Introducere in morfopatologie

Anatomia patologic este prin definiie o disciplin

situat n centrul medicinii umane sau veterinare,
cunotinele acesteia avnd la baz studiul
macroscopic i microscopic al leziunilor tisulare;

Este obligatorie trimiterea pentru diagnostic

histopatologic n serviciile de anatomie patologic a
tuturor fragmentelor tisulare recoltate de la pacieni
n cursul interveniei chirurgicale;

Este obligatorie recoltarea i efectuarea examenului

histopatologic al fragmentelor tisulare recoltate de
la cadavrele necropsiate
Tehnicile de macroscopie vor fi adaptate particularitilor fiecrei
piese n parte cu condiia respectrii urmtoarelor cerine:

1. descrierea macroscopic a piesei i a tuturor leziunilor

macroscopice

2. prelevarea de fragmente din toate leziunile identificate

macroscopic, pe ct posibil cu includerea n acelai fragment
att a esutului cu aspect macroscopic patologic ct i normal

3. prelevarea tuturor ganglionilor limfatici identificai n pies

4. prelevarea de fragmente de la nivelul marginilor de

rezecie (care vor fi marcate cu tusuri tisulare)
Examenul extemporaneu este o metod rapid de diagnostic
microscopic, n decursul interveniilor chirurgicale. Acesta se
efectueaz la cererea clinicianului i trebuie anunat cu 24 ore
nainte (de obicei)
Medicul anatomo-patolog poate refuza examenul extemporaneu,
dac:
esutul trimis este impropriu, din punct de vedere tehnic,
examinrii la ghea ( ex. os/zone calcificate, esut necrozat);
piesa sau leziunea trimis este foarte mic, existnd riscul
prejudiciului diagnosticului la parafin;
circumstante speciale apreciate de medicul anatomo-patolog
dup secionarea la ghea (ex. noduli tiroidieni, suspiciune
de limfom malign);
 Rezultatul examenului extemporaneu se comunic
seciei i conine numai afirmarea sau infirmarea
malignitii

Este obligatorie prelucrarea la parafin a

fragmentului tisular examinat la examenul
extemporaneu.
Examenul extemporaneu-tehnica de lucru:

se modeleaz fragmentul de analizat, ndeprtnd, pe ct posibil,

grsimea perilezonal, care se congeleaz greu;
grosimea piesei trebuie s fie maxim 3-4 mm;
piesele mici se includ n totalitate n mediul de includere pentru
seciuni la ghea( ex. Cryomatrix);
piesa nefixat se depune pe placua metalic, portobiect, pe care
s-a picurat mediul de nglobare, i se aeaz orizontal pe bara de
ngheare. Temperatura se alege n funcie de natura esutului;
se ateapt 3-4 minute pn la ngheare (mediul de includere
devine alb-opac);
se monteaz placua metalic n dispozitivul de prindere al
microtomului i se secioneaz la 5 microni, cu un cuit/lama,
speciala pentru sectiuni la gheata, utiliznd placua de plexiglas
antiroluire
de pe aceasta, seciunea se recolteaz direct pe o lama
histologic, aflat la temperatura camerei;
Se coloreaz cu hematoxilin -eozina (HE) sau albastru de
toluidin i se monteaz n balsam Canada.
 Prelucrarea histopatologica
FIXAREA- formol 10%, acetona, aer
are ca scop oprirea fenomenelor vitale din esuturi i celule,
pentru a putea surprinde microscopic un anumit aspect
histofiziologic sau histopatologic existent n produsul prelevat
la momentul recoltrii.

se previne alterrile postmortem a structurilor tisulare i

celulare, precum i ntrirea piesei, asfel ca aceasta s poat
fi supus prelucrrilor ulterioare

durata fixrii este variabil, n funcie de tipul esutului i de

dimensiunea piesei, de la cateva ore la cteva zile.
DECALCIFIEREA EDTA, acid tricloracetic

Se aplic pieselor histologice care conin saruri de

calciu, care fac imposibil secionarea lor (ex.os).

Timpii sunt variabili in functie de grosimea piesei

INCLUDEREA N PARAFIN

Este operaiunea care pregtete piesa n vederea secionarii acesteia n

seciuni subiri (4-6) care pot fi colorate i examinate la microscop.

Timpii de includere la parafin:

1. Deshidratarea - indepartarea apei din piesele fixate (bai de alcool etilic

succesive 85, 90, 96, absolut)

2. Clarificarea- impregnarea piesei cu un solvent al parafinei (ex. Alcool

izopropilic, benzen, toluen).

3. Parafinarea - impregnarea pieselor cu parafin topita la 56 gr

1,2,3-procesor automat de prelucrare a tesuturilor

4. Incluzionarea propriu zis - nglobarea pieselor bine ptrunse de

parafin, ntr un bloc de parafin. Se folosesc casetele metalice speciale
existente in laborator, pentru includerea blocurilor n parafin.
Blocul de parafina reprezinta modalitatea de conservare a materialului patologic. Se
pastreaza 30 ani pentru tesuturile tumorale.
Sectionarea:

Piesa inclus n parafin se fixeaz pe dispozitivul de fixare al

microtomului. De la dispozitivul de fixare al grosimii de
secionare al piesei, se stabilete grosimea seciunilor (3-6 ).

