Obiectul microbiologiei

ef lucrri Dr. Delia Berceanu

Microbiologia este tiina care se ocup cu

studiul organismelor microscopice. Ramuri: microbiologia medical, farmaceutic, industrial, alimentar, a mediului, a solului, a plantelor etc. Studiaz: Biologia agenilor infecioi Relaiile dintre aceti ageni i organismul uman Diagnosticul etiologic al infeciilor Bazele terapiei antiinfecioase Bazele profilaxiei infeciilor

LOCUL AGENILOR INFECIOI N SISTEMATICA MICROORGANISMELOR

Microorganismele difer n mod fundamental unele de altele, fiind ncadrate n 3 regnuri:

1. protista 2. procariotae 3. vira.

- microorganisme a cror celule sunt evoluate, de tip eucariot, cu nucleu i organite celulare nespecifice: reticul endoplasmatic, ergastoplasma, mitocondrii etc.

1. Regnul Protista

are toate caracterele celulelor evoluate nucleu organite celulare comune nu are perete celular se divide direct sau prin mitoza

Celula de tip eucariot

1. Regnul Protista
Algele - microorganisme acvatice, fotosintetizante, de

dimensiuni microscopice pn la forme gigante, pluricelulare, filamentoase. Nu prezint interes medical propriu-zis, cu excepia agar-agarului din care se obine agarul, polizaharid care servete la prepararea mediilor de cultur solide.
Mycetele (ciupercile microscopice) - grupate n 4 clase.

-12.000 de specii, din care 100 sunt de interes medical.

Protozoarele

- microorganisme unicelulare eucariote, evoluate structural i n general mobile, asemnndu-se cu celulele animale. Cele de interes medical se ncadreaz n 4 clase: flagelata, rhizopoda, sporozoa i ciliata.

2. Regnul Procariotae
- cuprinde microorganisme a cror celule sunt primitive, de tip procariot, lipsite de nucleu adevrat i de organite celulare nespecifice, dar cu un nveli suplimentar numit perete celular.
nu au nucleu adevrat - cromozom haploid format dintr-o

molecul circular de ADN lipsite de organite celulare ribozomilor au un perete celular rigid se divid direct

comune,

cu

excepia

nu au nucleu adevrat au un cromozom haploid format dintr-o molecul circular de ADN au perete celular rigid se divid direct lipsite de organite celulare comune, cu excepia ribozomilor

Celula de tip procariot

3. Regnul Vira - entiti infecioase de natur

subcelular (acelular): virusurile i viroizii.
Virusurile se deosebesc fundamental de formele
celulare de via:
sunt formate dintr-un singur acid nucleic (ADN sau ARN),

nvelit de o capsid proteic (nucleocapsida); unele prezint un nveli suplimentar anvelopa (peplosul); prezint parazitism intracelular obligatoriu; sunt particule inerte n stare extracelular, dar dup ce ptrund ntr-o celul vie, deviaz metabolismul acesteia n scopul propriei replicri.

Structura virusurilor

entiti infecioase acelulare, cu parazitism intracelular obligatoriu un singur acid nucleic (ADN sau ARN) inerte n afara celulei gazd paraziteaz celula la nivel genetic, deviaz metabolismul acesteia n scopul propriei replicri

 Viroizii - structur i mai simpl, fiind alctuii doar dintr-un acid nucleic cu GM mic. Unii produc boli transmisibile la plante. Virusurile i viroizii alctuiesc mpreun regnul VIRA. Prionii - entiti infecioase de dimensiuni foarte mici (5 nm), de natur proteic.
Se presupune c stau la baza unor boli degenerative ale SNC: boala Jacob-Creutzfeld, Kuru, scrapia oilor etc.

Caractere difereniale ntre bacterii i virusuri

Caracter
Dimensiuni Structur Coninutul n ac. nucleici

Bacterii
110 MO

Virusuri
20300 nm ME

Celular tip procariot Subcelular (acelular) ADN i ARN ADN sau ARN

Multiplicare / cultivare
Prezena enz. metabolice Sens la A. uzuale

Diviziune direct / pe m. de cultur inerte

Da Da

Replicate de ctre cel. gazd / anim. de lab., CC, OE

Nu Nu

 La agenii infecioi microscopici se

adaug paraziii multicelulari, cum sunt helminii i artropodele, cu structur complex i cu studiul crora se ocup parazitologia.

