Caiet de lucrari practice pentru “Biologia gi patologia reproductiei”
INSTRUMENTARUL FOLOSIT PENTRU INSAMANTARL
ARTIFICIALE
fn cadrul biotehnologiei ins&ménfiirilor artificiale fluxul tehnologic are
urmatoarele etape:
- recoltarea spermei;
- examenul spermei;
- diluarea gi conservarea spermei;
- transportul si pistrarea spermei;
- inocularea spermei.
A. Recoltarea spermei
Instrumentarul folosit variaz& in functie de metoda de recoltare aplicaté
(manuala, vagin artificial, electroejaculator, masarea ampulelor canalelor
deferente). La majoritatea speciilor cea mai folosit’ metoda este metoda cu
vaginul artificial. Ca elemente componente ale vaginului artificial apar
diferentieri majore care variaz4 in functie de specie. Pentru rumegatoare si
pentru cabaline parfile componente ale vaginului artificial sunt:
- corpul vaginului: - la rumegittoare: este format din cauciuc dur;
- la cabaline: este format din tabla zincata.
Indiferent de specie acest corp este prevazut cu un orificiu ce se inchide
cu un robinet.
~ elimasa vaginalA - este dintr-un cauciuc foarte fin care trebuie sii fie
lipsit de porozitafi; lungimea ei depaseste lungimea corpului vaginal cu 10-20em
deoarece capetele vor trebui rasfrante peste capetele tubului vaginal, astfel incat
intre c&masa si corp s& se formeze o camera virtuala.
~ dous inele de cauciue cu ajutorul c&rora capetele cAmasii vaginale se
fixeazii pe tubul vaginal.;
- recipientul colector (paharul colector) este acoperit de un manson
iama pentru protectie termica.
La taurine la vaginul de tip danez mai exist un con colector ce face
leg&tura intre vaginul artificial si recipientul colector.
Figura 34.
Vagine artificiale pentru
recoltarea spermei la taur
vnCaiet de lucratri practice pentru “Biologia gi patologia reproductiei”
Ansamblarea vaginului artificial.
‘Camasa vaginala se introduce prin tubul vaginal, capetele se risfrang
peste capetele tubului vaginal gi sunt fixate cu ajutorul celor doua inele. in
spafiul format se introduce apa si aer. La unul din capete se atageaza recipientul
colector. Atunei cénd se monteazA cimaga vaginal trebuie si nu se formeze
cute transversale pentru cd acestea ingusteazi lumenul gi° pot s& producd
leziuni la nivelul mucoasei peniene, leziuni care prin senzatia de durere ar putea
favoriza formarea unor reflexe condiionate negative.
‘Vaginul artificial trebuie si indeplineasc& anumite conditii, pentru a imita
caracteristicile vaginului unei femele in c&lduri si anume: temperatura, presiunea
silubrifierea.
ratura. La femelele in calduri temperatura la nivelul vaginului
jcat& decat temperatura corporala datoritA congestiei existente la
vaginul artificial pentru a realiza acest deziderat se introduce apa
50°C; pana in momentul recoltarii spermei desi temperatura scade cu
_o depaseste pe cea corporala, mentinandu-se la 40-42°C.
iv La femelele in cilduri ea este realizati de musculatura
ginal sub influenta hormonilor estrogeni si ocitocinei. Presiunea in vaginul
ial se realizeaz4 cu ajutorul apei calde introduse in camera creati intre
gi cimasa vaginal dar si prin intermediul insuflarii de aer. Perefii
yaginale apar apropiafi formfnd o cut& in forma literei “H” cand
este realizata la nivelul necesar. Pentru vier exist& un tip special de
ite realizarea presiunii asupra glandului vierului, care imit’
or existenti la nivelul cervixului scroafei.Figura 36
Vagine artificiale pentru
recoltarea spermei la vier.
Lubrifierea. Peretii vaginului femelei in calduri sunt lubrifiati de catre
mucusul de clduri. In mod artificial acest deziderat se asigura prin lubrifierea
vaginului artificial cu ajutorul unei vaseline neutre.
