Disciplina de Microbiologie UMF Tg.

Mure LP6

Genul Neisseria
Produs patologic: Neisseria gonorrhoeae
secreie uretral, secreie glande Bartholini, secreie vaginal, secreie prostatic la femei se recolteaz n timpul sau la sfritul ciclului menstrual secreie faringian secreie conjunctival urin

Neisseria meningitidis
secretie faringian snge LCR

Rezistena: foarte sensibili la temperatura camerei, la uscciune recoltarea i nsmntarea se fac la patul bolnavului!!! 1. Examenul microscopic: coci Gram(-) sub form de boab de cafea, dispui diplo n infecii acute se gsesc intracelular n infecii cronice se gsesc intrai extracelular 2. Izolarea: (sunt germeni foarte pretenioi) se nsmneaz imediat dup recoltare se nclzete mediul la 370C mediile de cultur utilizate: Geloz-chocolat, PEIZER-STEFFEN, THAIER-MARTIN coci gram (-), dispui diplo sunt capsulai

- Incubarea se face cu CO2 obligatoriu 10% 24-48 ore la 370C. -1-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP6

2. Identificarea: CC- col S friabile, asemntoare perlelor. ncadrarea n genul Neisseria: Testul oxidazei oxidazo(+)=Neisseria ncadrarea n specie: - Testul de umflare a capsulei (+) N meningitidis se stabilete i serogrupul acesteia - Fermentarea zaharurilor: GLUCOZ MALTOZ ZAHAROZ Gonococ + Meningococ + + Neisserii saprofite + + +

3. Antibiograma se face, dei marea majoritate este sensibil la Penicilin. Diagnostic rapid: bazat pe reacii Ag-Ac se pun n eviden Ag meningococice direct din LCR - Reacii de precipitare inelar - Reacii de aglutinare.

Genul Haemophilus
Produs patologic secreie nazo-faringian - de la poarta de intrare puroi n otite, sinuzite sput n pneumonii LCR n meningit snge n septicemie

Recoltare i transport ! n meningit recoltarea LCR o la patul bolnavului o transport rapid la 37oC, este interzis refrigerarea

-2-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP6

Examen direct macroscopic o LCR cu aspect purulent microscopic o direct din pp. sau dup centrifugare pentru concentrarea germenilor o frotiu colorat Gram sau cu albastru de metilen celule inflamatorii cocobacili G-, capsulai. n culturi vechi i pierd capsula izolai,n grmezi sau lanuri scurte, intra/extraleucocitar Cultivare germen pretenios necesit incubare n CO2 10%, atmosfer umed, 37OC necesit factori de cretere o mediu Chocolat o ! S. aureus produce factor de cretere V Identificare c.m.t. c.c. o colonii S sau M o asemntoare cu picturile de rou o coloniile sunt mai numeroase n jurul coloniilor de S. aureus (satelitism) c. biochimice o indol pozitive (majoritatea) o fermenteaz inconstant zaharurile o n prezent se folosesc teste API identificare antigenic o identificarea Ag capsular K reacii de umflare a capsulei RIF, ELISA, latexaglutinare identificarea AN o se folosesc sonde nucleotidice produse comercial Diagnostic serologic folosit pentru verificarea rspunsului imun dup vaccinare ELISA, RIA Antibiograma obligatorie se face pe medii speciale (Haemophilus test medium - HTM) -3-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP6

