert- Beer prin nregistrarea variaiei absorbanei n
funcie de concentraie
Se prepar soluii de diferite concentraii (C
1
- C
6
) cu substan etalon i se citesc
absorbanele (A
1
A
6
) soluiilor la spectrofotometru (fig.6). Cu valorile absorbanei (A)
se traseaz curba etalon liniar.(fig.7)


Figura 6. nregistrarea spectrelor i determinarea absorbanelor

Figura 7. Curba etalon
C
5
C
6
C
3
C
x
C
4
C
2
C
1
A
1
A
2
A
4
A
x
A
3
A
5
A
6
Concentraie

Absorban

C
4
C
3
C
5
C
6

max
C
2
C
1
A
1
A
2
A
4
A
x
A
3
A
5
A
6
Absorban

Lungime de
und
(nm)


39
Determinarea concentraiei analitului de interes
Dac se utilizeaz absorbana specific, notat cu , definit ca absorbana unui
strat de soluie cu grosimea de 1 cm, care conine 1 g de substan la 100 mL, se
poate calcula concentraia analitului dup formula:
C% (m/V) = A / ( 1)
X
= concentraia soluiei prob, avnd absorbana A, la lungimea de und ,
n cuva de 1 cm
=absorbana specific (constant specific fiecrei substane la o
lungime de und dat).
Dac nu se utilizeaz absorbana specific, concentraia se poate determina prin
metoda standardului extern

X
= concentraia soluiei prob, avnd absorbana A
p
, la lungimea de und ,
n cuva de 1 cm
s
= concentraia soluiei standard, avnd absorbana A
s
, la lungimea de und
, n cuva de 1 cm
Uzual se folosesc urmtoarele formule de calcul:


A
p
= absorban prob
A
et
= absprban etalon
m
p
= mas prob luat n lucru
m
et
= mas etalon luat n lucru
M
20
= mas medie (determinat pe 20 de uniti dozate)
F = factor de diluie (dac este cazul)





40
Concentraia se mai poate determina cu ajutorul curbei etalon
Se prepar cel puin 6 soluii etalon de concentraii diferite, cunoscute, se citesc
absorbanele i se face curba etalon. Apoi se citete absorbana substanei de analizat (A
x
),
iar prin interpolare se determin concentraia (C
x
).(fig.8)
Cnd curba este o dreapt i trece prin origine, nseamn c se respect legea Lambert
Beer n domeniul de interes.[Brc M., 2010]







Figura 8. Determinarea concentraiei cu ajutorul curbei etalon
C
5
C
6
C
3
C
x
C
4
C
2
C
1
A
1
A
2
A
4
A
x
A
3
A
5
A
6
C

A



41
I.4. Soluii injectabile - prevederi monografii FR X,
Farmacopeea European 0520

I.4.1. Farmacopeea Romn ediia X
INIECTABILIA
Preparate injectabile

Preparatele injectabile sunt soluii, suspensii, emulsii sterile sau pulberi sterile care se
dizolv sau se suspend ntr-un solvent steril nainte de folosire; sunt repartizate n fiole sau
n flacoane i sunt administrate prin injectare.
Preparare. La preparare se iau precauiile necesare pentru asigurarea stabilitii
fizico-chimice, microbiologice i biologice.
Substanele active se prelucreaz sub form de soluii, suspensii sau emulsii
injectabile.
Pulberile pentru preparate injectabile se dizolv sau se disperseaz nainte de folosire
n volumul de solvent steril prevzut.
Solvenii folosii sunt apa, uleiul de floarea-soarelui i ali solveni neapoi miscibili
sau nu cu apa.
Apa folosit trebuie s corespund prevederilor monografiei Ap distilat pentru
preparate injectabile.
Uleiul de floarea-soarelui folosit trebuie s corespund prevederilor monografiei
Ulei de floarea-soarelui neutralizat.
Soluiile apoase injectabile care nu se pot steriliza n recipientul final se prepar pe
cale aseptic i pot conine un conservant antimicrobian potrivit.
Nu se admite adaosul conservanilor antimicrobieni n cazul preparatelor injectabile
folosite ntr-un volum mai mare de 10 mL, indiferent de modul de administrare, precum i n
cazul soluiilor care se administreaz intracisternal, intracardiac, peridural, intraocular,
intrarahidian, indiferent de volumul acestora.
Preparatele injectabile apoase se izotonizeaz prin adugarea clorurii de sodiu sau a
altor substane. Izotonizarea este obligatorie n cazul soluiilor injectabile care se
administreaz n volume de 5 mL sau mai mari. Soluiile coloidale injectabile nu se
izotonizeaz.


42
Preparatele injectabile se sterilizeaz printr-o metod adecvat conform prevederilor
de la monografia Sterilizare.
Recipientele i dopurile folosite trebuie s corespund condiiilor prevzute de
normele de calitate n vigoare.
Descriere. Aspect. Soluiile injectabile trebuie s fie limpezi, practic lipsite de
particule n suspensie. Determinarea se efectueaz pe 25 de fiole sau pe 10 flacoane care
conin pulbere pentru preparate injectabile dizolvat. Soluiile se examineaz dup cteva
rsturnri ale recipientelor n condiii de vizibilitate corespunztoare (n faa unui ecran de
50/50 cm jumtate alb, jumtate negru, ntr-un unghi perpendicular pe raza de lumin a unui
tub de neon sau a unui bec electric mat de 100 W).
Culoarea. O eventual coloraie nu trebuie s depeasc coloraia etalonului de
culoare prevzut n monografia respectiv.
Suspensiile injectabile dup agitare timp de 1-2 minute, trebuie s fie omogene.
Suspensiile injectabile trebuie s corespund probei de pasaj. Suspensia omogenizat prin
agitare se aspir n ntregime ntr-o sering de mrime adecvat, apoi se evacueaz ntr-un
recipient, sub forma unui jet continuu, prin acul de sering numrul 16. Dup 10 minute,
suspensia se agit din nou i se repet determinarea; volumul suspensiei trebuie s treac n
jet continuu prin acul de sering numrul 16.
Emulsiile injectabile trebuie s aiba un aspect omogen dup agitare i s nu prezinte
nici un semn de separare a fazelor.
pH. Se determin poteniometric.
Uniformitatea volumului. Volumul de lichid injectabil care trebuie introdus n fiole
este prevzut n tabelul VIII.
Tabelul VIII.
Volumul de lichid injectabil
declarat (mL)
Volumul de lichid care trebuie introdus n fiole (n mL)
i abaterea admis
Pentru lichide injectabile
apoase
Pentru lichide vscoase
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
10,0
20,0
1,1 5%
2,2 5%
3,2 5%
4,25 5%
5,3 5%
10,5 3%
20,6 3%
1,2 5%
2,3 5%
3,3 5%
4,4 5%
5,5 5%
10,8 3%
21,0 3%


43
Excesul volumului de lichid injectabil adugat trebuie s asigure extragerea
volumului declarat.
Volumul de lichid se verific pe 10 fiole cu o sering potrivit.
Preparatele injectabile uleioase se nclzesc la 37 C naintea prelevrii coninutului
i se rcesc la 20 C naintea msurrii volumului.
Suspensiile injectabile trebuie agitate pn la omogenizare nainte de prelevarea
coninutului.
Uniformitatea masei. Se efectueaz n cazul pulberilor pentru preparate injectabile.
Se cntrete un flacon cu dop (fr armtura metalic) i se ndeprteaz pulberea
din flacon i de pe dop. Diferena dintre cele dou cntriri reprezint masa coninutului unui
flacon. Determinarea se repet pe nc nou flacoane i se calculeaz masa medie a
coninutului pe flacon.
Fa de masa medie calculat, masa individual a coninutului pe flacon poate s
reprezinte abaterile procentuale prevzute n tabelul IX, coloana A, pentru un singur flacon
se admit abaterile procentuale prevzute n coloana B.
Tabelul IX. Abateri de la masa medie a coninutului pe flacon
Masa medie a coninutului pe flacon
Abatere admis
A B
Pna la 120 mg
120 mg pn la 300 mg
300 mg i mai mult de 300 mg
10%
7,5%
5%
20%
15%
10%

Impuriti pirogene. Dac n monografia respectiv se prevede controlul
impuritilor pirogene i se procedeaz conform prevederilor de la Impuriti pirogene
(IX.F.10).
Sterilitate. Preparatele injectabile trebuie s fie sterile. Se procedeaz conform
prevederilor de la Controlul sterilitii (IX.F.2).
Identificare. Conform monografiilor componentelor.
Dozare. n cazul soluiilor, suspensiilor i emulsiilor injectabile, dozarea se
efectueaz conform prevederilor din monografia respectiv. Pentru coninutul n substan
activ calculat procentual se admite o abatere de 5% fa de valoarea declarat, dac nu se
prevede altfel.


44
n cazul flacoanelor cu pulberi pentru preparate injectabile, dozarea se efectueaz
conform prevederilor din monografia substanei respective. Concentraia procentual n
substan activ se raporteaz la masa coninutului declarat. Pentru coninutul n substan
activ pe flacon se admit, fa de valoarea declarat, abaterile procentuale prevzute la
paragraful Uniformitatea masei.
Conservare. n recipiente nchise etan.
Observaie. La preparare toate operaiunile se efectueaz ntr-un ciclu continuu. [FR
X, 1993]

I.4.2. Farmacopeea european ediia 6.0, 0520
Preparate parenterale
Parenteralia

Cerinele monografiei nu se aplic neaprat produselor derivate din snge uman,
preparatelor imunologice sau celor radiofarmaceutice. Cerine speciale se pot aplica
preparatelor veterinare, n funcie de specia de animal pentru care este destinat preparatul.
DEFINIIE
Produsele parenterale sunt preparate sterile destinate administrrii prin injectare,
infuzie sau implantare n corpul uman sau animal.
Preparatele parenterale pot necesita folosirea de excipieni, de exemplu, pentru a face
preparatul izotonic cu sngele, pentru a ajusta pH-ul, pentru a mri solubilitatea, pentru a
preveni deteriorarea substanelor active sau pentru a furniza proprieti antimicrobiene
potrivite, dar nu pentru a afecta negativ aciunea medicinal destinat a preparatului, sau la
concentraia folosit, s cauzeze toxicitate sau iritaii locale nedorite.
Recipientele preparatelor parenterale sunt realizate din materiale care sunt suficient de
transparente pentru a permite inspecia vizual a coninutului, cu excepia implantelor sau n
alte cazuri justificate sau autorizate.
Acolo unde este cazul, recipientele pentru preparate parenterale corespund prevederilor
din Materiale utilizate pentru fabricarea recipientelor (3.1 si subseciuni) i Recipiente
(3.2 i subseciuni).


