By OvyOne

MICROBIOLOGIA I BIOTEHNOLOGIA
APRECIEREA ACTIVITII ANTIOXIDANTE I ANTIRADICALICE A EXTRACTELOR DIN Porphyridium cruentum PRIN APLICAREA METODELOR NON-SPECIFICE
L. Rudi, L. Cepoi, V. Miscu, T. Chiriac, A. Cojocari, D. Sadovnic, V. Rudic
Institutul de Microbiologie i Biotehnologie al Academiei de tiine a Moldovei

Introducere
Antioxidanii n calitate de compui care micoreaz intensitatea oxidrii radicalice i neutralizeaz radicalii liberi, formeaz bariere succesive de protecie n dependen de tipul mecanismului lor de aciune. Unul din momentele importante n aciunea antioxidanilor este derularea n lan a reaciilor antioxidative, cu formarea radicalilor intermediari mai puin activi care sunt anihilai prin alte reacii antioxidative cu implicarea altor compui activi. n prezent tot mai multe cercetri conrm rentabilitatea utilizrii mediului acvatic n producerea materiei prime pentru obinerea antioxidanilor naturali [8,11]. n calitate de surse de antioxidani sunt studiate unele cianobacterii i microalge aa ca Spirulina platensis, Chlorella vulgaris, Dunaliella salina, Haematococcus pluvialis, Porphyridium cruentum .a. [2, 4, 5, 8, 11, 12]. Microalgele i cianobacteriile sunt purttorii unor complexe antioxidative cu o activitate superioar, datorit crora a fost posibil supravieuirea i evoluia lor. Impactul mediului poluat asupra puritii ecologice a materiei prime vegetale, surs de substane antioxidante, favorizeaz tehnologiile cologice n producerea substanelor biologic active cu un spectru tot mai larg de utilizare [4, 8, 11]. Extractele din Spirulina platensis sunt utilizate n medicin n scopul reducerii efectelor tratamentului radiologic [13]. Biomasa de Porphyridium cruentum conine mai multe componente cu proprieti pronunat antioxidante. Printre acestea sunt enzimele antioxidante, complexul glutationic, pigmenii cobilinici i carotenoizii, polizaharidele sulfatate, .a. Fiecare din aceste componente au mecanisme variate de aciune antioxidativ i se includ pe ci diferite n procesele de eliminare a radicalilor liberi. Astfel, antioxidanii obinui din biomasa algei Porphyridium cruentum au fost testai n calitate de component antioxidativ n procesarea alimentelor. Activitatea antioxidant a extractelor etanolice (96%) din biomasa de Porphyridium cruentum determinat cu utilizarea sistemuluimodel -caroten-linoleat este superioar activitii antioxidanilor sintetici BHA (hidroxianizol butilat) i BHT (hidroxitoluen butilat) [11]. Polizaharidele sulfatate din biomasa de Porphyridium deasemenea manifest aciune antioxidant care se realizeaz n baza activitii de eliminare a radicalilor [14]. Scopul cercetrilor efectuate a constat n aprecierea activitii antioxidante i antiradicalice a extractelor din Porphyridium cruentum pentru selectarea variantelor optimale de obinere a preparatelor policomponente cu activitate antioxidant i antiradicalic n baza

diverselor mecanisme de reducere i de inhibare a producerii de radicali. 114

Materiale i metode
n cali tat e de ma teri e pri m a fos t util izat bio ma sa lio li zat de Por phy ridi um cru ent um CN MAR01. Pe ntr u ob ine rea ext rac tel or hid roeta

noli ce din bio ma sa alg al au fos t sel ect ate con cen tra iile de eta nol : de 10 %, 20 %, 40 %, 55 %, 65 %, 75 % i 96 %. Ext rac tel e hid roeta noli ce au fos t ob inu te

