Genul Staphylococcus

Etapele diagnosticului de laborator in infectia cu

Staphylococcus spp.
Stafilococi coagulazo-pozitivi: S. aureus
Stafilococi coagulazo-negativi (SCN) cu iportan!" clinic": S. lugdunensis, S.
schleiferi, S. epidermidis, S.haemolyticus, S. saprophyticus. etc
#roduse patologice
portaj: secreie din cavitatea nazal anterioar, secreie faringian, probe de pe
tegumente (zona axilar, perianal)
plgi, otite, infecii tegumentare puroiul (S. aureus)
infecii urinare urin (S. saprophyticus, S. aureus)
infecii gastro-intestinale, toxiinfecii alimentare materii fecale, vomismente,
alimente.
meningite !"
septicemie, febr puerperal, s#nge pt $emocultura (S. aureus, %!&)
pneumonie, sput.
infecii nosocomiale - S. aureus meticilino-rezistent ('"%(, %("' ),
%!& meticilino-rezistent-('"%)
S. aureus intermediar vancomicina ()*%()
S. aureus rezistent la vancomicina ( )"%()
+
$ecoltare produs patologic
#$%&'S $EC%()*$E
a)C*N)+)*)E
b))$*NS#%$)
%,SE$-*)++
RESPECTA PRECAUTIUNIE
UNI!ERSAE
*,CES
&ESC.+S
+NC.+S
&ezinfecteaza cu
alcool etilic /012
betadina. &aca
este necesar iriga
leziunea cu o
solutie salina non-
inhibitorie.
*spira cu o
seringa sterila
( de preferat ) sau
cu tapon steril2
profund din
leziune.
*spira cu o
seringa sterila.
)ransfera iediat
aseptic tot
aterialul intr-un
siste anaerob.
a) 3 4l2 sau
5 tapoane din
acelasi loc.
b) 6 5 h.

a) 3 4 l
b) 6 5 h2 siste
anaerob de
transport
Se recoanda recoltarea cu seringa
sterila prin aspiratie sau biopsie. &aca
se recolteaza cu taponul2 este
obligatorie recoltarea a doua tapoane
din profunziea leziunii ( 4 tapon
pentru insaantare si 4 tapon pentru
frotiul Gra ).
7ediul de transport Stuart sau *ies.
Evita containarea produsului
patologic in oentul recoltarii cu
bacterii ce nu sunt iplicate in procesul
infectios.
Sisteul anaerob de transport este
obligatoriu pentru a asigura
supravietuirea bacteriilor anaerobe
iplicate in procesul infectios. Siste
anaerob : #$*S transport ediu2
*ccu- CulShure -o8ygen free-s9ab2
containere fara o8igen pentru biopsiile
de tesut.. (vezi ane8a nr.:)
*celeasi recoandari la recoltare
pentru: vezicule2 pustule2plaga2 flictene2
furuncule2 arsuri2 ulcer decubit2 fistule2
plaga uscata2etc
Gangrena : se recolteaza si
heocultura in acelasi tip.
,

E8aenul acroscopic: puroi cremos, filamentos, glbui.
E8aenul icroscopic direct - frotiu din produsului patologic (pp)
coloraia .ram: coci .ram pozitivi, dispu/i 0n grmezi asemntoare ciorc$inilor
de strugure
coci .ram pozitivi localizati intra si perileucocitar1 prezenta celulelor inflamatorii
este dovada ca s-a recoltat un produs patologic real, de la nivelul procesului
infectios
Gra stain of Staphylococcus aureus in pustular e8udate
2
+nsaantarea pp
se insamanteaza in poligon desc$is ( fara o latura) 3 pe medii solide, in scopul
obtinerii coloniilor microbiene izolate: geloza-sange sau !olumbia 3sange,
mediul !$apman
4
se insamanteaza si in mediu lic$id de imbogatire 3 56*

+ncubare aerob" la 278!, +9 3 ,4 ore.
+dentificarea bacteriei:
Caractere orfotinctoriale: frotiu din cultur" pur" : coci .ram pozitivi, 0n
grmezi.
Caractere de cultur": colonii :%; pigmentate sau nepigmentate ( medii solide)
'edii lic$ide- tulbura uniform bulionul cu depozit moderat la fundul tubului
<
#roducerea de heolizine 3 pe geloz-s#nge
$emoliza beta (S. aureus,) datorat $emolizinei alfa
nu prezint $emoliz (majoritatea tulpinilor %!&)
&escopunerea anitolului pe mediul !$apman (manito-pozitiv, colonii galbene, S.
aureus)
=

