14/04/2021

Enzime – medicamente biologice

• Caracteristici ale enzimelor care le fac medicamente specifice și eficiente:

- Enzimele leagă și acționează asupra țintei cu afinitate și specificitate mare
- Sunt catalizatori și transformă multe molecule țintă în produșii doriți
• Conceptul de enzimă – agent terapeutic – de circa 60 ani
- Enzima ce poate fi parte a unui tratament de substituție în
afecțiuni genetice caracterizate de deficitul acesteia – anii ‘60
- De atunci numărul enzimelor ca biofarmaceutice a crescut
- Obținute prin recombinare genetică
- Folosite în patologii variate
• 1987 – prima enzimă medicament obținută prin recombinare genetică
aprobată de FDA - Activase (alteplase - tissue plasminogen activator
recombinant) – a doua proteină recombinantă lansată pe piața
farmaceutică (după insulină, 1982)
• 1990 – aprobată o formă de adenozin dezaminază (ADA) bovină tratată
cu PEG pentru pacienții cu imunodeficiență severă combinată (deficit de
ADA) – Adagen (pegadamază bovină) - prima enzimă aprobată de FDA
ca ”medicament orfan” (medicament pentru afecțiuni rare)

1
 14/04/2021

Exemple de enzime cu aplicații terapeutice

Exemple de enzime cu aplicații terapeutice

Utilizare clinică Enzima

Disfuncții digestive Lactază/pepsină/papaină/pancrealipază
Agenți de debridare/anti-inflamatori Tripsină/papaină/colagenază/hialuronidază
Hiperuricemie Urat oxidază (Uricază)
Fibroză chistică Nuclează (DNază)
Agenți anticancerigeni Asparaginază
Anticoagulant Ancrod –serin protează trombin-like din venin
de viperă (Viprinex) – retras în 2017
Agenți trombolitici Tissue plasminogen activator
Urokinază, streptokinază
Toxicitatea oxigenului Superoxid dismutază
Toxicitate cianură Rodanază
Boala Fabry Alfa-galactozidază
Boala Gaucher Βeta-glucocerebrosidază (Alglucerase)

2
 14/04/2021

• Enzimele – agenți terapeutici:

- se obțin din culturi de microorganisme și
prin recombinare genetică
- se administrează intravenos, excepție cele digestive

• Au unele dezavantaje – determină răspuns imun

→↓ eficiența terapeutică datorită formării de anticorpi
→induc răspuns alergic/anafilactic imediat
→timp de înjumătățire mic – rapid eliminate din sânge
• Pentru a elimina dezavantajele:
- Conjugare cu polietilenglicol (PEG)
- Încapsulare – microsfere
- lipozomi

Microsfere
➢ Construite din substanță neantigenică
• Naturală – albumină
• Sintetică - nylon, poliacrilamidă, azotat
de celuloză
➢ O membrană semipermeabilă cu pori:
• Suficient de mici ca enzima sa nu iasă
• Destul de mari ca să permită difuzia
substratului/ produsului

3
 14/04/2021

Lipozomi
➢ Posibilitate de a elibera enzima în țesutul
țintă specific
• Incorporarea moleculei țintă (receptori,
glicoproteine, anticorpi, enzime) în
membrana lipozomului
• Interacție specifică cu liganzi de pe
suprafața celulei
• Fuziunea membranei lipozomului cu
celula permite intrarea conținutului
lipozomal în celulă

Teranostica – combinație a diagnosticului cu terapia

- terapie urmată de diagnostic
- metodă de diagnostic urmată de terapie țintită

4
 14/04/2021

Asparaginază
➢ Asparagina ◊ aa neesențial în celulele normale, netransformate
- sintetizat din glutamină

◊ aa esential pentru unele celule tumorale (leucemie) - dependente de

aportul exogen de Asn pentru supraviețuire
➢ Administrarea de L-asparaginază → depleția rapidă a Asn extracelulare,
moartea selectivă a limfocitelor

