26/04/2021

Citokine – medicamente biologice:

interferoni, interleukine, TNF-α

https://microbenotes.com/cytokines-mechanism-of-action-and-functions/

CITOKINE

• Termen introdus de Stanley Cohen la jumătatea anilor 1970

• Proteine/glicoproteine mici cu rol de reglare – acționează ca agenți
chimici de comunicare între celule
• Secretate mai ales de celulele imune, dar și de către alte tipuri celulare
(celule endoteliale, fibroblaste)
• Funcții biologice numeroase – considerate agenți imunomodulatori care
reglează intensitatea și durata răspunsului imun și inflamator

• Criterii de clasificare - numeroase

a. În funcție de celulele producătoare
b. În funcție de structură
c. După funcțiile biologice

!!! Nici unul dintre criterii nu s-a dovedit pe deplin corect – multe dintre
citokine sunt produse de mai multe tipuri de celule și îndeplinesc funcții
biologice multiple

1
 26/04/2021

Principalele proteine/familii de proteine care constituie

grupul citokinelor

➢ În funcție de celulele imune producătoare

Interleukine (IL) – secretate de leucocite (mai ales limfocite T helper)
Limfokine – secretate de limfocite (IL-2, IFN-γ)
Monokine – secretate de monocite (TNF)
Interferoni (IFN) – secretați de limfocite și monocite
Chemokine (CCL, CXCL) – secretate de celule din țesut limfoid, timus
➢ În funcție de structura moleculară - șase familii
Familia de citokine Reprezentanți
Citokine cu structură triangulară Fibroblast growth factor, IL-1
Chemokine IL-8, proteine inflamatoare din
macrofage
Citokine ce conțin trei punți Nerve growth factor (NGF)
disulfurice Transforming growth factor beta (TGF)
Platelet-derived growth factor (PDGF)
Familia EGF Epidermal growth factor (EGF)
Transforming growth factor alfa
Hematopoietine IL 2-7, 9, 13, G-CSF, GM-CSF
EPO, LIF (Leukaemia inhibitory factor)
Familia TNF Tumour necrosis factor (TNF)-alfa și beta

2
 26/04/2021

Caracteristici generale ale citokinelor

➢ Au masa moleculară mică (5-20 kDa)

➢ Sunt molecule reglatoare foarte eficiente – acționează la
concentrații de ordinul nmoli/L, pmoli/L
➢ Sunt produse de celule variate - leucocite (monocite,
macrofage, celule NK, limfocite B și T) sau cel. neimune (celule
musculare netede, celule endoteliale, fibroblaste, astrocite,
condrocite)
➢ Unele tipuri celulare pot produce diferite tipuri de citokine
(limfocitele produc IL, CSF, TNF, IFN-α și IFN-γ)
➢ Multe citokine sunt implicate și în alte procese decât răspunsul
imun și inflamator
• nerve growth factor (NGF) și brain derived neurotrophic factor
(BDNF) reglează creșterea, dezvoltarea și menținerea neuronilor
din sistemul nervos (central și periferic)
• eritropoietina (EPO) stimulează producerea de globule roșii în
măduva osoasă

➢ Au efect pleiotrop – pot afecta un număr variat de tipuri celulare în

același fel sau diferit (IL-1 poate induce febră, scăderea tensiunii și
un răspuns de fază acută)

➢ Multe citokine sunt inductibile în prezența unor stimuli variați

(agenți patogeni, lezare tisulară, stimuli toxici)
• Exemplu: IFN-α este indus de pătrunderea virusurilor în organism

➢ Unele citokine (CSF, EPO, chemokine) par a fi exprimate constitutiv

➢ Unele citokine (TGF-β, PDGF) sunt stocate în granule

citoplasmatice și pot fi rapid eliberate ca răspuns la stimuli
adecvați

➢ Prezintă redundanță – două/mai multe citokine induc efect similar

• Exemplu: TNF-α și β, IFN-α și IFN-β se leagă la același receptor și au
răspunsuri similare/identice în diferite celule