Corynebacterium diphtheriae - Diagnosticul de laborator n difterie Produsul patologic

fals membran, secreie faringian, secreie nazal la purttori secreie conjunctival, vulvar, din plgi Recoltarea se face cu 3 tampoane 1. Cu primul tampon se efectueaz 3 frotiuri frotiu colorat Gram pentru observarea morfologiei i dispoziiei spaiale o C. diphtheriae bacil Gram pozitiv, uor ncurbat, cu capetele mciucate, dispus caracteristic (litere chinezeti, chibrituri aruncate pe mas) frotiu colorat Neisser pentru evidenierea corpusculilor metacomatici Babe-Ernst o C. diphtheriae prezint corpusculi metacromatici la capete frotiu colorat Giemsa pentru diagnosticul diferenial cu angina fuso-spiralar o pe frotiu se evideniaz fusobacterii i forme spiralate (Treponema vincenti) 2. Tamponul al doilea se nsmneaz pe mediul de mbogire OCST incubare 12-18 ore, dup care se izoleaz pe medii caracteristice 3. Tamponul al treilea se descarc pe medii de cultur folosite pentru izolare identificare mediul Lffler colonii caracteristice circulare uor crenelate alb-glbui geloz snge colonii albe-gri perlate friabile mediul Gundel Tietz se difereniaz cele trei tipuri de bacil difteric o tipul gravis colonii negre de tip R plate cu margini crenelate centrul mamelonat cu striaiuni radiare ca o floare de margaret o tipul mitis colonii negre de tip S o tipul intermedius colonii de tip S-R bulion: tipul gravis formeaz pelicul la suprafarestul mediului rmne clar o tipul mitis tulbur uniform mediul o tipul intermedius formeaz inel la suprafa depozit i tulbur uniform mediul

-4-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP6

Caractere biochimice
producerea de H2S se studiaz pe mediul PISU (cu cistin) fermentarea zaharurilor o n funcie de fermentarea glucozei maltozei i zaharozei bacilii difterici se pot ncadra n specie (C. difteriae hoffmanii xerosis) o n funcie de fermentarea dextrinei amidonului i glicogenului i ncadrm n tip (gravis mitis i intermedius)

Caractere de patogenitate - cercetarea producerii de exotoxin difteric

teste n vivo teste in vitro o testul Elek reacie de precipitare n gel se toarn geloz peste o hrtie de filtru impregnat n ser antidifteric se insmneaz n striuri tulpinile de cercetat dac o tulpin produce exotoxin difteric (Ag) aceasta este eliberat n mediu i apare o band de precipitare o testul Ramon reacie de floculare prin care se dozeaz putere toxic a toxinei

Diagnosticul indirect
IDR Shick IDR de neutralizare o se injecteaz strict intradermic 1 unitate de toxin dac organismul nu are anticorpi toxina i exercit efectul eritematos i la locul inoculrii apare un eritem organism receptiv. dac organismul are anticorpi acetia vor neutraliza toxina deci nu apar modificri la locul inoculrii organism imun Reacii de hemaglutinare pasiv - determinare cantitativ a antitoxinelor

-5-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP6

Bacillus anthracis - diagnosticul de laborator al infeciei crbunoase

Produsul patologic:
n crbunele cutanat exudat din pustula malign n crbunele intestinal materii fecale n crbunele pulmonar sput n formele septicemice snge pentru diagnostic retrospectiv fragmente de organe

1. Examen direct frotiu Gram o bacil Gram pozitiv, cu capetele retezate sau uor concave, aezai n lanuri, cu aspect ce imit trestia de bambus. o prezint un spor central o n produsul patologic prezint capsul

2. Izolare
germene nepretenios o bulion o geloz simpl o geloz snge

3. Identificare
caractere morfotinctoriale (vezi examenul direct) caractere de cultur o n mediu lichid formeaz un depozit floconos, mediul rmne clar o pe medii solide colonii de tip R cu suprafaa rugoas, centrul ombilicat, margini dantelate cu prelungiri laterale (cap de Medusa) o n geloz dreapt crete sub forma unui brad inversat diagnostic diferenial fa de ali germeni din genul Bacillus (B. cereus) -6-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP6

o sensibilitatea la penicilin - B. Anthracis este sensibil, B. cereus este rezistent sensibilitatea fa de bacteriofagi

4. Diagnostic retrospectiv
reacia Ascoli reacie de precipitare inelar o evideniaz prezena antigenelor n fragmente de organe recoltate de la cadavre

-7-