Reprezentanii genului Candida n microbiota omului i implicaiile lor n

diferite afeciuni

Genul Candida cuprinde peste 200 de specii dintre care marea majoritate sunt
caracterizate de un potenial patogen crescut, sau chiar sunt patogene cum este cazul speciei
Candida albicans. Dei aceste microorganisme prezint o distribuie ubicvitar n natur, totui,
localizarea lor cea mai frecvent este ntalnit la nivelul organismului uman i animal.
Reprezentanii genului Candida fac parte din microbiota normal a tegumentelor, a tractului
digestiv dar i a tractului genito-urinar uman i nu dezvolt procesul infecios dect n cazul
existenei unor factori favorizani.
Cu toate c organismele umane i animale sunt sterile n cursul vieii intrauterine, imediat
dup natere acestea sunt colonizate de o serie de microorganisme, colonizare benefic att
pentru organismul uman i animal ct i pentru microrganismele ce realizeaz acest proces. Ftul
este steril n uter, ns se infecteaz la natere datorit traiectului pe care trebuie s l parcurg i
prin contactul cu orice surs de mediu la care este expus. Microorganismele care realizeaz
prima colonizare a nou-nscutului nu fac parte ntotdeauna din microbiota normal a acestuia,
datorit faptului c nu se adapteaz i nu pot dezvolta mecanisme de adaptare la aceast nia
ecologica . Exist ns i specii - pionier care se stabilizeaz i rmn n microbiota normal a
nou-nscutului.

Microbiota normal cutanat si afectiunile tegumentelor

2
 Candidoza muco-cutanat implic direct ariile intertriginoase ale pielii glabre sau
secundar poate coloniza leziuni preexistente n orice zon a corpului cauzate de diferii ageni
etiologici. Zonele intertriginoase cel mai frecvent populate sunt: zona axilar, pliurile
submamare, spaiile interdigitale, ombilicul i glandul penisului. Leziunile sunt caracteristice i
bine definite sub forma unei arii cu eritem bazal i margine solzoas ( piele oparit). Leziunile
sunt nconjurate de erupii satelitcare dezvolt vezicule discrete, pustule, sau bule care se
sparg i dau natere unor rni deschise cu marginile erodate. Candidoza de la nivelul pielii este
asociat cu existena a doua tipuri de persoane; persoane cu disfuncii metabolice (diabeticii,
obezi, alcoolici) i persoane care sunt predispuse la astfel de infecii datori mediului n care
lucreaz (menajere, pescari, spltorii de vase, sortatori de fructe.
Onicomicoza reprezint cele mai banale forme de candidoz cutanat. Pliurile
paronichiale sunt deja colonizate, n special la persoane a cror ocupaie presupune imersarea
frecvent a minilor n apa. Leziunile sunt caracterizate de durere, nroirea extremitailor i
ndepartarea cu aproximativ un centimetru de marginea paronichial. De obicei este prezent o
mixtur de bacterii i specii ale genului Candida.
Onicomicoza caracterizat prin ntarirea unghiilor, colorarea n nuane de maro a zonei
plate a unghiei care devine groas i striat. esutul unghial este distrus n condiii de cronicizare
a infeciei prin netratare.

Candidoza esofagian Candidoza esofagian este n mod frecvent datorat extensiei

acestor microorganisme din leziunile existente la nivelul cavitaii orale. La copii aceast
afeciune este frecvent asociat cu defecte genetice i disfuncii ale glandelor endocrine iar la
aduli este asociat cu terapia prelungit cu antibiotice i prezenta virusului imunodeficienei
dobndite. Detectarea implicrii speciilor de Candida n aceste afeciuni se realizeaz prin
cultivarea materialului obinut n urma endoscopiei, corelat i cu aspectele radiologice
(evidenierea distrugerii membranei mucoase, existena unui esofag rigid i iregular cu pierderea

3
pliurilor longitudinale). Este adesea asimptomatic, dar poate determina dureri substernale i
poate duce la sngerri i la afectarea alimentrii. Candidozele orofaringiene sunt frecvente la
pacienii cu HIV/SIDA ca infecii oportuniste la 50% dintre subiecii infectai cu HIV i 90%
dintre bolnavii cu SIDA.

