Polimerizarea actinei concomitent cu hidroliza ATP ar putea avea loc n celule nemusculare i ar

putea furniza mecanochimia pentru micare.

Fotografierea electronomicroscopic a filamentelor de actin fibroas au relevat c structura este
constituit din perechi de iruri de actin globular nfurate una n jurul celeilalte, ntr-un dublu
helix. Subunitatea care se repet este de cca. 55 i elicoidul care se repet e de aprox. 370.
Jamey .a. (1999) au artat proprietile caracteristice ale filamentelor de actin.
Legtura actin-miozin. F-actina se combin cu miozina pentru a forma actomiozina. n 0,6 M
KCl, actomiozina formeaz o soluie viscoas; dup adugarea ATP, actomiozina disociaz n
componentele sale, actina i miozina, cu o reducere asociat a viscozitii. La putere ionic
fiziologic, actomiozina e insolubil, la fel ca i n muchi. F-actina se combin de asemenea cu
fragmentele proteolitice ale miozinei, HMM sau S1. Complexul format, actomeremiozina groas
sau actosubfragment 1, rmn solubile la putere ionic sczut. Cnd HMM sau S1 sunt adugate
la filamentele musculare subiri, se ataeaz la componenta actinic a filamentului formnd o
structur specific cap de sgeat (Fig. 21). Aceasta sugereaz o polaritate structural a
filamentelor subiri.
Fig. 19. Polimerizarea actinei n prezena diferiilor ioni.
Curba 1-110 mM NaCl, 3 mM KCl, 3 mM CaCl2, i 10 mM MgSO4;
Curba 2- idem 1 dar fr Mg2+;
Curba 3 - idem 1 dar fr Ca2+;
Curba 4- idem 1dar fr K+.
Temperatura 24o C(dup Feuer i al., 1948).
Fig. 20.Electronmicrografia filamentului de actin.(dup Huxley, H.E.,1972).
Bazndu-se pe aceast observaie, H. E. Huxley a postulat c polaritatea structural a
filamentelor subiri i groase permite forei de alunecare s mute filamentele subiri ctre centrul
sarcomerului (Fig. 22).
Structura tridimensional a actinei. Kabsch i colaboratorii (1990) au fost primii care au
cristalizat G-actina i i-au determinat structura (Fig. 23).
Fig. 21. Fotografie la microscopul electronic a filamentelor subiri decorate cu HMM.
(dup Huxley, H.E., 1972).
Fig. 22. Diagrama polaritii structurale a filamentelor subiri i groase.(dup Huxley, H.E.,
1972).
Fig. 23. Schema structurii actinei.(dup Holmes i Kabsch, 1991).

