LUCRAREA 13

Diagnosticul de laborator al infecţiilor cauzate de anaerobi endogeni .

Clasificare

Coci Gram-pozitivi: Peptostreptococcus, Peptococcus

Coci Gram-negativi: Veillonella
Bacili Gram-pozitivi: Lactobacillus, Propionibacterium, Actinomyces,
Eubacterium,
Bifidobacterium
Bacili Gram-negativi:: Bacteroides spp., Prevotella, Porphyromonas,
Fusobacterium

fac parte din flora normală a organismului: cavitate bucală, tub digestiv, vagin, etc. –
leziuni la aceste nivele favorizează infecţii cu germeni anerobi

Indicii ale infecţiilor cu germeni anaerobi:

o abcese profunde (cerebrale, hepatice, etc.)
o miros fetid

o prezenţa în plăgi a corpilor străini, ţesuturi necrotice, insuficienţă

circulatorie, tumori, tulburări de metabolism

o contaminare cu floră anaerobă – intervenţii chirurgicale (abdominal, sfera

genitală feminină, maxilo-facial)

Produs patologic:

 Produse patologice adecvate pentru detectarea

anaerobilor:
o puroi din abcese,

o probe din plăgi adânci (plăgi muşcate, contaminate cu pământ, ţesuturi

zdrobite)
o abcese gingivale, periorale
o puroi din sinusurile paranazale

o secreţii din căile respiratorii inferioare, recoltate cu dispozitive cu lumen

dublu o ulceraţii (“diabetic foot”, decubitus)
o probe recoltate intraoperator

1
 o urină prelevată prin aspiraţie suprapubiană
o sânge pentru hemocultură

- Produse patologice inadecvate pentru detectarea

anaerobilor: o exsudat faringian, nazofaringian
o tampon cu secreţie de pe gingii

o spută (eliminată spontan, aspiraţie

nazo/orotraheală)
o conţinut gastric

o materii fecale (excepţie: dg. C. botulinum, C.

difficile) o urină (emisă spontan/cateter)

o secreţie vaginală/cervicală (excepţie: vaginoză

bacteriană) o secreţie din plagă superficială

- protejarea de efectele toxice ale oxigenului a bacteriilor anaerobe prezente

în probă o recipiente speciale
o mediu de transport pentru anaerobi
- păstrare la temperatura laboratorului
- prelucrare
o în 30 de minute – produs patologic în cantitate redusă (0,5 ml)

o bacteriile îşi păstrează viabilitate timp de câteva ore – produs patologic

purulent în cantitate mai mare (peste 1 ml)
o în mediu de transport bacteriile pot supravieţui câteva zile

Recoltarea produselor patologice

· anaerobii endogeni sunt prezenți frecvent în număr foarte mare în unele locații în
organism (109 – 1012)
· este importamtă colectarea probelor în așa fel încât contaminarea cu germeni
din flora normală să fie minimă
· cea mai corectă metodă de recoltare este aspirarea produsului patologic.

o recoltarea produselor patologice cu tampoane nu este acceptabilă, decât în

cazul în care nu există alte posibilități de recoltare

· proba recoltată se injectează imediat, cu un ac nou, steril, în recipiente speciale

pentru transportul anaerobilor, după ce aerul din acul nou a fost evacuat
2
 · recipientele pentru transport nu trebuie deschise inainte ca proba să fie recoltate,
pentru a minimaliza contactul cu oxigenul

· recipientele se inchid imediat după înoculare și se transportă cât mai rapid

posibil la laboratioare soecializate pentru prelucrarea anaerobilor

Abcese

· colecții lichide localizate

o aspirație cu seringă cu ac steril, după antisepsia tegumentelor
· abcese evidențiate intraoperator cu conținut lichidian mic (≤0,2 ml)
o recoltare prin aspirație cu ac fară seringă

Abcese orale sau gingivale

· flora bacteriană a cavității bucale este frecvent implicată în etiologia abceselor
periorale

· este importamtă colectarea probelor în așa fel încât contaminarea cu germeni

din flora normală să fie minimă

o recoltarea produselor patologice cu tampoane nu este acceptabilă

o se recomandă recoltarea prin aspirare sau drenare prin tegument
o dacă recoltarea presupune abordul abcesului prin mucoasă ,
mucoasa trebuie izolată cu tampoane de vată sterile, apoi uscată
si decontaminată riguros cu antiseptice (clorhexidină, iod-
povidonă, etc.)