Afeciuni ale tractului digestiv datorate speciilor genului Candida (Webb, 1998).
(A. ) Candidoz esofagian, (B.) Candidoz hiperplastic

Candidoza vulvovaginal este frecvent ntalnit n trimestrul trei de sarcin i poate

determina complicaii ale ftului i ale nou-nscutului. Infecia se caracterizeaz prin prezena
unor scurgeri albicioase i existena pseudomembranelor la nivelul mucoasei vaginale.
Afeciunea poate implica perineul, vulva i chiar ntreaga arie inghinal. La femeile care nu sunt
nsrcinate discomfortul vulvo-vaginar poate aprea n mod particular nainte de menstruaie.
Pruritul i durerea aprute la nivelul labiilor mici se pot agrava datorit urinatului, contactului
sexual sau ca urmare a unui examen ginecologic. n cazul acestor infecii se ntlnete frecvent
fenomenul de recuren vulvo-vaginal asociat de cele mai multe ori i cu contaminarea de la
nivelul tractului digestiv.
Candidoza neonatal este transmis nou- nscutului din vaginul mamei cu candidoz i
se constat prezena acesteia la 5% din nou- nscui; apare de cele mai multe ori n cavitatea
bucal sau mai rar sub forma unei infecii a pielii n jurul anusului i n jurul organelor genitale.
La nou-nascui, candidoza generalizata se dezvolt doar n mod excepional n condiii de
imunitate precar. Infectarea copilului n timpul naterii, poate duce la apariia candidozelor
pulmonare, care i poate produce moartea mai ales dac nou- nscutul este preamatur.
Candidoza de scutec sau candidoza nou-nascuilor apare la puin timp de la natere i
este determinat de macerarea tegumentrlor care sunt invadate de speciile genului Candida
datorit umiditii crescute. Acest lucru este posibil exclusiv din motive de igien, n mod special
prin neschimbarea scutecului bebeluului. Leziunile care se dezvolta la nivelul tegumentelor

4
acestuia sunt leziuni eritematoase tip satelit (pustule satelit), cu eroziuni ale tegumentelor i
produc astfel implicaii severe la nivelul pliurilor pielii.
A B

Candidoza neonatal (A) si Candidoza de scutec (B)

Efectele negative ale reprezentanilor genului Candida n diferite habitate

naturale i medicale
Infeciile asociate cu speciile genului Candida sunt recunoscute ca fiind cauza major a
creterii morbiditii i mortalitii la pacienii care sufer n special intervenii chirurgicale
invazive. Factorii favorizani implicai n apariia i creterea numrului acestor infecii sunt
reprezentai n special de prezena biomaterialelor implantate la nivelul organismului, terapia
prelungit cu antibiotice cu spectru larg de activitate, imunosupresia indivizilor ca rezultat al
unor transplanturi precum i arsurile de gradul II sau III pe suprefee extinse. Terapia antifungic
presupune n acest caz intervenii chirurgicale n vederea ndeprtrii biomaterilului implantat-
catetere, valve, aparate auditive i o terapie medicamentoas realizat cu substane cu activitate
antifungic.
De cele mai multe ori infeciile cu Candida sp care apar n urma interveniilor
chirurgicale sunt infecii nosocomiale, dobndite n cadrul unitilor sanitare n care se
realizeaz intervenia chirurgical. n ultimii ani s-a constatat o cretere alarmant a infeciilor
nosocomiale ca urmare a dezvoltrii masive a chirurgiei invazive i a implanturilor cu diverse
biomateriale medicale asociat cu utilizarea judicioas a substanelor antibiotice.
Formarea biofilmelor la nivelul biomaterialelor prostetice utilizate n medicin
Dezvoltarea tehnologiilor moderne a permis utilizarea unui numr ct mai mare i mai
variabil de biomateriale n scopul implantrii lor la nivelul organismului uman (catetere, proteze,
implanturi dentare, implanturi contaceptive, valve, aparate auditive). Aceste biomateriale au o
importan vital n funcionarea normal a unor organe (valve cardiace, defibrilatoare, implant
ventricular,) sau pot ndeplini funcii auxiliare (contracepie, mrirea sanilor, schimbarea culorii

