Universitatea POLITEHNICA din Bucureti

Facultatea Ingineria i Managementul Sistemelor

Tehnologice
Specializare Ingineria Nanostructurlor si Proceselor
Neconventionale

Cercetarea experimental n procese neconvenionale

Masterant: Mihai Iulian

Grupa: INPN
Anul: I

Anul universitar
2014-201

MICROSCOPIA ELECTRONIC
Primul microscop electronic a fost construit n 1931 de ctre inginerii germani
Ernst Ruska i Max Knoll. Acesta era bazat pe ideile i descoperirile fizicianului francez
Louis de Broglie. Dei primitiv i nepotrivit utilizrilor practice, instrumentul era capabil
s mreasc obiectele de patru sute de ori.
Reinhold Rudenberg, directorul de cercetri al companiei Siemens, a patentat
microscopul electronic n 1931, dei Siemens nu fcea cercetri n domeniul
microscoapelor electronice la acea vreme. n 1937 Siemens a nceput s-i finaneze pe
Ruska i pe Bodo von Borries pentru dezvoltarea unui microscop electronic. Siemens l-a
angajat i pe fratele lui Ruska, Helmut s lucreze la aplicaii, n particular cu specimene
biologice.
n acelai deceniu, Manfred von Ardenne a inventat microscopul electronic cu
scanare i un microscop electronic universal.
Siemens a nceput producia comercial a microscopului electronic cu transmisie
n 1939, dar pn atunci primul microscop electronic cu utilizare practic fusese construit
la Universitatea Toronto n 1938, de ctre Eli Franklin Burton i studenii Cecil Hall,
James Hillier i Albert Prebus.
Dei microscoapele electronice moderne pot mri obiectele de pn la dou
milioane de ori, toate se bazeaz pe prototipul lui Ruska. Microscopul electronic este
nelipsit n multe laboratoare. Cercettorii l folosesc pentru a examina material biologic
(cum ar fi microorganisme i celule), diferite molecule mari, probe de biopsie medical,
metale i structuri cristaline, i caracteristicile diferitelor suprafee. Microscopul electronic
este folosit extensiv pentru inspecia i asigurarea calitii n industrie, inclusiv, n mod
deosebit, n fabricarea dispozitivelor semiconductoare.

Imagine a unei furnici la microscopul electronic cu baleaj

Cel mai puternic microscop din lume a fost anunat la inceputul lui 2008[5].
Transmission electron aberration-corrected microscope, prescurtat "TEAM" atinge
rezoluia de 0,5 ngstrm, in jur de 1 milion de ori mai mic dect diametrul unui fir de
pr.
2

n microscopia electronic fasciculul de lumin este nlocuit cu un fascicul de

electroni accelerai.
Relaia dintre puterea (limita) de rezoluie i lungimea de und a radiaiei
luminoase, stabilit pentru microscopia optic este corect i aplicabil pentru orice form
de radiaie deci i pentru un fascicul de electroni. Proprietile de und ale electronului au
fost descoperite de fizicianul francez L. de Broglie, n 1924 , Electronii nu au o lungime
de und constant; ea crete pe msura, ce crete viteza electronilor. ntr-un microscop
electronic, la o tensiune de accelerare de 100.000 V, lungimea de und a electronilor este
de 0,004 nm. Rezoluia teoretic (calculat) corespunztoare acestei lungimi de und ar
trebui s fie de 0,002 nm. n fapt, ea este mai mic, fiind limitat de mai multe cauze,
printre care: a. aberaiile lentilelor electromagnetice sunt mai greu de corectat dect cele
ale lentilelor de sticl; b. tehnicile de preparare (fixare, includere, contrastare) i c. efectele
de deteriorare ale specimenului datorate fasciculului de electroni. n consecin,
specimenele de natur biologic pot fi observate n microscopia electronic la o rezoluie
limit de 2 nm (20 ), de aproximativ 100 de ori mai bun dect rezoluia microscopului
optic.
Cele mai perfecionate microscoape electronice aflate in exploatare n diferite
laboratoare, au rezoluii garantate de 2-3 iar n condiii speciale se poate ajunge la 1,21,4 i o putere de mrire (direct, n aparat) de 800,000 de ori. Deci, rezoluia acestor
aparate se apropie de dimensiunea atomului de hidrogen care este de 1 . Pentru
comparaie, reamintim c rezoluia ochiului uman, la o distan de 25 cm a obiectului, este
de 0,1 mm iar a microscopului optic de 0,1-0,2 m .
Judecnd dup performanele de rezoluie ale microscoapelor electronice actuale
(2-3 ) s-ar putea considera c observarea direct a aminoacizilor n moleculele
proteinelor, de exemplu, nu reprezint o problem. Aminoacidul cu diametrul cel
mai mic este glicina (5.1 ), iar cel mai mare este triptofanul (175.5 ).
Acest lucru nu este posibil deoarece rezoluia amintit se poate obine doar pe
reelele cristaline ale unor substane i nu direct pe biomolecule.
Domeniul de investigaie de la celul pn la molecul sau atom, care urmrete
nelegerea organizrii ansamblurilor de molecule n structuri supramoleculare, a
proceselor legate de biosinteza acestora precum i a funciilor lor, constituie domeniul
ultrastructural. La acest nivel nu se mai poate vorbi de zoologie, morfologie sau fiziologie
(n sensurile clasice), ci de un spaiu unificat al cunoaterii viului, acela al biologiei
celulare i moleculare.
1. Microscopul electronic de transmisie (TEM)
ntr-o perspectiv foarte general, microscopul electronic de transmisie (fig.1,2)
este similar microscopului optic. Sursa de iluminare este nlocuit cu un filament sau
catod care are rolul de a emite fasciculul de electroni. Catodul este localizat n partea
superioar a unei coloane cilindrice de aprox 2m. Pentru a se evita dispersia electronilor
din fascicul prin coliziunea cu moleculele aerului, n coloan se creeaz vid prin
pomparea n afar a aerului.

