NANOPARTICULE DE ARGINT

Student: Carmen-Alina Clin

SIMONa an III

CUPRINS

1.Introducere..3
2.Obinerea de noi nanoparticule de Ag plasmonice nvelite n chitosan pentru detecie
biomolecular i activitate antibacterian 5
3. Activitatea antibacterian Sinergistic a nanocompozitelor de chitosan-argint asupra
Staphylococcus Aureus .9
4.Concluzii12
5.Bibliografie.13

1.Introducere

Avnd n vedere evoluia, designul, sinteza i manipularea structurii particulelor, cu

dimensiuni cuprinse ntre 1-100 nm, dezvoltarea nanotehnologiilor a deschis noi frontiere
fundamentale ale aplicabilitii, incluznd sinteza materialelor la scar nano-, exploatarea i
utilizarea proprietilor fizico-chimice i optoelectronice.[1]
Nanotehnologiile devin din ce n ce mai importante n diferite domenii, cum ar fi:
sntate, protecia mediului, cosmetic, alimentaie, electronic, mecanic, energetic,
aerospaial, medicamente, optoelectronic, catalizatori, emitori de lumin, tranzistori,
reproducere de materiale grafice, dispozitive optice neliniare, aplicaii fotoelectrochimice etc..
nainte de anii 1980, interesul tiinific i practic al nanoparticulelor de argint (Ag) s-a datorat
posibilitii folosirii acestora ca suport de dispersie pentru consolidarea semnalelor moleculelor
organice n spectroscopia Raman . De asemenea, agenii antibacterieni (ex. Colargol) pe baz de
Ag coloidal s-au dovedit a fi foarte eficieni n medicin. Studiile fundamentale puse n practic
n anii 1980-1990 au artat c nanoparticulele de Ag dein o combinaie rar de proprieti,
proprieti optice unice asociate cu rezonana plasmonilor de suprafa, suprafee bine dezvoltate,
activitate catalitic, capacitate electric bun a dublului strat electric etc.[1]
Din aceste motive, nanoparticulele servesc drept material n dezvoltarea noii generaii de
componente electronice, optice i a dispozitivelor senzoriale. n ultimii 20 de ani, trendul
realizrii miniaturizrilor i necesitatea modernizrii proceselor tehnologice au condus la apariia
de publicaii tiinifice dedicate sintezelor i proprietilor nanoparticulelor de Ag. n prezent,
sinteza lor reprezint o ramur foarte activ de dezvoltare a chimiei coloidale. Dei
nanoparticulele de Ag au proprietii optice excelente i dein abilitatea unic de a amplifica
semnalele n spectroscopia de fluorescen i spectroscopia Raman , particulele de aur (Au) au
aplicaii tiinifice i practice pe scar mai larg datorit rigiditii i a sintezei lor mai simple .
Pe de alt parte, nanoparticulele de Ag nestabilizate ntr-un mod adecvat sufer o oxidare rapid
i o uoar agregare n soluie, ceea ce complic utilizarea in domeniul senzorilor i al
instrumentelor optice. Ag este mai reactiv dect Au, iar ca o consecin, trebuie elaborate n
primul rnd metodele de sintez i de stabilizare a nanoparticulelor cu distribuie ngust a
dimensiunilor. [1]
Bine-cunoscuta problem a cuplrii sintezei nanoparticulelor cu prepararea unui
modificator de suprafa corespunztor este un obstacol de nenvins n producia i stabilizarea
nanomaterialelor i a aplicaiilor lor ulterioare .[1]
Atunci cnd dimensiunea unui material se apropie de scar nanometric, proprietile sale
fizice i chimice se modific substanial. Cel mai spectaculos fenomen este culoarea strlucitoare
a nanoparticulelor coloidale, care este rezultatul interaciunilor electromagnetice dintre lumina
incident i electronii de conducie din nanoparticulele metalice. n acest caz lumina incident se
cupleaz cu frecvena de oscilaie a electronilor de conducie n nanoparticulele de metal nobil,
3