5
ochilor). Datorit multiplelor lor functionalitai aceste structuri sunt foarte frecvent folosite i
din acest motiv i infeciile dezvoltate de spciile genului Candida la nivelul lor sunt n cretere.
Cel puin jumatate din infeciile nosocomiale sunt asociate cu implanturile medicale iar
consecina acestor infecii este de cele mai multe ori dezastruoas. Colonizarea acestor
biomateriale poate conduce la infecii sistemice sau la funcionarea defectuoas a acestora, n
final fiind necesar chiar ndepartarea lor. Dei ndepartarea acestor implanturi poate fi de cele
mai multe ori dificil, totui, tehnica este practicat datorit refractibilitii microorganismelor
asociate biomaterialului la diferii compui antimicrobieni. Managementul infeciilor asociate
implanturilor medicale este dificil i costisitor. Reprezentanii genului Candida au un aport uria
n infeciile asociate cu diferite implanturi medicale. Prezena acestor microorganisme este foarte
frecvent asociat cu infeciile urinare datorit cateterizarii dar i cu septicemiile. Aceste
microorganisme sunt capabile s dezvolte structuri complexe de tipul biofilmelor pe suprafaa
implanturilor medicale i astfel s se protejeze de aciunea agenilor antifungici.
Formarea i structura biofilmelor candidale sunt influenate de suprafaa de contact, factorii
din mediu, morfologia celulelor precum i specia implicat n dezvoltarea biofilmelor. Natura
chimic a suprafeei de contact influeneaz magnitudinea formrii biofilmului (Saramanayake,
2005). Factorii din mediu pot fi de cele mai multe ori factori favorizani ai formrii biofilmelor.
Prezena unui nivel crescut de glucoz n mediu stimuleaz formarea biofilmelor; Candida
parapsilosis este frecvent izolat de la pacienii hranii parenteral.
Speciile de Candida dau natere la biofilme diferite. C. parapsilosis, C. pseudotropicalis, C.
glabrata dezvolt biofilme slabe pe substraturi reprezentate de policlorura de vinil comparativ cu
biofilmele dezvoltate de C. albicans. i la nivel structural biofilmele formate de Candida
albicans sunt mai complexe comparativ cu cele formate de alte specii. Spre exemplu n cazul
speciei C. parapsilosis biofilmele sunt formate din aglomerri de blastospori. Dei exista puine
studii in acest sens, s-a observat existena unei variabilitai la nivel de tulpin in procesul de
formare al biofilmelor.

A B

6
 C D

Fig 6.Microscopie n flux de electroni a biofilmelor pe filtru policarbonat

A- Candida albicans; B- Candida parapsilosis;C- Candida krusei; D- Candida albicans

Izolatele invazive prezint o abilitate crescut de a dezvolta biofilme comparativ cu

tulpinile non-invazive. Unul dintre cele mai mari dezavantaje ale formrii biofilmelor este
reprezentat de capacitatea sa de a rezista la concentraii mari de substane antifungice. n cazul
tulpinilor de C. albicans s-a constatat c rezistena poate crete de la 30 pana la 2000 de ori la
aciunea substanelor antifungice de genul fluconazol, amfotericina B, flucytozina, intraconazol
i ketoconazol comparative cu rezistena celulelor planktonice la aceste substane antifungice.
Acest fenomen este ntalnit i la speciile non-albicans. Mecanismele de rezisten la substanele
de acest gen includ n primul rnd blocarea penetrrii biofilmului de ctre substana antifungic
dar i ncetinirea creterii celulelor acompaniat de modificari ale structurii peretelui celular. In
concluzie speciile de Candida produc biofilme la nivelul diferitelor dispozitive prostetice
utilizate n medicin iar structura acestor biofilme este influenat de numeroi factori intrinseci
i extrinseci putnd determina creterea rezistenei la aciunea substanelor antifungice.

