Procedee microscopice de

investigare celular
prin folosirea
anticorpilor

Dr. Ctlin Gabriel MANOLE

Definiia noiunii de anticorp

ANTICRP s. m. protein specific elaborat de organism ca rspuns la ptrunderea unui antigen. (< fr.
anticorps) (DEX)

N.B. Prin antigen nelegem orice protein strin de organismul care produce anticorpul.

O imunoglobulin, n forma literei Y, produs de limfocitele B, folosit de sistemul imun

pentru identificarea i neutralizarea particulelor strine.

Definiia noiunii de anticorp

Interacioneaz specific cu o secven de aminoacizi (EPITOP) din structura unei proteine

(ANTIGEN)

Fiecare bra al anticorpului conine un paratop, care este specific pentru un singur epitop.

Structura general
a anticorpilor

Metode de utilizare a
anticorpilor n microscopie

Imunomarcare pentru microscopia optic

Imunohistochimia

Imunofluorescena

Imunomarcare pentru microscopia electronic

Imuno-electrono-microscopia

Imunomarcarea

Reprezint totalitatea tehnicilor care folosesc anticorpi pentru localizarea antigenelor corespunztoare

pe seciuni tisulare

Crioseciuni

Seciuni la parafin
pe celule n cultur

Face posibil vizualizarea distribuiei i localizrii componentelor celulare n microscopie optic

Principiul metodei

Recunoaterea specific a unui antigen (Ag) de ctre un un anticorp (Ac)

Ac sunt purificai din serul animalelor de laborator

Ac vor fi cuplai cu un sistem de detecie

ENZIM creia i se furnizeaz un SUBSTRAT care va fi transformat ntr-un compus colorat

(IMUNOHISTOCHIMIE)

Vizualizare n microscopie optic, cu lumin direct

MOLECULE FLUORESCENTE (IMUNOFLUORESCEN)

Vizualizare n microscopie de fluorescen

Metode de
imunomarcare pentru microscopie

Metoda direct

Metoda indirect

Metoda direct
- anticorp primar marcat -

Metoda indirect
anticorp primar nativ i anticorp secundar marcat

Imunohistochimia

Ce structuri celulare pot fi marcate ?

Structuri membranare

Organite celulare

Componente nucleare

Evaluarea apoptozei

IMUNOFLUORESCENA

O variant de luminiscen
O molecul capabil de fluorescen (fluorofor, sau fluorocrom) excitat cu lumin de o anumit
lungime de und, va emite o radiaie electomagnetic cu o lungime de und superioar, n spectrul
vizibil

Parametrii:

Spectru de absorbie/excitaie

Spectru de emisie

Intensitate

Durat

Spectrul
electromagnetic

Imuno-electrono
microscopia

Metoda a fost introdus pentru prima oar n 1971 de ctre Faulk & Taylor

Folosete anticorpi absorbii pe particule de aur (5-30 nm)

Dup caracteristicile anticorpului primar i structura celular creia se adreseaz marcarea se poate
realiza:

pre-includere

post-includere

Metoda mai scump i mai laborioas