Sunteți pe pagina 1din 10

1.

Introducere

Laptele si produsele lactate sunt componente importante ale unei diete sanatoase, cu toate
c, dac sunt consumate nepasteurizat, ele pot reprezenta, de asemenea, un pericol pentru sntate
datorit posibilei contaminrii cu bacterii patogene. Un studiu publicat de CDC n februarie 2012 a
examinat numrul de focare de lactate din Statele Unite, ntre anii 1993 i 2006, iar 60% dintre ele
au fost legate de produsele din lapte crud.

Cu toate c mai muli ageni patogeni bacterieni pot provoca mastit, Staphylococcus aureus
este, n general cel mai important agent etiologic n mamite de vaci i bivolie (Kumar, 2009; Olde
Riekerink, Barkema, Kelton, & Scholl, 2008, Piccinini, Borromeo, & Zecconi, 2010) . Mai mult
dect att, S. aureus este, probabil, agentul cel mai infectios, deoarece aceasta provoac o infecie
cronic i profund n glandele mamare, care este extrem de dificil de a eradica (Brouillette &
Malouin, 2005). Coagulazo-negativ Stafilococi (SCN) care au fost in mod traditional considerati a
fi ageni patogeni minori de mastit. Cu toate acestea, semnificaia trebuie s fie reconsiderat,
deoarece acestea au devenit cele mai comune subclinice cauzatoare de agenti de mastit n multe
ri. Pot provoca infecii persistente, care pot duce la deteriorarea esutului a ugerului, ceea ce duce
la producia de lapte a sczut. De Staphylococcus simulans i Staphylococcus chromogenes sunt n
prezent predominante speciile implicate n cons Mastita bovin. Staphylococcus haemolyticus i
Staphylococcus epidermidis reprezint, de asemenea, ageni patogeni importani asociati acestei
boli (Pyrl & Taponen, 2009; Schukken et al, 2009;. Simojoki, Hyvnen, Ferrer cu pene,
Taponen, & Pyrl, 2012).

Dou strategii tradiionale folosite mpotriva bolilor bacteriene n ferme sunt de vaccinare si
tratamentul cu antibiotice. Cu toate acestea, utilizarea fr discernmnt a antibioticelor poate
contribui la apariia unor germeni patogeni rezisteni la antibiotice, care pot fi transmisi ctre
consumatorii de lapte. In plus, acest tratament poate contamina laptele cu antibiotice reziduale timp
de cteva zile dup administrarea lor, cauznd probleme pentru consumatori (Brito & Lange, 2005,
Sawant, Sordillo, & Jayarao, 2005). Astfel, identificarea metodelor alternative de control ale
mastitei este esenial. Una dintre aceste metode ar putea fi utilizarea de bacteriocine (Bac).
Bacteriocinele sunt peptide antimicrobiene sau proteine produse de bacterii care au activitate
inhibitoare sau bactericid mpotriva altor bacterii (Heng, Wescombe, Burton, Jack, & Tagg, 2007,
Jack, Tagg, & Ray, 1995). Tulpinile productoare de bacteriocine sunt imune la propriile lor
produse i aceast imunitate este conferit de un sistem imunitar, care este, n general, exprimat
concomitent cu genele structurale bacteriocine (Bastos, Ceotto, Coelho, & Nascimento, 2009;. Heng
i colab, 2007). Bacteriocinele posed un potenial de aplicare biotehnologic drept conservani
alimentari, deoarece acestea sunt eficiente mpotriva agenilor patogeni-cheie importanti n boli de
toxiinfecie alimentar, inclusiv Listeria monocytogenes, o bacterie patogen important comuna n
mediu i greu de controlat n produsele alimentare (Glvez, Abriouel, Lpez & Omar , 2007). Mai
mult, ele sunt n general recunoscute ca fiind sigure, non-toxice asupra celulelor eucariote i devin
inactive prin proteaze digestive, avnd o influen redus asupra microbiotei intestinale (Glvez i
colab., 2007). In plus, bacteriocinele pot fi utilizate pentru tratamentul i prevenirea unor infecii
bacteriene, inclusiv mastita bovin (Coelho i colab, 2007;.. Glvez et al, 2007;. Klostermann et al,
2010).
Tulpinile stafilococice pot produce bacteriocine, cunoscute sub numele de staphylococcins.
S. epidermidis i S. aureus sunt cei mai importani productori stafilococici investigati pn n
prezent. n S. epidermidis, unii stafilococi au fost caracterizati, cum ar fi epidermin lantibiotics
(Augustin et al., 1992), Pep 5 (Ersfeld-Dressen, Sahl, & Brandis, 1984), epilancin K7 (van de Kamp
i colab., 1995), i epicidin 280 (Heidrich i colab., 1998), iar bacteriocin clasa II epidermicin NI01,