• Celulele normale – mai puțin sensibile la acțiunea oncolitică a enzimei

• Terapia enzimatică – induce un defect metabolic specific în celulele leucemice
➢ Aprobată pentru tratamentul leucemiei acute limfoblastice (LAL)
• Efect terapeutic mai bun în combinație cu alți agenți chimioterapeutici
(vincristină, metotrexat, citarabină, daunorubicină, doxorubicină)

➢ Preparate cu L-asparaginază disponibile pentru uz clinic:

❑ 2 enzime nemodificate purificate din Erwinia chrysanthemi și E. coli
• Dezvantaj: dozele repetate determină răspuns imun (hipersensibilitate)

❑ O formă PEGilată – pegaspargase (Oncaspar) – produsă în E.coli

• Reduce gradul și incidența problemelor de imunogenitate
• Crește timpul de înjumătățire al enzimei

➢ Efecte adverse ale tratamentului: - asociate cu inițierea terapiei

• greață, vomă, diaree
• risc de afectare hepatică și renală – datorate deficitului tranzitoriu de
asparagină

5
 14/04/2021

Dezoxiribonucleaza (Dnază)
➢ Enzimă aprobată pentru ameliorarea simptomelor fibrozei chistice (FC)
• FC – sindrom genetic cauzat de prezența unei proteine disfuncționale
CFTR (cystic fibrosis transmembrane conductance regulator) care
modulează transportul de apă și electroliți în celule
• Influențează secrețiile epiteliale din diferite organe→ devin extrem
de vâscoase, cu mucus abundent, care afectează:
• Plămânii → secreții purulente în căile aeriene, concentrație mare de
ADN extracelular eliberat din leucocitele degenerate → funcție
respiratorie compromisă și exacerbarea infecțiilor

• Pancreas – blocarea ductelor pancreatice

→ insuficiență pancreatică
• Tract reproducător → infertilitate
• Ficat – blocarea ductelor biliare, se pot înfunda
• Intestin subțire – malabsorbție
• Glande sudoripare - transpirație concentrată în sare

Aplicații terapeutice ale DNazei:

• reduce vâscozitatea mucusului respirator prin digestia ADN din
secrețiile purulente
• reduce riscul de infecții respiratorii

Preparate cu Dnază:
➢ Conțin DNază umană recombinantă înalt purificată (rhDNase)
• Produsă în linie de celule CHO - dornase-α sau Pulmozyme
(Genentech)
• Formulată ca soluție apoasă - 1.0 mg/mL
• Administrată direct în plămâni prin inhalarea unui mixt de
aerosoli

6
 14/04/2021

Urat oxidaza/ uricaza

➢ Enzimă din metabolismul purinelor

• Catalizează conversia acidului

uric puțin solubil la alantoină,
metabolit inactiv, dar mai
solubil care se poate elimina
prin rinichi

• Administrarea urat oxidazei la

pacienții cu hiperuricemie
determină scăderea conc.
acidului uric seric

➢ Aplicații terapeutice ale uricazei

❑ Asociere cu tratament chimioterapeutic în leucemie, limfoame,
tumori maligne solide
• Rasburicase (Fasturtec, Elitek) - uricază recombinantă produsă în
drojdie (Sacchromyces cerevisiae), ADNc fiind clonat din tulpină de
Aspergillus flavus
• proteină homotetramerică, masă moleculară 34 kDa
• pulbere albă liofilizată, administrare i.v.
• timp de înjumătățire - 16 - 23 h
❑ Tratamentul gutei cronice severe, refractară la alte tratamente
Pegloticase (Krystexxa) – uricază recombinantă PEGilată porcine-like
• timp de înjumătățire - 162– 332h – administrare i.v. la 2-3 săptămâni
• Dezavantaj: incidență crescută a răspunsului imunologic