7
 Studii privind mecanismele moleculare ale patogenitatii si
virulentei la speciile genului Candida

Etapele procesului infecios la Candida albicans

Candida albicans este o drojdie ubicuitar, comensal care se dezvolt la nivelul

mucoaselor i care este n mod frecvent izolat din cavitatea oral, tractul gastro- intestinal i din
vagin. n condiii normale acest microorganism se afl n echilibru cu microbiota acestor regiuni
dar i cu sistemul imunitar al gazdei. Starea fiziologic a gazdei reprezint factorul principal care
st la baza etiologiei candidozelor. Cu toate acestea, datorit faptului c simple modificri ale
strii fiziologice a organismului pot duce la perturbarea echlibrului n cadrul microbiotei
respective (favoriznd trecerea celulelor de drojdii de la comensalism la parazitism n relaia lor
cu organismul uman), speciile de Candida prezint un potenial patogen foarte crecut.
Datorit usurinei cu care se realizeaz trecerea de la comensalism la parazitism, exist
un numar foarte crescut de persoane care sunt afectate de infeciile cu Candida. Categoriile cele
mai afectate sunt reprezentate de purttorii virusului HIV ( datorit imunitii sczute), subiecii
cu transplanturi, diabeticii, persoanele n vrst i copii. n plus trei ptrimi din femeile sntoase
prezint cel puin o infecie vaginal de origine levuric (levuri=drojdii). n timp ce rata ridicat
a mortalitii asociat infeciilor sistemice cu bacterii a nceput s scad datorit administrrii
antibioticelor cu spectru larg de aciune, infeciile sistemice datorate drojdiilor cu potenial
patogen au nceput s capete o importan foarte mare datorita faptului ca reprezint cauza
mbolnvirii i mortalitii pacienilor imunocompromii. Patogenitatea drojdiilor aparinnd
genului Candida este sporit i de rezistena lor crescut la diferite clase de compusi
antifungici.
n acest moment una dintre cele mai importante abordri ale acestui microorganism
vizeaz caracterizarea factorilor de virulen eseniali n procesul de propagare a infeciei.
Analiznd pn la nivel molecular factorii de virulen i patogenitate se pot dezvolta o serie de
strategii de contracarare a acestor microorganisme duale. Procesul de dezvoltare i evoluie a
infeciilor microbiene poate fi privit ca interacia dintre virulena microorganismului i
capacitatea gazdei de a preveni sau rezista la invazia acestor microorganisme. Bacteriile
patogene, avnd un genom relativ mic pot dezvolta adesea mecanisme foarte specifice de
iniiere i dezvoltare a infeciei n organismul uman. Spre exemplu, o serie de bacterii au
dezvoltat o serie de factori de virulen foarte specializai care servesc supravieuirii intracelulare
n anumite tipuri de celule i sunt puine cazuri n care doar toxinele determin boala. n schimb
8
C. albicans este un microorganism cu un genom de dimensiuni mult mai mari n comparaie cu
genomul bacterian i prin urmare prezint i mai multe resurse. Dei relaia acestui
microorganism cu organismul uman este una pozitiv, de comensalism, C. albicans conine un
numar mare de factori de virulen care-i permit s adere, s colonizeze i s invadeze esuturile
gazdei pentru a afecta direct sau pentru a evita mecanismele de aprare ale gazdei.
Exprimarea atributelor de virulen este ns determinat de mai multi factori printre care
se nscriu: compoziia mediului, temperatura, ph-ul, starea fiziologic a gazdei, etc. n plus n
cazul infeciilor un rol important n exprimarea acestor atribute de virulen l au: tipul infeciei,
natura raspunsului gazdei, localizarea i stadiul infeciei.
n procesul de patogenitate i virulen la C. albicans factorii de virulen mbrac
diferite forme dintre care cele mai frecvent ntlnite sunt
Recunoaterea moleculelor de suprafa n etapa de aderen
Dimorfismul celular
Producerea i eliberarea enzimelor hidrolitice care degradeaz diferite substraturi (aspartil
proteinaze, fosfolipaze, lipaze, esteraze, glucoamilaze, fosfataze acide factorul hemolitic).
Perturbarea activitaii sistemului imunitar prin inactivarea sistemului complement
La C. albicans procesul infecios presupune activarea unor factori multipli de virulen,
un singur mecanism de aciune fiind insuficient n declanarea i n evoluia candidozelor.
Stadiul infeciei cu C. albicans cuprinde urmatoarele etape:
colonizarea
infecia superficial
infecia profund
diseminarea
Prima etap a infeciei reprezentat de colonizare presupune n primul rnd aderena la
substratul respectiv precum i achiziia de nutrieni pentru microorganismul invadator. Factorii
de virulen activai pentru procesul de colonizare sunt reprezentai de adezine, enzimele
hidrolitice, formarea de hife, modificrile fenotipice precum i mimetismul moleculelor gazdei.

