LP 4

DOZAREA ENZIMATICĂ A COLESTEROLULUI / 2 ORE

Colesterolul seric

Determinarea nivelului colesterolului evalueaza statusul lipidic si tulburarile

metabolice, riscul de ateroscleroza, stenoza coronariana si infarct miocardic.

Dozarea colesterolului si a fractiunilor HDL- si LDL-colesterol reprezinta test

screening pentru evaluarea gradului de ateroscleroza, hipertensiune arteriala,
cardiopatie ischemica si accident vascular cerebral sau pentru monitorizarea
pacientilor cu afectiuni coronariene.

Prin urmare, colesterolul se determina pentru:

- Monitorizarea factorilor de risc crescut pentru boala coronariana;
- Screening-ul dislipidemiilor primare si secundare;
- Monitorizarea tratamentului dislipidemiilor (TG mari, HDL-col mic)

Dozarea colesterolului total prin metoda enzimatica colorimetrica

Principiul metodei

Metoda enzimatica permite determinarea cantitativa si specifica a colesterolului total

din lichide biologice.

Colesterolul si esterii colesterolului sunt eliberati din lipoproteine sub actiunea

enzimelor colesterolesteraza, colesterol oxidaza si peroxidaza.

Peroxidaza in prezenta fenolului si a 4-aminoantipirinei (PAP) conduc la formarea

produsului final, chinonimina (rosu), direct proportional cu cantitatea de colesterol din
proba.

colesterol esteraza
Esteri de colesterol + H2O ―――――――→ colesterol + acizi grasi
colesterol oxidaza
Colesterol + O2 ―――――――→ 3-colesten (colestenona) + H2O2
peroxidaza
2 H202 + fenol + 4-aminoantipirina (PAP) ―――――――→ chinonimina (rosu)
Reactivi

REACTIVUL l
Tampon PIPES pH 6,9 (90 mmol/l); fenol (26 mmol/l);

REACTIVUL 2: colesterol esteraza (300 U/1); colesterol oxidaza (300 U/1);

peroxidaza (1250 U/I); 4-aminoantipirina (0,4 mmol/l).

STANDARD colesterol:colesterol 200 mg/dl, 2g/l, 5,17 mmol/l.

PREPARAREA REACTIVULUI DE LUCRU:

R1 se amesteca cu R2 in proportia consemnata de producator

Proba: ser sanguin, plasma heparinizata (nehemolizata).

Mod de lucru
In trei eprubete PROBA (P), STANDARD (S) si MARTOR (M) se adauga reactivii
conform tabelului:

STANDARD MARTOR
REACTIVI PROBA (P)
(S) (M)
Amestec reactivi (enzimatic-
1ml 1ml 1ml
culoare)
PROBA (ser) 10 μl - -
STANDARD - 10 μl -
APA DISTILATA - - 10 μl

Se agita, se incubeaza 10 minute la 37ºC.

Se masoara extinctia probelor (Ep) si a standardului (Es) fata de martor la λ=546nm
(sau λ=505 nm) in cuva de 1 cm. Culoarea este stabila timp de o ora.

CALCUL:

COLESTEROL (mg/dl)= (Ep/Es) x conc. standard exprimata in mg/dl (200mg/dl)

VALORI NORMALE:
160 – 200 mg/dl

Colesterol total optim adulti < 200 mg/dl; 150-200 mg/dl

Colesterol total optim adolescenti, copii < 170 mg/dl;

Suspiciune de dislipidemie = colesterol total 220-240 mg/dl

Hipercolesterolemie cu risc crescut >240 mg/dl
Variatii patologice

Valori crescute hipercolesterolemie

- Hiperlipoproroteinemii primare
- Hipotiroidie
- Ateroscleroza
- Colestaza
- Sindrom nefrotic
- Anotrexie nervoasa
- Guta
- Diabet
- Alcoolism

Valori scazute – hipocolesterolemie

- Malabsorbtie
- Maldigestie
- Inanitie
- Carente alimentare
- Casexie
- Afectiuni hepatice, ciroze
- Hipertiroidie
- Hipo-alfa-lipoproteinemie