45
Preparatele parenterale sunt condiionate n recipiente de sticl (3.2.1) sau n alte
recipiente, cum ar fi recipientele din plastic (3.2.2, 3.2.2.1 i 3.2.9) i seringile preumplute.
Etaneitatea recipientului este asigurat prin mijloace adecvate. nchiderile asigur un sigiliu
bun, previn ptrunderea microorganismelor sau altor contaminani i de obicei permit
extragerea unei pri sau a ntregului coninut fr a nltura capacul. Materialele plastice sau
elastomerii (3.2.9) folosii pentru a fabrica sigiliile sunt suficient de stabile i elastice pentru
a permite ptrunderea unui ac, cu o scurgere de particule ct mai mic. Sigiliile pentru
preparatele multidoz sunt suficient de elastice pentru a asigura c puncia este resigilat
cnd acul este scos.
Se pot diferenia mai multe categorii de preparate parenterale:
- injecii
- infuzii
- concentrate pentru injecii sau infuzii
- pulberi pentru injectii sau infuzii
- geluri pentru injectii
- implanturi

PRODUCIE
n timpul fabricrii unui preparat parenteral, pentru formularea care conine un
consevant antimicrobian, eficacitatea consevantului ales trebuie s fie demonstrat la cererea
autoritii competente. O metod de testare adecvat mpreun cu criteriile de apreciere a
proprietilor conservantului din formulare sunt prevzute n Eficacitatea consevrii
antimicrobiene. (5.1.3).
Preparatele parenterale sunt fabricate utiliznd materiale i metode destinate s asigure
sterilitatea i s previn introducerea de contaminani i dezvoltarea microorganismelor.
Recomandrile privind aceste aspecte sunt prevazute n capitolul Metode de preparare a
produselor sterile (5.1.1).
Apa utilizat la prepararea produselor parenterale corespunde cerinelor apei pentru
preparate injectabile, stabilite n monografia Apa pentru preparate injectabile (0169).

TESTE
Contaminare cu particule: particule sub-vizibile (2.9.19)
Pentru preparatele de uz uman, soluiile pentru infuzii sau soluiile pentru injecii
corespund testului.


46
n cazul preparatelor injectabile cu administrare subcutanat sau intramuscular sunt
prevzute limite mai nalte. Preparatele radiofarmaceutice fac excepie de la aceste cerine.
Preparatele pe care eticheta menioneaz c produsul trebuie s fie folosit cu un filtru final
fac excepie de la cerine, cu condiia c s-a demonstrat c filtrul duce la formarea unei
soluii care corespunde cu testul.
Pentru preparatele pentru uz veterinar, cnd sunt furnizate n recipiente cu un coninut
nominal mai mare de 100 mL i cnd coninutul este echivalent cu o doz mai mare de 1,4
mL pe kilogram de masa corporal, soluiile pentru infuzii sau soluiile pentru injecii
corespund cu testul pentru contaminare cu particule: particule sub-vizibile.
Sterilitate (2.6.1)
Preparatele parenterale corespund cu testul pentru sterilitate.

CONSEVARE
n recipiente sterile, nchise etan, inviolabile.
ETICHETARE
Eticheta trebuie s menioneze:
- numele i concentraia oricrui consevant antimicrobian adugat,
- acolo unde este cazul, c soluia trebuie s fie utilizat n asociere cu un filtru final,
- acolo unde este cazul, c preparatul este lipsit de endotoxine bacteriene sau c este
apirogen.

Preparate injectabile

DEFINIIE
Preparatele injectabile sunt soluii, emulsii sau suspensii sterile. Sunt preparate prin
dizolvarea, emulsifierea sau suspendarea substanei/substanelor active i a tuturor
excipienilor adugai n ap, ntr-un solvent neapos corespunztor, care poate fi nesteril
unde este justificat, sau ntr-un amestec al acestor vehicule.
Soluiile pentru injecii, examinate n condiii corespunztoare de vizibilitate, sunt
limpezi i practic lipsite de particule.
Emulsiile pentru injecii nu prezint nici un senm de separare a fazelor. Suspensiile
pentru injecii pot prezenta un sediment care este uor dispersabil la agitare, formnd o
suspensie care ramne suficient timp stabil pentru a permite extragerea unei doze corecte.


47
Preparate multidoz
Injeciile apoase multidoz conin un conservant antimicrobian potrivit, la o
concentraie adecvat, cu excepia cazului cnd preparatul nsui are proprietai
antimicrobiene. Cnd un preparat pentru uz parenteral este prezentat ntr-un recipient
multidoz, sunt specificate precauiile care trebuie luate la administrare i, n mod particular,
la consevarea ntre dou administrri succesive.
Conservani antimicrobieni
Preparatele apoase care sunt preparate pe cale aseptic i care nu pot fi sterilizate la
final pot conine un consevant antimicrobian potrivit ntr-o concentraie adecvat.
Nu se adaug consevani antimicrobieni atunci cnd:
- volumul care se injecteaz ntr-o singur doz depaete 15 mL, dac nu se prevede altfel;
- preparatul este destinat pentru administrare pe ci pe care, din cauze medicale, un
conservant antimicrobian nu este acceptat, cum ar fi intracisternal, epidural, intratecal sau
pe orice cale care ofer acces la lichidul cerebrospinal, intra- sau retro-ocular.
Aceste preparate sunt condiionate n recipiente unidoz.

PRODUCIE
n fabricarea injeciilor ce conin particule dispersate, se iau msuri pentru a asigura o
dimensiune adecvat i controlat a particulelor, n ceea ce privete utilizarea destinat.
Preparate unidoz
Volumul injeciei dintr-un recipient unidoz este suficient pentru a permite extragerea
i administrarea dozei nominale, folosind o tehnic normal. (2.9.17)

TESTE
Uniformitatea unitailor de dozare
Suspensiile injectabile unidoz corespund cu testul pentru uniformitatea unitilor de
dozare (2.9.40) sau, unde este prevzut i autorizat, cu testul pentru uniformitatea
coninutului. Medicamentele i preparatele pe baz de plante prezente n forma de dozare nu
sunt subiectul dispoziiilor din acest paragraf.
Uniformitatea coninutului (2.9.6)
Suspensiile injectabile unidoz cu un coninut de substan activ mai mic de 2 mg sau
mai mic de 2% din masa total corespund cu testul A pentru uniformitatea coninutului


48
suspensiilor unidoz, cu exceptia cazului cnd este prescris sau justificat i autorizat altfel.
Dac preparatul conine mai mult de o substant activ, cerina se aplic doar acelor
substane care corespund condiiilor prevzute mai sus.
Endotoxine bacteriene pirogene
Se efectueaz testul pentru endotoxine bacteriene (2.6.14) sau, unde este justificat i
autorizat, testul pentru pirogene (2.6.8). Pentru limitele de endotoxinele bacteriene sunt date
recomandri n capitolul 2.6.14.
Preparate pentru uz uman
Prepararea corespunde cu testul pentru endotoxine bacteriene (2.6.14) sau cu testul
pentru pirogene (2.6.8).
Preparate pentru uz veterinar
Cnd volumul de injectat dintr-o singur doz este 15 mL sau mai mult i este
echivalentul unei doze de 0,2 mL sau mai mult pe kilogram de mas corporal, preparatul
corespunde cu testul pentru endotoxine bacteriene (2.6.14) sau cu testul pentru pirogene
(2.6.8).
Orice preparat
Cnd eticheta menioneaz c preparatul este lipsit de endotoxine bacteriene sau este
apirogen, atunci corespunde cu testul pentru endotoxine bacteriene (2.6.14) sau cu testul
pentru pirogene (2.6.8). [European Pharmacopoeia 6
th
edition, 2007]


49
II. Parte experimental

II.1. Soluii injectabile cu meloxicam nregistrate pe piaa farmaceutic
internaional
Tabelul X
Denumire comercial Productor ara Ambalaj
Numrul
autorizaiei de
punere pe pia
Movalis 15 mg/1,5 mL
Boehringer
Ingelheim Int.
GmbH
Germania
Cutie cu 5;
10 fiole
708/2008/01-02-03
Recoxa 15 mg/1,5 mL Zentiva KS Cehia
Cutie cu
10 fiole
1772/2009/01-02
Melox 15 mg/1,5 mL *
Medochemie
LTD.
Cipru
Cutie cu 5
fiole
6358/2014/01
Meloxicam 15mg/1,5mL
SC Balkan
Pharmaceuticals
SRL
Republica
Moldova
Cutie cu 5;
10 fiole
-

* medicament pentru care deinatorii autorizaiilor de punere pe pia nu au pltit taxa
de meninere n vigoare a autorizaiei, n acord cu prevederile Ordinului ministrului
sntii nr. 716/11.06.2009 modificat i completat prin Ordinul ministrului sntii cu
nr. 1359 din 13.11. 2013.
[http://193.169.156.200/app/nom1/anm_list.asp?s_den_com=&s_dci=meloxicam&s_fir
m_tar_d=&s_forma_farm=inj&s_cod_atc=&s_cim=&anmPageSize=100]

II.2. Controlul calitii produsului farmaceutic Movalis 15 mg/1,5 mL
soluie injectabil

Preparatele injectabile sunt soluii, suspensii, emulsii sterile sau pulberi sterile care se
dizolv sau se suspend ntr-un solvent steril nainte de folosire; sunt repartizate n fiole sau
n flacoane i sunt administrate prin injectare. Fiolele cu meloxicam se administreaz
intramuscular n tratamentul simptomatic iniial i de scurt durat al poliartritei reumatoide,
spondilitei anchilozante, artrozelor i bolilor degenerative articulare.
Lucrarea prezent se refer la produsul Movalis 15 mg/1,5 mL soluie injectabil,
productor Boehringer Ingelheim GmBh Germania.