1
care este legat de aureocin A53 (Sandiford & Upton, 2012).
n prezenta lucrare, producia de bacteriocine a fost investigat n Staphylococcus spp.
tulpini izolate din lapte de vaci i bivolie cu mastita bovin n diferite turme de lapte din Brazilia cu
scopul de a gsi noi stafilococi cu potentiale aplicatii biotehnologice. n cursul acestui studiu, o
nou substan bacteriocina asemntoare inhibitoare (BLIS), numita hyicin 4244, a fost detectat i
aciunea sa mpotriva monocytogenes S. aureus i L. n laptele degresat a fost testat.

2. Materiale i metode

2.1. Tulpinile i condiiile de cretere bacterian

Stafilococ spp. tulpini izolate din lapte de vac, fie (35) sau bivolie (12), toate cu mastita la bovine,
de la 33 de turme de lapte diferite situate n regiunea de sud-est a Braziliei, au fost testate pentru
substana antimicrobian de producie (AMS).

Alte tulpini de stafilococ din studiile anterioare au fost angajate n lucrarea de fa, fie ca
bacteriocine productoare sau ca inte n testul de eco-imunitate, i ca element de control pentru
prezena genelor bacteriocine-structurale.
Tulpinile stafilococice i alte bacterii utilizate ca inte, cu excepia bacteriilor lactice (LAB),
au fost cultivate fie BHI (Difco, Sparks, USA) sau TSB (Difco) la 37 C timp de 18 ore i
depozitate n TSB cu 40% glicerol (g / v) la -20 C. Tulpinile LAB au fost cultivate n MRS
(Difco), fie la 30 C sau 37 C timp de 18 ore. Atunci cnd a fost necesar, mediile au fost
suplimentate cu agar 1,5% (greutate / volum) sau 0,6% (greutate / volum).

2.2. Identificarea tulpinilor

Tulpinile stafilococice care au prezentat producia AMS au fost identificate la nivel de specie
bazat pe coloraia Gram urmat de utilizarea unui kit comercial pentru identificarea bacterian
(API Staph, bioMrieux, Marcy-l'toile, Frana) i teste biochimice convenionale (Bannerman &
Peacock , 2007). Identificarea tulpinii stafilococice 4244 a fost, de asemenea, confirmat prin 16S
ADNr secveniere aa cum s-a descris de ctre Fagundes i colab. (2011).

2.3. Efectul enzimelor proteolitice i de hidroxid de sodiu

Efectul tripsinei, proteaza XXIII, pronaz i proteinaza K [Sigma-Aldrich (St. Louis, SUA);
1 mg ml'1 preparat n Tris / HCI 50 mM, pH 8,0 - CaCl2 10 mM] i NaOH 0,2 N asupra activitii
AMS a fost determinat pe mediu solid aa cum este descris de Giambiagi-deMarvaL i colab.
(1990).

2.4. Izolarea ADN-ului i manipulri

ADN-ul plasmidic a lizatelor stafilococice ale AMS + tulpini au fost izolate aa cum este descris de
Giambiagi-deMarvaL i colab. (1990), iar profilele de plasmide au fost analizate prin electroforez

2
n gel de agaroz [0,7% (g / v) preparat n Tris 40 mM, acetat 40 mM i EDTA 1 mM, pH 8,4].
ADN-ul genomic de la AMS + tulpinile utilizate n reaciile PCR i Southern blotting a fost
izolat aa cum este descris de ctre Potter i colab. (2009). Pentru Southern blot, ADN-ul genomic
(1 pg) a fost digerat n prealabil cu enzimele de restricie EcoRI (Invitrogen, Carlsbad, USA) sau
Hindlll (Invitrogen) n conformitate cu recomandrile productorului.