Plierea moleculei de actin este reprezentat prin banda trasat -elicoidal a atomilor carbon. N
i C corespund gruprilor terminale amino- i respectiv, carboxil. Literele urmate de cifre
reprezint aminoacizii din lanul polipeptidic. O ipotetic linie vertical mparte molecula de
actin n dou domenii mare partea stng i mic, partea dreapt. ATP i Ca2+ sunt localizai
ntre cele dou domenii. Aceste dou domenii mai pot fi subdivizate n cte dou subdomenii
fiecare, domeniul mic fiind compus din subdomeniile 1 i 2, iar domeniul mare, n subdomeniile
3 i 4 (subdomeniul 2 are o mas semnificativ mai sczut fa de celelalte trei subdomenii i
acesta este motivul pentru care se divide actina n domenii mari i mici). Cele patru subdomenii
sunt prinse mpreun, legtura fiind stabilizat mai ales de punile de sruri i legturile de H cu
gruprile fosfat ale legturii ATP i la acestea asociat Ca2+, localizat n centrul moleculei.
Deoarece masa subdomeniului 2 e mai sczut, molecula de actin este distinctiv polar pe o
direcie de la subdomeniile 1 i 3, numite terminaie n barb, ctre subdomeniile 2 i 4,
denumite terminaie ascuit.
Aceast polaritate determin orientarea moleculei de actin n fixarea pe tiparul miozinei
HMM din filamentele subiri, aa cum se observ din Fig. 22. Contactele intersubunitare din
filamentul de F-actin. n structuri elicoidale, cum este filamentul de F-actin, sunt posibile n
principiu, dou tipuri de contacte intersubunitare: cele de-a lungul i cele ntre torsadele
elicoidale cu nlime mare. n modelul atomic al filamentului de Factin, sunt implicate 24
resturi de aminoacizi per subunitate, n contacte de-a lungul torsadelor elicoidale de mare
nlime. n contrast, numai 15 reziduuri per subunitate mediaz contactele mai slabe dintre cele
dou torsade.
Localizarea actinei n structura muchiului. La microscop, se observ miofibrilele de miozin
extrase ale filamentelor subiri, ataate la linia Z. Cnd s-a adugat soluia 0,6 M KCl, care
dizolv F-actina, la o astfel de zon de incluziuni miofibrilare structura dispare, ceea ce indic
faptul c filamentele subiri sunt compuse din actin. n structura muchiului, banda I conine
filamente subiri n timp ce banda A conine ambele filamente, groase i subiri.
Structura filamentului subire. Fig. 24 prezint structura: moleculele de actin formeaz dou
torsade dispuse una n jurul celeilalte; n interior este filamentul de tropomiozin, iar la intervale
regulate, moleculele de troponin sunt ataate la tropomiozin.
Interaciunea actin-miozin
Modelul structural. Att F-actina, ct i miozina sunt molecule mari de protein, a cror
interaciune are loc pe multiple site-uri, ntr-o manier specific. Din structura independent la
raze X a G-actinei i S1 i din diagramele de densitate electronic ale filamentelor de actin
conectate cu S1, a fost reconstituit structura tridimensional a actoS1, avnd forma din Fig. 25.
Zonele de contact. Aa cum am observat n Fig. 23, molecula G-actinei are patru sub domenii,
dar majoritatea aminoacizilor implicai n interaciunea cu S1 sunt localizai n subdomeniul 1.
Aa cum am vzut anterior n ce privete structura tridimensional a S1, primul helix al
fragmentului de 20 kDa i domeniile de sub i de deasupra fragmentului de 50 kDa, conin zone
de legare a actinei, ale S1.
Primul contact implic ncrcarea pozitiv a particulelor de resturi de aminoacizi ale S1 la
jonciunea 20-50 kDa i ncrcarea negativ a particulelor de resturi de aminoacizi din
subdomeniul 1 al actinei. Acesta este un contact electrostatic nespecific; se constituie legturi
slabe ntre S1 i actin.
Fig. 24. Modelul pentru structura filamentului subire.(dup Huxley, H.E., 1972).
Al doilea contact implic reziduurile hidrofobe att din S1, ct i ale actinei. Aceasta este o
interaciune stereospecific. Domeniul de sub fragmentul de 50 kDa al S1 este alipit mai ales, la
reziduurile din subdomeniul 1 al actinei i cteva din subdomeniul 3.
Al treilea contact mai puternic dect cel de al doilea prin recrutarea de bucle adiionale de la
domeniul mai sus al fragmentului de 50 kDa al S1 i subdomeniul 2 al actinei. Interaciunea
urmeaz nchiderii despriturii dintre domeniile de sub i de deasupra fragmentului de 50 kDa al
S1.
Formarea legturii puternice pornind de la stadiul de legtur slab are loc odat cu contactele al
doilea i al treilea. Alipirea puternic e necesar pentru un efort puternic. Arginina 405, care
particip la al treilea contact, este un reziduu de aminoacid conservat n toate miozinele studiate.
Prezint importan funcional; adic, s-a demonstrat c transformarea argininei 405 n
glutamin e una din cauzele cel mai des ntlnite n cazul cardiomiopatiei hipertrofice.
Aceste trei contacte implic o singur subunitate de actin i definete prima localizare a
interaciunii actin-miozin. n plus, modelul construciei indic cea de a doua regiune a S1 n
proximitatea monomerului actinic vecin, un helix ntorcndu-se dedesubt. Cea mai mare
contribuie la aceast interaciune secundar cu actina vine din partea unei bucle ce corespunde
reziduurilor 567-578 din secvena S1.
O remarcabil conservare funcional a fost identificat n felul n care interacioneaz izomerii
actinei i miozinei ale diferitelor specii. Astfel de descoperiri sugereaz o constan a structurii
contactelor moleculare de la interfaa actomiozinei.
Modelul bra-prghie. Ipotezele curente asupra mecanismului generrii forei de ctre actin-
miozin-ATP postuleaz c rotaia braului prghie ca un prim component mecanic al loviturii
puternice. Braul prghie este un -helix lung de 85 , la care sunt legate miozinele reglatoare i
eseniale ale fibrelor subiri. n timpul alipirii ATP i a hidrolizei care-i urmeaz, aria zonei active
a subfragmentului 1 sufer transformri conformaionale substaniale i ca rezultat, braul
prghie se mut cu 11 nm de-a lungul axelor helixului actinei (Fig. 26a i 26b).
Rotaia braului prghie (Dominguez et al., 1998) care are loc de la nceputul i n timpul
producerii forei se poate urmri n Fig. 26c.