9
 Etapele procesului infecios i factorii de virulen implicai n acest proces
Dupa ce procesul de colonizare a avut loc, (celulele de drojdii sunt deja aderate la
substrat) are loc iniierea procesului de infecie superficial, proces n care rmn activate n
continuare genele care codific pentru enzimele hidrolitice (care au rol n degradarea proteinelor
gazdei, inclusiv a mucinei, matrixul proteic extracelular, molecule ale sistemului imunitar,
proteinele endoteliilor celulare, etc.) i pentru dezvoltarea hifal( cu rol n penetrarea epiteliului).
n etapa de infecie profund, se realizeaz imunomodularea sistemului imunitar al
gazdei, fie prin blocarea unor componente ale acestuia (C3d), fie prin evitarea aciunii sistemului
imunitar asupra microorganismului (evadarea din celulele macrofage). Prin colaborarea dintre
aceti factori de virulen n cadrul infeciei profunde cu C. albicans are loc penetrarea
esuturilor, invazia vaselor de snge ievitarea aciunii sistemului imunitar.
Ultima etapa a infeciei cu drojdii patogene se concretizeaz prin aderena la endotelii,
infecia altor esuturi ale gazdei (diseminarea), activarea procesului de coagulare i a cascadei
de trombui. La aceasta ultima etapa a procesului infecios particip toi factorii de virulenn:
adezinele, enzimele hidrolitice, formarea de hife, dimorfismul celular, imunomodulatorii,
antioxidanii.

10
 Capacitatea de aderenta la suprafeele celulelor epiteliale i la suprafee
inerte

Noiunea de aderen n biologie, constituie un concept de o importan fundamental,

datorit faptului ca mecanismele de fixare reprezint prima etap necesar majoritaii proceselor
fiziologice ct i patologice.
Organizarea complex ct i potenialul funcional major al nveliurilor celulare care
interfer cu toate procesele biologice care se desfoar la nivel celular, au determinat ca
structurile de grani s devin un subiect privilegiat al biologiei celulare i moleculare. Celulele
drojdiilor prezint dou nveliuri, i anume, perete celular i membran plasmatic. Aceste dou
structuri, dei sunt diferite din punct de vedere fizic, chimic i arhitectural ele ndeplinesc funcii
asemntoare sau complementare. Proprietile protectoare, reglatoare (selective) i
informaionale sunt rezultatul unei cooperri funcionale ntre aceste dou structuri de suprafa.
Peretele celular al drojdiilor reprezint o structur esenial pentru colonizarea i invazia
esuturilor gazdei precum i pentru creterea microorganismelor. Aceast structur realizeaz
contactul dintre organism i mediu, i menine forma caracteristic a drojdiei. Cercetrile au
relevat prezena la speciile de drojdii studiate a trei componente chimice majore, ce reprezint
90% din substana uscat a peretelui celular, i anume:
componenta fibrilar (reprezentat de glucan);
componenta amorf ( mananproteine);
chitina.
La aceste trei componente se mai adaug i cantiti mici de lipide, enzime, anioni fosfat
i cationi divaleni. Diversitatea biochimic i variaia antigenic sunt determinate de raporturile
cantitative, precum i de structura particular a unora dintre componentele chimice parietale.
Variaiile biochimice pot s apar i la aceeai tulpin n funcie de condiiile de cultivare i de
etapa ciclului de dezvoltare.
Aderena la celulele epiteliale i endoteliale
Adezinele identificate la C.albicans includ i moleculele care se leag de fragmentele
complexului C3b i C3d, laminin, fibrinogen, fibronectin i alte componente ale matricei
extracelulare. Aderena drojdiilor aparinnd genului Candida a fost studiat pentru a definii
factorii relevani n patogeneza candidozelor orale, gastrointestinale, vaginale i urinare. n plus
ataarea acestor microorganisme la matricea fibrinoplachetar i la celulele endoteliului vascular
au fost examinate pentru a elucida evenimentele timpurii n producerea endocarditei candidozice

