Zona de legare a ATP-ului are secvena:

Gli-Glu-Ser-Gli-Ala-Gli-Lis-Trh,
care e similar cu secvena determinat la site-urile active ale altor ATP-aze. Site-ul de legare a
ATP-ului a fost identificat ca o cavitate. Exist o fant n partea superioar a capului care ncepe
de pe site-ul de legare a ATP-ului pn la interfaa actinei. Ambele poriuni, dup i nainte de
fant sunt implicate n legarea actinei. Cnd ATP se leag la S1, cavitatea cea mai apropiat i
fanta se extind, rupnd legtura S1-actin, ceea ce nseamn c ATP disociaz S1 de actin. Cnd
ATP e hidrolizat de S1 la ADP i Pi, actina se recombin cu S1. Modificrile structurale
implicate constau n restrngerea fantei i deschiderea cavitii de legare a ATP. Aceste
modificri subtile sunt denumite modificri conformaionale care joac rolul cheie n
mecanismul de contracie a muchilor.
Lanurile regulatoare i cele subiri eseniale se ncolcesc n jurul fragmentului de 20 kDa al S1,
formnd astfel un -helix de 85 lungime, cu o deschidere mai mare dect S1. Rayment a
sugerat c modificrile conformaionale din cavitatea de legare a nucleotidelor ar putea fi
transmise -helixului de 85 lungime. Aceast structur ar putea avea rolul de bra ridictor,
care s mreasc modificrile conformaionale mici n micri largi. Ipoteza braului ridictor
este prezentat n capitolul Interaciunea actin-miozin.
Asamblarea
Filamentele de miozin. La putere ionic sczut (ex.: 0,03 M KCl), miozina precipit i
formeaz filamente. Electronmicrografia relev structura specific a filamentelor, care este sub
forma unui trunchi central cu lateralele sale proieminente (Fig. 15). Un model al aranjamentului
moleculelor de miozin n filamente este prezentat n fig. 16. Avnd n vedere c moleculele
individuale de miozin au o regiune globular (S1) numai la un singur capt, filamentele sunt
formate probabil, prin asocieri antiparalele ale moleculelor de miozin. Toate moleculele dintr-o
jumtate de filament sunt orientate ntr-o direcie i toate celelalte din cealalt jumtate a
filamentului sunt orientate n direcia opus. Astfel, n mijlocul catenelor filamentelor
moleculelor antiparalele se suprapun rezultnd o bar central liber, iar regiunile globulare sunt
dispuse la ambele capete ale filamentului.
Electronmicrografiile filamentelor groase din muchi i filamentele groase sintetice fcute din
miozin sunt f. asemntoare, diferenele fiind greu observabile. Totui, filamentele groase
sintetice realizate din meromiozin subire nu au proieminene, aa cum se observ la
microscopul electronic.
Fibrele musculare, miofibrile. Complexele actomiozinice produc tensiune mai sczut dect
muchiul intact, ceea ce a iniiat cercetarea fibrelor musculare. n experimentele sale clasice,
Szent-Gyrgyi a secionat muchiul psoas de iepure n fascicule de fibre de cca. 1 mm diametru.
Acestea au fost legate n restul lungimii la o manivel subire i introduse n 50% glicerol la 0 o C,
timp de 24 h. Dup schimbarea glicerolului, fasciculele de fibre au fost meninute la -20o C.
nainte de utilizare, fasciculele au fost transferate n 20% glicerol, dup care au fost splate cu
sruri.
Tratamentul prelungit cu glicerol a distrus membrana celulelor musculare, iar splarea ulterioar
a ndeprtat constituienii organici i anorganici ai muchiului, precum i mai mult de jumtate
din proteinele sarcoplasmatice. Fibrele de psoas tratate cu glicerol nu au reacionat la stimularea
electric, dar odat cu adugarea ATP s-a produs contracie puternic.H.H. Weber i Portzehl
(1954) au pregtit fibre musculare izolate tratate cu glicerol din muchi psoas, care au dezvoltat
tensiune egal cu muchiul intact i au reprodus astfel ntregul ciclu contracie-relaxare al
muchiului (Fig. 17). Astfel, a fost demonstrat fr dubiu, c interaciunea dintre actin, miozin
i ATP st la baza mecanismului ciclului contracie-relaxare din muchiul scheletic.
Miofibrilele sunt fibre musculare minuscule, preparate prin omogenizarea unui muchi proaspt
disecat n soluie fiziologic salin. Contracia lor indus de ATP poate fi urmrit la microscop.
Ambele, fibrele de psoas i miofibrilele conin proteine musculare contractile (miozin i actin)
i reglatoare (troponin i tropomiozin). Componentele individuale ale acestor sisteme sunt bine
izolate prin SDS-PAGE (Fig. 18).
Localizarea miozinei n structura muchiului. Miofibrilele au fost extrase sub microscop, cu o
soluie selectiv pentru disoluia miozinei. Banda-A a disprut ca urmare a extraciei; de aici a
fost tras concluzia c miozina este localizat n banda A, partea nchis la culoare a muchiului.
Anticorpii specifici pentru miozin care au fost depozitai n banda A, au confirmat de asemenea
localizarea.
Fig. 17. Ciclul contracie-relaxare-contraci a unei fibre individuale de psoas. Fibra a fost
contractat cu ATP i la captul contraciei splat cu sruri. Relaxarea fibrei a fost realizat prin
adugarede pirofosfat n baie, sgeata n jos, apoi recontractat
prin adugare de ATP, sgeata n sus.
(dup Weber i Portzehl, 1954).