producnd aa numitele rezonane plasmonice de suprafa (SPR), care determin apariia unei
benzi de absorbie intense n sprectrul vizibil . In cazul nanoparticulelor metalice aceste SPR sunt
localizate la suprafaa nanoparticuleor i se numesc rezonane plasmonice de suprafata localizate
(LSPR)[2].
Datorita proprietilor lor chimice, electronice i plasmonice excepionale,
nanoparticulele metalice sunt foarte atractive pentru o gam larg de aplicaii biomedicale cum
sunt: detecia molecular, diagnosticul molecular, aciunea antibacterian, transportul
medicamentelor, terapia cancerului [2]
Efectul antibacterian al nanoparticulelor de argint faa de bacteriile Gram-negative i
Gram-positive a fost exploatat ntr-un numr mare de studii. Totui, mecanismul lor de toxicitate
este doar parial explicat. Numeroase studii sugereaz faptul c nanoparticulele interacioneaz
cu membrana celular i c unele dintre acestea penetreaz peretele celular bacterian, cauznd
astfel moartea bacteriilor. [2].
Unele ipoteze susin faptul c mecanismul antimicrobian al nanoparticulelor de argint
este mediat de formarea radicalilor liberi, care produc distrugerea membranei bacteriene i
respectiv, moartea celulara . Un alt mecanism sugereaz faptul c activitatea antimicrobian a
nanoparticulelor se datoreaz ionilor eliberai de acestea . O idee general acceptat este aceea c
efectul antibacterian al nanoparticulelor de argint depinde de diferii parametri, cum sunt
dimensiunea i forma particulelor, precum i stabilitatea acestora n mediul de cretere[2].

2. Obinerea de noi nanoparticule de Ag plasmonice nvelite n chitosan pentru detecie

biomolecular i activitate antibacterian

2.1. Biopolimerul chitosan: proprieti i aplicaii biomedicale

Chitosanul ((-1, 4)-legat de D-glucozamina, N-deacetilat) este un derivat al chitinei, cel

mai rspndit polimer natural dup celuloz i se gsete n exoscheletul artropodelor sau n
pereii celulari ai ciupercilor i drojdiei . Chitosanul se obine prin deacetilarea parial a chitinei
(minim 50 %), aa cum este reprezentat schematic in Figura 1. n consecin, chitosanul este un
polimer natural, biocompatibil, biodegradabil care are proprietatea de a forma filme, prezint o
rezisten mecanic ridicat i este usor de modificat chimic. Deoarece deacetilarea chitinei este
incomplet, chitosanul este un copolimer, compus din glucozamina si N-acetilglucozamina
( Figura 1).[2].

Figura 1
Datorit proprietilor sale unice, chitosanul este un material foarte atractiv pentru
numeroase aplicaii biologice, printre care eliberarea controlat a medicamentelor, agent
antibacterian, agent n vindecarea rnilor, supliment nutriional, agent pentru eliminarea
toxinelor, substrat pentru ingineria esuturilor, membran semipermeabil, etc[2].

2.2.Sinteza nanoparticulelor anizotrope de argint mediat de chitosan

Pentru a sintetiza nanoparticule de argint de dimensiune i form controlabil, am

dezvoltat o metod de sintez mediat de germeni de cretere . Pentru aceasta a fost preparat o
soluie stoc de particule de argint, numite germeni de cretere, prin reducerea azotatului de
argint cu borohidrur de sodiu la temperatura gheii.[2]
5

In al doilea pas a fost preparat un amestec de soluie de germeni de cretere, citrat de

sodiu, acid ascorbic i chitosan, care a fost apoi ncalzit i meninut la temperatura de 352 C.
Peste acest amestec s-au adaugat picaturi de azotat de argint sub continua agitaie magnetic.
Reacia s-a finalizat ntr-un interval de 5 minute, timp n care culoarea soluiei s-a modificat de la
incolor la galben, apoi portocaliu, roz, mov, albastru, turcoaz i, n final, verde inchis. [2]
Caracterizarea detaliat a morfologiei nanoparticulelor de argint a fost obinut prin
msurtorile de microscopie electronic de transmisie (TEM).

Figura 2
Figura 2 ilustreaz o imagine TEM reprezentativ a nanostructurilor de argint sintetizate
care pune n eviden, n mod clar, formarea nanoparticulelor individuale de argint, n special cu
form de triunghiuri sau triunghiuri teite, avnd dimensiunea laturii cuprins ntre 115 nm i
123 nm. Aceste valori au fost obinute prin analiza mai multor imagini TEM.[2]

2.3.Efectul citratului de sodium asupra dimensiunii i morfologiei nanoparticulelor

Pentru nelegerea mecanismului de formare a nanoparticulelor de argint, a fost

investigat efectul relativ al diferiilor componeni de reacie, incluznd concentraia de citrat de
sodiu, chitosan i acid ascorbic. Efectul modificrii concentraiei de citrat de sodiu, n timp ce
ceilali parametri experimentali sunt meninui constani, este semnificativ i o prim ilustrare
este evideniat n mod clar in Figura 3. [2]