50
Compoziia pentru o fiol
1,5 ml soluie injectabil conin:
- substan activ: meloxicam 15 mg
- excipieni: meglumin (N-metil-D-glucamin), alcool tetrahidrofurfuril N1 + N2
95% (glicofurol), poloxamer 188 (Pluronic F 68), clorur de sodiu, glicin, hidroxid de
sodiu, ap distilat pentru preparate injectabile.










Figura 9. Mod de prezentare i condiionare a fiolelor de Movalis

II.2.1.Determinarea aspectului soluiei injectabile de Movalis
Protocol experimental:
Se iau n lucru 25 de fiole de Movalis i se examineaz dup cteva rsturnri ale
fiolelor n faa unui ecran de 50/50 cm jumtate alb, jumtate negru, ntr-un unghi
perpendicular pe raza de lumin a unui bec electric mat de 100 W.
Conculzie: se observ c toate fiolele analizate conin o soluie limpede practic lipsit
de particule n suspensie.



51
II.2.2. Determinarea culorii soluiei injectabile de Movalis
Conform rezumatului caracteristicilor produsului Movalis 15 mg/1,5 mL, soluia
injectabil trebuie sa fie o soluie limpede, de culoare galben cu tent verde, fr particule
strine. [RCP]
Conform FR X o eventual coloraie nu trebuie s depeasc coloraia etalonului de
culoare prevzut n monografia respectiv. Avnd n vedere faptul c nu exist monografie
pentru produsul farmaceutic analizat, compararea s-a efectuat conform FE ed.6 utilizndu-se
ca etalon de culoare soluia standard GY (galben verzui).

Prepararea soluiei etalon GY
Prepararea soluiilor primare:
Soluia galben: se dizolv 46 g de clorur feric R n aproximativ 900 mL amestec
de 25 mL acid clorhidric R i 975 mL ap distilat R i se dilueaz la 1000 mL cu acelai
amestec. Soluia se titreaz i se ajusteaz astfel nct s conin 45,0 mg de FeCl
3
x 6H
2
O
per mililitru prin adugarea aceluiai amestec acid. Soluia se conserv n recipiente ferite de
lumin.
Soluia roie: se dizolv 60 g de clorur de cobalt R n aproximativ 900 mL amestec
de 25 mL acid clorhidric R i 975 mL ap distilat R i se dilueaz la 1000 mL cu acelai
amestec. Soluia se titreaz i se ajusteaz astfel nct s conin 59,5 mg de CoCl
2
x 6H
2
O
per mililitru prin adugarea aceluiai amestec acid.
Soluia albastr: se dizolv 63 g de sulfat de cupru R n aproximativ 900 mL amestec
de 25 mL acid clorhidric R i 975 mL ap distilat R i se dilueaz la 1000 mL cu acelai
amestec. Soluia se titreaz i se ajusteaz astfel nct s conin 62,4 mg de CuSO
4
x 5H
2
O
per mililitru prin adugarea aceluiai amestec acid.
Prepararea soluiei standard:
Folosind cele 3 soluii primare, se prepar soluia standard conform tabelului urmtor:
Tabelul XI.Prepararea soluiei standard
Soluia standard
Volum (mL)
Soluia galben Soluia roie Soluia albastr
Acid clorhidric
(10g/L HCl)
GY (galben-verzui) 9,6 0,2 0,2 0,0
[European Pharmacopoeia 6
th
edition, 2007]


52
Soluia de analizat s-a comparat cu soluia etalon preparata conform specificaiilor
din FE utiliznd volume egale din cele dou soluii care s-au adus n dou eprubete identice,
cu acelai diametru intern, din sticl neutr, necolorat, transparent, privind n lumin
difuz vertical pe un fundal alb.

Proba Etalon
Figura 10. Examinarea culorii soluiei injectabile de Movalis
Comparativ cu etalonul de culoare

Concluzie: soluia de analizat corespunde parametrului descriere deoarece nu
prezint o coloraie mai intens dect cea a etalonului de culoare preparat.

II.2.3.Determinarea uniformitii volumului fiolelor cu soluie injectabil de
Movalis
Conform FR X volumul de lichid se verific pe 10 fiole cu o sering potrivit.
Excesul volumului de lichid adugat trebuie s asigure extragerea volumului declarat.
Volumul de lichid care trebuie introdus n fiole este prevzut n urmtorul tabel:
Tabelul XII
Volumul de lichid
injectabil declarat (n mL)
Volumul de lichid injectabil apos care trebuie introdus
n fiole (n mL) i abaterea admis
1,0 1,1 5%
2,0 2,2 5%
3,0 3,2 5%
4,0 4,25 5%
5,0 5,3 5%
10,0 10,5 3%
20,0 20,6 3%



53
Tabelul XIII. Determinarea uniformitii volumului fiolelor de Movalis
Fiola
analizat
Volumul de lichid
msurat (mL)
Abaterea fa de volumul
de lichid care trebuie
introdus n fiole (mL)
Abaterea procentual fa de
volumul de lichid care trebuie
introdus n fiole (%)
F1 1,617 -0,033 -2,0408
F2 1,598 -0,052 -3,2540
F3 1,594 -0,056 -3,5131
F4 1,609 -0.041 -2,5481
F5 1,592 -0.058 -3,6432
F6 1,605 -0.045 -2,8037
F7 1,618 -0,032 -1,9777
F8 1,620 -0,03 -1,8518
F9 1,628 -0,022 -1,3513
F10 1,613 -0,037 -2,2938

Volumul de lichid injectabil declarat de productor este de 1,5 ml pe fiol.
Volumul de lichid care trebuie introdus n fiole este de 1,65 mL.
Limita de admisibilitate este de 1,65 5% (1,5675 1,7325).

Concluzie:
Se observ c fiolele de Movalis 15 mg/1,5 mL analizate corespund prevederilor
FRX privind uniformitatea volumului deoarece volumul nici unei fiole din cele 10 luate n
lucru nu prezint o abatere procentual fa de volumul care trebuie introdus n fiole mai
mare de 5%.


54
II.2.4. Identificarea meloxicamului din soluia injectabil de
Movalis 15mg/1,5mL

II.2.4.1. Identificarea meloxicamului prin spectrofotometrie n UV

Spectrofotometria de absorbie UV-VIS este utilizat n special pentru analiza
substanelor aduse n soluie.
Spectrofotometria de absorbie UV-VIS este o ramur a spectroscopiei bazat pe
fenomenul cel mai important care are loc atunci cnd o radiaie electromagnetic
interacionez cu moleculele unei probe i anume absorbia radiaiei.
n urma absorbiei de radiaie electromagnetic cu energia h, moleculele trec ntr-o
stare superioar de energie de rotaie, vibraie, electronic, aceast trecere fiind numit
tranziie. Sunt absorbite doar acele radiaii cu energia egal cu diferena de energie ntre dou
nivele cuatificate ale moleculei.
n spectrofotometria de absorbie molecular, se msoar absorbana unei probe funcie
de lungimea de und a radiaiei cnd se obine un spectru care conine informaii calitative i
cantitative.
Analiza calitativ a substanelor se face dup curba de absorbie prin comparaie cu a
unei substane de referin, pe baza numrului maximelor i minimelor de absorbie i a a
acestor maxime i minime.
Cu ct spectrul are mai multe maxime i minime cu att identificarea este mai sigur.
Determinarea trebuie completat cu teste suplimentare (fizice, fizico-chimice) deoarece
spectrul singur nu constituie un mijloc sigur de identificare [Brca M.,2010].
Farmacopeea Britanic la monografia de meloxicam prevede identificarea acestuia
printr-o metod spectrofotometric UV.
Pornind de la aceast prevedere am dezvoltat o metod spectrofotometric UV a
meloxicamului n soluie tampon pH = 7,4. Meloxicamul n soluie tampon prezint dou
maxime de absorbie la 270 nm i respectiv la 362 de nm.


55

Figura 11. Spectrul n UV pentru soluia de meloxicam s.r. 0,01824 mg/ml n
domeniul spectral 250 400 nm

Pentru analiza calitativ i cantitativ se alege lungimea de und de 362 nm la care
coeficientul de absorbie are valoare maxim.

Reactivi i aparatur:
- dihidrogenofosfat de sodiu (Sigma)
- hidrogenofosfat de disodiu (Sigma)
- meloxicam substan de referin (Cadila Pharmaceuticals)
- hidroxid de sodiu (Sigma)
- metanol de puritate analitic (Sigma)
- Movalis fiole 15 mg/1,5mL productor Boehringer Ingelheim Germania
- balan analitic Sartorius
- spectrofotometru UV-VIS Jasco V-550

Prepararea soluiilor:
Soluia de tampon fosfat pH 7,4: se cntresc 2,28 g dihidrogenofosfat de sodiu (R) i
9,146 g hidrogenofosfat de disodiu (R) i se dizolv n 500 mL de ap prospt fiart i rcit
i se completeaz cu acelai sovent la 1000 mL ntr-un balon cotat.
Soluia standard: se cntresc la balana analitic 0,0076 g meloxicam substan de
referin ntr-un balon cotat de 50 mL; se adaug 2,5 mL CH
3
OH i 0,5 mL NaOH 0,5M i se


56
completeaz la volum cu tampon fosfat pH 7,4.Se agit.Se dilueaz 1 mL din aceast soluie
la balon cotat de 10 mL cu tampon fosfat pH 7,4. Se filtreaz.
Soluia prob : se aduc 1,5 mL soluie injectabil Movalis 1,5 mg/1,5 mL ntr-un balon
cotat de 100 mL i se agit cu 30 mL tampon fosfat dup care se completeaz balonul la
volum cu tampon fosfat. Se agit. Se dilueaz 1 mL din aceast soluie la balon cotat de 10
mL cu tampon fosfat pH 7,4. Se filtreaz.

