19, 20 și 21. 03.

2018
Enterobacterii (1)

• un sindrom despre care am mai amintit ...

• sfaturi ... mirări ...

• lucrare de control
“Felul cum întrebuinţăm timpul
liber ne trădează caracterul.”

Plinius
„Căci ce-i foloseşte omului să
câştige lumea întreagă, dacă-şi
pierde sufletul?

Sau ce ar putea să dea omul, în

schimb, pentru sufletul său?”.
Un proiect ...

• Problemă / Beneficiari / Grup țintă

• Scop
• Obiectiv general
• Obiective specifice
• Activități / Resurse / Buget
• Rezultate
• Monitorizare și evaluare (feed-back) - indicatori

• Susținere în timp („sustenabilitate”)

0,64%

0,63%
ENTEROBACTERIACEAE
dar ...
 Definiție

 Bacili Gram-negativi, nesporulați, mobili /

imobili, aerobi / facultativ anaerobi
 Fermentează glucoza cu producere de acid / acid+gaz
 Oxidază negativ, catalază pozitiv
 G+C = 49-59%
 Habitat intestinul uman și animal
alte regiuni ale corpului
plante, sol, alimente
 Specii comensale, patogene, condiționat patogene
 Nomenclatură și clasificare
1919 (Winslow) fermentarea zaharurilor
fermentativi
nefermentativi
intermediari

1956; 1957 (Cowan) Citrobacter, Escherichia, Klebsiella, Proteus,

Salmonella si Shigella.
1959 (Kaufmann) trei triburi si 14 genuri
1960 (Ewing si Edwards) patru grupuri biochimice:
Escherichia – Shigella
Arizona – Citrobacter- Salmonella
Cloaca – Klebsiella – Serratia
Proteus - Providencia

1966 (Ewing) patru triburi și 11 genuri (genul Edwardsiella)

Eschericheae: Escherichia – Shigella
Salmonelleae: Arizona – Citrobacter- Salmonella
Klebsielleae: Enterobacter – Klebsiella – Serratia
Proteae: Proteus - Providencia
1985 (Farmer si col.) 22 genuri și 69 de specii (29 de biogrupuri
nedenumite încă) … ... ...
Alishewanella Moellerella
Alterococcus Morganella
Aquamonas Obesumbacterium
Aranicola Pantoea
Arsenophonus Pectobacterium see Erwinia
Azotivirga Candidatus Phlomobacter
Blochmannia Photorhabdus, e.g. Photorhabdus
Brenneria luminescens
Buchnera Poodoomaamaana
Budvicia Plesiomonas, e.g. Plesiomonas
Buttiauxella shigelloides
Cedecea Pragia
Citrobacter Proteus, e.g. Proteus vulgaris
Cronobacter Providencia
Dickeya Rahnella
Edwardsiella Raoultella
Enterobacter Salmonella
Erwinia, e.g. Erwinia amylovora Samsonia
Escherichia, e.g. Escherichia coli Serratia, e.g. Serratia marcescens
Ewingella Shigella
Grimontella Sodalis
Hafnia Tatumella
Klebsiella, e.g. Klebsiella pneumoniae Trabulsiella
Kluyvera Wigglesworthia
Leclercia Xenorhabdus
Leminorella Yersinia, e.g. Yersinia pestis
Yokenella
 Proteus e.g. Proteus vulgaris

Salmonella

Escherichia e.g. Escherichia coli

Shigella

Klebsiella e.g. Klebsiella pneumoniae

Yersinia e.g. Yersinia pestis

 Cultivabilitate
• Cultivă cu ușurință pe medii nutritive simple
• În medii lichide
– Tulbură omogen mediul, fără depozit, fara văl
– Proteus si Klebsiella formeaza văl sau inel
• Pe mediile gelozate simple
– Colonii rotunde, netede, bombate semitransparente, tip ”S”
– Tulpinile “R” dezvoltă colonii turtite, cu marginea neregulată
– Dar și tip ”M”
– Unele specii / tulpini produc pigmenți
– ... ... ...
• Pe mediile cu sânge unele specii produc hemoliză
• Medii de cultură selective / diferenţiale - utilizate în diagnostic
 Medii selective utilizate pentru identificarea
Enterobacteriilor
Sistem indicator Aspectul coloniilor
Denumirea Agent selectiv Zaharuri Indicator de pH Enterobacterii Enterobacterii
fermentative nefermentative
MacConkey Saruri biliare + cristal Lactoza Rosu neutru Rosii, ma ri, Necolorate,
violet opalescente,uneori semitransparente
cu halou
opalescent
Levine Albastru de metilen Lactoza Eo zina ga lbena Rosu inchis, cu Necolorate,
sau fara luciu semitransparente
meta lic
Hectoen Saruri biliare Lactoza , Albastru de Rosii, med iul Albastru inchis
zaharoza , bromthy mol, virea za in rosu uneoricu centrul
salicina fucsina adcida negru
Agar verde Verde brilliant Lactoza , Rosu fenol Verzui, Rosu intens,
brilliant zaharoza semitransparente med iul v irea za in
ori opace rosu
Wilson Bla ir Verde brilliant - - Mici verzu i ori Salmonelle le dau
mucoide maronii colonii negre,
rugoase cu halou
meta lic
Salmonella- Saruri biliare, verde Lactoza Rosu neutru Rosii cu centru Necolorate,
Shigella brilliant opac semitransparente
 Morfologie
• Bacili cu lungimea de 2-3μ și grosimea de 0,6μ, cu laturile
paralele și capetele rotunjite (excepţii, ex. Proteus spp., Klebsiella
pneumoniae).