2.5. Detectarea genelor structurale staphylococcin prin PCR

Reaciile PCR au fost efectuate pentru a detecta, n AMS + tulpini, prezena operonului
aurABCD i ale genelor Auca, sacA / sacA, Pepa, EPIA, Elka, ECIA, Nuka i bsaA2 (genele
structurale ale A70 aureocin, aureocin A53, staphylococcin C55, Pep5, epidermin, epilancin K7,
epicidin 280, nukacin 3299 i Bsal, respectiv). Cu excepia pentru acesta din urm, primerii utilizai
pentru amplificarea fiecrei gene i condiiile de PCR au fost n esen cele descrise anterior de
Ceotto, Nascimento, Brito i Bastos (2009). Prezena genei structurale bsaA2 a fost evaluat
utiliznd primerii BsaF (5 '-TTAACAGCAGAAGCTATTAAAACTACCAG- 3') i BsaR (5'-
ATGGAAAAAGTTCTT GATTTAGACG-3 ') (A. Potter, date nepublicate), n aceleai condiii, cu
excepia temperatura de recoacere care a fost de 54 C. Ampliconilor au fost analizate prin
electroforez n gel de agaroz [1,4% (g / v)], folosind o scara ADN de 100 pb (Promega, Madison,
SUA) ca marker cu greutate molecular.

2.6. ADN / ADN hibridizare teste

Pentru a detecta genele structurale aurABCD, Auca, sacA / sacA, Pepa, EPIA, Elka i
ECIA, hibridizarea Southern blot au fost realizate folosind ADN-ul genomic digerat anterior cu
EcoRl, i pentru a detecta Nuka, ADN-ul genomic a fost digerat cu Hindlll.
ADN-urile genomice digerate au fost separate prin electroforez n gel de agaroz [0,7% (greutate /
volum)] i ptate pe membrane de nylon (Hybond-N, GE Healthcare, Piscataway, Statele Unite ale
Americii), folosind metode standard aa cum este descris de ctre Sambrook, Fritsch, i Maniatis
( 1989). In ambele tipuri de experimente (PCR i de hibridizare), ADN-ul genomic izolat din tulpina
productor fiecrui staphylococcin cercetat a fost utilizat ca martor pozitiv.

2.7. electroforez n gel pulsed-cmp

ADN-urile genomice din tulpinile 4059, 4231, 4244, 5409 i 5580 au fost introduse prin
electroforez pe gel de impulsuri camp (PFGE). Suspensiile bacteriene au fost incluse n dopurile
de agaroza i tratate aa cum s-a descris anterior de Nascimento, Santos, Gentilini, Sordelli i
Bastos (2002). ADN-ul cromozomial a fost digerat cu Smal (New England Biolabs, Ipswich, SUA).
Fragmentele de restricie au fost separate prin PFGE la 1% (greutate / volum) geluri de agaroz ntr-
un sistem CHEF-DRIII (Bio-Rad, Hercules, USA), cu timpi de impulsuri crescnd de la 2 la 35
pentru 21 ore la temperatura de 13 C, cu o gradient de tensiune de 6 V cm-1 i 120 unghi
(Santos, Teixeira, Fonseca & Gontijo Filho, 1999). Lambda-scara PFGE marker de 50-1000 kb
(New England Biolabs) a fost utilizat ca marker de greutate molecular. Analiza profilurilor de
restricie a fost realizat prin inspecia vizual a registrului fotografic al gelurilor colorate cu
bromur de etidiu. Tulpinile au fost considerate a fi strns legate n cazul n care acestea au diferit
de cel mult trei benzi n conformitate cu van Belkum i colab. (2007).