Figura 3. Imaginile TEM ale coloizilor de argint preparai prin creterea concentraiei de citrat
de sodiu
Imaginile TEM din Figura 3 pun n eviden evoluia nanoparticulelor, de la formele
sferice iniiale la cele triunghiulare, n funcie de concentraia de citrat de sodiu. Concentraia
ridicat de citrat de sodiu determin formarea, n principal, a nanoparticulelor anizotrope de
dimensiuni mari, cu form de triunghiuri i triunghiiri teite, precum i a unui numr mic de
nanoparticule sferice. Nu se pot obine triunghiuri de argint folosind o concentraie scazut de
citrat de sodiu, particulele sferice fiind produsul principal chiar i dup prelungirea duratei de
sintez(Figura 3-a). Imaginea marit a nanoparticulelor de argint, n Figura 3-h, pune n
eviden, prin colorare n contrast, prezena unui strat subire de chitosan n jurul particulelor.[2]
Pentru a nelege rolul chitosanului s-au efectuat dou experimente comparative, i
anume: (a) n absena chitosanului n soluie i (b) n prezena chitosanului n soluie:

Figura 4. Spectrele UVVISNIR

Figurea 4 ilustreaz spectrele de extincie ale celor dou probe. Din analiza acestora se
constat c, n primul caz spectrul de extincie (a) prezint caracteristici specifice
nanoparticulelor sferice (band dominant la 423 nm), n timp ce n al doilea caz spectrul optic
(b) pune n evidena formarea particulelor triunghiulare confirmat de prezena modului
plasmonic cuadrupolar la 340 nm si a benzii dipolare la 618 nm. Totui, nanotriunghiurile pure
7

pot fi obinute doar n prezena chitosanului i a unei concentraii ridicate de citrat de sodiu, ceea
ce indic faptul c cei doi compui acioneaz synergistic n procesul de crestere anizotrop.[2]

2.4. Stabilitatea nanoparticulelor de chitosan-argint n diferite condiii de mediu

Performana nanoparticulelor de argint n diferite aplicaii nu depinde doar de prepararea

controlat n ceea ce privete dimensiunea i forma acestora, ci i de stabilitatea particulelor n
diferite condiii de mediu, i anume pe durata stocrii, la concentraii de sare, la modificarea pHului, n fluidele biologice, etc. n general, stabilitatea sistemelor coloidale se refer la tendina
acestora de a agrega sau de a sedimenta sub aciunea gravitaiei. Stabilitatea nanoparticulelor
anizotrope n soluie ar trebui tratat, de asemenea, i n ceea ce privete evoluia dimensiunii i a
formei lor n diferite condiii fizice i chimice, incluznd durata depozitrii, modificri de pH,
medii biologice, etc. [2].
n lucrarera de fata a fost investigat stabilitatea nanocompozitelor de chitosan-argint
preparate n ceea ce privete agregarea acestora i conservarea dimensiunii i a formei n diferite
condiii de mediu. Rezultatele au aratat ca lanul biopolimeric adsorbit pe suprafaa acestora
confer nanoparticulelor o protecie electrosteric, meninndu-le segregate n soluie n diferite
condiii de mediu, i anume pe durata stocrii, la concentraii de sare,la diferite valori ale pH-ului
i n mediul celular[2].

3. Activitatea antibacterian Sinergistic a nanocompozitelor de chitosan-argint asupra

Staphylococcus Aureus
3.1.Determinarea valorilor MIC si MBC
n studiul de fa am efectuat teste comparative pentru a evalua impactul nanoparticulelor
de argint, al compozitelor de chitosan-argint i al biopolimerului chitosan asupra a dou tulpini
reprezentative de Staphylococcus aureus (S. aureus) rezistente la meticilin.[2]
Testele au fost efectuate prin incubarea bacteriilor n prezena a diferitelor concentraii de
nanoparticule i chitosan. S-au preparat dou probe suplimentare, i anume controlul negativ
(doar mediu steril de crestere), i controlul pozitiv (suspensie bacterian fr nanoparticule sau
chitosan). Efectele antimicrobiene au fost evaluate determinnd concentraia minim inhibitoare
(MIC) i concentraia minim bactericid (MBC), care reprezint metodele microbiologice
standard de evaluare a proprietilor bacteriostatice i bactericide ale agenilor antimicrobieni.[2]
Creterea bacteriilor a fost evaluat vizual i a fost determinat valoarea MIC
corespunztoare concentraiei minime care inhib complet creterea. Pentru a determina MBC,
au fost extrase din godeurile n care nu a fost vizibil creterea bacteriilor volume identice (100
L) de suspensie bacterian incubat cu nanoparticule sau chitosan i depuse pe plcue de agar
Mueller Hinton. Apoi plcuele au fost incubate la 37C timp de 24 ore. Dup incubare au fost
numrate coloniile formatoare de uniti (CFUs), corespunztoare numrului de celule
supravieuitoare. Valoarea MBC corespunde concentraiei minime care inhib formarea
coloniilor.[2]
Pentru a confirma reproductibilitatea rezultatelor noastre, toate testele antibacteriene au
fost fcute n duplicat i au fost repetate dup cateva zile. Rezultatele sunt prezentate n Tabelul 1
i reprezint valorile medii MIC i MBC pentru fiecare agent antibacterian testat. Deviaia
standard pentru valorile MIC i MBC este, de asemenea, prezentat n Tabelul 1.