• Sunt tulpini care au forma cocoidă ... tulpini cu aspect filamentos.

• Dezvoltă flageli peritrichi, cu excepția genului Tatumella

• Multe enterobacterii sunt fimbriate, identificându-se 50-100 fimbrii

per celulă, cu rol în patogenitate

• Unele celule dezvoltă pili de „sex” cu rol în conjugarea bacteriană

• Unele specii sunt capsulate (colonii M pe mediile solide)

 Metabolism si fiziologie

Edwardsiella

Enterobacter

Providencia

Morganella
Escherichia

Citrobacter
Salmonella

Klebsiella

Ewingella

Tatumella
Kluyvera
Cedecea
Yersinia
Shigella

Serratia

Proteus
Hafnia
Test

Glucoza- + - + + + + + d + + D d - + + - -
gaz
Zaharoza d D - - d + + + d D d - D D + - +
Lactoza + D - D d D d D - - - - - D + + -
Adonita - - - - D d D d - - D - D - - - -
Inozita - - - d - + d D - - D - - - - - -
Citrat - - - + + D + + + d + - - + + + -
(S immons)
Malonat - - - D D D d D d - - - - D + - -
H2 S - - + + D - - - - + - - - - - - -
Indol + d + - D D - - - D + + D - + - -
Lizina d - + + - D D + + - - - - - D - -
Ornitina d D + + d - D + + D - + D D + - -
Fenilalanina - - - - - - - - - + + + - - - - +
Uree - - - - d D D - - + D + D - - - -
Mobilitate d - + + + - + + + + + + - + + + -
 Patogenitate (... Ag...)
 Endotoxine
Şocul endotoxic ... CID
Febră
Leucopenie
Hipotensiune arterială
Acțiune abortigenă

 Exotoxinele
Toxina termolabilă
Toxina termostabilă
Toxina shiga

 Invazivitate

 Multiplicare intracelulară
Coagularea intravasculară
diseminată (CID)
 Etiologie
- Sepsis bacterian
- Patologii maligne (tumori / un anumit tip de
leucemie)
- Cauze obstetricale (jumatăte din cazurile cu
„abruptio placentae”)
- TRAUMELE (mai ales craniene) → CID prin
expunerea sângelui la fosfolipidele din țesutul
lezat, hemoliză și lezare endotelială.

=> Toate duc la LEZIUNI ENDOTELIALE sau

DISTRUCȚII TISULARE ce activează
COAGULAREA.
Colecţie şi/sau colonizare la nivel nazofaringian
 Colecţie şi colonizare la nivel nazofaringian

Pneumonie
(în unele cazuri)
 Colecţie şi colonizare la nivel nazofaringian

pneumonie

Invazie la nivel sangvin

 Colecţie şi colonizare la nivel nazofaringian

Invazie la nivel sangvin

~ 55%

MENINGITĂ
 Colecţie şi colonizare la nivel nazofaringian

Invazie la nivel sangvin

~ 55% ~30%

MENINGITĂ
MENINGITĂ
+
MENINGOCOCEMIE
 Colecţie şi colonizare la nivel nazofaringian

Invazie la nivel sangvin

~ 55% ~30% ~15%

MENINGITĂ
MENINGOCOCEMIE
MENINGITĂ FULMINANTĂ
+ (sdr. Waterhouse-
MENINGOCOCEMIE Friderichsen)
 Colecţie şi colonizare la nivel nazofaringian

pneumonie

Invazie la nivel sangvin

Defecte la nivelul Ac
bactericizi, MBL, TNF, FcγIIA, PAI-1,
complement, ACE-1, IL-1Ra, gene
opsonofagocitoză ~30% IL-1
~ 55% ~15%
MENINGITĂ MENINGOCOCE
MENINGITĂ MIE
+ FULMINANTĂ
MENINGOCOCEMIE
Fiziopatologia CID
• Formare de fibrină răspândită intravascular
• activitate excesivă a proteazelor sangvine
• depășește mecanismele naturale de
anticoagulare.