3
2.8. hyicin brut 4244 preparat

Supernatantul fr celule a fost obinut dintr-o cultur de 1 l Staphylococcus hyicus 4244


crescuta la 37 C timp de 24 ore n BHI, sub agitare (180 rpm), i se centrifugheaz la 10,000g
timp de 15 minute la 4 C. Sulfatul de amoniu [40% (g / v); Vetec, Rio de Janeiro, Brazilia] a fost
adugat la supernatant, care a fost inut sub agitare timp de 4 ore la 4 C. Substana antimicrobiana
a fost precipitat din supernatant prin centrifugare la 10,000g timp de 25 minute la 4 C, dizolvat n
50 ml de tampon fosfat (5 mM, pH 6,5), dializat fa de acelai tampon printr-o membran de
separare la 2000 Da i se trateaz la 65 C timp de 15 min. Activitatea antimicrobian (UA ml-1) a
fost determinat prin testul de difuzie de agar i descris de Coelho i colab. (2007).

2.9. Activitatea lui hyicin 4244 mpotriva L. monocytogenes i S. aureus n lapte degresat
i n bulion TSB

Pentru a evalua eficacitatea preparatului hyicin brut 4244 n reducerea numrului de celule
viabile de S. aureus i L. monocytogenes n produsele alimentare, activitatea acestei BLIS att
mpotriva agenilor patogeni din alimente a fost testat n lapte degresat. In acest experiment,
tulpinile S. aureus A70 Bac- i L. monocytogenes ATCC 19117 au fost utilizate. Laptele a fost
inoculat cu aproximativ 107 cfu ml-1 din fiecare bacterie (cultivate anterior n TSB bulion la 37 C
timp de 18 ore). Cele dou eantioane de lapte au fost mprite n dou pri: ntr-unul, s-au adugat
1000 AU ml'1 a BLIS brute i, n cellalt volum egal de tampon fosfat (5 mM, pH 6,5) a fost
adugat, ca martor fr antimicrobian activ.
Toate probele au fost incubate la 37 C. La intervalele dorite (0, 2, 4, 6, 8 i 24 h), alicote de
cultur au fost diluai n serie ntr-o soluie salin steril i placat n triplicat pe mediu TSB. Plcile
au fost incubate la 37 C timp de 48 ore i a fost utilizat numrul mediu de colonii pentru a calcula
numrul de celule viabile n ml-1 cfu. Trei studii independente au fost efectuate pentru analiza
statistic.

2.10. Analize statistice

Toate experimentele de inhibare a creterii hyicin 4244 au fost efectuate n trei exemplare,
iar valorile medii i deviaiile standard au fost calculate cu programul Excel (Microsoft Corp.,
SUA). Analizele statistice au fost realizate folosind testul t Student statistic versiunea programului
R 2.15.0 (Lucent Technologies, Statele Unite ale Americii), considernd p <0,05.

3. Rezultate

3.1. Detectarea tulpinilor AMS +

Patruzeci i apte de Staphylococcus spp. tulpini izolate din probele de lapte de la animale
cu Mastita bovin din 33 de turme diferite de lapte din Brazilia au fost testate pentru producia de
AMS. Paisprezece tulpini (29,8%) din 11 cirezi diferite au prezentat activitate antagonist fa de C.
FIMI NCTC 7547. n timpul testelor ulterioare de producie AMS pe mediu solid, tulpinile 643,

4
4189, 3276 i 3398 s-au dovedit a fi productoare neconstante, i anume, detectarea AMS a fost
observat n unele experimente, dar nu i n altele. Prin urmare, aceste patru tulpini nu au fost
investigate n continuare. Tulpinile 318, 770, 3699, 4369 i 5475 au prezentat zone de inhibiie ntre
11 i 18 mm, n timp ce cele cinci tulpini rmase (4059, 4231, 4244, 5409 i 5580) au generat zone
de inhibiie mai mari de 20 mm.

3.2. Efectul enzimelor proteolitice i hidroxid de sodiu asupra activitii AMS

Toate cele zece AMS testate au fost rezistente la NaOH 0,2 N (tabelul 2), exclude
posibilitatea ca zonele de inhibiie expuse fa de tulpinile int s-au datorat acizilor din
metabolismul productor-tulpina. Cu excepia AMS produse de tulpinile 3699 i 4244, AMS rmase
au fost sensibile la cel puin o enzim proteolitic testat, sugernd natura lor proteinic, o
caracteristic a BLIS. Prin urmare, din continuare, AMS va fi considerat ca fiind BLIS.

