2.2.6.

Recoltarea embrionilor
Embrionii sunt colectai atunci cnd se gsesc n cornul uterin, dup
ieirea lor din oviduct (ntre zilele 4-5). Din motive sanitare i decongelare
se prefer colectarea embrionilor nc inclui n zona lor pelucid (ies n
a 9-a zi). Cel mai frecvent, colectarea se realizeaz ntre zilele 6-8 dup
fecundaie, de regul n ziua a 7-a. Recoltarea embrionilor se face
chirurgical i nechirurgical .
Mult timp, metoda chirurgical a fost singura utilizat. Tehnica
operatorie presupunea parcurgerea a dou etape: laparotomia, cu
exteriorizarea aparatului genital n plag i recoltarea propriu-zis a
embrionilor prin splarea cu un lichid cu o compoziie special, a
oviductelor (dup un interval de timp mai mic de 3 zile dup nsmnare)
sau a coarnelor uterine (dup un interval de timp mai mare de 4 zile de la
nsmnare).n prezent, metoda chirurgical de recuperare a embrionilor
la vac este abandonat, datorit inconvenientelor pe care le prezint.
Astzi, este generalizat metoda nechirurgical de prelevare a embrionilor,
al crui principiu const n splarea coarnelor uterine cu un mediu
special preparat, splare care se realizeaz n condiii de asepsie n a 7-a
zi de lansmnare.
Tehnica nechirurgical de colectare a embrionilor s-a perfecionat
continuu, firme specializate produc pe scar industrial mediul de recoltare,
congelare, decongelare i ntreaga aparatur necesar recoltrii i
transferului embrionilor.
Tehnicile nechirurgicale
Tehnicile nechirurgicale de recoltare a embrionilor presupun mai
multe operaii: contenia femelei, anestezia, vidarea rectului, toaleta vulvei
i a regiunii perivulvare, identificarea prezenei corpilor galbeni pe ovar,
introducerea lichidului de splare n lumenul coarnelor uterine,splarea
acestora, recuperarea lichidului mpreun cu embrionii, identificarea i
recuperarea embrionilor din lichidul recuperat i supus decantrii i
aprecierea morfologic a acestora. n condiii de ferm, recoltarea
embrionilor se face la locul unde se gsete femela donatoare, dup ce n
prealabil, vecinele acesteia au fost ndeprtate. Femela se
contenioneaz adecvat, astfel nct s-i fie limitate micrile, trecerea
sondei prin canalul cervical care este nchis, provocnd dureri animalului i
implicit, reacie de aprare. Pentru a suprima durerea, se practic
anestezia epidural cu 4-6 ml procaine 2% sau cu 10 ml ludocain 1%,
care blocheaz nervii coccigieni i ultimele perechi de nervi sacrali
(S3,S4. S5). Acul se introduce ntre prima i a doua vertebr coccigian
sau ntre ultima vertebra sacral i prima vertebr coccigian, anestezia

instalndu-se dup circa 10-15 minute i dureaz n jur de 90 de minute,

zonele insensibilizate fiind : coada, anusul, rectul, vulva, vaginul i
uterul.Se introduce, cu precauiile de rigoare, mna n rect, acesta se
videaz de coninut, apoi se apreciaz rspunsul femelei la tratamentul
poliovulator, palpndu-se cu atenie ambele ovare i numrdu-se corpii
galbeni.
n cazul n care rspunsul la tratamentul de superovulare este
pozitiv, se procedeaz cu precauie la introducerea cateterului de tip Folley
cu dou sau trei ci, prin conductul cervical pn n cornul uterin. Pentru
rigidizarea cateterului, se introduce pe lumenul acestuia un mandren (tij
metalic) , care se menine pn se ajunge n lumenul cornului uterin,
apoi se retrage. Cateterul este introdus circa 5-8 cm de la bifurcaia
coarnelor uterine, pe unul dintre i acestea, apoi se introduce de la
exterior, cu seringa, 8-15 ml de aer n scopul fixrii cateterului i pentru a
mpiedica refularea din cervix a lichidului de splare.Vasul din sticl, ce
conine lichidul de splare se suspend la 1,5 m de la sol i, prin cdere,
acesta ajunge prin calea de admisie a cateterului n coarnele uterine.
Irigarea acestora se face continuu, calea de evacuare a lichidului este
conectat, printr-un tub de plastic, la vasul de colectare a mediului
recuperat (de splare). Recuperarea lichidului de splare se face prin calea
de admisie (n cazul cateterului cu dou ci la care s-a adaptat o pies n
forma literei (y)
Recoltarea embrionilor prin metoda nechirurgical, prevzut cu canal de
admisie i evacuare al lichidului, ramura de evacuare a lichidului fiind conectat la
un filtru de colectare a crui orificii au un diametru de 75m, care are rolul de
reinere a embrionilor, lichidul ce traverseaz filtrul fiind colectat ntr-un recipient
situate sub filtru. Mediul folosit la splarea unui corn uterin se folosete la splarea,
n acelai mod, a celui de-al doilea corn uterin. Cantitatea de mediu care se
folosete pentru splarea unui corn uterin este de 300-500 ml, efectundu-se irigri
repetate i un masaj transrectal permanent al cornului uterin perfuzat. Exist
diverse sonde de recuperare a embrionilor, imaginate de diveri cercettori, care se
bazeaz pe acelai principiu constructiv
(Elsden i colab., 1978, Newcomb i colab., 1978, Cassou etc.).
ntre momentul recuperrii embrionilor i cel al inoculri lor n uterul
receptoarelor, zigoii trebuie s fie meninui n via n condiii speciale i
s fie manipulai n cele mai bune condiii tehnice i igienice. Compoziia
mediilor de recoltare i cultivare a embrionilor s-a modificat frecvent n
decursul timpului, pe msur ce cunotinele n domeniu au avansat i pe

baza multiplelor experiene ntreprinse.n ultimii ani s-a generalizat

folosirea unei soluii tampon fosfat -PBS (Fosfat bufferet salin) pentru
splarea coarnelor uterine i pentru pstrarea embrionilor recuperai.
Acest lichid are un pH de 7,2, o presiune osmotic de 290 miliosmoli i
conine multe sruri minerale, glucoz i protein (albumin bovin
seric, 2-4 g/l, sau ser de viel fetal de complementat 10%

Recoltarea embrionilor prinmetoda nechirurgical

Compozi]ia mediului PBS (Fosfat bufferet salin)(dup Witthingham

G., 1971)Specificare U.M. Cantitatea
Toate mediile, soluiile, serurile, enzimele i substanele crioprotectoare care
vin n contact cu embrionii trebuie s fie sterile. Tot materialul care nu se arunc
(sonde colectoare, filtre, recipiente din sticl , sonde de transfer, etc.) care necesit a
fi sterilizate, se spal cu o soluie de detergent netoxic, se cltete n ap distilat, se
usuc i se nvelee n hrtie n vederea sterilizrii. Alegerea metodei de sterilizare
depinde de natura materialului (cldur- uscat , cldur- umed, substane
antiseptice, vapori de formol etc.). Rezultatele recuperrii embrionilor depind n cea
mai mare msur de abilitatea i antrenamentul operatorului. Proporia embrionilor

recuperai, oscileaz n medie, ntre 60-70% comparative cu numrul de corpi

galbeni identificai pe ambele ovare. Dup colectarea embrionilor se injecteaz
donatoarei o doz de PGF 2, care are rolul de a liza corpii galbeni, evitndu-se
astfel gestaia multipl