Tabel 1
Pentru nanoparticulele de argint fr chitosan valorile MIC i MBC sunt mai mici sau
similare cu cele raportate anterior n literatura . Cnd este aplicat singur, chitosanul exercit
efecte antibacteriene la concentraii similare cu cele prezentate n literatura . Nanoparticulele de
argint nvelite n chitosan, sintetizate att la 0C, ct i la 35C au efecte mai pronunate dect
componenii lor .
Acest fapt este evident n special n ceea ce privete aciunea lor bacteriostatic,
determinat prin valoarea MIC. Efectul sinergistic observat poate fi explicat prin modificarea
9

chimiei suprafeei nanoparticulelor i, n consecin, a proprietilor lor biologice, n urma

acoperirii cu un biopolimer.[2]

3.2.Imagistica AFM a efectelor antibacteriene ale nanoparticulelor de argint asupra

S. aureus

n acest studiu am folosit microscopia de for atomic (AFM) pentru a investiga

modificrile morfologice i structurale induse n celulele de S. aureus, dup expunerea la
nanoparticulele de argint nvelite n chitosan. A fost utilizat modul AC pentru a obine n timpul
scanrii att imaginile topografice AFM, ct i cele de faz ( Figura 5)[2].

Figura 5
Imaginea topografic i cea de faz corespunztoare ( a i d) ilustreaz forma tipic,
aproximativ sferic a unui S. aureus izolat, nainte de expunerea la nanoparticulele de argint.
Dup tratamentul cu nanocompozitele de chitosan-argint se poate observa o modificare
substanial a structurii celulelor de S. aureus[2].
. Imaginile topografice AFM n Figura 5 b si c ilustreaz n mod clar formarea mai multor
cratere adnci n structura biofilmului ca rezultat al ruperii membranei celulare dup incubarea
cu nanoparticulele de chitosan-argint. Mai mult, imaginile de faz corespunztoare (Figura 5 e si
10

f) nu sunt afectate de topografia local i pun n eviden variaiile n interaciunea vrf-proba,

care sunt n concordan cu modificrile proprietilor suprafeei ca urmare a deteriorrii
integritii celulei bacteriene. Analiza de seciune eficace din Figura 5- h i Figura 5-i
demonstreaz c gurile distincte formate n biofilmul de bacterii provin din eliberarea
coninutului bacterian n urma tratamentului cu nanocompozitele de chitosan-argint.[2].

11

4.Concluzii

Nanoparticulele de argint au atras atenia cercettorilor datorit proprietilor unice i

aplicabilitii dovedite n diverse domenii cum ar fi medicina, cataliza, ingineria textilelor,
biotehnologie, tiine bioinginereti, electronice, optic, tratarea apelor etc. Mai mult dect att,
nanoparticulele de argint au efecte inhibitoare semnificative asupra agenilor patogeni
microbieni. [1]
De asemenea, sunt utilizate pe scar larg ca ageni antimicrobieni ntr-o gam divers de
produse de consum, inclusiv spray-uri pentru mprosptarea aerului, osete, perne, papuci,
erveele umede, produse cosmetice, detergeni, spunuri, ampoane, past de dini, filtre de aer
i de ap, frigorifice, aspiratoare, reconstrucii osoase, pansamente chirurgicale, maini de splat,
ambalaje de depozitare a alimentelor i telefoane mobile. [1]
Flexibilitatea metodelor sintetice de obinere a nanoparticulelor de argint i simpla
ncorporare a nanoparticulelor de argint n diferite materiale de stocare au strnit din ce n ce mai
mult interesul cercettorilor de a investiga mai departe mecanismele efectelor antimicrobiene,
antivirale i antiinflamatorii ale acestor nanoparticule.[1]

12

Bibliografie
[1]POPA, I., NICOLA, I.-M., CEAR, V., BOBOC, C., & DANE, C.-A. (2015). Silver
Nanoparticles Synthesis and Applications. Bucureti.
[2]POTARA, M. (2012). Obinerea de noi nanoparticule plasmonice nvelite n
chitosan pentru detecie biomolecular i activitate antibacterian. ClujNapoca.

13