3.3. Profile plasmidice

Tulpinile 4244, 5475 i 5580 nu a prezentat nici un ADN plasmidic. apte tulpini au
prezentat cel puin dou forme de plasmid. Tulpinile 4059 i 4231 au prezentat profile identice
(fig. 1), care prezint forme de plasmid cu dimensiuni similare cu cele ale pRJ6, plasmida
stafilococic bacteriocinogenic care codific aureocin A70. Tulpinile rmase au prezentat profiluri
plasmide care au fost diferite ntre ele i care au inclus forme mari i / sau mici.

Fig. 1.

Profilul plasmidic al tulpinilor BLIS productoare (a) i hibridizarea Southern blot utiliznd
operonul aurABCD, amplificat prin PCR, ca sond (b). Culoarele reprezint ADN plasmidic izolat
din urmtoarele tulpini: (A) S. aureus MB196 (utilizat ca martor negativ i ca un marker de mrime
molecular plasmidic); poziiile markerilor de mrime molecular (n kb) sunt indicate n partea
stng; (B) A70 S. aureus (martor pozitiv); (C) 4059; (D) 4231; (E) 4244; (F) 5409, i (G) 5580.

5
3.4. Imunitatea mpotriva bacteriocine produse de S. aureus, S. epidermidis i S.
Simulans

Bacterii productoare de bacteriocine posed n mod normal, un mecanism de imunitate


pentru a se proteja de propriile produse, iar o astfel de auto-imunitate este adesea mediat prin
expresia unui sistem imunitar inrudit. n general, tulpinile care produc bacteriocine fie identice sau
similare prezint imunitate ncruciat (Jack i colab., 1995). Prin urmare, activitatea de inhibare a
BLIS + tulpinile investigate n prezentul studiu a fost testat mpotriva tulpinilor de stafilococi care
produc staphylococcins cunoscute i vice-versa. Rezultatele acestor teste de imunitate ncruciat
sunt prezentate n tabelul 4.
Table 4.

Imunitate / rezisten la bacteriocine ntre BLIS tulpinile producatoare de stafilococ.

BLIS-producing strains
Target strains
4059 4231 4244 5409 5580
S. aureus A53 ++ ++ ++ + +
S. aureus A70 +++ +
S. aureus A70 Bac ++ ++ +++ +
S. aureus C55 + + ++
S. epidermidis 5 + + ++

S. epidermidis 5 Bac + ++ ++
S. epidermidis T3298 +
S. epidermidis BN280 +
Target strains
Producer strains (bacteriocin)
4059 4231 4244 5409 5580
S. aureus A53 (aureocin A53) + + + +
S. aureus A70 (aureocin A70)
S. aureus C55 (staphylococcin C55)
S. epidermidis 5 (Pep5) ++ + ++ +
(+) Zone de inhibiie ntre 12 i 20 mm; (++) Zone de inhibare cuprins ntre 21 i 29 mm; (+++)
Zone de inhibiie 30 mm; (-) Nici o inhibare.

Tulpinile 4059 i 4231 au fost capabile s inhibe creterea S. aureus A70 Bac- (ntrit din
plasmida pRJ6), dar nu i de tulpina A70, productorul aureocin A70. n plus, tulpina A70 nu a
inhibat tulpinile 4059 i 4231, sugernd prezena eco-imunitatii ntre AMS produse de aceste trei
tulpini i, prin urmare, nrudirea dintre ele.

Tulpina productoare de epiderme, aureocin A53, i Pep5 au fost capabile de a inhiba toate
cele cinci Staphylococcus spp. asociate cu mastita bovin, ceea ce sugereaz c niciunul dintre
BLIS din acest studiu este identic cu aceste trei staphylococcins. BLIS produs de tulpina 4244 a
inhibat toate cele nou tulpini productoare de staphylococcin, sugernd c acest BLIS este diferit
de aceste noi staphylococcins descrise n literatura de specialitate.
Tulpina 5409 a inhibat tulpina productor S. aureus A53 si a fost sensibil la bacteriocins
aureocin A53, Pep5, epidermin i nukacin 3299, sugernd c BLIS 5409 este diferit de aceste patru
staphylococcins. In plus, tulpina 5580 a fost inhibat de epidermin i Bsal, i a fost capabil s inhibe

6
tulpinile productoare de aureocins A53 i A70, ceea ce sugereaz c BLIS 5580 nu a fost similar
cu aceste patru bacteriocine.