n con dii i de te mp era tur (18 200 C) con sta nt la agi tai e per ma ne nt . Ra por tul din tre bio ma s i sol ve nt a fos t de 1:1 0 (w: v), iar tim pul de ext rag ere

 de 24 ore . Ext rac tel e ob inu te au fos t sta nd arti zat e la 1 mg /ml sub sta n usc at . A cti vit ate a ant ira dic alic a ext rac tel or a fos t det er mi nat

spe ctr ofo to me tric cu util izar ea rad ical ilor DP PH (2, 2dip he nil1pic rilh idr azil ) [1] i AB TS (2, 2 azi no bis 3ethy lben zoth iazo line -6acid sulf onic ) [10] . A ctivi tate a ant iox

ida nt a fos t det er mi nat sp ect rof oto me tric n ba za rea ci ei de red uc ere a rea ge ntu lui fos fo mo lib de nic [9] . n cali tat e de ec hiv ale nt a fos t util iza t

acid ul asc orbi c. C on in ut ul fen olil or a fos t de ter mi na t n ba za rea ci ei Fol inCio cal te u [1 2]. n cali tate de ech ival ent a fost utili zat aci dul gali c. Rezultate i discuii
P ent ru ob

ine rea co mp lex elo r ant ioxi da nte din ma teri a pri m ve get al tot ma i fre cve nt est e util izat eta nol ul n cali tat e de sol ve nt. [2]. n caz ul cer cet ril or de tes tar

e a co mp on ent elo r cu ac iun e ant ioxi da nt , con cen tra iile var iat e de eta nol util izat e au per mis sta bili rea con cen tra iei opt im ale a alc ool ulu i etil ic pe ntr u

ob ine rea ext rac tel or cu act ivit ate ant ioxi da nt ma xi ma l [7].
n ace st stu diu n cali tat e de sol ven t de ase me nea a fost utili zat eta nol ul de div ers e con cen tra ii n sco

pul obi neri i unu i pre par at hidr oeta noli c co mpl ex car e s con in at t co mp one nte hidr ol e, ct i lipo le . Pen tru sta bilir ea pot eni alul ui anti oxi dan t i anti radi cali c al

extr act elor obi nut e au fost ada pta te i apli cat e met ode le uzu ale nes pec ic e de det erm inar e a acti vit ii anti oxi dan te. Astf el, pen tru sta bilir ea acti vit ii anti oxi dati ve a extr act

elor a fost utili zat met oda red uce rii rea gen tulu i fosf om olib den ic car e sta bile te cap acit ate a stru ctur ilor co mp one nte acti ve de a par tici pa n rea ciil e de oxi dored uce re

n cali tat e de red uc tor. Rez ulta tele sun t pre zent ate n g ura 1.

A cti vit ate a ant iox ida nt n ext rac tel e hid roeta nol ice var iaz de la 1,0 6 m mo l p n la 8,2

9 m mo l aci d asc orb ic/ mg su bst an act iv . Put em a rm a exi ste na un ei cor el ri line are (R2 = 0,8 62 2) din tre co nc ent rai a eta nol ulu i util iza t i act ivit

ate a ant iox ida nt . Da tel e ob inu te vor be sc n fav oar ea util iz rii co nc ent rai ilor ma i ma ri de alc ool etil ic n caz ul det er mi nr ii act ivit ii ant iox ida tiv e

pri n me tod a red uc erii rea ge ntu lui fosf om olib deni c.
P ent ru sta bilir ea abil iti i co mp one ntel or acti ve din extr act ele obi nut e de a par tici pa la rea ciil e de ani hila re a

radi calil or prin me can ism ul anti radi cali c don or de hidr oge n, a fost utili zat radi cal ul DPP H. Rez ulta tele test ului anti radi cali c (g .2) au ar tat cap acit ate a extr act elor eta noli ce cu con cen

tra ia eta nol ului de 1020 % de a red uce radi cal ul DPP H n pro por ie de 40 %. Ext ract ele de 55 % i 70 % eta nol red uc radi cal ul DPP H cu apr oxi mat iv 20 %, iar extr act ele

de 40 %, 65 % i 96 % eta nol au acti vita te anti radi cali c de la 10 % la 13 % inhi bii e. Coe ci entu l de core lare dintr e acti vitat ea