Figura 37. Recoltarea spermeé la taur
prin masaj transrectal al ampulelor canalelor.,
deferente si al vezioulelor seminale
Figura 38. Recoltarea spermei la vier
prin metoda manuala
B. Transportul si pastrarea spermei
Recipientele folosite pentru transportul si pastrarea spermei variaza in
functie de metoda de conservare. Astfel, in cazul in care conservarea spermei se
face prin refrigerare (1a temperatura de 0-4°C), depozitarea acesteia se face fie In
78
7 Buzesti 61, DI. AG, ap. 47, sector Twoucuresu; Ter MztZzr- ter eww us ee; ran rere eeeCaiet de lucrari practice peiitru “Biologia gi patologia reproductiei”
termose cu ghiati, fie lazi izoterme, in care de asemenea, se pune ghiata. Fiolele
sau flacoanele cu sperma trebuiese protejate pentru a nu veni in contact direct cu
ghiata si pentru aceasta se pun in cutii de bachelita,
Figura 39, Conteiner pentru sperma congelata
Dac& sperma se conserva prin congelare, transportul si depozitarea
acesteia pana in momentul utilizarii se fac in containere de mic& capacitate, in
care se afl azot fichid. Astfel, se asiguri menfinerea constant a temperaturii
spermei congelate, la nivel de~ 196°C.
C. Aparatura gi tehnica folositi pentru inocularea spermei
Acestea diferd in raport cu specia si cu metoda de inagulare.
Astfel, la vacd se pot folosi dou’ metode de inoculare a spermei: vaginala
si rectovaginal’.
Metoda vaginal necesiti ca instrumentar: speculum vaginal, lamp&
- frontal si pipet de instimAnfare. Se foloseste cu precidere speculum trivaly (de
tip Polanski), care in prealabil a fost sterilizat. Lampa frontalA se aplic& pe capul
operatorului insiményétor gi ugureazi observarea orificiului vaginal al
cervixului. Pipeta de insimanfare este din sticlé si are atasatA Ja un capat 0
suzeti (para de dimensiuni mici) de cauciue; pipeta trebuie sterilizati dup’
fiecare utilizare, pentru a se impiedica vehicularea unor germeni microbieni de
Ia o femela la alta,
Ca mod de lucru se procedeazi astfel:
- se apasi pe suzeta de cauciuc, se introduce varful pipetei de
ins&ménfare in recipientul cu sperma si se d& drumul suzetei; fn felul
acesta sperma este aspirat4 in pipet;
se face toaleta organelor genitale exteme ale vacii de insaménjat si
apoi se introduce speculum vaginal prin fanta vulvar, avand brajele
apropiate; apoi cu ajutorul surubului fluture se depirteazi brafele
719..Caiet de lucrdri practice pentru “Biologia si patologia reproductiei”
(valvele) speculumului, iar prin migcirile capului insiménfitorul
dirijeazi fascicolul luminos al !mpii frontale spre fundul vaginului;
- se introduce varful pipetei de insdménjare prin orificiul cervical in
lumenul cervixului pe o distanji de 3-4 cm si apoi se apas& pe suzeta
de cauciuc, depundnd astfel sperma din interior;
~ se fine suzeta de cauciuc compresata i se scoate pipeta de insiméntare
(se eviti astfel reabsorbfia spermei in pipet);
~ se scoate speculum vaginal preferabil dupa ce s-au apropiat bratele lui
cu ajutorul surubului fluture rotit in sens invers;
- se noteaz data insiménfarii in registrul de ins&ménf&ri si fatari.
C&nd inocularea spermei se face prin metoda rectovaginalii este necesara
ménusa obstetrical gi pistoletul de insimantare.
Pistoletul de insimAntare este alc&tuit din:
- corpul pistoletului — din inox si prevzut pe toat’i lungimea lui cu un
canal central;
~ tija pistoletului —cu rol de piston;
- ghend din metal plastic ce se aplica peste corpul pistoletului dupa ce s-a
introdus paieta cu sperma;
rondel& de plastic, mai dur, pentru fixarea ghenei.