Protocol experimental
Se traseaz spectrele de absorbie UV (domeniul spectral 250 - 400 nm) ale soluiilor
preparate din meloxicam substan de referin, respectiv Movalis soluie injectabil
15mg/1,5 mL folosind ca martor soluia tampon pH = 7,4.



Figura 12. Spectrul n UV pentru meloxicam soluie din substan de referin n domeniul
spectral 250 400 nm



0.2
1
0.4
0.6
0.8
250 400 300 350
Abs
Wavelength [nm]
362 nm, 0.76243
270 nm, 0.45014


57


Figura 13. Spectrul n UV pentru Movalis soluie injectabil n domeniul
spectral 250 400 nm


0.2
1
0.4
0.6
0.8
250 400 300 350
Abs
Wavelength [nm]

Figura 14. Spectrele suprapuse n UV pentru meloxicam soluie de referin (rou)
respectiv pentru Movalis soluie injectabil (verde) n domeniul spectral 250 400 nm


58

Tabelul XIV. Valori obinute pentru absorbana maximului de la 362 nm.
Proba de analizat (nm) Absorban
Soluie meloxicam subst.referin 362 0,76243
Soluie injectabil Movalis 15 mg/1,5 mL 362 0,75336

Concluzie:
Prin suprapunerea celor dou spectre se poate observa c acestea au aceeai alur cu un
maxim de absorbie la lungimea de und de 362 nm.
Deoarece spectrul singur nu constituie un mijloc sigur de identificare pentru
meloxicam determinarea a fost completat cu identificarea meloxicamului printr-o reacie de
culoare.

II.2.4.2. Identificarea meloxicamului prin reacia de culoare cu FeCl
3
FR X prevede n monografia piroxicamului o reacie de identificare a acestuia cu
clorura ferica 30 g/L. Pornind de la aceast prevedere am aplicat reacia de identificare i
pentru meloxicam.
Reactivi:
Soluie injectabil de Movalis
Clorur de fer (III) 30 g/L
Tehnic de lucru:
Se aduce cantitativ coninutul unei fiole de Movalis soluie injectabil ntr-o
eprubet i se adaug 0,2 mL clorur de fer (III) 3 g/L. Apare o coloraie roie - viinie.





Figura 15. Vizualizarea coloraiei prevzute de FR X n urma reaciei cu FeCl
3


59
II.2.5. Verificarea influenei excipienilor asupra dozrii meloxicamului din
soluia injectabil de Movalis utiliznd metoda HPLC

Cromatografia de lichide de nalt performan este o metod fizico-chimic de
separare cromatografic n care faza mobil este un lichid, iar faza staionar coninut ntr-o
coloan, este constituit dintr-un solid cu granulaie fin (cromatografie lichid-solid) sau un
lichid ce impregneaz un suport solid (cromatografie lichid-lichid). Se lucreaz la presiuni
mari (de pn la 400-600 barri). HPLC este o metod rapid, eficient i selectiv. [Brc M,
2010]
HPLC folosete o coloan ncrcat cu diferite materiale (faza staionar), o pomp
ce mpinge faza mobil prin coloana i un detector care arat timpurile de retenie ale
moleculelor. Timpul de retenie depinde de interaciunea dintre faza staionar, moleculele de
analizat i solvenii utilizai, fiind considerat o caracteristic unic de identificare a analitului
dat. [http://ro.wikipedia.org/wiki/HPLC]

Aparatur sistem HPLC
Un sistem HPLC conine un rezervor de eluent, o pomp de nalt presiune cu ajutorul
creia se realizeaz fluxul de faz mobil prin coloan, un injector pentru introducerea
probei n fluxul fazei mobile, o coloan din oel inoxidabil care are la interior faza staionar
imobilizat, un detector i un sistem de nregistrare.
Adiional, pentru creterea preciziei analizei, se poate ataa un termostat de coloan.
Sistemul poate fi controlat prin intermediul unui computer.
Prin nregistrarea grafic a semnalului detectorului n funcie de timp se obine o
cromatogram (sau o curb de eluie cu alura similar curbei Gauss). Un astfel de semnal
produs de un detector n momentul eluiei unui anumit compus este cunoscut sub numele de
pic cromatografic (figura 16).
Picul cromatografic corespunde unei distribuii gaussiene de valori reprezentat n
sistemul de coordonate p=f(t).



60

Figura 16. Pic cromatografic.

Cea mai folosit metod de identificare a componenilor de analizat se bazeaz pe
compararea parametrilor de retenie ai standardului cu cei ai componentului de identificat
(figura 17).

Figura 17. Identificare pe baza timpului de retenie

Metoda cromatografic de lichide de nalt performan ofer importante posibiliti de
separare, detecie i cuantificare a speciilor chimice analizate. Prin urmare are aplicaii largi
n analiza calitativ i cantitativ. [Boji M. et al, 2003]


61
Principiul metodei:
Ne-am propus s elaborm o metod simpl i eficient pentru a detecta dac
excipienii din soluia injectabil de Movalis (meglumin, glicofurol, poloxamer 188, clorur
de sodiu, hidroxid de sodiu) influeneaz dozarea meloxicamului.
Pornind de la prevederile parametrului dozare din Farmacopeea American, am
elaborat o metod HPLC cu faz invers cu detecie n UV la lungimea de und 360 nm. Am
utilizat o coloan cromatografic C18 cu diametrul interior 4,6 mm x 15 cm i o faz mobil
format din metanol i un amestec acetat de amoniu 0,1% (m/v) ajustat cu amoniac 10% la
pH 9,1 n proporie de 21:29 v/v (notat Solutia A), cu un debit de eluie de 1 mL/min.

Reactivi i aparatur:
- acetat de amoniu (Sigma)
- soluie de amoniac 10% (Sigma)
- metanol de puritate analitic (Sigma)
- hidroxid de sodiu (Sigma)
- clorur de sodium (Sigma)
- meglumin (N-metil-D-glucamin) (Sigma)
- glicofurol (Sigma)
- poloxamer 188 (Sigma)
- meloxicam substan de referin (Cadila Pharmaceuticals)
- ap bidistilat
- balan analitic tip AND BM 20 (maxim 22 g)
- pHmetru Mettler Toledo

Condiiile cromatografice:
Detector: UV 360 nm
Coloan: Spherisorb 5 ODS (faz legat C 18); 4,6 mm x 15 cm
Faza mobil: metanol : Soluia A (21:29 v/v)
Debit de eluie: 1 mL/minut
Volumul de injecie: 10 L


62

Figura18. Aparatura utilizat la determinarea HPLC

Protocol experimental
Prepararea soluiilor:
Solutia A: amestec de soluie de acetat de amoniu 0,1% (m/v) ajustat cu soluie de
amoniac 10% la pH 9,1.
Se cntresc la balana analitic 1,0247 g acetat de amoniu ntr-un balon cotat de 1000 mL,
se adaug ap distilat, se agit pn la solubilizarea complet i se completeaz la volum cu
ap distilat. Se adaug soluie de amoniac 10% pn la pH 9,1 determinat cu ajutorul
pHmetrului.
Faza mobil: metanol i Soluia A (21:29 v/v). Se amestec 724,13 mL metanol cu
1000 mL Soluie A. Se agit.
Solvent pentru dizolvarea meloxicamului s.r.: metanol i hidroxid de sodiu 1 N
(250:1 v/v). Se cntresc la balana analitic 4,0782 g hidroxid de sodiu ntr-un balon cotat
de 100 mL, se solubilizeaz n ap distilat i se completeaz cu ap distilat la volum. Se
amestec 1000 mL metanol cu 4 mL din soluia de hidroxid de sodiu 1 N preparat. Se agit.
Soluii etalon de meloxicam: Se cntresc la balana analitic cantitaile de
meloxicam substan de referin prevzute n tabelul XV; se adaug urmatoarele volume de
Solvent 25 mL, 50 mL respectiv 125 mL (corespunzatoare baloanelor cotate de 50, 100, 250
mL) i se completeaz la volum cu ap distilat.


63

Tabelul XV. Prepararea soluiilor etalon de meloxicam s.r.
Numele
probei
Cantitate de meloxicam
cntrit (mg)
Volumul balonului
cotat (mL)
Concentraie (mg/mL)
1 20,684 50 0,41368
2 18,089 50 0,36178
3 15,692 50 0,31384
4 25,154 100 0,25154
5 19,905 100 0,19905
6 15,029 100 0,15029
7 9,973 100 0,09973
8 13,339 250 0,053356

Figura 19 . Soluii etalon de meloxicam s.r.



Soluiile excipienilor din soluia injectabil de Movalis:
Soluia de meglumin (N-metil-D-glucamin) (10 mg/100 mL): se cntresc la
balana analitic 10,086 mg meglumin ntr-un balon cotat de 100 mL, se solubilizeaz n
ap distilat i se completeaz la volum cu ap distilat. Se agit.
Soluia de glicofurol (0,01 mL/100 mL): se cntresc la balana analitic 0,013 mL
soluie de glicofurol ntr-un balon cotat de 100 mL i se completeaz la volum cu ap
distilat. Se agit.