7
 14/04/2021

Beta-Glucocerebrozidază

➢ Glucocerebrozide
❑ Lipide complexe - sfingozină + acid gras + glucoză

❑ Funcții biologice:
• Structural – în creier și alte structuri nervoase, asociate tecii de mielină
• Intermediari în sinteza și degradarea altor glicosfingolipide mai complexe
– se formează dependent de acțiunea unor enzime lizozomale specifice
din celulele sistemului reticuloendotelial (fagocite din splină, măduva
osoasă, ficat)

➢ Glucocerebrozidaza – administrată pentru a elimina simptomele

bolii Gaucher

• Eroare înnăscută de metabolism – lipsa glucocerebrozidazei →

acumulare de glucocerebrozide în macrofagele din țesuturi
• Simptome clinice:
Hepatomegalie, splenomegalie – funcție compromisă
Leziuni ale oaselor lungi, retardare mentală
Administrarea de GC exogenă ca terapie enzimatică de substituție reduce
principalele simptome ale bolii

8
 14/04/2021

Preparate cu glucocerebrozidază:
❑ Ceredase/alglucerase - glucocerebrozidază extrasă din placentă umană
în tampon citrat, aprobată în 1991 - retrasă
❑ Cerezyme/imiglucerase – enzimă recombinantă umană - în celule CHO
• glicoproteine modificate cu rest de manoză terminal (în loc de acid sialic) –
îmbunătățește localizarea intracelulară în lizozomii din leucocite
• administrată ca infuzie i.v., 2,5-60U/kg, o dată la două săptămâni
- 200-400 U/fiolă
• răspuns imun relativ crescut – hipersensibilizare

❑ Vpriv (velaglucerase α) – produsă în linie

celulară de fibroblaste umane HT-1080,
apropâbată în 2010

❑ Elelyso (taliglucerase α – aprobată în 2012

pentru adulți, 2014 pentru copii) – produsă în
plante, 200 unități/fiolă

α-Glucozidaza acidă
➢ Enzimă lizozomală similară enzimei de deramificare (citoplasmatică)
responsabilă de scindarea glicogenului
• Deficitul de α-glucozidază determină acumulare de glicogen în
lizozomi → leziuni celulare și tisulare – tezaurizare de glicogen/
glicogenoza tip II Pompe → miopatie progresivă (afectare inimă,
mușchi scheletici, sistem nervos)

➢ α-Glucozidaza acidă – enzimă de substituție pentru pacienții cu

maladia Pompe
• Alglucosidase alfa (Myozyme) – medicament orfan, aprobat în 2006
- analog obținut prin recombinare genetică, glicoproteină cu masa 110 kDa
- recomandată la doza de 20 mg/kg, i.v., o dată la două săptămâni
- mulți pacienți dezvoltă anticorpi cu riscul de a scădea nivelul plasmatic al
enzimei și apariția reacțiilor de hipersensibilizare

❑ Beneficii dovedite - 79%–95% reducerea deceselor,

58%–91% reducere necesitate de ventilație asistată,
îmbunătățire dezvoltare motorie

9
 14/04/2021

α-Galactozidaza A

➢ Enzimă lizozomală în degradarea sfingolipidelor

• Deficit de α-galactozidază A – boala Fabry,
sfingolipidoză genetică X-linkată rară
- acumulare de globozide în diverse țesuturi
- determină insuficiență renală,
cardiomiopatie, accidente cerebrovasculare,
mâncărimea pielii (rash), dureri severe la
extremități

➢ α-galactozidaza A – terapie de substituție la pacienții cu maladia Fabry

• Agalsidase beta (Fabrazyme)
- α-galactozidază umană recombinantă produsă în celule CHO, secvență de
aminoacizi identică cu a enzimei native
❑ Beneficii dovedite ≈ 1 mg/kg – infuzie i.v. la fiecare două săptămâni
- reduce depunerile de globozide în endoteliul capilar din rinichi, inimă
și piele, restabilește funcția celulelor endoteliale (la 69% pacienți)