3
 26/04/2021

➢ Citokinele constituie una dintre principalele clase de

biofarmaceutice, manipularea activității citokinelor putând
influența intens răspunsul organismului la o mare varietate de
condiții medicale

• Administrarea unor citokine poate intensifica răspunsul imun

față de agenți infecțioși și celule tumorale
• EPO este eficientă în stimularea producerii de globule roșii la
persoanele anemice
• Factorii de creștere au potențial de utilizare pentru vindecarea
rănilor
• Factorii neurotrofici prezintă potențial clinic în unele boli
neurodegenerative

➢ Principalele citokine utilizate în scop terapeutic: interleukine,

interferoni, TNF, factori hematopoietici

Interleukinele ca imunoterapeutice
➢ Interleukine (IL) – citokine ce reglează condiții fiziologice și patologice variate:
- creșterea celulară normală și malignă
- răspunsul imun
- inflamația
➢ Sunt molecule solubile care își promovează răspunsul biologic prin legarea de
receptori specifici de la suprafața celulelor țintă
➢ Există două tipuri de receptori (tip 1 și tip 2) – proteine transmembranare care
aparțin superfamiliei Ig

(Dwyer C et al. Fueling Cancer Immunotherapy With Common Gamma Chain Cytokines. Frontiers in Immunology 10.
10.3389/fimmu.2019.00263)

4
 26/04/2021

➢ Multe IL prezintă acțiune paracrină (acționează în vecinătate)

➢ Unele IL au acțiune autocrină (de ex., IL-2 poate stimula creșterea și
diferențierea celulelor T care o produc) sau efecte sistemice endocrine
(de ex., IL-1 acționează asupra fibroblastelor, celulelor endoteliale)

https://www.abbkine.com/abbkine-products-for-your-interleukin-study/

➢ Până în prezent, descoperite numeroase molecule (IL-1 la IL-38),

divizate în trei familii:

• IL-1 – activitate proinflamatoare și de activare celulară

• IL-2-like sau IL-2 – creșterea și diferențierea celulelor T și B,
activitate de expansiune
• IL-10-like – imunoreglare și activitate antiinflamatoare

Interleukinele care constituie cele trei familii

5
 26/04/2021

• rIL-2- prima aprobată de către FDA, în 1992, pentru uz medical în

tratamentul carcinomului renal
• Mai multe preparate cu interleukine sunt în trialuri clinice

IL-2
• Implicată în stimularea și creșterea celulelor T (T-cell growth factor)
• Susține creșterea celulelor NK, a subpopulației LAK (lymphokine activated
killer cells) capabile să omoare celulele tumorale
• Aprobată de FDA ca agent imunomodulator, pentru imunoterapie
• Primul imunoterapeutic utilizat cu intenția de a elimina celulele tumorale
metastazate fără să fie implicat direct în moartea celulelor canceroase

Abul K. Abbas, Regulatory T cells; why tolerance fails,

https://slideplayer.com/slide/10529765/

6
 26/04/2021

➢ Proleukin (aldesleukin) - IL-2 recombinantă aprobată pentru

tratamentul carcinomului renal metastazat
• IL-2 produsă în E. coli
• Lipsește O-glicozilarea din IL-2 umană, restul de alanină
de la capătul N-terminal al formei native
• Cisteina de la capătul C-terminal este mutată în serină
(C125S) – pt. a reduce agregarea prin punți disulfurice

• Pentru mulți pacienți prezintă toxicitate ridicată –

sindrom de scurgere capilară (trecerea fluidului din
sânge în țesutul înconjurător pentru că vasele sunt prea
subțiri)
• Efectul terapeutic nu este imediat, apare cu întârziere
• IL-2 – aprobată și pentru tratarea melanoamelor metastazate

• Administrare – injectare i.v. în doză mare (600000 UI), la 8 ore (până la

maxim 14 doze)

• Numeroase încercări de a trata și alte tumori lichide și solide cu IL2 sau

PEG-IL2 (NKTR-214, neaprobată de FDA pentru uz clinic)
NKTR-214 eliberează controlat și susținut liganzi pentru semnalizarea prin
receptorul pentru IL2 (IL2R)