115

ant ira dic alic a ext rac telo r i con cen tra ia eta nol ului est e des tul de mic R2= 0,54 17. Sc der ea acti vit ii ant ira dic alic e a avu t loc bru sc, (cu 70 % fa de ext rac tul

de 10 %) la niv elul ext rac tul ui de 40 % eta nol. Rea bilit are a acti vit ii ant ira dic alic e n con tin uar e, oda t cu cre te rea con cen tra iei eta nol ului , a fost ne nse mn at . Pri n

ur ma re, extr acte le din bio mas a de Por phy ridi um au capa citat ea de a redu ce radi calii liber i, iar com pon ente le ant ira dic alic e acti ve se con in n ext rac tel e cu con in ut min im de eta nol.

F ig . 1. A ct iv it at e a a n ti o xi d a n t ( m m ol a ci d a s c

o r bi c/ m g s u b st a n a ct iv ) a e xt ra ct el o r di n P or ph yr idi u m d et er m in at p ri n m et o d

a re d u c er ii re a g e n t ul ui fo sf o m ol ib d e ni c.

F ig . 2.

A c ti v it a t e a a n ti r a d i c a li c ( % i n h i b i i e ) a e x t r a c t e l o r d i n P o r p h y ri

di u m p ri n m et o d a d e re d u ce re a r a di c al ul ui D P P H
U na din cel e mai uzu ale met ode de det erm inar e a acti vit ii anti radi cali ce est

e rea cia de red uce re a radi cal ului cati on ABT S+. Pen tru extr act ele obi nut e din bio ma sa de Por phyr idiu m car e pre zint un co mpl ex de prin cipi i biol ogi c acti vi, est e imp ort

ant pos ibili tat ea det erm inr ii cap acit ii de a par tici pa la rea ciil e de ani hila re a radi calil or libe ri prin me can ism ul rea cie i de red uce re (do nor de ele ctro ni). Test ul est e spe

ci c at t pen tru co mp one ntel e lipo sol ubil e, ct i pen tru cel e hidr oso lubi le. Rez ulta tele obi nut e ( gur a 3) de mo nstr eaz o acti vita te anti radi cali c sup erio ar a tut uro r

extr act elor fa de radic alul ABT S. Ext ract ul de 10 % eta nol inhi b 65 % din radi cal ul ABT S, iar extr actu l de 20 % alc ool pro duc e 45 % inhi bii e. Ca i n caz ul test ului DPP H, extr

act ul de 40 % eta nol est e mai pui n acti v, ma nife st nd un efe ct anti radi cali c de doa r 33 % inhi bii e. Ext ract ele de 55 % i 70 % eta nol au acti vita te anti radi cali c sim

ilar de 40 % inhi bii e.

116

F i D D T a
10 2,14 0,02

Extrac etano 20 4 1,60 1 0,06

D
T a
10 2,180,02 3,220,05

Spirulina Nostoc

E e 20 1,52 1,52

D atel e pre zen tat e au de mo nstr at o acti vita te anti oxi dan t ase m nt oar e, cu exc epi a extr act elor din cia nob act erii obi nut e cu utili zar ea con cen tra iilor mar i ale eta

nol ului , und e val oril e TEA C sun t sup erio are. Prin ur mar e, extr act ele obi nut e din bio ma sa cia nob act eriil or au acti vita te anti oxi dan t mai mar e. Coe ci entu l TEA C dete rmin

at pent ru Por phyr idiu m crue ntu m este mai apro ape de TEA C stabi lit pent ru unel e plan te