MORFOLOGIA I STRUCTURA BACTERIILOR

MORFOLOGIA I STRUCTURA BACTERIILOR

Dimensiunea bacteriilor: 1-10 (1=10-3 mm), Dimensiunea, forma i aezarea bacteriilor se apreciaz prin MO, iar detaliile morfologice i structurale prin ME. Forma bacteriilor st la baza clasificrii lor.
Form i aezare. n raport cu forma lor deosebim 4 categorii de bacterii: - rotunde (cocii), - alungite (bacili), - ncurbate (spirili, spirochete, vibrioni) i - filamentoase (actinomycete).

 cocii - bacterii rotunde, aezate n grmezi (genul

Staphylococcus), - ovalare, aezate n lanuri (genul Streptococcus), lanceolate, - n diplo ca dou flcri de lumnare (specia Streptococcus pneumoniae) - reniforme, dispuse ca dou boabe de cafea ce se privesc fa n fa (genul Neisseria),

bacilii - bacterii cu form alungit de bastona, cocobacilii - forme intermediare ntre coci i bacili (Yersinia
pestis, Bordetella pertussis, Haemophilus influenzae);

 vibrionii - bacterii ncurbate, n form de virgul (Vibrio

cholerae);

spirilii - bacterii spiralate cu 1-2 spire rigide (Spirillum

volutans);

spirochetele - bacterii spiralate cu corpul flexibil i 12-20

de spire (Treponema pallidum), foarte multe spire strnse (Leptospira) sau 2-3 spire (Borrelia);

actinomicetele - bacterii foarte asemntoare fungilor i

formeaz filamente sau hife lungi i ramificate care se rup, rezultnd forme bacilare (Actinomyces).

STRUCTURA CELULEI BACTERIENE

Componente
Componente

obligatorii:
1. peretele celular 2. membrana citoplasmatic 3. materialul nuclear 4. citoplasma

neobligatorii:
1. capsula 2. cilii sau flagelii 3. pilii bacterieni 4. sporii

Structuri celulare obligatorii

1. peretele celular 2. membrana citoplasmatic 3. materialul nuclear 4. citoplasma

Structuri celulare obligatorii

1. Peretele celular

Peretele celular
nconjoar membrana citoplasmatic, este o

structur rigid, specific bacteriilor. format: - un strat bazal sau peptidoglican (mureina), asemntor la toate bacteriile i - un strat al structurilor superficiale, foarte difereniat, n funcie de care bacteriile manifest caractere tinctoriale diferite: - bacterii gram-pozitive, - gram-negative i - acido-alcoolo-rezistente.

 Peptidoglicanul sau mureina - asigur forma,

rigiditatea i rezistena mecanic a bacteriei.

Prezent la toate bacteriile, el const dintr-un schelet, format din molecule lungi paralele polizaharidice de N-acetil-glucozamin i acid N-acetilmuramic. Moleculele de acid N-acetil-muramic din lanurile vecine sunt legate ntre ele prin puni polipeptidice, transversale.

- La bacteriile gram-pozitive, peptidoglicanul

este mai gros (15-30 nm). Stratul structurilor speciale este redus i alctuit din polimeri hidrosolubili - acizii theicoici. Ei reprezint antigenele de suprafa ale bacteriilor gram-pozitive.
Peretele celular al bacteriilor gram-pozitive este sensibil la aciunea lizozimului, care rupe legturile dintre acidul N-acetil-muramic i N-acetil-glucozamin.

- La

bacteriile gram-negative, peptidoglicanul

este mai subire (4-5 nm). Stratul superficial este ns mult mai complex dect la bacteriile gram-pozitive fiind alctuit din: Membrana extern - format dintr-un strat dublu fosfolipoproteic. Deasupra membranei externe a bacililor gramnegativi se afl lipopolizaharidul de perete (LPZ) sau endotoxina bacililor gram-negativi.