Charych D et al. Modeling the receptor pharmacology, pharmacokinetics, and pharmacodynamics of NKTR-214, a
kinetically-controlled interleukin-2 (IL2) receptor agonist for cancer immunotherapy. PLoS ONE, 2017

7
 26/04/2021

IL-11
• Produsă de celule derivate din măduva osoasă asemănătoare fibrocitelor
• Are efecte pleiotrope: - protecție hematopoietică, osoasă și la nivelul mucoaselor
- Induce diferențierea coloniilor de
megakariocite și intensifică
maturarea plachetelor sanguine
- Activează osteoclastele
- Inhibă proliferarea celulelor
epiteliale și apoptoza
- Inhibă producerea de citokine
proinflamatoare de către
macrofage
- Inhibă adipogeneza
- Induce sinteza proteinelor de fază
acută (ex. fibrinogen)

Putoczki T, Ernst M. More than a sidekick: the IL‐6 family cytokine IL‐11 links inflammation to cancer. J Leuc Biol 2010,
88:1109-1117

➢ Neumega (oprelvekin) – IL-11 recombinantă produsă de E.coli, formă

neglicozilată
➢ Aprobată pentru prevenirea trombocitopeniei severe la pacienții care
fac chimioterapie
➢ Administrare - injectare subcutanata (50 mg/kg), la 6-24 ore după cura
de chimioterapie, întrerupere cu 2 zile înainte de următoarea cură
- tratament între 10-21 zile – trombocite > 50000/mm3

8
 26/04/2021

Interferonii ca biofarmaceutice
➢ Familie de citokine cu puțini membri, dar cu efecte biologice variate:
• inducerea rezistenței celulelor la atac viral
• reglarea a numeroase aspecte ale funcției imune
• reglarea creșterii și diferențierii a multor tipuri de celule
➢ Cuprinde trei grupe majore: tip 1, 2 și 3 (grupă controversată)
Interferoni tip I: IFN-α, IFN-β, IFN-ω
• Produși de celule variate (limfocite B și T, fibroblaste, celule NK, monocite)

• Funcții biologice:
• activitate antivirală
• efect antiproliferativ asupra unor
tipuri celulare variate, inclusiv celule
tumorale:
- efect direct antiproliferativ asupra
cel. tumorale
- cresc activit. celulelor NK și a
celulelor T citotoxice

https://slideplayer.com/slide/10042752/

Familia IFN-α
- cuprinde 14 membri cu activitate antivirală și antiproliferativă
Aprobați pentru a trata:
• hepatita cronică cu virus B și C
• leucemia mielogenă
• limfomul folicular
• leucemia cu celule păroase
• ca adjuvant în melanomul malign operat
• metastazele tumorilor carcinoide ale ficatului și ganglionilor limfatici
• menținerea remisiunii în mielomul multiplu
❑ IFN-α2 – formă recombinantă (rIFN) aprobată pentru tratament oncologic
• 2 tipuri de IFN-α2 recombinant – diferă printr-un aminoacid
IFN-α2a (Roferon A) și IFN-α2b (Intron A)
IFN-α2c – comercializat în Europa ca Berofor
- Administrare: injectare s.c sau i.v., doze variate

9
 26/04/2021

❑ IFN-α2 PEG-ilat – profil farmacologic prelungit, aprobat pentru tratamentul

hepatitei C și melanomului în stadiul III
Pegasys – ramificare PEG de 40 kDa conjugată la IFN-α2a
PEG-Intron - PEG de 20 kDa conjugat la IFN-α2b
Administrare: injectare s.c.