11
i a infeciilor diseminate pe cale hematogen. Speciile de Candida ader rapid la o varietate de
celule epiteliale, incluznd celule epiteliale exfoliate, celule epiteliale vaginale, celule
uroepiteliale, ca i la celule cultivate n monostraturi derivate din epitelii. Dup unii autori aceste
drojdii prezint o mare afinitate pentru celulele epiteliale vaginale, iar dup alii pentru celulele
epiteliale ale cavitaii bucale. Pentru a elucida mecanismele de ataare, s-a studiat aderena
drojdiilor n diferite condiii de cretere; s-au utilizat att celule intacte ct i componente de
perete celular purificate sau perei celulari parial degradai. Preincubarea celulelor de drojdii
viabile cu zaharoz iniiaz aderena la celulele epiteliului bucal i suprafee de acrilat, n timp ce
expunerea celulelor intacte de Candida sau a fragmentelor de perete celular la enzime
proteolitice diminueaz aderena la celulele epiteliale mucoase. C.albicans, fiind o drojdie
dimorf, capacitatea ei de aderare este influenat de starea celulelor: n stare germinal este
crescut de doua pna la cinci ori fa de cea a organismelor n faz de blastospori (celule unice).
Factorii care contribuie la creterea aderenei formelor hifale includ schimbarile calitative ale
adezinelor i ale expunerii lor, precum i exprimarea unor adezine specifice. Aderena drojdiilor
la mucoase este influenat i de prezena anticorpilor specifici, prezeni n secreiile mucoaselor
colonizate. De exemplu, anticorpii specifici din clasele Ig A i Ig G sunt prezeni n saliva
pacienilor cu infecii orale candidozice, dar nu pot proteja mpotriva recderilor dup terapia cu
ageni antifungici.
Adezinele Als, Ala si Hwp1 fac parte din grupul de proteine din peretele celular
glicozilfosfatidilinozitol dependente;
Als 1 si Als 2 sunt doua dintre adezinele implicate in formarea biofilmelor;

Enzimele hidrolitice
Un alt factor important care contribuie la procesul de virulen i patogenitate este
reprezentat de producerea enzimelor hidrolitice. Invazia celulelor gazd de ctre
microorganismele patogene determin penetrerea i distrugerea nveliului celular extern. Acest
proces de transmigrare este mediat cel mai probabil de ctre stadiul morfologic al celulei de
Candida precum i de ctre enzimele pe care aceste microorganisme le pot secreta. Fosfolipidele
i proteinele reprezint constituenii majori ai nveliului celulelor gazdei. Din acest motiv
enzimele capabile s degradeze aceste tipuri de constitueni, cum sunt proteinazele i
fosfolipazele sunt implicate n procesul de degradare a membranei celulare n timpul invaziei
celulelor gazdei. Prin clivarea fosfolipidelor membranare, este destabilizat structura membranei
i are loc liza celular.

12
Printre cele mai reprezentative enzime hidrolitice produse de C.albicans se numr aspartil
proteinazele, fosfolipazele, lipazele i factorul hemolitic.
Rolul enzimelelor hidrolitice
Nutritia celulei, acumularea de Fe si substante nutritive
Distrugerea tesutului
Diseminarea patogenului
Inactivarea sistemului imunitar