64
Soluia de poloxamer 188 (0,01 mL/100 mL): se cntresc la balana analitic 0,012
mL soluie de poloxamer 188 10% ntr-un balon cotat de 100 mLi se completeaz la volum
cu ap distilat. Se agit.
Soluia de clorur de sodiu (10 mg/100 mL): se cntresc la balana analitic 10,129
mg clorur de sodiu ntr-un balon cotat de 100 mL, se solubilizeaz n ap distilat i se
completeaz la volum cu ap distilat. Se agit.
Soluia de hidroxid de sodiu (10 mg/100 mL): se cntresc la balana analitic 10,274
mg hidroxid de sodiu ntr-un balon cotat de 100 mL, se solubilizeaz n ap distilat i se
completeaz la volum cu ap distilat. Se agit.

Mod de lucru:
Se echilibreaz sistemul cromatografic cu faza mobil.
Pentru stabilirea domeniului de concentraie n care se respect legea Lambert-Beer
(domeniul de liniaritate) se injecteaz cte 10 L din soluiile etalon de meloxicam
(0,053356 mg/mL, 0,09973 mg/mL, 0,15029 mg/mL, 0,19905 mg/mL, 0,25154 mg/mL,
0,31384 mg/mL, 0,36178 mg/mL, 0,41368 mg/mL) i se nregistreaz cromatogramele
(figurile 20 - 27).
Pentru o exactitate mai bun s-au executat cte 3 injecii pentru fiecare dintre
concentraiile soluiilor etalon de meloxicam.





65

Time Area Area % Height Component Name
8.908 1,485,493.9 100.00 76,919.3 meloxicam 0,053356 mg/mL
Figura 20. Cromatograma soluiei etalon de meloxicam 0,053356 mg/mL


Time Area Area % Height Component Name
8.843 2,779,961.2 100.00 142,827.2 meloxicam 0,09973 mg/mL
Figura 21. Cromatograma soluiei etalon de meloxicam 0,09973 mg/mL


66

Time Area Area % Height Component Name
8.790 4,184,958.1 100.00 212,203.4 meloxicam 0,15029 mg/mL
Figura 22. Cromatograma soluiei etalon de meloxicam 0,15029 mg/mL


Time Area Area % Height Component Name
8.709 5,513,830.6 100.00 275,445.1 meloxicam 0,19905 mg/mL
Figura 23. Cromatograma soluiei etalon de meloxicam 0,19905 mg/mL


67

Time Area Area % Height Component Name
8.639 7,004,016.9 100.00 342,855.9 meloxicam 0,25154 mg/mL
Figura 24. Cromatograma soluiei etalon de meloxicam 0,25154 mg/mL


Time Area Area % Height Component Name
8.598 8,661,571.5 100.00 414,546.7 meloxicam 0,31384 mg/mL
Figura 25. Cromatograma soluiei etalon de meloxicam 0,31384 mg/mL


68

Time Area Area % Height Component Name
8.651 10,004,517.7 100.00 465,750.9 meloxicam 0,36178 mg/mL
Figura 26. Cromatograma soluiei etalon de meloxicam 0,36178 mg/mL




Figura 27. Cromatograma soluiei etalon de meloxicam 0,41368 mg/mL
Time Area Area % Height Component Name
8.752 11,526,054.3 100.00 517,741.1 meloxicam 0,41368 mg/mL


69
Liniaritatea i domeniul de liniaritate
S-au determinat prin studierea corelaiei dintre concentraiile soluiilor i factorii de
rspuns, respectiv ariile picurilor cromatografice
Liniaritatea a fost verificat pe domeniul 0,053356-0,41368 mg/mL utiliznd opt soluii
etalon de meloxicam (substan de referin)
Evaluarea s-a fcut prin analiza de regresie
Criterii de acceptare: coeficientul de corelaie 0,99

Tabelul XVI. Rezultatele obinute n urma analizei HPLC a celor 8 soluii etalon
Numele
probei
Concentraie
(mg/mL)
Numrul
injeciei
Aria (mAU *
minutes)
Media ariilor
1 0,41368
1 10293954
11131274 2 11573815
3 11526054
2 0,36178
1 10037731
10024444 2 10031084
3 10004518
3 0,31384
1 8653625
8665033 2 8679901
3 8661571
4 0,25154
1 6994826
6999377 2 6999289
3 7004017
5 0,19905
1 5501891
5511729 2 5519466
3 5513831
6 0,15029
1 4166798
4178812 2 4184681
3 4184958
7 0,09973
1 2768215
2777185 2 2783379
3 2779961
8 0,053356
1 1483749
1487749 2 1494003
3 1485494



70

Figura 28. Dreapta de regresie pentru soluiile etaloan de meloxicam
Se observ dependena liniar a absorbanei fa de concentraie pe domeniul 0,053356-
0,41368 mg/mL, cu un coeficient de corelaie R
2
= 0,9999.

Se injecteaz alternativ cte 10 L din soluiile de excipieni (Soluia de meglumin 10
mg/100 mL, Soluia de glicofurol 0,01 mL/100 mL, Soluia de poloxamer 188 0,01
mL/100 mL, Soluia de clorur de sodiu 10 mg/100 mL, Soluia de hidroxid de sodiu 10
mg/100 mL) i se nregistreaz cromatogramele (figurile 29 - 33)
Se compar timpii de retenie ai excipienilor cu timpul de retenie al meloxicamului







71

Time Area Area % Height Component Name
0 0 0 0 Meglumin 10 mg/100mL
Figura 29. Cromatograma soluiei de meglumin 10 mg/100mL


Time Area Area % Height Component Name
0 0 0 0 Glicofurol 0,01 mL/ 100 mL
Figura 30. Cromatograma soluiei de glicofurol 0,01 mL/100 mL


72

Time Area Area % Height Component Name
1,865 5603,0 100,00 453,0 poloxamer 188 0,01mL/100 mL
Figura 31. Cromatograma soluiei de poloxamer 188 0,01mL/100 mL


Time Area Area % Height Component Name
0 0 0 0 NaCl 10 mg/ 100 mL
Figura 32. Cromatograma soluiei NaCl 10 mg/ 100 mL


73


Time Area Area % Height Component Name
0 0 0 0 NaOH 10 mg/ 100ml
Figura 33. Cromatograma soluiei NaOH 10 mg/ 100 mL


Concluzie: Excipienii nu influenteaz determinarea deoarece nu apar picuri suplimentare
la timpii de retenie corespunztori meloxicamului.



74
II.2.6. Dozarea meloxicamului din soluia injectabil de Movalis 15
mg/1,5 mL prin spectrofotometrie n UV

Meloxicamul n soluie tampon pH = 7,4 prezint un maxim de absorbie la
lungimea de und de 362 nm. Ne-am propus s elaborm o metod de dozare a
meloxicamului pornind de la proprietatea lui de a absorbi radiaia ultraviolet.

II.2.6.1. Determinarea linearitii i stabilirea domeniului de linearitate
La instituirea unei metode spectrofotometrice trebuie stabilit domeniul de
concentraie n care se respect legea Lambert-Beer (domeniul de liniaritate).
Intervalul unei metode analitice este intervalul dintre limitele superioar i inferioar
ale analitului (inclusiv aceste nivele) care s-au determinat cu acuratee, precizie i linearitate
folosind respectiva metod. Intervalul se exprim n mod normal n aceleai uniti ca i
rezultatele testului (ex. procentual, pri per milion) obinute prin metoda analitic.
Dependena linear a absorbanei funcie de concentraie a unor serii de diluii a fost
determinat n intervalul de concentraie 0,01064 0,01824 mg/mL meloxicam substan de
referin.
Prepararea soluiei stoc: se cntresc la balana analitic 0,0076 g meloxicam
substan de referin ntr-un balon cotat de 50 mL; se adaug 2,5 mL CH
3
OH i 0,5 mL
NaOH 0,5M i se completeaz la volum cu tampon fosfat pH 7,4. Se agit. Din aceast
soluie stoc se fac diluii astfel nct absorbana acestora s fie cuprins n intervalul 0,1-1.
Absorbanele se citesc la spectrofotometrul Jasco V-550, n cuve de cuar de 1 cm fa de
soluia de tampon fosfat pH 7,4 la lungimea de und 362 nm. Valorile obinute sunt
prezentate n tabelul XVII:









75



Tabelul XVII. Valorile absorbanelor obinute pentru soluia de referin
Nr. Crt.
Concentraia soluiei etalon
(mg /mL )
Absorbana Legend
1 0,01064 0,5298 ________
2 0,01216 0,6138 ________
3 0,01368 0,6944 ________
4 0,01520 0,7624 ________
5 0,01672 0,8444 ________
6
0,01824 0,9231
________



0.1
1
0.2
0.4
0.6
0.8
250 400 300 350
Abs
Wavelength [nm]


Figura 34. Scara etalon pe domeniul de concentraii 0,01064 0,01824 mg/mL




76
Studiul valorilor absorbanelor ca funcie de concentraie prin analiza de regresie
liniar a condus la dreapta de calibrarea (figura 35), avnd coeficientul de corelaie
R
2
=0,999680 (criteriul de acceptabilitate 0,99).

0
1 . 0 0 1 7 4
0 . 5
0 0 . 0 1 9 0 . 0 0 5 0 . 0 1 0 . 0 1 5
Ab s
Co n c .


No. of WL: 1-WL method Calib Curve: Linear
Peak : 362.0 nm Expression: Abs = A + B * Conc
Response: Fast Factor: A = -0.011
BandWidth: 2.0 nm B = 51.2376
No. of cycles: 1 Coefficient: 0.999680
Create Date: 5/7/2014 7:35PM

Figura 35. Curba de calibrare pe domeniul de concentraii 0,01064 0,01824 mg/mL

Se observ dependena liniar a absorbanei fa de concentraie pe domeniul studiat
(0,01064 0,01824 mg/mL), cu un coeficient de corelaie de 0,999680.
Acest lucru demonstreaz c metoda de dozare elaborat se poate folosi cu rezultate
bune la dozarea meloxicamului n domeniul de concentraie 0,01064 0,01824 mg/mL.