() Staphylococcus aureus, (5) Staphylococcus epidermidis, and (!) Escherichia
coli strea>ed on a mannitol salt agar plate. ?$e mannitol fermenting colon@
(@elloA) is S. aureus, A$ile t$e mannitol nonfermenting colon@ (pin>) is S.
epidermidis. ?$e groAt$ of E. coli Aas in$ibited b@ t$e $ig$ salt concentration.
7
Caractere biochiice:
)estul catalazei
&iferentiaza coloniile de staphylococ de cele de streptococ.
Beoarece ambele bacterii cresc pe mediu cu sange se recomanda folosirea doar a
varfurilor coloniilor de stafilococ sau streptococ pentru a evita reactii fals pozitive
datorita catalazei eritrocitare(din mediu cu geloza 3sange).
Ce o lama de microscop depune +-, picaturi de 6
,
D
,
,
peste picatura de reactiv se adauga
coloniile testate.
Citire si interpretare:
?est pozitiv-aparitia bulelor de gaz pana la efervescenta
?est negativ-absenta bulelor
+dentificarea Staphylococcus aureus
%e face prin testul coagulazei pe laa , stafilococul auriu fiind productor de coagulaz.
Ce o lam de microscop se pune o pictur de plasm . En pictur se omogenizeaz cu
grij o ans din cultura pur a bacteriei de identificat. Dmogenizarea se continu
imprim#nd lamei mi/cri de rotaie.
Citire si interpretare
?est pozitiv-apariia de grunji, care las pictura limpede 0nseamn reacie
pozitiv.
?est negativ- amestecul rm#ne omogen1Drice reactie negativa se continua cu
testarea coagulazei in tub.
9
)estul coagulazei in tub -F,< ml plasma se incubeaza cu F.< ml cultura de ,4 ore a
tulpinii de testat in bulion glucozat,.la 27 ! pentru patru ore.
Citire si interpretare
"ezultat pozitiv presupune aparitia unui coagul, se poate prelungi incubarea
probei pana la +=-+9 ore, daca coagulul nu a aparut in primele patru ore, cu
verificarea periodica a probei
"ezultat negativ-lipsa coagulului
coagulaza liber pozitiv: S. aureus;
coagulaza liber negativ: stafilococi coagulazo-negativi (%!&)
G
+dentificarea S.aureus -test rapid:
Slide8 Staph #lus este un test rapid de latex aglutinare
pentru identificarea Staphylococcus aureus izolat pe mediile de cultura
rezultat negativ, absent S.aureus


+
;erenteaz" glucoza, manitolul, lactoza, za$aroza etc. cu producere de acid
?ruse (C* de identificare bioc$imica

)ipizarea bacteriilor: pentru identificarea sursei de infecie, compararea tulpinilor
izolate
prin lizotipie (determinarea sensibilitii stafilococului fa de bacteriofagi1)
prin metode de biologie molecular
*ntibiograa 3 testeaza sensibilitatea tulpinilor izolate
'ediul 'uller 6inton, inocul F.< 'cHarland, temp 2< !, incubare +9 pana la ,4 ore
(legerea discurilor pentru testarea sensibilitatii prin metoda difuzimetrica, interpretarea
rezultatelor conform Performance standards for antimicrobial susceptibility
testing;
!%* I,FFG( anterior numit &!!%)
+


antibiograma J-?J%?
pentru tulpinile cu inalta rezistenta la antibiotice
Modul de desfasurare a lucrarii practice
studentii primesc manuscrisul cu etapele diagnosticului de laborator in
infectia cu Staphylococcus spp.
1. Lp se desfasoara interactiv- se discuta pe marginea manuscrisului primit
anterior LP-ului
2. Fiecare student efectueaza reactia catalazei
+
3. material demonstrativ- lucreaza doar asistentul -testul slidex Staph Plus
4. material demonstrativ-medii de cultura-Columbia-sange -colonii de
S. aureus, studentii recunosc coloniile de tip S, recunosc coloniile beta
hemolitice si non-hemolitice
5. material demonstrativ-trusa API pentru identificarea biochimica
=. antibiograma S.aureus, studentii masoara diametrele si noteaza in caiet,
interpretare conform CLSI/2009, Staphylococcus spp.
7. Fiecare student prinde imaginea la microscop si examineaza frotiuri :coci
Gram pozitivi in gramezi
Bibliografie
Bacteriologie Medicala, Olga Dorobat, editura UTM, 2006
Clinical Microbiology Procedures Handbook, Henry D. Isenberg, editata
American Society for Microbiology, 2004
Koneman's Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology , Washington
C Winn, Stephen D. Allen, Gail L. Woods, William M. Janda, Paul C.
Schreckenberger , editura Lippincott Williams & Wilkins, 2005
Manual of Clinical Microbiology , Patrick R. Murray ,
Ellen Jo Baron , Michael A. Pfaller , Fred C. Tenover , Robert H. Yolken, editura
ASM, 2007
Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing.M 100, S19
CLSI /2009
+