Catedra de medicina celulara si moleculara

Obiectul biologiei celulare Microscopie optica

Obiectul biologiei celulare

Biologia celular = tiina fundamental care se ocup cu studiul celulei ca unitate structural i funcional a oricrui organism viu

Microscopia optica

Microscopul optic = dispozitiv cu ajutorul cruia se pot examina structuri cu dimensiuni mult sub puterea de rezoluie a ochiului uman

Microscopul optic
Ocularul

Condensator Sursa lumina

Masa Macro si microviza

Componentele microscopului optic

SURS DE LUMINA 2. CONDENSOR 3. DIAFRAGM 4. MASA 5. DISPOZITIV DE DEPLASARE A LAMEI

1.

6. REVOLVER 7. OBIECTIVE 8. SISTEM DE PRISME 9. OCULAR 10. MACROVIZA 11 MICROVIZA

Modul de formare a imaginii la MO

Obiectivul - o imagine marit, real i rsturnat a obiectului Ocularul- va forma imaginea final mult marit , rsturnat i virtual , la infinit deci nu necesit efort de acomodare

Performantele microscopului optic

Puterea de mrire Puterea de rezoluie

Puterea de mrire
Puterea de mrire = produsul dintre puterea de mrire a obiectivului i cea a ocularului Puterea de mrire maxim x1500 ori Puterea de mrire - 4, 10 - 20, 40 diagnostic histologic - 60, 100 diagnostic citologic

Puterea de rezoluie a MO
=Cea mai mic distan dintre dou puncte la care acestea pot fii percepute distinct De ea depinde claritatea i bogia n detalii a imaginii Depinde de lentila obiectivului FORMULA LUI ABB : d=/ n sin

= lungimea de unda a radiatiei electromagnetice ( 0,55 m) n= indicele de refractie al mediului dintre preparat si obiectiv = din aperura unghiulara a obiectivului

Puterea de rezoluie a MO

d=/ n sin

Limitrile puterii de rezoluie a microscopului optic n practic

este o constanta naturala ce nu poate fi influenat (0,55) Mediul dintre preparat si obiectiv este de obicei aer (n = 1)

Puterea de rezoluie a MO

d=/ n sin

Obiectivul

cu imersie ntre obiectiv i preparat se interpune o pictura de lichid cu un indice de refracie supraunitar, cum este uleiul de cedru (n=1,51)

Puterea de rezoluie a MO

d=/ n sin

Apertura

unghiulara maxim teoretica este 180 , deci =90, limita teoretic maxim a sin =1

Rezoluia maxim a microscopului optic= 0,2

Preparate fixate si colorate

Studiul celulelor vii, necolorate

1.MICROSCOP CU CMP NTUNECAT 2. M. CU CONTRAST DE FAZ 3. M. CU INTERFEREN 4. M. TIP NOMARSKI 5. MICROSCOPUL RANVERSAT

Studiul celulelor vii, necolorate

1.MICROSCOP CU CMP NTUNECAT PRINCIPIU exist un diafragm n condensor care selecteaza doar lumina laterala, imaginea final fiind format de razele reflectate de componentele din preparat

2. M. CU CONTRAST DE FAZ PRINCIPIU - lumina care trece prin medii cu indici de refracie diferii i modific direcia i viteza - micoscopul transform aceste diferene n diferene de intensitate luminoas

3. M. CU INTERFEREN PRINCIPIU - mai folosete nc o raz de lumin care nu traverseaz esutul analizat ,dar interfer cu raza provenita de la sursa de lumina - ofera informaii despre densitatea obiectului analizei

4. M.

TIP NOMARSKI

Un

tip modificat al microscopului cu contrast de faza, oferind imagini aparent tridimensionale

5. MICROSCOPUL RANVERSAT - pentru examinarea celulelor din flacoane sau placi Petri - obiective sub masu - sursa de lumin deasupra

MICROSCOPUL CU FLUORESCEN
LUMINISCENA = proprietatea unor substane de a emite lumina atunci cand sunt stimulate luminos =FOTOLUMINISCENA FLUORESCENA proprietatea unei substane de a emite radiaii lumioase doar in timpul stimulrii FOSFORESCENA proprietatea unei substane de a emite radiaii lumioase i

dup ncetarea stimulrii

MICROSCOPUL CU FLORESCEN
TERMOFLUORESCENTA = proprietatea
unor substante de a emite lumina atunci cand sunt stimulate termic.

MICROSCOPUL CU FLUORESCEN
Aplicaii practice: 1.AUTOFLUORESCENA capacitatea esuturilor vii de a absorbi radiaii luminoase cu o anumita lungime de unda si de a o emite ulterior alte radiaii, cu o alta lungime de und, mai mare

2.

FLUORESCENA SECUNDAR dup marcare cu compui fluoresceni :

a.
b.

Acridine orange ADN-verde/ ARN-rosu

Quinacrina cromozomi = bandare

Marcarea fluorescenta a ADN

MICROSCOPUL CU FLUORESCEN
3.IMUNOFLUORESCENA : punerea n eviden a diferiilor antigeni cu ajutorul unor anticorpi specifici marcai cu un compus fluorescent IZOTIOCIANAT DE FLUORESCEINA (FITC) -2 tipuri: direct si indirect

Imunofluorescenta directa
=Ag + Ac specific marcat

Imunofluorescenta indirecta
Ag + Ac specific + Ac sec. marcat - are o sensibilitate mai mare ca metoda ase foloseste in cazul n care antigenele se gasesc in cantitate mic n esut

Imunofluorescenta indirecta

4.SONDE FLUORESCENTE , molecule care detecteaza concentratia i.c. a ionilor , a rad. liberi , a variatiilor de pH i.c. si isi modifica proprietatile in functie de valorilor acestora.