77
II.2.6.2. Determinarea cantitativ a meloxicamului din soluia injectabil de
Movalis prin metoda spectrofotometric elaborat
Principiul metodei:
Metoda spectrofotometric la = 362 nm. Meloxicamul n soluie tampon pH 7,4
prezint un maxim de absorbie la 362 nm.

Reactivi i aparatur:
- dihidrogenofosfat de sodiu (Sigma)
- hidrogenofosfat de disodiu (Sigma)
- meloxicam substan de referin (Cadila Pharmaceuticals)
- hidroxid de sodiu (Sigma)
- metanol de puritate analitic (Sigma)
- Movalis fiole 15 mg/1,5mL productor Boehringer Ingelheim Germania
- balan analitic Sartorius
- spectrofotometru UV-VIS Jasco V-550

Tehnica de lucru:
Soluia de tampon fosfat pH 7,4: se cntresc 2,28 g dihidrogenofosfat de sodiu (R) i
9,146 g hidrogenofosfat de disodiu (R) i se dizolv n 500 mL de ap prospt fiart i rcit
i se completeaz cu acelai sovent la 1000 mL ntr-un balon cotat.
Soluia standard: se cntresc la balana analitic 0,0076 g meloxicam substan de
referin ntr-un balon cotat de 50 mL; se adaug 2,5 mL CH
3
OH i 0,5 mL NaOH 0,5M i se
completeaz la volum cu tampon fosfat pH 7,4. Se agit. Se dilueaz 1 mL din aceast
soluie la balon cotat de 10 mL cu tampon fosfat pH 7,4. Se filtreaz.
Soluia prob : se aduc 1,5 mL soluie injectabil Movalis 1,5 mg/1,5 mL ntr-un balon
cotat de 100 mL i se agit cu 30 mL tampon fosfat dup care se completeaz balonul la
volum cu tampon fosfat. Se agit. Se dilueaz 1 mL din aceast soluie la balon cotat de 10
mL cu tampon fosfat pH 7,4. Se filtreaz.


78
Se determin valorile absorbanelor celor dou soluii standard i prob prin
nregistrarea spectrelor la spectrofotometrul Jasco V-550, n cuve de cuar de 1 cm fa de
soluia de tampon fosfat pH 7,4 la lungimea de und 362 nm.

0.2
1
0.4
0.6
0.8
250 400 300 350
Abs
Wavelength [nm]

Figura 36. Spectrele suprapuse n UV pentru meloxicam soluie de referin (rou)
respectiv pentru Movalis soluie injectabil (verde) n domeniul spectral 250 400 nm

Calculul:
Susbstan activ mg/1,5mL =

A
P362
= absorbana soluiei prob la
max
362 nm
m
Et
= masa de meloxicam s.r. cntrit = 0,0076 g
A
Et362
= absorbana soluiei etalon msurat la
max
362 nm

Subst. Activ (%) =






79
Tabelul XVIII. Rezultatele obinute la dozarea meloxicamului din fiole
Proba A
p
A
Et

Meloxicam gsit pe
1,5 mL sol.inj.
Meloxicam gsit
fa de declarat (%)
Movalis
sol.inj. 15 mg/1,5mL
0,75336 0,76243
0,0150191 g
15,0191 mg
100,12

Se observ c preparatul farmaceutic studiat, Movalis soluie injectabil 15 mg/1,5
mL corespunde prevederilor Farmacopeei Europene la parametrul dozare, care impun o
abatere de 5% (adic concentraia de substan activ pe 1,5 mL soluie injectabil trebuie
s fie cuprins n intervalul (14,25 15,75 mg/1,5 mL soluie injectabil) pentru Movalis
soluie injectabil 15 mg/1,5 mL).
Concluzie:
Cantitatea de meloxicam determinat din fiolele de Movalis soluie injectabil 15
mg/1,5 mL 100,12 % se nscrie n limita de admisibilitate 95 105 % fa de declarat
(Farmacopeea European).


II.2.6.3. Verificarea repetabilitii metodei elaborate

Repetabilitatea se refer la concordana rezultatelor obinute n urma repetrii
determinrilor sau aplicrii metodei n cadrul unui laborator, de ctre un singur analist, cu
acelai tip de echipament, n decursul unei perioade scurte de timp.
Am evaluat repetabilitatea metodei prin dozarea a ase soluii prob cu aceeai
concentraie (1,50191 mg/1,5 mL) preparate n ziua determinrii i calcularea abaterii
standard (SD) i abaterii standard relative (SDR). Rezulatetele obinute sunt redate n figura
nr.11 i tabelul nr.7.



80
0.2
1
0.4
0.6
0.8
250 400 300 350
Abs
Wavelength [nm]

Figura 37. Spectrele suprapuse obinute n urma a ase determinri consecutive pe
soluia de Movalis 1,50191 mg/1,5 mL

Tabelul XIX. Valorile absorbanelor obinute pentru soluia de Movalis 1,50191mg/1,5mL
Nr. Crt. Absorbana Legend
1 0,75336 ________
2 0,75561 ________
3 0,75547 ________
4 0,75543 ________
5 0,75539 ________
6
0,75557 ________

Tabelul XX. Rezultatele privind determinarea repetabilitii metodei
Concentraia
(mg/1,5 mL)
Repetabilitate
Valoare regsit
(mg/1,5mL)
15,0191
15,0191
14,9743
14,9771
14,9779
14,9787
14,9751
Media 14,9837
SD 0,012838
SDR (%) 0,085684

Concluzie: Se constat c SDR este mai mic de 2%, deci metoda este repetabil.


81

II.2.6.4. Determinarea stabilitii soluiilor obinute din meloxicam substan de
referin i respectiv din Movalis soluie injectabil
Verificarea stabilitii soluiilor de meloxicam folosite pentru dozarea meloxicamului
din soluia injectabil de Movalis s-a realizat prin determinarea absorbanelor soluiei de
referin, respectiv soluiei de prob la 24 de ore, 72 de ore i respectiv 168 de ore de la
prepararea soluiilor. Pe tot intervalul de timp al determinrilor soluiile au fost stocate la 2-8
0
C, ferite de lumin. Valorile absorbanelor obinute n urma nregistrrii spectrelor au fost
utilizate pentru calculul concentraiei de substan activ pe 1,5 mL soluie injectabil de
Movalis luat n lucru.

Verificarea stabilitii probelor la 24 de ore de la preparare
0.2
1
0.4
0.6
0.8
250 400 300 350
Abs
Wavelength [nm]

Figura 38. Spectrul n UV pentru meloxicam soluie din substan de referin n
domeniul spectral 250 400 nm la 24 de ore de la prepararea soluiei

Spectrul soluiei de meloxicam substan de referin obinut inial a fost suprapus
peste spectrul aceleiai soluii nregistrat la 24 de ore de la prepararea soluiei.


82
0.2
1
0.4
0.6
0.8
250 400 300 350
Abs
Wavelength [nm]

Figura 39. Spectrele suprapuse n UV pentru meloxicam soluie de referin
iniial(rou) respectiv dup 24 de ore (verde) n domeniul spectral 250 400 nm

S-a procedat n mod similar cu soluia obinut din fiolele de Movalis
sol.inj.15mg/1,5mL.
0.2
1
0.4
0.6
0.8
250 400 300 350
Abs
Wavelength [nm]

Figura 40. Spectrul n UV pentru Movalis soluie injectabil n domeniul spectral
250 400 nm la 24 de ore de la prepararea soluiei




83
0.2
1
0.4
0.6
0.8
250 400 300 350
Abs
Wavelength [nm]

Figura 41. Spectrele suprapuse n UV pentru Movalis soluie injectabil iniial(verde)
respectiv dup 24 de ore (roz) n domeniul spectral 250 400 nm

Calculul concentraiei de meloxicam pe 1,5 mL soluie injectabil de Movalis la 24 de
ore de la prepararea soluiilor:
Susbstan activ mg / 1,5mL =
A
P362(24h)
= absorbana soluiei prob la
max
362 nm la 24 de ore de la prepararea soluiei
m
Et
= masa de meloxicam s.r. cntrit = 0,0076 g
A
Et362(24h)
= absorbana soluiei etalon msurat la
max
362 nm la 24 de ore de la prepararea
soluiei

Tabelul XXI. Rezultatele obinute la dozarea meloxicamului din fiole
dup 24 de ore de la prepararea soluiilor
A
P362(24h)
0,73442
Meloxicam gsit
pe 1,5 mL sol.inj.
Meloxicam gsit
fa de declarat (%)
A
Et362(24h)
0,75753 14,7362 mg 98,24%


84

Verificarea stabilitii probelor la 72 de ore de la preparare
0.2
1
0.4
0.6
0.8
250 400 300 350
Abs
Wavelength [nm]

Figura 42. Spectrul n UV pentru meloxicam soluie din substan de referin n
domeniul spectral 250 400 nm la 72 de ore de la prepararea soluiei

Spectrul soluiei de meloxicam substan de referin obinut inial a fost suprapus
peste spectrul aceleiai soluii nregistrat la 24 de ore de la prepararea soluiei.