Fig. 25. Modelul structural atomic tridimensional al F-actinei combinat cu subfragmentul 1

miozinic.Este redat interaciunea miozin-actin printr-o panglic i o
zon de spaiu plin. Panglica din stnga reprezint subfragmentul S1 miozinic;n dreapta este
reprezentat helixul dublu al F-actinei constituit din globulele actinice 4 i 3.
(dup Rayment i Holden, 1995).

Proteine reglatoare: (5%)

Tropomiozina (TM ) sau paramiozina, a fost descoperit de Bailey n 1946 i reprezint
aprox. 10% din coninutul proteic total al miofibrilei, avnd masa molecular de 65-70 kDa. Este
dispus n filamente subiri, nsoind zonele de localizare ale actinei. Moleculele au form
fibrilar, de tij (cca. 400 lungime i 20 grosime) i prezint o structur dubluelicoidal (-
helix), fiind interpuse ntre dou filamente de F-actin; moleculele de tropomiozin sunt fixate de
la cap la coad .
Posed proprietatea de supercontracie i contribuie la meninerea pe o perioad mai lung
a muchiului ntr-o stare contractat. Solubilitatea i proprietile structurale ale acesteia s-au
dovedit a fi similare cu cele ale miozinei, de unde i numele acesteia.
Izomerii tropomiozinei.
La SDS-PAGE, TM prezint dou benzi, corespunztoare sirurilor (rapide) i (lente).
Greutatea molecular a sirurilor nu difer semnificativ i au valori de 33000-35000. Ambele
iruri conin 248 resturi de aminoacizi, dintre care 39 sunt diferite. Secvena aminoacizilor indic
o poriune nepolar i una polar de astefl de reziduuri, totaliznd 7 reziduuri. Lungimea
moleculei unui irag a fost calculat pt secven, 248x1,49 = 423 (numrul reziduurilor
nmulit cu lungimea efectiv a unui reziduu ntr-o dubl spiral) este mai mare dect lungimea
de 400 calculat prin studii n raze X. Diferena ar putea fi apreciat ca fiin sumarea unei
suprapuneri a 8-9 reziduuri ntre terminaiile moleculelor de TM. Raportul dintre concentraiile
subunitilor i variaz funcie de tipul muchiului. Muchiul scheletic lent (rou) i
muchiul fetal conin o proporie mai mare de subuniti dect muchii scheletici rapizi (alb),
n timp ce muchiul cardiac de iepure i avian conin numai subuniti . Electroforeza pe gel
bidimensional relev mai muli izomeri ai TM n diferii muchi. Mai mult, civa dintre
izomerii TM pot fi fosforilai. Schimbrile de distribuie a izomerilor TM au fost observate n
decursul dezvoltrii.
Proprieti de legare. TM prezint afinitate ridicat pentru actin, evideniat de dificultile de
ndeprtare a TM n cursul purificrii actinei. Fiecare molecul de TM leag 7 monomeri actin
n F-actin. Cnd se ataeaz la actin, fiecare TM se crede c este supernfurat cu o raz de
cca. 40 i lungimea moleculei se reduce la aprox. 385 . Studiile de reconstrucie la
microscopul electronic i difracie cu raze X sugereaz c n timpul activrii muchiului, TM se
mut din poziia lateral pe filamentul de actin pe o distan de 10-15 ctre centrul aglomerrii
din dublul helix al actinei. Se postuleaz c n restul muchiului, TM ocup zona actinei necesar
pentru combinarea cu capul miozinei. Micarea TM, de la nceputul contraciei, elibereaz zona
de legare a miozinei, astfel nct se poate forma actomiozina i muchiul se poate contracta. O
alt interacie ntre proteine este legarea troponinei la TM. Un mol de troponin este legat per
mol de TM.