α-L-Iduronidază
• Hidrolază lizozomală ce degradează
glicozaminoglicanii (GAG) - dermatan
sulfat și heparan sulfat - elimină restul
de acid α-L-iduronic terminal

• Defect de activitate a L-iduronidazei → mucopolizaharidoza I

(MPSI)/sindrom Hurler → acumulare de GAG în celule din diferite țesuturi
și organe → disfuncții organice multiple:
- anomalii scheletice, disfuncții ale capacității de deplasare
- hepatosplenomegalie
- dizabilități severe
- disfuncție pulmonară

➢ α-L-iduronidaza – terapie de substituție în sindromul Hurler

• Laronidase (Aldurazyme) - α-L-iduronidază umană recombinantă
• Beneficii dovedite: terapia de substituție (0.58 mg/kg/săpt.) nu
corectează complet nivelul urinar al GAG, dar normalizează semnificativ
funcția enzimei, scade nivelul de GAG și îmbunătățește capacitatea de
deplasare

10
 14/04/2021

Iduronat-2-sulfataza
➢ Hidrolază lizozomală necesară pentru degradarea GAG - dermatan sulfat
și heparan sulfat – hidrolizează legăturile esterice sulfat din poziția 2 ale
resturile de acid iduronic terminale
• Defect de iduronat-2-sulfatază → Mucopolizaharidoza II (MPS II)/ sindrom
Hunter: hepatosplenomegalie, disfuncții cardiovasculare, aspect facial
anormal, capacitate de deplasare redusă
➢ Terapia de substituție
• Idursulfase (Elaprase)
• iduronat-2-sulfatază umană recombinantă
• 0.5 mg/kg i.v./ săptămână
❑ Beneficii dovedite:
- reducerea nivelului GAG urinari
- îmbunătățire abilități de deplasare
❑ Administrarea cronică duce la răspuns imun
la jumătate din pacienți – reacții alergice și
anafilactice

Enzime eficiente pentru tulburările digestive

➢ Folosite în preparate cu - un singur tip de activitate enzimatică

- activitate enzimatică multiplă
➢ Indicate pentru – funcție digestivă compromisă datorită unei
insuficiente produceri/secreții de enzime digestive endogene –
insuficiență pancreatică – fibroză chistică
➢ Cele mai multe funcționează la pH apropiat de cel neutru - formulate
ca tablete acoperite de un film rezistent în mediu acid pentru a
proteja enzima de degradare în mediul acid din stomac
➢ Recomandare de administrare -oral înainte de masă/ în timpul mesei

11
 14/04/2021

➢ Pancreatină
• Extract pancreatic din pancreasul animalelor sacrificate la abatoare
• Amestec de enzime (amilază, proteaze, lipază) → capacitate
digestivă largă
• Oral - granule enterice acoperite/capsule, luate direct cu alimentele
• Poate fi substituită de enzime digestive individuale - proteaze
(papaină, pepsină, bromelaină), α-amilază

➢ Celulază
• Nu este produsă de tractul digestiv uman
• Obținută din Aspergillus niger/alți fungi
• Îmbunătățește digestia (în diete bogate în fibre)

➢ α-Galactozidază
• Pentru digestia α-galactozidelor (oligozaharide din plante, mai ales
din boabe) – nu sunt degradate în mod obișnuit în tractul digestiv
uman, responsabile de flatulența – stimulează fermentația
microbiană în intestinul gros

➢ Lactaza
• Utilă pacienților cu intoleranță la lactoză
Simptome: diaree osmotică, crampe
abdominale, flatulență
- ¾ din adulți
- Până la 90% din adulți în Africa și Asia

Tratament:
❑ ↓ consumul de produse lactate
❑ Alimentare cu produse tratate cu
lactază
❑ Lactază microbiană formulată ca
tablete sau pulbere, ingerată imediat
înainte de consumul produselor
lactate sau presărată pe alimente
înainte de consum

12