0.2
1
0.4
0.6
0.8
250 400 300 350
Abs
Wavelength [nm]

Figura 43. Spectrele suprapuse n UV pentru meloxicam soluie de referin
iniial(rou) respectiv dup 72 de ore (albastru) n domeniul spectral 250 400 nm


85
S-a procedat n mod similar cu soluia obinut din fiolele de Movalis
sol.inj.15mg/1,5mL.
0.2
1
0.4
0.6
0.8
250 400 300 350
Abs
Wavelength [nm]

Figura 44. Spectrul n UV pentru Movalis soluie injectabil n domeniul spectral 250
400 nm la 72 de ore de la prepararea soluiei

0.2
1
0.4
0.6
0.8
250 400 300 350
Abs
Wavelength [nm]

Figura 45. Spectrele suprapuse n UV pentru Movalis soluie de injectabil
iniial(verde) respectiv dup 72 de ore (galben) n domeniul spectral 250 400 nm

Calculul concentraiei de meloxicam pe 1,5 mL soluie injectabil de Movalis la 72 de
ore de la prepararea soluiilor:


86
Susbstan activ mg / 1,5mL =
A
P362(72h)
= absorbana soluiei prob la
max
362 nm la 72 de ore de la prepararea soluiei
m
Et
= masa de meloxicam s.r. cntrit = 0,0076 g
A
Et362(72)
= absorbana soluiei etalon msurat la
max
362 nm la 72 de ore de la prepararea
soluiei

Tabelul XXII. Rezultatele obinute la dozarea meloxicamului din fiole
dup 72 de ore de la prepararea soluiilor
A
P362(72h)
0,73079
Meloxicam gsit
pe 1,5 mL sol.inj.
Meloxicam gsit
fa de declarat (%)
A
Et362(72h)
0,75682 14,6772 mg 97,84%


Verificarea stabilitii probelor la 168 de ore de la preparare
0.2
1
0.4
0.6
0.8
250 400 300 350
Abs
Wavelength [nm]

Figura 46. Spectrul n UV pentru meloxicam soluie din substan de referin n
domeniul spectral 250 400 nm la 168 de ore de la prepararea soluiei
Spectrul soluiei de meloxicam substan de referin obinut inial a fost suprapus
peste spectrul aceleiai soluii nregistrat la 168 de ore de la prepararea soluiei.


87

0.2
1
0.4
0.6
0.8
250 400 300 350
Abs
Wavelength [nm]

Figura 47. Spectrele suprapuse n UV pentru meloxicam soluie de referin
iniial(rou) respectiv dup 168 de ore (mov) n domeniul spectral 250 400 nm

S-a procedat n mod similar cu soluia obinut din fiolele de Movalis
sol.inj.15mg/1,5mL.
0.2
1
0.4
0.6
0.8
250 400 300 350
Abs
Wavelength [nm]

Figura 48. Spectrul n UV pentru Movalis soluie injectabil n domeniul spectral 250
400 nm la 168 de ore de la prepararea soluiei


88
0.2
1
0.4
0.6
0.8
250 400 300 350
Abs
Wavelength [nm]

Figura 49. Spectrele suprapuse n UV pentru Movalis soluie de injectabil
iniial(verde) respectiv dup 168 de ore (turcoaz) n domeniul spectral 250 400 nm

Calculul concentraiei de meloxicam pe 1,5 mL soluie injectabil de Movalis la 168 de
ore de la prepararea soluiilor:
Susbstan activ mg / 1,5mL =
A
P362(168h)
= absorbana soluiei prob la
max
362 nm la 168 de ore de la prepararea soluiei
m
Et
= masa de meloxicam s.r. cntrit = 0,0076 g
A
Et362(168h)
= absorbana soluiei etalon msurat la
max
362 nm la 168 de ore de la
prepararea soluiei

Tabelul XXIII. Rezultatele obinute la dozarea meloxicamului din fiole
dup 168 de ore de la prepararea soluiilor
A
P362(168h)
0,72327
Meloxicam gsit
pe 1,5 mL sol.inj.
Meloxicam gsit
fa de declarat (%)
A
Et362(168h)
0,75509 14,5594 mg 97,06%



89
0.2
1
0.4
0.6
0.8
250 400 300 350
Abs
Wavelength [nm]

Figura 50. Spectrele suprapuse n UV pentru Movalis soluie de injectabil
iniial(verde), dup 24 de ore(roz), dup 72 de ore (galben)i respectiv dup 168 de
ore(turcoaz) n domeniul spectral 250 400 nm
0.2
1
0.4
0.6
0.8
250 400 300 350
Abs
Wavelength [nm]

Figura 51. Spectrele suprapuse n UV pentru meloxicam soluie de etalon iniial(rou),
dup 24 de ore(verde), dup 72 de ore (albastru)i respectiv dup 168 de ore(mov) n
domeniul spectral 250 400 nm

Concluzie: Nu se observ variaii importante ale absorbanelor, soluiile fiind stabile
mai mult de 72 de ore, respectiv pn la 168 de ore n condiiile de pstrare menionate. n
urma determinrii concentraiilor de meloxicam obinute dup fiecare interval de timp se
observ faptul c dup fiecare determinare s-a obinut un coninut de substan activ mai
mare de 95%.
Testarea stabilitii soluiilor obinute din meloxicam substan de referin respectiv
din soluia injectabil de Movalis 15 mg/1,5 mL s-a efecuat n scopul evalurii robusteei
metodei.


90
Concluzii

Lucrarea intitulat Controlul calitii produsului farmaceutic Movalis 15 mg/1,5 mL
soluie injectabil este structurat n dou pri, o parte general i o parte experimental.
Partea general cuprinde informaii cu privire la proprietile fizico-chimice i
farmacologice ale meloxicamului, cu detalierea proprietilor farmacocinetice, a
mecanismului de aciune, a indicaiilor terapeutice i a reaciilor adverse ale soluiei
injectabile de Movalis. Au fost descrise prevederile Farmacopeei Britanice privind analiza
meloxicamului din tablete i prevederile Farmacopeei Americane privind meloxicamul ca
atare, monografii care au fost ulterior folosite la elaborarea unor metode de analiz a soluiei
injectabile de Movalis.
Partea general mai cuprinde date din literatura de specialitate referitoare la stadiul
actual al cunoaterii privind analiza cantitativ a meloxicamului ca atare i din diverse forme
farmaceutice, utiliznd spectrofotometria UV-VIS, cromatografia de lichide de nalt
performan, precum i alte metode de analiz. Un capitol este destinat aspectelor teoretice
ale metodelor spectrofotometrice UV-VIS n controlul medicamentului i nu n ultimul rnd,
un alt capitol cuprinde monografia soluiilor injectabile din Farmacopeea Romn ediia a
X-a i cea din Farmacopeea European ediia 6.
n partea experimental ne-am propus controlul calitii produsului farmaceutic
Movalis 15 mg/1,5 mL soluie injectabil, plecnd de la prevederile monografiei
Iniectabilia din FR X.
Am determinat urmtorii parametrii de control ai produsului: aspectul i culoarea
soluiei injectabile, uniformitatea volumului determinat pe zece uniti de produs analizat,
identificarea i dozarea meloxicamului din soluia injectabil i verificarea influenei
excipienilor din soluia injectabil asupra dozrii meloxicamului.
Pentru identificarea produsului, pornind de la prevederile Farmacopeei Britanice, am
dezvoltat o metod spectrofotometric UV a meloxicamului n soluie tampon fosfat pH =
7,4. Meloxicamul n soluie tampon fosfat prezint un maxim de absorbie la 362 nm.
Identificarea s-a realizat prin compararea spectrului soluiei etalon de meloxicam cu spectrul
soluiei injectabile de Movalis, obinndu-se dou spectre identice cu maxim de absorbie la
362 de nm. Determinarea a fost completat cu identificarea meloxicamului prin reacia de
culoare cu FeCl
3
, cnd apare o coloraie roie-viinie.
Pentru verificarea influenei excipienilor asupra dozrii meloxicamului din soluia
injectabil de Movalis, am elaborat o metod HPLC pornind de la prevederile parametrului


91
dozare din Farmacopeea American. Am determinat iniial liniaritatea i domeniul de
liniaritate pe o serie de opt soluii etalon de meloxicam substan de referin. S-a observat
dependena liniar a absorbanei fa de concentraie pe domeniul 0,053356-0,41368 mg/mL,
cu un coeficient de corelaie R
2
= 0,9999. S-au comparat timpii de retenie ai excipienilor cu
timpul de retenie al meloxicamului i s-a ajuns la concluzia c excipienii nu influenteaz
determinarea deoarece nu apar picuri suplimentare la timpii de retenie corespunztori
meloxicamului.
Pentru determinarea cantitativ a meloxicamului din soluia injectabil de Movalis
am elaborat o metod spectrofotometric n UV plecnd de la prevederile FR X.
La instituirea metodei spectrofotometrice s-au determinat inial linearitatea i
domeniul de linearitate. Dependena linear a absorbanei funcie de concentraie a unor serii
de diluii a fost determinat n intervalul de concentraie 0,01064 0,01824 mg/mL
meloxicam substan de referin. Studiul valorilor absorbanelor ca funcie de concentraie
prin analiza de regresie liniar a condus la un coeficient de corelaie R
2
= 0,999680 (criteriul
de acceptabilitate 0,99).
Metoda spectrofotometric elaborat de noi poate fi utilizat cu succes la dozarea
meloxicamului din fiole, procentul de meloxicam obinut n urma aplicrii acestei metode
fiind de 100,12% din coninutul declarat de productor i nscriindu-se astfel n limitele de
admisibilitate prevzute de Farmacopeea European.
Am verificat repetabilitatea metodei spectrofotometrice elaborate prin determinarea
absorbanelor unei serii de ase soluii etalon de meloxicam cu concentraia de 1,50191
mg/1,5 mL i calcularea abaterii standard i abaterii standard relative. Rezultatele obinute au
fost mai mici de 2% ceea ce demonstreaz repetabilitatea metodei.
n scopul determinrii robusteei metodei am verificat stabilitatea soluiilor obinute
din meloxicam substan de referin respectiv din soluie injectabil de Movalis prin
determinarea concentraiei de meloxicam/1,5 mL dup intervalele de timp de 24, 72 i 168
de ore de la prepararea soluiilor. Nu s-au observat variaii importante ale absorbanelor,
soluiile fiind stabile pe tot intervalul de timp testat.
Determinrile efectuate asupra produsului farmaceutic analizat, Movalis soluie
injectabil 15 mg/1,5 mL, duc la concluzia c acesta corespunde normelor de calitate
prevzute de legislaia n vigoare pentru toi parametrii analizai.