Aspartil proteinazele la Candida albicans- Generaliti

Toate proteinazele catalizeaz hidroliza peptidelor legate n proteine, dar se difereniaz ntre ele
n funcie de specificitatea i mecanismul lor de aciune.
n funcie de substratul asupra caruia actioneaza ele se clasific astfel:
serin- proteinaze (tripsin)
cistein proteinaze (papain)
aspartil- proteinaze (colagenaze)
metalo-proteinaze.
Toate proteinazele secretate de Candida albicans sunt aspartil proteinaze iar producerea
acestora n procesul infecios este asociat i cu formarea de hife i fenomenul de aderen. C.
albicans nu este singura specie din genul Candida care are capacitatea de a produce proteinaze
extracelulare. Muli ali reprezentani ai genului Candida au artat c prezint genele SAP (gene
care codific ARNm pentru proteinazele aspartil), inclusiv C. tropicalis, C. parapsilosis, C.
krusei i C. guillermondii. La C. albicans s-a evideniat ns existena unei familii de gene SAP,
familie ce cuprinde 10 membrii notati SAP 1-10;
- Proteinele Sap functie similara insa difera masa molec. si pH izoelectric;
- Proteina matura dimensiuni 35-48kDa si contine doua regiuni conservate care
interactioneaza cu resturile de acid aspartic;
- Molecule scindate de aspartil proteinaze sunt:
- matrixul extracelular si prot. de supafata ex.: colagenul, laminina, fibronectina
mucinul sunt degradate cu o rata mai mare de Sap2.
-diferite proteine ale gazdei implicate in aparare precum: lactoferina salivara, -
macroglobulinele, precursori ai factorilor de coagulare, macrofagele, majoritatea
imunoglabulinelor inclusiv IgA care e rezistent la majoritatea proteinazelor bateriene.
13
 -componente cheie ale sitemului imunitar precum: citokinele proinflamatorii
interleukina 1, lactoperoxidaze, catepsina D, comp. complement;
Astfel proteinele Sap au rol in inactivarea sitemului imunitar prin distrugerea unor
molecule cheie implicate in raspunsul imun;
Expresia genelor SAP
reglajul SAP are loc la nivel transcriptional se sintetizeaza o prepropeptida care e cu
aprox 60 de aa mai mare decat enzima matura si este alcatuita din molecula semnal si
propeptida.
Scindarea are loc la nivelul RE si este realizata de o proteinaza, dupa care este
transportata de o proteinaza Kex2-like iar capatul carboxi e procesat la nivelul AG pentru
a obtine enzima activa.
Factorii fizici:
-pH optim de actiune este intre 2 si 7
Sap 1 si 3 actioneaza la pH acid
Sap 2,4 si 6 sunt stabile la pH neutru
-Temperatura: la temp intre 30370 C studiile in vitro pe C. albicans au demonstrat ca
proteina Sap2 este cea mai exprimata.
la o temp de 250 C, creste rata transcrierii genei Sap8;
-Dimofism celular: genele SAP 1-3 secretate de formele unicelulare si 4-6 de formele
hifale;
Expresia genelor SAP9 si SAP10 pare sa fie independenta de cond externa ele fiind
exprimate constitutiv in toate conditiile.
Factori externi:
S-a constatat ca expresia genelor SAP2 este mai ridicata in urma tratamentului cu substante
antifungice.
Fosfolipazele la Candida albicans
Termenul de fosfolipaze se refer la un grup heterogen de enzime ce prezint abilitatea de
a hidroliza unul sau mai muli esteri nlanuii n structura glicerofosfolipidelor. Cu alte cuvinte
toate fosfolipazele au drept int pentru hidroliz fosfolipidele, fiecare enzim avnd capacitatea
de a hidroliza o legtur esteric specific. innd seama de legtura hidrolizat la nivelul
fosfolipidelor, aceste enzime au putut fi clasificate astfel:
fosfolipaza A( PLA1 i PLA2)
fosfolipaza B (PLB)

