MICROBIOLOGIE GENERALĂ

Laborator 1

NORME DE SECURITATE A MUNCII

ÎN LABORATORUL DE MICROBIOLOGIE

În laboratoarele de microbiologie este absolut necesar să se ţină seama de anumite

norme privind securitatea muncii, în special în vederea evitării infectărilor accidentale de
laborator, precum şi răspândirea microorganismelor prin obiecte contaminate.
Personalul va purta în mod obigatoriu şi în anumite situaţii mască, ochelari de
protecţie, mănuşi de cauciuc etc.
Pentru a se evita infestarea prin instrumentarul folosit (ansele de însămânţare, ace
spatulate, foarfeci, pensete, seringi etc.), manipularea acestuia se va face cu o foarte mare
atenţie. Se vor respecta condiţiile de sterilitate prevăzute. Curăţarea şi spălarea instrumentelor
se va face numai după o prealabilă sterilizare a acestora. Manipularea materialului infectat ca
şi a culturilor microbiene, a mediilor de cultură se face cu grijă, respectându-se normele de
asepsie, lucrându-se la flacără cu instrumente corespunzător sterilizate. Ansele de
însămânţare, după utilizare, se vor steriliza prin încălzire la roşu de 3 ori succesiv şi apoi se
aşează în staţii. Pipetele gradate sau pipetele Pasteur, după întrebuinţare, se introduc în
recipiente cu o soluţie dezinfectantă [sublimat corosiv (HgCl2) 0,1%, bicromat de potasiu
5%, amestec oxidant sulfocromic].
Culturile microbiene care nu mai sunt întrebuinţate se adună în coşuri de sârmă sau
vase emailate şi se sterilizează în autoclav. Este interzisă spălarea acestora înainte de a fi
sterilizate. Culturile microbiene care vor servi pentru studiu nu se lasă pe mese, ci se vor
păstra fie în termostate, fie în dulapuri închise.
După terminarea lucrărilor, când se folosesc germeni patogeni, mesele se vor curăţa cu
soluţii dezinfectante, ca sublimat corosiv 0,1 %.
În cazul producerii unui accident, cum ar fi de exemplu: spargerea unor recipiente cu
culturi microbiene patogene, imediat se acoperă suprafaţa infectată cu o soluţie de sublimat
corosiv 0,1% sau alt dezinfectant care se lasă 1-2 ore, după care se curăţă mecanic şi se mai
dezinfectează cu soluţie de bicromat de potasiu 5%.
Dacă în timpul executării lucrărilor echipamentul de protecţie vine în contact cu un
material infectat, acesta se va steriliza în autoclav.
În laborator trebuie să se găsească în permanenţă la îndemână prosoape curate şi
săpun, precum şi vase cu soluţii antiseptice (apă oxigenată, spirt sanitar etc.). În laborator este
interzis să se consume alimente, apă sau alte lichide.
În afară de cele arătate mai sus se vor lua o serie de măsuri legate de folosirea
aparaturii şi a substanţelor nocive, măsuri de protecţie comune şi pentru alte laboratoare.

Laboratorul de microbiologie trebuie să cuprindă două compartimente:

- o sală de pregătire a mediilor şi obiectelor de lucru şi de decontaminare, conţinând
mese, un autoclav, o etuvă, un congelator şi un frigider (care va fi utilizat şi pentru păstrarea
tulpinilor microbiene). Tot aici se poate stoca sticlăria, mediile de cultură precum şi reactivii.

1
 - o sală de lucrări propriu-zise, de manipulare a culturilor microbiene, la adăpost de
curenţii de aer, dotată cu mese cu suprafaţă netedă, rezistentă, impermeabilă, cu conducte de
gaz şi prize electrice, un sistem de vid şi de aer comprimat şi o hotă sterilizabilă cu radiaţii
ultraviolete (eventual o hotă cu flux laminar). În măsura în care este posibil, în legătură cu
această sală, ar trebui să existe anexe prevăzute cu termostate la diferite temperaturi ( 250C,
300C, 370C, 440C, 550C).
Manipulările de culturi microbiene sau de produse susceptibile să conţină
microorganisme se efectuează ţinând cont de unele tehnici particulare prin care să se evite
cele două tipuri de contaminare:
1. contaminarea culturii sau a produsului ce trebuie analizat datorită personalului sau
mediului inconjurător;
2. contaminarea personalului sau a mediului înconjurător de către microorganismele
studiate.
În laboratorul de microbiologie, operaţia de bază este transferul de microorganisme
dintr-un recipient în altul, lucrare ce se execută în zona sterilă de protecţie din jurul flăcării
becului de gaz.
Sticlăria cel mai des utilizată în laboratorul de microbiologie constă în eprubete de
diferite dimensiuni, flacoane Erlenmeyer, plăci Petri, pipete Pasteur şi pipete gradate. În
ultima perioadă sunt din ce în ce mai mult utilizate recipientele şi pipetele din plastic, de unică
folosinţă. Pentru prelevarea şi inocularea culturilor se utilizează ansa sau firul metalic,
fabricate din nicrom. Ustensilele de etalare permit repartizarea uniformă a inoculului pe
suprafaţa mediilor solidificate şi pot fi fabricate prin îndoirea unui tub sau a unei baghete din
sticlă. În afara acestor ustensile curente de lucru, mai pot fi întrebuinţate o serie de alte
instrumente, în funcţie de operaţia efectuată.
Laboratorul de microbiologie trebuie să aibă în dotare următoarele aparate şi
echipamente:

• robinet cu apă caldă şi rece, de preferinţă acţionat cu piciorul;

• hotă cu flux laminar sau nişă sterilizabilă, indispensabilă lucrărilor de microbiologie
• bec de gaz tip Bunsen pentru lucrul în zona sterilă din jurul flăcării cu con albastru şi
pentru sterilizarea ansei
• etuvă pentru sterilizarea sticlăriei
• termostat bacteriologic pentru incubarea culturilor
• autoclav pentru sterilizarea mediilor de cultură şi pentru decontaminarea obiectelor
• baie de apă termostatată
• frigidere pentru conservarea mediilor şi a culturilor
• balanţe
• pH-metru
• microscoape