Lipopolizaharidul de perete (LPZ) sau endotoxina bacililor gram-negativi este alctuit din:
lipidul A partea activ, miezul sau core, numit i antigen R, comun tuturor

bacteriilor gramnegative, uniti monozaharidice repetitive (15-40) - specifice de specie i tip, care constituie antigenul O al bacteriilor gram-negative.
Spaiul periplasmic - se ntinde de la membrana celular pn

la membrana extern. El conine peptidoglicanul. Aici sunt prezente enzimele de inactivare ale unor antibiotice (betalactamazele i cefalosporinazele).

 Bacteriile acido-alcoolo-rezistente de interes medical sunt bacilul tuberculos i bacilul leprei. Peretele celular se aseamn cu cel al bacteriilor gram-pozitive, dar structurile speciale conin acid micolic i o cear, ce confer acestor bacterii caractere tinctoriale deosebite i rezisten crescut la factorii de mediu. Ele se coloreaz la cald prin tehnica ZiehlNeelsen.

Funciile peretelui celular:

asigur forma, rezistena mecanic i osmotic a bacteriei;

regleaz traficul molecular de perete n ambele sensuri; sediul antigenelor de suprafa;

sediul unor factori de patogenitate;

rol n diviziunea bacterian i n procesul de sporulare.

Structuri celulare obligatorii

1. peretele celular 2. membrana citoplasmatic 3. materialul nuclear 4. citoplasma

2. Membrana citoplasmatic

Membrana citoplasmatic
Membran fin (6,5-7nm), elastic, lipsit de rezisten

mecanic. Structur trilaminat - fosfolipoproteic.

Mezozomii - structuri membranare care se formeaz prin

invaginarea membranei citoplasmatice sub form de buzunar, prezente la bacteriile gram-pozitive i ocazional la cele gram-negative. Ei sunt n contact direct cu materialul nuclear fiind implicai n diviziunea cromozomului.

Funciile membranei citoplasmatice:

permeabilitate selectiv - barier osmotic ce regleaz

schimburile celulei bacteriene. secret enzime hidrolitice n mediul nconjurtor, ndeplinete rolul mitocondriilor de la celulele eucariote, fiind centrul energogenezei celulare, este sediul sintezei acizilor grai, a fosfolipidelor, este implicat n sinteza peretelui celular, al polizaharidelor capsulare, participnd activ la creterea i diviziunea celulei bacteriene i la formarea sporului bacterian.

Structuri celulare obligatorii

1. peretele celular 2. membrana citoplasmatic 3. materialul nuclear 4. citoplasma

3. Materialul nuclear

nucleoid (echivalent nuclear) - structur primitiv

n comparaie cu nucleul celulelor eucariote. format dintr-o molecul circular de ADN, organizat sub forma unui cromozom haploid care este n contact direct cu citoplasma datorit lipsei membrane nucleare. Molecula de ADN dublu spiralat este la rndul ei suprahelicat n jurul unui miez de ARN, dispoziie necesar funcionalitii materialului nuclear. Funcia nucleului bacterian const n depozitarea informaiei genetice. ADN suportul material al ereditii.

 n afar de ADN-ul cromozomial, la unele

bacterii sunt prezente n citoplasm molecule circulare de ADN plasmide, care se replic independent de cromozomul bacterian i care au rol n rezistena bacteriilor la antibiotice.

Structuri celulare obligatorii

1. peretele celular 2. membrana citoplasmatic 3. materialul nuclear 4. citoplasma

4. Citoplasma
situat ntre materialul nuclear i faa intern a

membranei citoplasmatice, sistem coloidal alctuit din 80% ap, n care se gsete o cantitate mare de molecule organice, ioni anorganici, enzime, ARN, vacuole i incluzii,
este lipsit de organitele celulare prezente la celulele

eucariote, cum sunt reticulul endoplasmatic, aparatul Golgi, mitocondriile, centrul celular, ergastoplasma.

 Ribozomii. O celul bacterian are aprox. 20.000

de ribozomi ce conin 80-90% din ARN-ul citoplasmatic. Reprezint sediul sintezelor proteice din celul.
Incluziile citoplasmatice - formaiuni structurale

inerte, temporare, de diferite dimensiuni, variind n funcie de specia bacterian i condiiile de mediu. Reprezint un material de rezerv care poate fi folosit ca surs de energie.