❑ IFN-α1 – subtip folosit în China

Familia IFN-β
• subtip predominant exprimat de multe fibroblaste și celule epiteliale
• activitate biologică similară și efecte adverse similar cu IFN-α2, dar cu
potențial antiproliferativ și apoptotic crescut
• Efect de down-reglare a citokinelor proinflamatoare TNF-α și IL-1β
➢ Aprobat pentru:
• Tratamentul sclerozei multiple recurent remisive (85% din cazurile SM)
- Reduce rata progresie și recădere și dezvoltarea dizabilității
IFN-β1a (Rebif, Avonex) - IFN-β recombinant produs în celule CHO
IFN-β1b (Betaseron, Betaferon) – formă sintetică produsă în bacterii
• Efecte adverse: afectare hepatică
reacții alergice severe
depresie
tulburări cardiace
reacții locale la locul injectării
scăderea nr. elementelor figurate
simptome asemănătoare gripei

10
 26/04/2021

Interferon tip II - IFN-γ

• Omologie foarte redusă cu membrii tipului I
• Produs de limfocite B, limfocite T, celule NK
• Celule țintă - toate celulele nucleate
• Activitate antivirală și antiproliferativă slabă
• Citokină imunomodulatoare potentă, implicată direct în reglarea
răspunsului imun și inflamator
• Activator al macrofagelor - intensifică efectele mediate de macrofage:
• distrugerea microorganismelor invadante
• distrugerea patogenilor intracelulari
• citotoxicitatea celulelor tumorale
• activarea limfocitelor

• Expresia aberantă a IFN-γ este asociată cu numeroase condiții

autoinflamatorii și boli autoimune

• IFN-γ modulează direct răspunsul imun afectând creșterea, diferențierea și

funcționarea limfocitelor T și B

11
 26/04/2021

➢ Aplicații medicale ale IFN-γ:

IFN-γ1B (Actimmune) – interferon uman recombinant (rhIFN-γ) produs de
E. coli, cu activitate biologică identică IFN-γ uman
• Pentru tratamentul bolii granulomatoase cronice (CGD):
– boală genetică rară în care celulele fagocitare (fagocitele) sunt incapabile să
ingere și să distrugă agenții infecțioși (bacterii, protozoare, fungi) - nu produc H2O2

- pacienţii cu CGD au susceptibilitate crescută la infecţii cauzate de anumite

bacterii/fungi, unele cu risc crescut de mortalitate
- fagocitele pacienţilor cu CGD pot apăra organismul de anumite tipuri de infecţii
bacteriene sau virale, dar nu şi de cele care necesită în mod specific H2O2 pt. a
controla infecţia
- boala se asociază cu acumularea excesivă a celulelor sistemului imun în agregate
numite granuloame la locul infecţiei sau al unei inflamaţii

- Pacienţii cu CGD care primesc tratament

cu IFN-γ au cu 70% mai puţine infecţii şi
chiar dacă contactează o infecţie, aceasta
nu este foarte severă
- Pacienţii cu CGD nu au deficit de IFN-γ,
iar acesta nu vindecă CGD
- IFN-γ creşte imunitatea pe mai multe căi,
compensând parţial deficitul producţiei
de H2O2

- Administrare – de 3 ori/ săptămână la

aceeași oră
- Poate fi și autoinjectat subcutanat
- Trebuie păstrat la frigider (nu trebuie
ținut mai mult de 12 ore la temp.
camerei)

12
 26/04/2021

• Tratamentul osteopetrozei maligne

(boala oaselor de marmură)
– boală genetică caracterizată de
insuficiența osteoclastelor de a resorbi osul
– masă osoasă crescută, totuși fragilitate
osoasă - terapia cu IFN-γ aduce beneficii
pe termen lung

Efecte adverse ale IFN

Efecte adverse minore Efecte adverse potențial severe
Simptome asemănătoare gripei: Anorexie
febră, dureri de cap, frison Oboseală
Insomnie
Complicații cardiovasculare
Reacții autoimune
Decompensare hepatică

• IFN-γ a fost considerat agent imunoterapeutic promițător în tratamentul unor

tipuri de cancer (vezică urinară, colon)
• Folosit rar ca agent singular, cele mai multe trialuri clinice l-au asociat ca
adjuvant intervenției chirugicale sau chimioterapiei
• Rezultate irelevante pentru cele mai multe tipuri de cancer
• IFN-γ are rol dual/contrastant în cancer – în funcție de mediu și stimuli

Ni L, Lu J. Interferon gamma in cancer immunotherapy. Cancer Medicine. 2018;7:4509–4516.