3.5. Detectarea genelor structurale staphylococcin prin PCR i ADN / hibridizarea ADN

Cele cinci tulpini BLIS productoare au fost apoi testate pentru prezena genelor structurale
implicate n producerea de A70 aureocin, aureocin A53, staphylococcin C55, Pep5, epidermin,
epicidin 280, epilancin K7 i nukacin 3299 prin ambele PCR i ADN / hibridizarea ADN i pentru
prezena genei structurale Bsa numai prin PCR.
Prin utilizarea primerilor specifici pentru detectarea operonului aurABCD (care codific
genele structurale ale A70 aureocin), un fragment de ~500 pb a fost amplificat n tulpinile 4059 i
4231 (fig. 2). n testele de hibridizare folosind operon aurABCD ca sond, semnalele au fost
detectate in ambele tulpini pe plasmide cu ~8.0 kb, o dimensiune similar cu cea a pRJ6 (fig. 1).

Fig. 2.
Modele de ADN banding obinute dup amplificarea PCR cu primeri specifici pentru
detectarea operonului aurABCD. (A) 100 bp ladder ADN (Invitrogen); poziiile markerilor de
mrime molecular (n kb) sunt indicate n partea stng; (B) A70 S. aureus (martor pozitiv); (C)
4059; (D) 4231; (E) 4244; (F) 5409; (G) 5580, i (H) S. aureus A53 (control negativ).

3.6. Activitatea lui hyicin 4244 mpotriva L. monocytogenes i S. aureus n lapte degresat
i n bulion TSB

Pentru a testa aplicarea potenial a hyicin 4244 ca aliment bioprezentativ, s-au adugat 1000
ml AU-1 dintr-un preparat brut al acestei BLIS a probelor de lapte degresat inoculate anterior cu
aproximativ 7 log ufc ml-1 fie de L. monocytogenes ATCC 19117 sau S. aureus A70 Bac-. In plus,
acest experiment a fost realizat n TSB bulion.
L. monocytogenes a crescut n laptele degresat dintr-un numr iniial de 7-8 log ufc ml-1 dup 24
ore la 37 C (fig. 3B). Cu toate acestea, n laptele adugat 1000 ml AU-1 hyicin 4244 bacteriile
numarate au fost mai mici dect numrtorile detectate n controlul creterii (p <0,05), rmnnd la
fel ca inocul iniial. Acest rezultat sugereaz o aciune inhibitoare a hyicin 4244 n aceast matrice

7
de alimente. Rezultate similare au fost gsite n TSB contaminate cu L. monocytogenes (Fig. 3A).

Fig. 3.

L. monocytogenes i cinetica de S. aureus de cretere, fie n prezena (ptrate) sau n absena


(cercuri) de 1000 AU ml'1 de hyicin 4244. Curbele arat numrul de celule viabile (cfu / ml). A i
B, L. monocytogenes cinetici de cretere n mediu TSB i, respectiv, lapte degresat. C i D, S.
aureus cinetici de cretere n mediu TSB i lapte degresat.

4. Discuie

Bacteriocinele au fost caracterizate n mod eficient i testate n sistemele de alimentare


pentru a controla microorganisme patogene i duntoare, fiind studiate ca aditivi naturali n
industria alimentar (Bastos & Ceotto 2010; Galvez, Lpez Abriouel, Valdivia, & Omar, 2008).
Dei multe bacteriocine au fost purificate i caracterizate pn n prezent, singurele bacteriocine
disponibile comercial sunt nisin, i, ntr-o msur mai mic, pediocin PA-1 (Cotter, Hill & Ross,
2005). Pentru c Nisin este dovedit a fi ineficient n anumite matrici alimentare (de exemplu, carne),
i avnd n vedere posibilitatea apariiei unor populaii de bacterii rezistente la nisin, se pare atractiv
pentru a explora utilizarea altor bacteriocine pentru a preveni creterea microbian n produsele
alimentare (Deegan, Cotter, hill, & Ross, 2006).