[3] i ind ic val ori su per ioa re pe ntr u ext rac tel e cu co nc ent rai ile mi ci ale alc ool ulu

i etili c. P rin ur ma re, a fos t de mo nst rat po sibi lita tea util iz rii ext rac tel or din mi cro alg e ca pot en iali ant iox ida ni nat ura li ec olo gic ino fen sivi . n ext rac

tel e ob inu te a fos t det er mi nat co ni nut ul fen olil or. Pe ntr u ac ea sta a fos t util iza t me tod a red uc erii rea gen tulu i Foli nCio calt eu.
D in rezu ltate le prez enta te n

g ura 4 se sta bile te dep end en a inv ers dint re con cen tra ia eta nol ului i con cen tra ia fen olil or, coe ci entu l de core lare in d R2= 0,67 97. Con cen tra ia fen olil or sca de oda t

cu cre ter ea con cen tra iei etan olul ui. n prin cipi u, rea gent ul Foli nCio calt eu nu este spe ci c num ai pent ru cua nti c are a com pon ente lor feno lice deo arec e el poat e red us i de une

le co mp one nte ca pro tein ele, aci dul asc orbi c .a. Con cen tra iile mar i ale eta nol ului extr ag une le co mp one nte fen olic e car e au acti vita te anti oxi dan t mar e dar car e se ma

nife st prin me can ism e dife rite de cel al tra nsf erul ui de ele ctro ni car e est e real izat de car ote n i toc ofer ol.

F i g . 4 . A c ti vi t a t e a a n ti o xi d a n t ( m m o l a ci d g a li c/ m g s u b s t a n a c ti v

 ) a e x tr a c t e l o r di n P or p h yr id iu m p ri n m et o d a d e re d u ce re a re a ge nt ul ui F ol in C io ca lt e u

D ac co mp ar m me tod a det er min rii con in utu lui fen olil or ca me tod de det er min are a cap acit ii de red uce re a rea gen tul ui Foli nCio aclt eu cu me tod a de

tes tar e a cap acit ii de red uce re a rad ical ului AB TS (te stul TE AC) , ob ine m o cor elar e vd it car e se exp rim pri n coe ci ent ul de cor elar e de R2= 0,9 563 (g ura

5).

C oe c ien tul de cor ela re ma re per mit e intr od uc ere a me tod ei dat e n list a me tod elo r uz ual e, si mp le n util iza re i n ad apt are la tip ul ext rac tel or,

pe ntr u det er mi nar ea act ivit ii ant iox ida nte [6] .
S tudi ul dat a sta bilit c extr act ele eta noli ce de 10 %20 % au cea mai mar e cap acit ate de a red uce rea gen tul Foli nCio

calt eu, car e est e de 5-6 mm ol aci d gali c/m g sub sta n acti v. Acti vita tea anti oxi dan t sca de pen tru extr ace tle eta noli ce de 40 % 96 %, val oar ea min im in d de 2,8 9 mm ol

aci d gali c/m g sub sta n acti v pen tru extr actu l de

96 % etan ol. 118

F i

R
1 .
A n

1 9

2 3 4 5 6 7 .
1
C h

8 .
P laza M., Cifu ente s A., Ib ez E. In the searc h of new funct ional food ingre dient s from algae . // Tren ds in Food Scie nce & Tech nolo gy, 2008 , vol. 19, p. 3139. P rieto P., Pine da M., Agui lar M. Spec trop hoto metri c Qua ntitat ion of Anti oxid ant Capa city

9 .

thro ugh the For mati on of a Pho sph omo lybd enu m Co mpl ex: Spe ci c Appl icati on to the Det ermi nati on of Vita min E1. Anal ytica l Bioc hem istry, 199 9, vol. 269, p. 337 341.

1 0 .
R e R., Pell egri ni N., Prot egge nte A., Pan nala A., Yang M., Rice

Eva ns C. Anti oxid ant activ ity appl ying an impr oved ABT S radic al catio n deco loriz ation assay . //Fre e Radi cal Biol ogy & Medi cine, 1999 , vol. 26(9 /10), p. 1231 1237 .