13
 26/04/2021

Factorul de necroză tumorală ca medicament biologic

Familia TNF (tumor necrosis factor)

• 2 proteine reglatoare - TNF-α (cașectină) și TNF-β (limfotoxină)
• Se leagă de același receptor
• Activități biologice similare
• Omologie de secvență limitată
• TNF-α – mai studiat - TNF, cașectină, macrophage cytotoxic factor,
macrophage cytotoxin, necrosin

➢ Surse celulare de TNF: macrofage activate, limfocite, celule din

țesutul adipos, miocardiocite, celule endoteliale, fibroblaste, celule
din sistemul nervos
➢ Inductori fiziologici majori ai producerii și eliberării TNF:
lipopolizaharide bacteriene, IL-1, enterotoxine bacteriene,
micobacterii, virusuri variate, fungi, paraziți, complexe antigen-
anticorp

• TNF-α – biosintetizat ca proteină transmembranară aranjată sub formă

de homotrimeri (tmTNF-α)
• Proteina ancorată la membrană este eliberată după clivaj proteolitic
catalizat de o metaloprotează, enzimă de conversie a TNF-α-converting
enzyme (TACE) – sTNF-α (forma solubilă)
• Ambele forme sunt biologic active
• Există doi receptori specifici pentru TNF-α
TNF-α R1 – exprimat în multe țesuturi, activat de ambele forme TNF-α
TNF-α R2 – exprimat selectiv în celulele imune, activat doar de forma legată
de membrană a TNF-α

14
 26/04/2021

➢ Funcții biologice ale TNF-α

➢ Are efecte pleiotrope

❑ Concentrații scăzute – mecanism paracrin și autocrin

❑ Reglarea imunității
• Activare fagocite (macrofage, neutrofile, leucocite polimorfonucleare)
• Crește toxicitatea eozinofilelor și macrofagelor față de agenții patogeni
• Activitate antivirală similară IFN tip I
• Stimulează proliferarea limfocitelor T dependent de IL-2
• Exercită efect citotoxic asupra unui nr. variat de celule transformate
❑ Promovarea inflamației – rol fiziologic major
• Promovează activarea neutrofilelor, eozinofilelor, altor leucocite cu rol în
inflamație
• Induce sinteza citokinelor pro-inflamatoare (IL-1 și IL-8)
• Efect chemotactic
• Promovează vasodilatația și permeabilizarea vasculară
❑ Concentrații foarte mari (de ex. în infecții bacteriene severe cu agenți G(-) –
efecte sistemice, șoc dăunător în mare măsură
• Nivelul crescut prelungit induce efecte adiționale, de ex. efecte metabolice
(inițial hiper, apoi hipoglicemie, hipertrigliceridemie)
• Multe dintre efectele biologice ale TNF sunt intensificate de IFN-γ

➢ TNF- α în terapie
❑ Beromun – TNF recombinant (rTNF) produs de E. coli
- Adjuvant pt. tratament în sarcoame de țesuturi moi ale membrelor
- Distruge celulele tumorale, vasele ce irigă tumora și stimulează
sistemul imun să le atace

❑ Produse care neutralizează efectele biologice ale TNF – inhibitori de TNF

– supraexprimarea TNF este asociată cu aspecte clinice negative în boli inflamatorii
(poliartrită reumatoidă, spondilită anchilozantă, boala Crohn, psoriasis)

Inhibitori de TNF

15
 26/04/2021

❖ Anticorpi monoclonali anti-TNF – infliximab (Remicade), adalimumab (Humira)

❖ Forme solubile ale receptorului TNF - previn legarea TNF la receptorii naturali de
pe suprafața celulelor – etanercept (Enbrel)
Enbrel – proteină obținută prin inginerie genetică în linie CHO–fuziune TNFR2-IgG1
- indicat în artrita reumatoidă - administrat injectabil, s.c.
- stilou sau seringi preumplute, flacon multidoză
❖ Inhibitori de metaloprotează – acid hidroxamic – previne eliberarea TNF-α

Acțiune inhibitori TNF

subcutanat intravenos

subcutanat

16