Electronii produi de filamentul supranclzit sunt accelerai fa de un anod,

cruia i se aplic o tensiune negativ ce smulge electronii i i accelereaz. Fasciculul trece
printr-o deschidere ngust a anodului i strbate n ntregime coloana.
De-a lungul coloanei sunt plasai mai muli e1ectromagnei (lentile
electromagnetice) care pot concentra sau focaliza fasciculul ndeplinind un rol similar cu
acela al lentilelor de sticl din microscopia optic.

Fig. 1 Schema componenetelor unui microscop electronic de transmisie

Fig. 2 Microscopul electronic de transmisie

Un sistem de diafragme cu diametrul de 30-100m opresc trecerea electronilor
mrginai, mbuntindu-se claritatea i contrastul imaginilor.
Specimenul este situat n coloana vidat, pe direcia fasciculului de electroni. n
urma coliziunii electronilor fasciculului primar cu specimenul, rezult mai multe tipuri de
electroni sau radiaii, majoritatea fiind utilizate n diverse microscoape
electronice (fig. 3). Ca i n microscopia optic, specimenul este colorat (contrastat) cu
substane electrocondense adic substane capabile s disperseze cea mai mare parte a
electronilor incideni pe suprafaa ocupat de ele. Electronii care au strbtut preparatul
(transmii) sunt focalizai pentru a forma o imagine pe un ecran fluorescent sau pentru a
impresiona o plac fotografic. Deoarece regiunile dense ale preparatului vor dispersa
majoritatea electronilor, aceste zone vor arta pe ecran sau n fotografie ca zone mai negre,
mai nchise i se vor numi zone electron-dense.

Electroni transmii

Fig. 3 Prezenterea schematic a interaciunii dintre fasciculul primar de electroni i

specimen
2. Microscopia electronic de baleiaj (SEM)
Microscopul electronic de baleiaj (termen derivat din lb. francez) sau microscopul
electronic scanning (termen derivat din lb. englez) (fig. 4) permite obinerea unor imagini
tridimensionale ale specimenului. Prin intermediul unui astfel de aparat se pot studia
suprafeele obiectelor biologice, fr a se obine ns informaii despre modul de
organizare n profunzime (referitoare la structurile lor interne).
n timp ce n microscopia electronic de transmisie (TEM) imaginea se formeaz
datorit electronilor transmii (care pot trece prin preparat), n microscopia electronic
scanning (SEM) imaginea se obine prin detectarea i msurarea fluxurilor electronice
dispersate sau emise (electroni secundari) de pe suprafaa specimenului. Deci, cu ct
suprafaa specimenului va dispersa (reflecta) n mai mare msur electronii fasciculului cu
att imaginea obinut va fi mai bun. Proprietile reflectorizante ale suprafeelor
specimenelor sunt amplificate prin acoperirea lor cu un strat subire de metal greu (aur,
platin, aliaj aur-platina etc.). Pe suprafaa specimenului este proiectat un fasicicul foarte
ngust de electroni care parcurge ntr-un mod ordonat ntreaga sa suprafa (baleiere,
scanare). Detectorul de electroni dispersai (reflectai) sau secundari (emii din specimen
6