• Formare necontrolată de trombină prin

expunerea la nivele patologice de factori
tisulari
=> 2 mari probleme:
1). Proces accelerat de formare a trombinei
- suprimarea mecanismelor naturale anti C
- fibrinoliză anormală

DEPUNEREA SISTEMICĂ DE FIBRINĂ (v. m și m)

=> compromiterea vascularizației organelor

=> insuficiență de organ (mai ales pulmonar,
renal, hepatic, cerebral)
2). Activare continuă a coagulării
=> consumul de factori de coagulare
=> consumul de plachete sangvine

=> SÂNGERARE SISTEMICĂ

(proces agravat de hiperfibrinoliza
secundară)
 CID

Generare necontrolată de trombină

Consumarea plachetelor sangvine

şi a factorilor plachetari

Sângerare difuză
 CID

Generare necontrolată de trombină

Depozite de fibrină Consumarea plachetelor sangvine

în microcirculaţie şi a factorilor plachetari

Sângerare difuză
 CID

Generare necontrolată de trombină

Depozite de fibrină
în microcirculaţie

Afectarea Afectarea
ischemică hematiilor şi
tisulară hemoliză
 CID

Generare necontrolată de trombină

Depozite de fibrină
în microcirculaţie

Afectarea Afectarea
Insuficiență
ischemică hematiilor şi
de organ
tisulară hemoliză
 CID

Generare necontrolată de trombină

Depozite de fibrină
în microcirculaţie

Insuficiență Afectarea Afectarea

de organe ischemică hematiilor şi
tisulară hemoliză

Hiperfibrinoliză
secundară
 CID

Generare necontrolată de trombină

Depozite de fibrină
în microcirculaţie

Afectarea Afectarea
Insuficiență
ischemică hematiilor şi
de organe
tisulară hemoliză

Deblocarea Hiperfibrinoliză
vaselor secundară
 CID

Generare necontrolată de trombină

Depozite de fibrină Consumarea plachetelor sangvine

în microcirculaţie şi a factorilor plachetari

Afectarea Afectarea
Insuficiență
ischemică hematiilor şi
de organe
tisulară hemoliză

Deblocarea Hiperfibrinoliză
vaselor secundară Sângerare difuză
 CID

Generare necontrolată de trombină

Depozite de fibrină Consumarea plachetelor sangvine

în microcirculaţie şi a factorilor plachetari

Afectarea Afectarea
Insuficiență
ischemică hematiilor şi
de organe
tisulară hemoliză
FDP
D-dimer test
Deblocarea Hiperfibrinoliză
vaselor secundară Sângerare difuză
 Semne clinice

• sângerările
• La locul de recoltare,
• Peteșii,
• Echimoze până la

• Hemoragii severe
• tract intestinal,
• pulmonar
• SNC etc.
În CID cronică:
- sângerare mai discretă
– limitată la suprafața tegumentului
– limitată la nivelul mucoaselor
- Insuficiența de organ (e)
- datorită ocluziilor vasculare
- prin hipercoagulabilitate.

În CID acută
- complicații hemodinamice
- șoc.
• Purpura fulminans
– formă severă de CID
– tromboza unor arii extinse la nivel tegumentar
– afectează m.a. copiii în urma unor infecții
 bacteriene sau
 virale
– mai ales pe cei cu hipercoagulabilitate
înnăscută/dobândită.
 Diagnostic de laborator în CID
•  PT / aPTT
• Nr. de plachete sangvine <100.000/mm3
sau scădere rapidă a numărului de
plachete
• Prezenta schistocitelor (fragmente de
eritrocite) pe frotiul de sânge
•  PDF (produși de degradare a fibrinei)
 Tratament
• I) monitorizarea semnelor vitale + analiza
severității hemoragiilor + corectarea
hipovolemiei + proceduri hemostatice (dacă e
nevoie).
• II) tratamentul patologiei pre-existente !
(traumă, sepsis, urgență obstetricală etc)
• III) înlocuire de plachete și factori;
Heparina – pt. tratamentul depozitelor de fibrină
Proteina C activă – pt. rolul ei anticoagulant
ENTEROBACTERIACEAE
 ESCHERICHIA COLI
Definiție