Actina-reprezint 20-25% din coninutul proteic total al miofibrilei i este localizat la

nivelul filamentelor subiri.
Ca structur, actina se prezint n dou forme configuraionale:
- forma globular, monomeric (G-actina)-se comport ca monomeri care pot polimeriza
necovalent formnd un agregat molecular, constituit din filamente lungi de F-actin, la fora
ionic fiziologic i n prezena Mg2+; masa molecular = 42 kDa i
- forma fibrilar (F-actina)-cu conformaie dublu-elicoidal; diametrul = 6-7 nm; structur
repetitiv de 35,5 nm, ambele capabile s se transforme reversibil.
Tranziia G-actinei la forma polimerizat F-actin e dependent de ionii Mg2+ i nsoit de
hidroliza ATP la ADP + Pi.
Deci, actina se caracterizeaz prin dou proprieti eseniale:
capacitatea de a polimeriza i
capacitatea de a se combina reversibil cu miozina din filamentele groase adiacente
pentru a forma complexul actomiozin.
Straub, un tnr biochimist din laboratorul lui Szent-Gyrgyi, a descoperit actina n 1942.
Anterior, Szent-Gyrgyi a artat c extracia scurt a muchiului de iepure mixat cu o soluie
alcalin 0,6 M KCl n camera rece produce o miozin cu vscozitate sczut (miozina A), n timp
ce atunci cnd muchiul mixat a fost lsat n 0,6 M KCl timp de o zi, a fost extras o soluie f.
viscoas (miozina B). Straub s-a gndit c diferena dintre miozina B i A este cauzat de
extracia unei noi proteine care face ca extractul de o zi s fie viscos. n consecin, a extras
miozina A din muchi, apoi a lsat reziduul n camera rece timp de o zi. Reziduul muchiului a
fost splat cu ap distilat i transferat n KCl pt izolarea proteinelor citoplasmatice i apoi,
reziduul final a fost uscat cu aceton.
Proteina extras din reziduul uscat cu aceton a format un complex f. viscos cu miozina A,
similar la miozina B, a activat miozina i de aici a fost denumit actin. n muchiul scheletic,
actina reprezint aprox. 15% din proteina total.