n urma coliziunii cu electronii fasciculului primar) msoar punctiform proprietile

acestora traducndu-le ntr-un semnal luminos pe ecranul unui monitor. Imaginea
specimenului pe ecran se reconstituie pe baza semnalelor ( imaginilor) punctiforme
datorate electronilor dispersai sau secundari detectai.
Microscoapele de baleiaj permit diferene mari ntre planurile de focalizare, deci
faciliteaz examinarea suprafeelor unor obiecte relativ mari. Deoarece cantitatea
electronilor dispersai este dependent i de unghiul dintre suprafaa specimenului i
fasciculul de electroni, imaginea obinut va fi mai luminat sau mai umbrit. Se
amplific astfel aparena de tridimensionalitate spaialitate.
Microscoapele electronice de baleiaj sunt mai mici i mai puin costisitoare
n
comparaie cu microscoapele electronice de transmisie. Microscoapele de baleiaj
(cele uzuale) nu au o rezoluie foarte mare ci doar de aproximativ 10nm; mrirea
efectiv ( obinut n aparat) este de pan la 20.000 de ori.
n concluzie, microscopia electronic de baleiaj poate fi utilizat n mod curent
pentru ivestigarea celulelor ntregi, a esuturilor, a fragmentelor de organe ( de exemplu, a
fragmentelor de frunze, rdcini etc.) sau chiar a unor organisme de dimensiuni adecvate
(unele insecte, de exemplu).
n ultimul timp, s-a reuit o mbuntire substanial a rezoluiei n
microscopia electronic de baleiaj reducndu-se mult diferena fa de TEM. Au fost
produse instrumente care permit o rezoluie de 0,5-1 nm, deci, o vizualizare direct,
tridimensional, a unor detalii de nivel molecular. Acest nou domeniu al SEM poart,
numele de microscopie electronic scanning de nalt rezoluie (HRSEM - engl.
High-Resolution Scanning Electron Microscopy ) . Aceste performane
au
fost
obinute prin utilizarea electronilor slab accelarai, care reduc producerea de sarcini
electrice n specimen precum i capacitatea de penetrare a specimenului, chiar dac. acesta
este foarte subire.

Fig. 4 Microscopul electronic de baleiaj (SEM)

7

3. Microscopul electronic de voltaj supranalt

Este o variant a TEM cu o coloan cu lungime total de 10m. Deoarece tubul de
accelerare este de dimensiuni mari, accelerarea electronilor este de aproximativ 1.000.000
V. Acest voltaj confer electronilor suficient enargie cinetic pentru a penetra prin
preparate cu grosime de microni sau chiar prin ntreaga celul. Imaginea rezultat este o
radioscopie celular care evideniaz ultrastructura ntregii celule, fr a fi nevoie de
sseciuni ultrafine.
Principalul avantaj al microscopului electronic de voltaj supranalt este acela c
permite observarea n profunzime i d o imagine tridimensionsl asupra celulei.
Rezoluia i adncimea cmpului sunt extrem de performante pe toat grosimea
preparatului.
4. Microscopul electronic cu scanare
Spre deosebire de MET, unde raza de electroni la tensiune nalt formeaz
imaginea specimenului, microscopul electronic cu scanare[9] produce imagini prin
detecia electronilor secundari, cu energie sczut, emisi de pe suprafaa specimenului
datorit excitrii acestuia de ctre raza principal de electroni. n MES, raza de electroni
parcurge ntreg specimenul, detectorii construind o imagine prin maparea semnalelor
detectate la poziia razei.
n general, rezoluia MET este de regul cu un ordin de mrime mai mare dect
cea a MES, dar, datorit faptului ca imaginea produs de microscoapele cu scanare se
bazeaz pe procese de suprafa i nu pe transmisie, este capabil s vizualizeze probe mai
mari, i are o adncime de penetrare mult mai mare, producnd astfel imagini care sunt o
bun reprezentare tridimensional a probei.

Microscop electronic cu scanare la Institutul de Geologie al Universitii din Kiel,

Germania, n 1980. Coloana din mijloc produce fluxul de electroni, iar specimenul este
plasat la baz
8

5. Microscopul electronic cu reflexie

n plus, exist i microscoape electronice cu reflexie (MER). Ca i MET, aceast
tehnic implic raze de electroni incidente pe o suprafa, dar n loc s foloseasc
electronii transmii, sau cei secundari, se detecteaz raza reflectat.
6. Microscopul electronic cu scanare i transmisie MEST combin nalta
rezoluie a MET cu funcionalitile MES, permind folosirea unei game de tehnici de
analiz imposibil de atins cu MET convenionale