Germeni comensali
Patogeni digestivi
Patogeni extraintestinali Infecții urinare
Meningite
Septicemii / sepsis

Bacili Gram-negativi, fermentativi, aerobi,

mobili/imobili
G+C: 50-51%
1-3 X 0.4-0.7 
Filamente/cocobacili
Cili peritrichi/capsulă/fimbrii
 Metabolism

Caractere + Caractere -

Catalază Oxidază
Gaz/glucoză / lactoză Uree
-galactozidază Citrat
Indol Malonat
Lizina H 2S
 Structura antigenică

• Antigene somatice “O”

• Antigene flagelare “H”

• Antigene de înveliș “K” (L, A, B)

 Tulpini ...
• Ag O
– Somatic (LPZ)
– 171 grupuri
• Ag H
– Flagella
– 56 tipuri
• Ag K
– Capsulă ...
– 80 tipuri O18ac:H7:K1

18th O antigen 1st K antigen

7th H antigen
 Patogenitate

• Adezine de tip fimbrial și afimbrial

• Factorii de colonizare
• Antigenele somatice “O”
• Capsulă
• Toxine
 E. coli enterotoxigen (ETEC)
DIAREEA CĂLĂTORILOR
Factori de patogenitate Control genetic Mecanisme de patogenitate

Adezine Plasmidic Adeziune la nivelul

Enterotoxine termolabile (LT)
Enterotoxine termostabile
(STa)
Enterotoxine termostabile
(STb)
Proteine de membrana
externa
vilozitatilor intestinale
Colonizarea peretelui
intestinal
Plasmidic/cromozomal Receptorul celular este GM1
Perturbarea sistemului
secretor
Plasmidic Perturbarea sistemului
secretor
Modificarea citoscheletului
Plasmidic Atrofie vilozitara
Diminuarea capacitatii de
absorbtie
Cromozomal Adeziune/invazivitate?
Inflamatie
 E. coli enteropatogen (EPEC)
DIAREE MALIGNĂ A NOU-NĂSCUTULUI

Factori de patogenitate Control genetic Mecanisme de patogenitate

Adezine bfp (bundle-forming Plasmidic-factor de aderenta Receptori: glicolipidele din

pilus) Gene bfpA membrana
Aderenta localizata
Alte adezine

Intimina Cromozomal Aderare intima la epiteliul

Proteina de 39 KDa eaeA: codifica intimina intestinal, distrugerea
Proteine bacteriene de (atasare/stergere) microvilozitatilor apicale,
marimi diferite esp, sep: codifica pentru diaree prin malabsorbtie,
proteine secretate de EPEC internalizare
 E. coli enterohemoragic (EHEC)
SINDROM HEMOLITIC UREMIC...

Factori de patogenitate Control genetic Mecanisme patogenice

Fimbrii Plasmidic Adeziune fara invazivitate

Alte sisteme

Intimina O 157 Cromozomal Aderare intima la epiteliul

(atasare/stergere) eaeA (locusul LEE) intestinal, distrugerea
microvilozitatilor apicale,

Citotoxine SLT (shiga-like) Bacteriofag temperat Receptor celular: Gb3

(globotriosyl)
Actiune pe ARNr 28S-
inhibarea biosintezei proteice
 Escherichia coli enteroagregativ (EAgEC)

Factori de patogenitate Control genetic Mecanisme patogenice

Adezine AAF Plasmidic Adeziune, invazivitate

Invazine

Enterotoxine termolabile (LT) Plasmidic Dezechilibru hidroelectrolitic

Toxina necrozanta Plasmidic Edem si inflamare a vilozitatilor

intestinale

Citotoxina (ST-like) Plasmidic Activarea guanilat-ciclazei

Dezechilibru hidroelectrolitic
 Escherichia coli cu aderență difuză (DAEC)

Factori de patogenitate Control genetic Mecanisme de patogenitate

Adezine (AIDA) Plasmidic Adziune la enterocitele

epiteliului intestinal

Fimbrii F1845 (AFA) Plasmidic (operonul afa) Recunoasterea receptorului

Cromozomal DAF
 Evidențierea în laborator a patotipurilor enterice

Patotip Metode de diagnostic

ETEC ELISA pentru detectarea toxinelor LT si/sau ST

PCR pentru st si sau lt (toxina termostabila/termolabila)

EPEC Serologie “O”

Adeziune pe linii celulare Hep-2 sau HeLa
PCR pentru bfp (pilina) si eaeA (intimina)

EHEC ELISA pentru detectarea toxinelor SLT1 si/sau SLT2

Efect citotoxic pe linia celulara Y1
PCR pentru eaeA (intimina)
PCR pentru slt1 si slt2 (toxina shiga-like1 si shiga-like2