Leziuni parodontale
· regiunea se izolează cu tampoane sterile, apoi se usucă
o pentru decontaminare și uscare se poate folosi etanol 70%
· placa supragingivală se îndepărtează cu ajutorul unui scaler steril

· cu alt scaler steril sau cu o chiuretă Gracey se recoltează proba prin raclare
ușoară, din profunzimea șanțului
· recoltarea se poate face și cu conuri de hârtie sterile
o 3 conuri se introduc în profunzimea leziunii, se lasă timp de contact 10
sec., apoi se introduc în medii de transport corespunzătoare

3
Saliva

· Pacientul scuipă cca. 2 ml salivă într-un recipient steril

o Se poate face stimularea secreției salivare cu parafină

o Dacă este necesar se poate cromometra timpul necesar pacientului pentru a

produce o anumită cantitate de salivă, determinându-se rata fluxului salivar

o La copii mici se recoltează saliva din regiunea sublinguală, cu o pipetă

sterilă

Placa supragingivală

· Regiunea din care se va recolta se izolează cu tampoane sterile, apoi se

usucă (tot cu tampoane sterile)

· Proba se recoltează cu scaler sau cu o chiuretă sterilă si apoi se introduce

imediat în recipientul de transport

Placa subgingivală

· Regiunea din care se va recolta se izolează cu tampoane sterile, apoi se

usucă (tot cu tampoane sterile)
· Placa supragingivală se ăndepărtează cu ajutorul unui scaler
· Recoltarea cu ajutorul scalerului steril
o Scalerul se introduce buzunarul format între dinte și gingie și se raclează
ușor

o Scalerul se introduce în recirientul de transport și se agită

ușor pentru desprinderea probei de pe el
· Recoltare cu conuri de hârtie sterile
o Marginea gingiei se reatractează

o În profunzimea șanțului format se introduc 3 conuri, se lasă timp de

contact 10-60 sec., apoi se introduc în medii de transport
corespunzătoare
· Recoltare cu freză zimțată
o Marginea gingiei se reatractează

o Se plasează acul în profunzimea șanțului

o Freza se introduce prin ac până când depășește marginea inferioară a

acului o După recoltarea probei, freza se retrage în ac, apoi se
retractează și acul
4
 o Acul se introduce în recipientul de transport, iar freza se eliberează în
mediul de transport

Placa periinplantară

· Implant nereușit

o Se îndepărtează structurile prostetice superficiale, dacă există

o Se minimalizează contaminarea situsului cu salivă prin clătire cu
clorhexidină

o Regiunea se izolează cu tampoane sterile, apoi se usucă și se aspiră

continuu pentru a preveni contaminarea cu salivă
o Accesoriul se eliberează din șurub și se introduce în recipientul de transport
· Suspiciune de periimplantită
o Placa se recoltează fie cu scaler, fie cu conuri

Principii de diagnostic

Examen microscopic:
- se descriu morfotipurile bacteriene prezente în produsul patologic

Cultivare

- medii adecvate pentru cultivarea anaerobilor (pp întotdeauna se însămânţează în

paralel şi pentru aerobi)

o medii lichide: mediul cu tioglicolat

o medii solide: geloza sânge pentru anaerobi ( Columbia, Schaedler, etc)
o medii speciale, selective pentru diagnosticul anerobilor (PEA- Phenyl-etyl
alcool, BBE
– bacteroides bile-esculin, KVLB – kanamycin-vancomycin laked blood,
EYA – egg-yolk agar)
- incubare: în condiţii de anaerobioză
o metode clasice (cu pirogalol, metoda Fortner)
o în „jar” anaerob, anaerostate cu plicuri generatoare de anaerobioză
o chamber anaerob
- durata incubării: peste 48 de ore – până la 7 zile

Identificare

5
- demonstrarea caracterului strict anaerob! (lipsa creşterii în atmosferă
obişnuită, microaerofilie)
- ex. microscopic: pp nativ (spori, mobilitate), pp colorate Gram
- caractere de cultură - examinare sub lupă (frecvent culturi mixte: izolare!);
- identificări pe baza caracerelor biochimice:

o creşterea pe diverse medii selective

o discuri de identificare (vancomicină, kanamicină, colistin etc)
o prezenţa pigmenţilor
o fluorescenţă
o hemoliză
o producere de lipază, lecitinază
o producere de urează, indol, catalază, oxidază etc.

- sisteme comerciale de identificare

o truse API

pe baza unor teste teste biochimice (fermentarea a 16 zaharuri,

producere de indol, uează, descompunerea esculinei şi a gelatinei,
testul catalazei şi oxidazei)
- gazcromatografie
o identificare pe baza detectării produşilor metabolici (caracteristic pentru
specie)

Testarea susceptibilităţii faţă de antibiotice

- metoda difuzimetrică – inadecvată pentru testarea anaerobilor
- determinare CMI prin metoda microdiluţiilor sau E-teste