92
Bibliografie

1. Abd Elbary A., Foda N., Elkhateeb M. - Reversed phase liquid chromatographic
determination of meloxicam in human plasma and its pharmacokinetic application,
Analytical Letters, Volume 34, Issue 7, 2001, pages 1175-1187
2. Al-Momani I.F. - Indirect Flow-Injection Spectrophotometric Determination of
Meloxicam, Tenoxicam and Piroxicam in Pharmaceutical Formulations, Analytical
sciences, decembrie 2006, vol. 22, pag 1611-1614
3. Ananth V., Venkatamahesh R., Ulaganathan C., Balaji M., Sachin Kumar Singh -
Development and validation of spectrophotometric methods for quantitative estimation
of Meloxicam in bulk and pharmaceutical dosage forms, Der Pharma Chemica, 2011,
Vol 3(2), pag 352-357
4. Bae J.W. et al - Determination of meloxicam in human plasma using a HPLC method
with UV detection and its application to a pharmacokinetic study, J Chromatogr B Analyt
Tehnol Biomed Life Sci, 2007, 859: 69-73
5. Brc M. - Controlul medicamentelor, Editura Technoplast Company SRL, Bucureti,
2010
6. Bebawy L.I. - Stability -indicating method for the determination of meloxicam and
tetracaine hydrochloride in the presence of their degradation products, Spectroscopy
Letters, Volumul 31, Nr 4, 1998, pag 797-820
7. Boji M., Muntean D.L. - Controlul medicamentelor: metode spectrale, cromatografice
i electroforetice de analiz, Ed. Medical Universitar Iuliu Haieganu, Cluj-Napoca,
2004
8. Boji M., Roman L., Sndulescu R., Oprean R. - Analiza i controlul medicamentelor,
vol. II. Metode instrumentale n analiza i controlul medicamentelor, Editura Intelcredo,
2003
9. Cristea A.N. - Tratat de farmacologie, Ediia I, Editura Medical, Bucureti, 2012
10. Culita C.D., Alexandrova R., Dyakova L., Marinescu G., Patron L., Kalfin R.,
Alexandrov M. - Evaluation of cytotoxic and antiproliferative activity of Co(II), Ni(II),
Cu(II) and Zn(II) complexes with meloxicam on virus-transformed tumor cells, Revista
de chimie, vol 63, Nr 4, 2012, pag. 384-389
11. Dhandapani B., Eswara Murali S., Susrutha N., Rama S., Sonia Rani S.K., Sarath Babu
T., Seetharamanjaneyulu G.V., Celestin Baboo R.V. - Spectrophotometric estimation of


93
meloxicam in bulk and its pharmaceutical formulations, International Journal of Pharma
Sciences and Research, Vol.1(4), 2010, pag 217-221
12. Dobrescu D. - Farmacoterapie practic, Vol. I, II, Ed. Medical, Bucureti, 1989
13. Dobrescu D., Negre S. et al. Memomed: Memorator de farmacologie alopat, vol 1,
ediia 19, Editura Universitar, Bucureti, 2013
14. Ekram M.H. - Spectrophotometric and fluorimetric methods for the determination of
meloxicam in dosage forms, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,
Volumul 27, Nr 5, 1 Februarie 2002, pag 771-777
15. Farzana S.B. and Pradeep R.V. - A Stability Indicating HPLC Method for the
Determination of Meloxicam in Bulk and Commercial Formulations, Tropical Journal of
Pharmaceutical Research, Iunie 2009; 8 (3): 257-264
16. Ganesh M., Hemalatha P., Peng M.M., Sakthimanigandan K., Tae Jang H. - Estimation
of meloxicam in human plasma by liquid chromatography-tandem mass spectrometry
(lc-ms/ms), Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, Volume 36,
Issue 7, 2013, pag 867-880
17. Garc

a M.S., Snchez-Pedreo C., Albero M.I., Mart

J.- Spectrophotometric methods

for determining meloxicam in pharmaceuticals using batch and flow-injection
procedures, European Journal of Pharmaceutical Sciences, Ianuarie 2000, Volumul 9,
Nr 3, pag 311-316
18. Gurupadayya B.M., Trinath M.N., Shipla K. - Spectrophotometric determination of
meloxicam by sodium nitroprusside and 1,10-phenantroline reagents in bulk and its
pharmaceutical formulation, Indian Journal of Chemical Technology, Vol 20, martie
2013, pag. 111-115
19. Hui X., Anigbogu A., Singh P., Xiong G., Poblete N., Liu P., Maibach H.I. -
Pharmacokinetic and local tissue disposition of [14C]sodium Diclofenac following
iontophoresis and systemic administration in rabbits. J Pharm Sci (2001); 90: 126976
20. Joseph-Charles J., Bertucat M. - Simultaneous high-performance liquid chromatography
analysis of non-steroidal antiinflammatory oxicams in pharmaceutical preparations,
Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, Jul 1999, Vol.: 22, (13), pag.
2009-2021
21. Joseph-Charles M., Bertucat M.- Determination of Meloxicam in Tablet Formulations by
Ultraviolet Spectrophotometry and High-Performance Liquid Chromatography,
Analytical Letters, Volume 32, Issue 10, 1999, pages 2051-2059


94
22. Luger P., Daneck K., Engel W., Trummlitz G. and Wagner K. - Structure and
physicochemical properties of Meloxicam, a new NSAID, European Journal of
Pharmaceutical Sciences, 1996, Vol, 4, 3, 175-187
23. Mndrescu M., Pac A.F., Dorneanu V. - Spectrophotometric determination of meloxicam,
Revista de chimie (Bucureti) Vol 60, Nr.2, 2009, pag 160-163
24. Muller M., Mascher H., Kikuta C., Schtier S., Brunner M., Dorner G., Eichler H.G. -
Diclofenac concentrations in defined tissue layers after topical administration, Clin
Pharmacol Ther (1997); 62:2939
25. Murarau A.E., Mndrescu M., pac A.F., Dorneanu V. A turbidimetric method for the
assay of meloxicam using molybdophosphoric acid, Revista Farmacia, Vol. 58, Nr. 3,
2010, pag. 315 321
26. Murrau A.E. - Metode analitice pentru unele antiinflamatoare nesteroidiene, tez de
doctorat, 2010
27. Negru M., Samoil M., Anghel L. et al. MedEx: Medicamente explicate, Editura Medic
Art, Bucureti, 2013
28. Nemutlu E., Kir S. - Validated Determination of Meloxicam in Tablets by Using UV
spectrophotometry, Hacettepe University, Journal of Faculty of Pharmacy, Volumul 24,
Nr 1, Ianuarie 2004, pag. 13-24
29. Nemutlu E., Kir S. - Method development and validation for the analysis of meloxicam
in tablets by CZE, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, Volumul 31, Nr
2, 26 Februarie 2003, pag 393400
30. Radi A., El Ries M.A., El-Anwar F., El-Sherif Z. - Electrochemical oxidation of
meloxicam and its determination in tablet dosage form, Analytical Letter, Volumul 34, Nr
5, 2001, pag 739-748
31. Reddy M.N., Murthy T.K., Rajita K., Shankar D.G. - New Spectrophotometric Methods
For The Determination Of Meloxicam, Indian Journal of Pharmaceutical Sciences,
2001, Volumul 63, Nr 3, pag 245-247
32. Sahoo N.K., Sahu M., Rao P.S., Rani N.S., Indira Devi JNV, Ghosh G. - Validation of
assay indicating method development of meloxicam in bulk and some of its tablet dosage
forms by RP-HPLC, SpringerPlus, 2014, 3, pag 95
33. Schmid J., Prox A., Busch U., Kaschke S., Sauter T. - The biotransformation of
Meloxicam in man and rat, Scand J Rheumatol, 1994, Suppl 9, A118
34. Shaji J., Varkey D. - Development and validation of a reverse phase-HPLC method for
determination of meloxicam in pharmaceutical dosage forms and human plasma,


95
International Journal of Pharmaceutical Sciences Review and Research, ianuarie-
februarie 2012; Volumul 12, Nr. 1, Articol-028, Pagina 152- 160
35. Shaji J., Vinay Jain P., Kundnani K.M. - Reverse phase HPLC method development and
validation for determination of meloxicam in bulk and pharmaceutical formulation,
International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 2011; Vol. 2 (issue 1):
107-115
36. Taha E.A., Salama N.N., Abdel F.L.S. - Stability-indicating methods for determination of
meloxicam and tenoxicam in the presence of their degradation products, Spectroscopy
Letters, Egypt, Jul 2002, Vol.: 35 (4), Pag. 501-516
37. Turck D., Busch U., Heinzel G., Narjes H. - Clinical pharmacokinetics of Meloxicam.
Eur J Rheumatol Inflamm, 1995, 15:22-34
38. Velpandian T., Jaiswal J., Bhardwaj R.K., Gupta S.K. - Development and validation of a
new high-performance liquid chromatographic estimation method of meloxicam in
biological samples, Journal of Chromatography, B: Biomedical Applications, Feb 2000,
Vol.: 738 (2), pag. 431-436
39. Zang H., Choi H.K. - Analysis of meloxicam by high-performance liquid
chromatography with cloud-point extraction, Anal BioAnal Chem, 2008, 392: 947-953
40. *** British Pharmacopoeia 2009
41. *** European Pharmacopoeia 6
th
edition 2007, 0520
42. *** Farmacopeea Romn, ediia a X-a, Editura Medical, Bucureti, 1993
43. *** United States Pharmacopoeia - buletin revizuit Oficial , 1 martie 2012
44. *** http://www.rxlist.com/mobic-drug.htm
45. *** RCP Rezumatul caracteristicilor produsului Movalis soluie injectabil 15 mg/1,5
mL - http://www.anm.ro/_/_RCP/RCP_708_06.05.08.pdf?anmPage=837&ID=16737
46. *** http://www.mymed.ro/antiinflamatoarele-nesteroidiene-ains.html