EIEC Serologie “O”

Testul Sereny
PCR pentru ipaH (invazina)

DAEC Adeziune de tip difuz pe linii celulare HEp-2 sau HeLa

PCR pentru afa (adezine afimbriale)

EAggEC Adeziune de tip agregativ pe linii celulare Hep-2 sau HeLa

PCR pentru agg
 Genul Klebsiella

K. pneumoniae, K. ozaenae, K. rhinoscleromatis şi K. oxytoca.

• larg răspândită în natură (sol, apă)

• intestinul omului şi animalelor;
• în mediul spitalicesc se selectează tulpini
multirezistente
Bacili gram negativi, încapsulaţi (capsula are
dimensiuni de 2-3 ori mai mari decât diametrul
bacteriei), imobili, nesporulaţi.
Se pot dispune în diplo.
Bacili gram negativi, încapsulaţi (capsula are dimensiuni de 2-3
ori mai mari decât diametrul bacteriei), imobili, nesporulaţi.
Se pot dispune în diplo.

Cultivă cu uşurinţă pe medii uzuale.

Colonii de tip …
Lactoză ...
Structură antigenică
• Antigene somatice O (LPZ) specifice de grup
• Antigene capsulare polizaharidice K, specifice de tip
• peste 80 de tipuri antigenice
• reacţia de umflare a capsulei.
Structură antigenică
• Antigene somatice O (LPZ) specifice de grup
• Antigene capsulare polizaharidice K, specifice de tip
• peste 80 de tipuri antigenice
• reacţia de umflare a capsulei.

Caractere de patogenitate
• microorganism condiţionat patogen
•poate fi implicat în patologia prin multiplicare şi invazivitate.

Factorii de patogenitate
• capsula
• endotoxina (antigenul O).
Boli produse ?

… Pneumonii ...

Alte boli
 Genul Proteus

Proteus mirabilis şi Proteus vulgaris

P. morganii a devenit Morganella morganii; P.
rettgeri a devenit Providencia rettgeri).

• larg răspândit în natură (ubicuitar)

• intestinul omului şi animalelor;
• în mediul spitalicesc se selectează tulpini multirezistente;
• se pot identifica în materiile organice în putrefacţie, în
alimente.
Bacili gram negativi, foarte mobili (cili peritrichi),
nesporulaţi.
Cu accentuat polimorfism.
Bacili gram negativi, foarte mobili (cili peritrichi), nesporulaţi.
Cu accentuat polimorfism.

Cultivă cu uşurinţă pe medii uzuale.

Colonii de tip …
“Fenomene” ...
Boli produse ?

Infecţii urinare

Probleme deosebite ?
From:

March 24, 2017 2:13 AM

Sent: Thursday,
To: mircea.ioan.popa@gmail.com
Subject: Mesaj microbiologie

Buna seara! Am parcurs materialul trimis de

dumneavoastra si chiar daca pe alocuri
mesajele ating un nivel de persuasiune cu care
nu suntem obisnuiti in fiecare zi, eu cred ca
buna intentie, onorabilitatea si folosul ce
decurge din aplicarea lor reprezinta un avantaj
clar pentru noi si imi dau seama ca nu aveti
obligatia de a face acest demers.
Din informatiile pe care le am, consider ca initiativa
dvs pentru restaurarea increderii in Institutul
Cantacuzino, dar si a functionalitatii si a performantei
acestuia, reprezinta un scop nobil, la care am
subscris si pe care il voi promova pe masura
puterilor mele. Sunt convins ca exista o legatura
incontestabila intre obstacolele puse in fata
institutului si tendinta publica de a contesta valoarea
principiilor vaccinarii profilactice, iar trimiterea in
derizoriu a acestor principii de preventie in numele
unei dubioase valorificari imobiliare a activelor
institutului mi se pare un gest iresponsabil si
criminal la adresa sanatatii publice.
Consider, de asemenea, ca neglijarea/luarea in
derizoriu a unor principii sanatoase de
sanatate publica a condus si va conduce, in
lipsa unor masuri adecvate, la "crize"
epidemiologice precum sdr. hemolitic uremic.

Pentru acest motiv voi ramane deschis la

temele de studiu.
From:
Sent: Thursday, March 24, 2017 8:20 AM
To: Mircea Popa
Subject: Autoevaluare
...

– nu am beneficiat la maxim de oportunitățile

din jur și nu am avut o comunicare eficientă cu
profesorii și asistenții (aici este de vină și timiditatea
mea, pe care încerc să o înfrâng)