Structuri celulare neobligatorii

1. capsula 2. cilii sau flagelii 3. pilii bacterieni 4. sporii

Structuri celulare neobligatorii

1. Capsula
clar ce nconjoar bacteria (nu se coloreaz Gram).

Capsula - nveli compact, care apare ca un halou

Dpv. chimic, capsula bacteriilor de interes medical este de

natur polizaharidic (Streptococcus pneumoniae, Klebsiella etc.), cu excepia capsulei bacilului crbunos care este polipeptidic.

Asigur rezistena bacteriilor la fagocitoz, fiind un

factor de virulen. Variantele necapsulate ale acelorai specii sunt nepatogene.

- ex. S. pneumoniae capsulat produce la oarecele de laborator o septicemie mortal, pe cnd varianta necapsulat nu este patogen.

Este sediul antigenelor capsulare K - permit diferenierea

unor serotipuri n cadrul speciei.

Funciile capsulei:
factor de aderen i colonizare a bacteriilor pe

suprafee; protejeaz bacteriile de diferii ageni antibacterieni din mediu, cum sunt: bacteriofagii, colicinele, complementul, lizozimul sau alte enzime bacteriolitice; protejeaz bacteriile de aciunea fagocitelor, fiind un factor de virulen; reprezint sediul antigenelor capsulare K, importante n identificarea acestor bacterii.

Structuri celulare neobligatorii

1. capsula 2. cilii sau flagelii 3. pilii bacterieni 4. sporii

2. Cilii sau flagelii bacterieni

apendici filamentoi ai speciilor bacteriene mobile,

ce servesc ca organe de locomoie. Ei sunt prezeni mai ales la bacili. dispoziia i numrul cililor sunt caracteristice speciei.
S-au descris bacterii: - atriche (fr cili), - monotriche - cu un cil polar (Vibro cholerae), - lofotriche - cu un smoc de cili situat la unul din polii bacteriei (Pseudomonas fluorescens), - amfitriche - cu cilii situai la ambii poli ai bacteriei (genul Spirillum) i - peritriche - cu cilii dispui pe ntreaga suprafa a bacteriei (Salmonella, E. coli, Proteus etc.).

Cilii bacterieni

 Cilii / flagelii sunt sediul antigenelor flagelare H,

importante n identificarea bacteriilor.

Structuri celulare neobligatorii

1. capsula 2. cilii sau flagelii 3. pilii bacterieni 4. sporii

3. Pilii bacterieni
-

Se gsesc la suprafaa unor bacterii gram-negative. - Sunt apendici filamentoi, rigizi, mai scuri dect flagelii, n numr mare (100-500/celul) i cu dispoziie n general peritrich. - Se evideniaz numai prin ME.

Din punct de vedere funcional, se mpart n: sex pili - rol n transferul de material genetic ntre bacterii. pili comuni sau pili de aderen (fimbrii) - servesc la fixarea ferm a bacteriilor pe mediul de cultur sau pe suprafaa celulelor, constituind un important factor de virulen. n afar de aderen, pilii comuni mai au i proprieti antifagocitare.

Structuri celulare neobligatorii

1. capsula 2. cilii sau flagelii 3. pilii bacterieni 4. sporii

4. Sporii
Unele bacterii se transform n spori, care sunt

forme de rezisten la factorii de mediu i care apar endocelular n condiii nefavorabile de via. Au un nveli rezistent, format din mai multe straturi datorit cruia rezist n mediul extern zeci de ani.
Sporogeneza se ntlnete numai la 2 genuri de

bacterii gram-pozitive de Clostridium i Bacillus.

interes

medical:

Poziia sporului bacterian constituie un caracter taxonomic. Poate fi: central, terminal i subterminal.

STUDIUL MORFOLOGIC AL BACTERIILOR

Examinarea microscopic este frecvent primul

pas n identificarea unor bacterii. Caracterele morfologice i tinctoriale ncadreaz bacteriile n unul din grupurile majore, stabilind conduita diagnosticului bacteriologic.
Elementele

morfologice importante n identificarea unei bacterii sunt: dimensiunea, forma, aezarea, prezena unor structuri speciale ca, de pild, endospori, flageli, capsul sau incluzii intracelulare.

 Microscopul cu cmp luminos Microscopul cu fond ntunecat Microscopul cu contrast de faz Microscopul cu raze UV (imunofluorescen) Microscopul electronic

V MULUMESC !!!