Reziduuri laborator 7 data 03.05.

2018

Determinarea reziduurilor de medicamente din alimente prin tehnici cromatografice

**cromatografia este o metoda care se bazeaza pe separarea in zone distincte a componentilor unui
amestec la trecerea amestecului printr-un mediu in care componentii se deplaseaza cu viteze
diferite.

Tehnica toate fi utilizată pentru detectarea majoritatii substantelor meficamentoase prezente in

alimente.

Faza stationara sau fixa reprezentata dr materialul prin care circula proba se care asigura separarea
componentilor din amestec

Faza mobila este reprezentaata de lichidul sau gazul care transporta proba la suprafata fazei
stationare.

Pt reziduurile de medicamente se folosesc in special promatografia in strat subtire si se noteaza cu

CSS apoi gaz-cromatografia si HPLC. Cromatografia in stat subtire consta in depunerea unor spoturi
discrete din proba de analizat pe o placa din sticla aluminiu sau plastic acoperita de o sibstanta
absorbanta. Placa respectiva este introdusa intr-o incinta in care se gaseste faza mobila si astfelare
loc migrarea diferitelor substante continute. Distantele parcurse sunt comparate cu valori standard
si astfel se poate exprima cantitatea de reziduu de medicament din proba.

Gaz cromatografia utilizeaza ca faza mobila un gaz inert, care transporta proba prin interiorul unor
coloane cromatografice (este faza fixa). In acestea are loc adsobtia diferentiata a componentilor
amestecului respectiv. Coloanele cromatografice sunt tuburi din metal sau sticla cu diametre 1-8mm.

Hplc cu ajutorul unui lichid care este faza mobila probele de analizat sunt trecuteprin coloane
cromatografice umplute cu materiale speciale. Ele reprez faza stationara. Se gasesc la presiuni inalte
datorita unor pompe de presiune.

Det reziduurilor medicamentoase din alimente prin radioimunoanaliza -RIA

Este o metoda analitica ce se preteaza pt detectarea unei largi palete de medicamente din produsele
alimentare atat din cele solide cat si din cele lichide lapte oua miere.

**Tehnica Ria implica utilizarea unor izotopi radioactivi (H,C,iod) prin masurarea cantitatii de
radioactivitate se determina concentratia medicamentului din proba. Este o metoda f sensibila insa
necesita conditii deosebite de lucru. Principiul metodei consta in existenta unei competitii pentru
cuplarea vu anticorpul intre antigenul din proba de analizat respectiv medicamentul respectiv
aflatintr-o concentratie necunoscută si un atigen marcat cu un izotop rafioactiv aflat intr'o
concentrație cunoscuta.

Tehnica de lucru: o cantitate precisă de anticorpi se gaseste imobilizata pe un anumit substrat. Se

afauga proba de analizat precum si o cantitate cunoscuta de antigen marcat radioactiv. Antigenii din
proba si cei marcati vor competitiona pt legarea cu anticorpii. Se realizează spalari succesive pt
indepartarea antigenilor nelegati. Se adaugaun lichid de scintilatie de ex optifluor. Care are ca efect
initierea unei reactii de degradare a izotopului cu emitere de lumina. Cantitatea fe lumina emanata
este cunatificata cu ajutorul unui luminometru.

Interpretarea reactiei: cu cat cantitatea de lumina emanata se descompunerea izotopilor rafioactivi

este mai mare cu atat concemtratia in proba a medicamentului analizat este mai mica si invers.
Determinarea reziduurilor de substante antibacteriene pri tehnica imunoenzimatica elisa
competitiva

**Tehnica Elisa este folosită in analize calitative si cantitative atat pentru evidentierea anticorpilor
cat si pentru evidentierea antigenilor.

Tehnica de lucru difera in functie de produs însă principiul general este acelasi: reactia se produce in
godeuri din material plastic ce sunt livrate de producator. 1. Godeurile din placa de microtitrare sunt
acoperite din fabrica cu o cantitate cunoscuta de substanta antibacteriana (antigen =Ag) cuplata cu o
proteina. 2. O cantitate precisa din proba suspecta a conținereziduuri de substante antibacteriene
(Ag) este introdusa in godeu. 3. Se adauga in acelasi godeuo cantitate cunoscuta de anticorpi
antisubstanta antibacteriana care se vor cupla cu antigenii. 4. Cuplarea Ag si Ac1 este competitiva
adica se va realiza o competiție intre Ag prezenti pe peretii godeului si Ag prezenti in proba. Ag din
proba au o afinitate mai mare pentru ac1 decat ag legati pe peretii godeului astfel ca la sfarsitul
timpului de cuplare toti Ag din proba vor fi cuplati cu Ac1 restul Ac1 legand Ag prezenti la nivelul
peretilor godeului. Prin urmare o parte a Ag de pe peretele godeului vor ramane necuplati. 5. Se
ecevuta spalari repetatr pt indepartarea complexelor Ag-Ac1 libere in godeu ramanand astfel doar
complexele Ag-Ac1 legate de pereti precum si Ag necuplati. IN ACEASTA etapa practic proba de
analizat se îndepărtează. 6. Se adauga anticorpul 2 Ac2 care este in anti Ac1 intr-o cantitate suficienta
pentru a lega toate conplexele Ag-Ac1 ramase in godeu. AC2 este cuplat cu o enzima. 7. Complexul
Ac2 enzima se cupleaza cu complexele Ag-Ac1. 8. Dupa un anumit timp necesar cuplarii Ac2 cu
complexul Ag-Ac1 se executa spalari pt a îndepărta excesul de Ac2. 9. Se adauga in godeu
substratul.enzimei si o substanta cromogena care initial este incolora. 10. Godeurile sunt incubate o
perioada determinata de timp dupa incubare se adauga un agent de stopare a reactiei enzimatice. Pe
parcursul perioadei de incubare, enzima realizeaza descompunerra sibstratului, determinand aparitia
unui produs care duce la schimbarea culorii cromogenului din incolor in colorat. Intensitatea culorii
obtinute este determinata prin spectrofotometrie.

Concluzionand rezultatul obtinut este direct proportional cu cantitatea de Ag cuplati din peretii
godeului si deci invers proportional cu cantitatea de Ag din proba analizată.