Etalarea in baia de apa:

Odat secionate, seciunile se culeg pe apa cald cu ajutorul

unei pensule fine i a unui ac de disociere.

Se elimin cutele din panglica de parafin, apoi seciunile se

etaleaz de pe ap, pe lama port-obiect

Seciunile etalate pe lam se supun apoi colorrii (cea mai

utilizat coloraie n laboratorul de Anatomie Patologic este
coloraia Hematoxilin Eozin)
TEHNICA COLORATIEI HE ETAPE:

1. deparafinarea consta in dizolvarea parafinei cu

solventi de tipul hidrocarburilor aromatice de ex.
xilen, toluen, benzen, la termostat 60 gr; 1,5 ore

2. rehidratarea prin trecerea preparatului prin 3 bai

succesive ce contin alcool in concentratii
descrescande, apoi in apa
3. Colorarea si spalarea
a. Prima data in hematoxilina timp de 3 5 min , dupa care este
spalat cu apa pentru a intrerupe actiunea colorantului
b. Al doilea colorant eozina timp de 1 2 min , dupa care
sectiunea se spala pentru a indeparta excesul de colorant

4. Clarificarea pentru indepartarea alcoolului , cu xilen

5. Montarea in balsam de Canada

REZULTATE
1. nuclei: albastru - violet
2. citoplasma: roz- rosu
COLORATIA VON GIESON

Este o coloratie tricromica ce foloseste trei coloranti

1. hematoxilina ferica
2. acidul picric
3. fuxina acida

REZULTATE
1. Nuclei negri
2. Citoplasma,fibre musculare, fibrina galben
3. Fb. de colagen rosu intens
Van Gieson - colagen-rosu
-nuclei negru
-citoplasma, muschi, hematii-galben
 COLORATIA MASSON

Este o coloratie tricromica ce foloseste

1. hematoxilina ferica
2. solutia coloranta A ce contine fuxina acida
3. solutia coloranta B ce contine albastru de anilina

REZULTATE
1. Nuclei rosu inchis- violet
2. Citoplasma rosu deschis-roz
3. Fb. de colagen albastru intens
Massons trichrome
Masson's trichrome
Depozite de fier (hemosiderina) albastre , in ficat coloratia Perls
 Rosu de Congo in lumina polarizata-
HE-amiloid birefringenta verde

Rosu de Congo
Red Oil vs. Negru Sudan-lipide (coloratii la gheata)
Coloratia Ziehl- Neelson bacili Koch rosii pe fond albastru
Warthin-Starry's silver- Helicobacter pylori la nivelul mucusului foveolar gastric
 Examenul citologic
Produsele biologice destinate examinrii
citologice au urmtoarea provenien:

frotiuri exfoliative;
lichide biologice (ascita, lichid pericardic,
pleural, articular, LCR, etc.);
amprente tisulare (gg. limfatic);
material aspirat cu ac fin.
 Examenul citologic Babes - Papanicolau

deine de mult timp un rol esenial n screening-ul

cancerului cervical precum si pentru diagnosticul
infeciilor vaginale, inflamaii si n diagnosticul de
tulburri funcionale endocrine, n asociere cu alte
metode de laborator.

Se recolteaz material citologic de la suprafaa

exocolului (celule scuamoase i celule patologice din
leziunile exocolului), din canalul cervical (celule
cilindrice i celule din leziunile endocervicale) i din
fundul de sac vaginal posterior (celule atipice din
toate compartimentele organelor genitale interne)
Tehnica frotiului cervico-vaginal:

Intindererea pe lam:
-dintr-o singur micare (nu n zig-zag!)
-prin rotirea periei endocervicale (nu prin tergere!).

Fixarea:
-spray: sub unghi drept la 20cm;
-alcool etilic 90-95%, 15-30 min.
-alcool izopropilic 70-90%
-alcool/eter (50/50).

Identificarea: notarea cu creion.

Colorarea: coloraia Babes- Papanicolau

Montarea: lamel/film plastic cu Balsam de Canada sau rini sintetice.
Coloraia Babes- Papanicolau:
Coloranti:

Hematoxilina Harris
Eozina alcoolica (EA 50)
Orange G (OG 6)

Rezultate:
Nuclei albastri
Citoplasme cianofila (verde albastruie celule intermediare) sau eozinofila (roz
rosie celule superficiale)
HGSIL
 Tehnici imunohistochimice
Se bazeaza pe reactia antigen anticorp

Prin folosirea Ac specifici se evidentiaza prezenta

unor Ag in anumite tesuturi, printr-o reactie
colorimetrica

Colorarea imunohistochimica este utilizata pe scara

larga in diagnosticul si depistarea celulelor
anormale, cum ar fi cele specifice tumorilor
canceroase
C-erbB-2 (3+)
Estrogen Receptor
Mamaglobina