1 1 .
R odri guez Gar cia I., Guil Gue rrer o J.L. Eval uatio n of the antio xida

nt activ ity of three micr oalg al speci es for use as dieta ry supp leme nts and in the prese rvati on of food s. Food Che mistr y 108 (200 8) 102 3 102 6.

1 2 .
R ogin sky V., Lissi E.A. Revi ew of meth ods to deter mine chai nbrea king antio xida nt activ ity in food .

//Fo od Che mist ry, 200 5, vol. 92, p. 235254.

1 3 .
S ama rth R.,P anw ar M., Kum ar M., Soni A., Kum ar M, Kum ar. Eval uatio n of antio xida nt and radic alscav engi ng activ ities of certa in radi opro tecti ve plant extra cts. / /Foo d Che mist ry , 200 8, vol. 106,

p. 868 873.

1 4 .
T anni nSpitz T., Berg man M., vanMop pes D., Gros sman S. Anti oxida nt activi ty of polys acch aride of the red micr oalga Porp hyrid ium Sp. // Journ al of Appl ied Phyc ology , 2005 , v 17, p. 215222.

ST AN DA RDI ZA RE A

PR OC ED URI I DE CO NS ER VA RE A T U L P I N I L O R D E A C T I N O M I C E T E P S T R A T E N C O L

E C I A N A I O N A L D E M I C R O O R G A N I S M E N E P A T O G E N E . I I . I N F L U E

N A U N O R M E T O D E D E C O N S E R V A R E A S U P R A M E N I N E R I I C A R A C T E

R E L O R C U L T U R A L E I P R O P R I E T I L O R A N T I M I C R O B I E N E P E N T R U

T U L P I N I L E D E S T R E P T O M I C E T E D I N C O L E C I E
Stepan ov Vitalie, Bureva Svetlan a, Postola chi Olga, Srbu Tamara, Tolocich ina Svetlana

, Slanina Valerina
I n s t i t u t u l d e M i c r o b i o l o g i e i B i o t e h n o l o g i e a l A c a d e m i e i

d e t i i n e a M o l d o v e i

Inroducere
P str are a via bilit ii i sta biliz are a par ticu larit il or tax ono mic e pen tru tulp inil e con ser vat e n cad

rul col eci ilor nai ona le de mic roo rga nis me pre zint un mar e inte res at t din pun ct de ved ere fun da me ntal , ct i pra ctic . Cer cet to rii mic robi olo gi per ma nen t stu dia

z e caci tat ea dife ritel or met ode de con ser var e nd elu nga t asu pra me nin erii car act erel or mor folo gocult ural e i acti vit ii pro duc eni lor de sub sta ne biol ogi c acti ve

[1, 6, 16,

17, 18, 19, 20, 21]. A cti no mic ete le rep rezi nt o sur s bo gat de ant ibio tic e i alt e sub sta ne biol ogi c act ive. Ps trar ea via bili ti i i me ni ner ea car act ere lor zi olo go-

bio chi mic e a act ino mic ete lor n con dii i de an abi oz rep rezi nt un pro ces des tul de di ci l de real izat , ace ast gru p de mic roo rga nis me car act eri zn duse pri ntrun gra

d nal t de var iabi lita te [8, 9, 11, 15, 20, 23] . n pra ctic a de lab ora tor sun t cu nos cut e ma i mu lte me tod e de ps trar e a tul pin ilor de act ino mic ete , din tre car e pot

 en um era te ur m toa rel e: ps trar ea pe me dii nut riti ve ag ari zat e [20 ], n sta re ng he at la t0 -20300 C [3], n glic eri n de 15, 0% [1], sub un str at de ulei mi ner

al [6, 19, 20, 21, 22, 23] , lio li zat [4, 18] , cri oco nse rva t [5, 7].

12 0

PDF to Word