==
Figura 40. Ansamblarea pistoletului de inoculare a spermei
80Figura 41.
Explicati figura 41.
Tehnica de inoculare a spermei const& in urmatoarele:
~ dupa decongelarea paietei cu sperma aceasta se introduce in corpul
pistoletului, se taie capitul exterior la distanfé de 1 cm. de vérful
pistoletuliti, se ataseaza ghena)si se fixeazA cu rondela;
operatorul insiméntitor, avand mana protejati cu manuga de plastic, 0
introduce in rect si repereaz cervixul pe care il imobilizeaza intre
degete si podul palmei, avand un deget liber (cel mare sau cel mic)
pentru a sesiza orificiul vaginal al cervixului;
cy-ména cealalfé introduce pistoletul in vagin si apoi in cervix
rijandu-l cu ajutorul méinii aflate in rect si apasa pe tija pistoletului
care prin intermediul dopului din paieti impinge sperma si o depune in
cervix;
se scoate pistoletul si mAna din rect si se noteazi data efectuarii
insiméngarii.
Figura 42. Inocularea spermei la vacd prin metoda rectovaginal&
81Caiet de lucrari practice pentru “Biologia si patologia reproductiei”
sere
Pentru inocularea spermei la scroafai se poate folosi cateterul englezesc
sau semineta romaneascl.
Cateterul este confectionat din cauciuc consistent si are un capt spiralat,
care imit& conformatia glandului vierului.
La capatul opus se adapteaza flaconul cu sperma. In vederea insAmantarii,
dupa ce s-a facut o ugoari igiend a vulvei scroafei, se introduce varful cateterului
prin fanta vulvara si pe msur& ce acesta inainteazi in vagin se rasuceste spre
dreapta pentru a putea strabate printre cuzinefii din cervixul scroafei. Se verificd
acd a ajuns in cervix trigand usor spre fnapoi.
Figura 43. Inocularea spermei la scroafa,
Apoi se adapteazé flaconul cu sperma, care este din cauciuc sau material
plastic, se apasi pe el si se depune astfel sperma in corpul uterin. Cateterul se
scoate apoi prin rasucire inversa (spre sténga).
Semineta este confectionaté din material plastic avand o tij& terminat&
printr-o ogivi de mérimea unei misline, iar la capitul, opus se ataseaziCaiet de lucrati practice pentru “Biologia si patologia reproductiei”
recipientul cu sperma, Pentru introducerea in cervix se manevreazi prin
impingere si migcari de lateralitate — stanga-dreapta.
Laden
Pipeta de inoculare sau seringa de inoculare este din sticla si ofel
inoxidabil. Doza este reglabil existind un surub pe tijd. Se recomanda fie
metoda recto-vaginald, fie metoda vaginala. In acest din urm& caz se introduce
mana sténga in vagin, arititorul se introduce in cervix si se conduce seringa pe
palma pana in cervix unde se face inocularea,
Aa
Figura 43. Inocularea spermei la iap&
Laoaie
Doza este de 0,1 ml Ia adulte si 0,2 ml la primipare. Se foloseste o sering’
semiautomat cu umplere manuala si inoculare automaté. Oile sunt mult mai
rezistente si nu se pune problema sterilizarii, acest lucru este posibil si datorit&
Jocului de inoculare. Adultele sunt inoculate in cervix iar primiparele fn vagin.
Figura 44. Inocularea spermei la oaieCaiet de lucrari practice pentru “Biologia si patologia reproductiei”
La iepuroaicd
Inocularea spermei se face cu o sering& semiautomata; doza este de 1,00
ml. Are prevazut la capat un tub de cauciuc si un tub de sticla indoit sub un
unghi de 30°. Acest tub se introduce in vaginul femelei pana se intampina o
rezisten{a si apoi se rasuceste 180° asa cum se observa din figura 45.