Principalul criteriu stabilit pentru a caracteriza AMS ca bacteriocine este prezena unui
compus biologic activ proteinic (Cascales et al, 2007;. Jack i colab., 1995). AMS produs de cele
mai multe tulpini testate in prezentul studiu au fost sensibile la cel puin o enzim proteolitic, ceea
ce sugereaz c ar putea fi BLIS. Excepiile au fost BLIS 3699 i BLIS 4244.

8
Cu toate acestea, au fost deja raportate bacteriocine rezistente la digestia proteolitic n
literatura de specialitate, cum ar fi aureocin A53 (Netz et al., 2002).
Printre cele cinci tulpini de stafilococi care au prezentat cel mai larg al activitii
antimicrobiene spectre, tulpinile 4244 i 5580 avea nici un fel de ADN plasmidic, ceea ce sugereaz
c genele care codific pentru BLIS lor corespunztoare sunt localizate pe cromozomul bacterian.
Dou forme de plasmid au fost observate n tulpina 5409. Cu toate acestea, bacteriocin
determinanii sale genetice sunt, probabil, cromozomial codificate, deoarece formele de plasmid
gsite n aceast tulpin (5,4 i 3,4 kb) poate reprezenta OC si SC formele de aceeai plasmid, care
este prea mic pentru a transporta toate genele, n general, necesare pentru exprimarea bacteriocine
(Bierbaum & Sahl, 2009, Nissen-Meyer, Rogne, Oppegrd, Haugen, & Kristiansen, 2009).
S. aureus tulpinilor 4059 i 4231 au prezentat trei forme de plasmid cu dimensiuni similare cu cele
ale pRJ6, o plasmid de 7,9 kb care codific aureocin A70 (Coelho, Ceotto, Madureira, Nes, &
Bastos, 2009). Teste de imunitate ncruciat mpotriva S. aureus A70 i derivatul su A70 Bac- i
detectarea operonului aurABCD prin PCR i ADN / hibridizare ADN a confirmat c tulpinile 4059
i 4231 produce o BLIS fie similare sau identice cu aureocin A70, ale crei determinani genetice
sunt prezente plasmida lor unic. Cu toate acestea, profilele PFGE ale ambelor specii s-au dovedit a
fi identice ntre ele, dar diferit de modelul de benzi de S. aureus A70, confirmnd c genele
implicate n aureocin A70 producie pot fi gsite n tulpinile genetic nenrudii de S. aureus, ca deja
propus de Ceotto et al. (2012).
A dat BLIS 4059 sa dovedit a fi rezistente la proteaz XXIII i digestia pronaza, n timp ce
A70 aureocin era sensibil, se poate presupune c BLIS 4059 este o variant mai rezistent de A70
aureocin, care poate da primul un avantaj atunci cnd se analizeaz cererea introductiv n
produsele alimentare cu activitate enzimatic ridicat, cum ar fi carnea (Glvez et al., 2007).

9
Bibliografie

1. Augustin et al., 1992 J. Augustin, R. Rosenstein, B. Wieland, U. Schneider, N. Schnell, G.


Engelke, et al. Genetic analysis of epidermin biosynthetic genes and epidermin-negative
mutants of Staphylococcus epidermidis, European Journal of Biochemistry, 204 (1992), pp.
11491154.
2. Bannerman and Peacock, 2007, T.L. Bannerman, S.J. Peacock, Staphylococcus,
Micrococcus, and other catalase-positive cocciP.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C.
Tenover, R.H. Yolken (Eds.), Manual of clinical microbiology (9th ed.), ASM Press,
Washington, DC (2007), pp. 390411.
3. Bastos and Ceotto, 2010, M.C.F. Bastos, H. Ceotto. Bacterial antimicrobial peptides and
food preservation, M. Ray, M. Chikindas (Eds.), Antimicrobial peptides and food quality
and safety, CAB International, United Kingdom (2010), pp. 6276

10