14
 fosfolipaza C (PLC)
fosfolipaza D (PLD)
Spre exemplu fosfolipaza A 1 (PLA1) hidrolizeaz legaturile acil dintre esterii acizilor
grai n poziia 1 la jumtatea moleculei de glicerol, n timp ce fosfolipaza A2 (PLA2)
ndeprteaz acizii grai din poziia 2 acestei molecule. Prin aciunea fosfolipazelor PLA 1 i
PLA2 se acumuleazacizi grai liberi i 2-acil-lizofosfolipid sau 1- acil-lizofosfolipid. Acizii grai
care mai rmn inlnuii n structura fosfolipidului sunt hidrolizai de alte enzime care poart
numele de lizo-fosfolipaze (Lyso- PL).
Fosfolipaza C (PLC) hidrolizeaz legturile fosfodiesterice la nivelul scheletului
fosfolipidic pentru a produce 1,2 diacilglicerol i, funcie de tipul de fosfolipid poate produce i
fosfatidil-colin, fosfatidil etanol-amin.
Fosfolipaza D (PLD) scindeaz cea de-a doua legtur fosfodiesteric obinndu-se
astfel acid fosfatidic i colin sau etanol-amin n funcie de clasa de fosfolipide implicat n
hidroliz.
Fosfolipaza B (PLB, - sinonim cu lizo-fosfolipaz, lizo-fosfolipaz-transacetilaz) este
o enzim care prezint capacitatea de a cliva legaturile acil att de la nivelul poziiei 1 de la
jumtatea moleculei de glicerol ct i de la nivelul poziiei 2; nomenclatura acestei enzime este
nc confuz. Aceast confuzie se datoreaz faptului c aceast enzim poate avea att activitate
de hidroliz elibernd acizii grai ct i activitate de lizo-fosfolipaz- trans-acilaz (LPTA).
Lipazele la Candida albicans
Activitatea lipazic la C. albicans a putut fi evideniat prin plasarea tulpinilor n mediu
coninnd tween 80, 60, 40 i 20, ca unic surs de carbon. Responsabile pentru activitatea
lipazic la C.albicans sunt genele LIP.
Actineaza asupa gruparilor esterice de la niv mona di si triacizi glicerolilor si de la niv
fosfolipidelor, hidrolizand TAG in glicerol si AG;
Hialuronidaza i condroitin-sulfataz sunt lipaze produse ca majoritatea izolatelor de C.
albicans i sunt secretate n mediul nconjurtor.
Stabilitate termica ridicata, rezistenta la solventi organici si la actiunea unor proteinaze
Factorul hemolitic la Candida albicans
O alt enzim implicat n patogenitatea i virulena la C. albicans este cunoscut sub
denumirea de factor hemolitic. n timp ce despre proteinaze, fosfolipaze, esteraze, lipaze exist o
serie de informaii fiind astfel posibil caracterizarea genetic i biochimic a acestora, despre
factorul hemolitic se cunosc doar cteva aspecte. Astfel se tie c achiziia fierului de ctre

15
drojdiile cu potenial patogen reprezint o condiie de baz pentru supravieuirea acestora precum
i n procesul de infectare al gazdei. Dei n organismul uman ionii de fier exist doar asociai cu
alte structuri (hemoglobina), aceste microorganisme au capacitatea de a achiziiona fierul din
aceste structuri. Enzimele care mediaza aceast activitate sunt ncadrate ca fiind hemolizine.
- Tulpinile de Candida prezinta hemoliza de tip a si b
- Hemoliza a fost asociata cu mai multi factori: producerea de H2O2, prezenta unei
mananproteine, producerea de fosfolipaze extracelulare, hemolizine specie specifice

Rezistena la diferite clase de substane antifungice.

Studiul substantelor antifungice este n plin dezvoltare datorit necesitii de a combate
mbolnavirile cauzate de drojdii patogene, care sunt n deplin cretere datorit utilizrii pe scar
larg a antibioticelor, corticosteroizilor, citostaticelor i imunosupresivelor. Dupa modul i locul
de actiune aceste substane pot fi mprite n fungicide care acioneaz local i fungicide care
pot aciona si sistemic. Antifungicele sunt substane active fa de diferite drojdi patogene, avnd
un spectru de activitate mai larg sau mai ngust. Printre cele mai cunoscute i utilizate substane
cu activitate antifungic se numr compuii azolici, substanele polienice, 5-fluorocitozin.
.Mecanismul de actiune al fluconazolului
Substanele derivate din azoli au fost descoperite n 1960 i sunt de origine sintetitc. n
aceast clas de substane antifungice se nscriu ketoconazolul, miconazolul, fluconazolul,
voriconazolul i intraconazolul. Ca mecanism de aciune compuii azolici au capacitatea de a
inhiba sinteza ergosterolului, un component important al membranei plasmatice care are rol in
fluidizarea si in permeabilitatea membranei.
Fuconazolul blocheaz activitatea lanosterol-14-demetilaza. Prin inhibarea acestei enzime
se stopeaz conversia de la lanosterol la ergosterol. n consecin, permeabilitatea membranei
plasmatice este alterat iar celula de drojdie moare.

16
 Mecanismele de rezisten dezvoltate de C. albicans la fluconazol
Ca raspuns la aciunea compuilor azolici, drojdiile patogene au dezvoltat cteva strategii
de rezisten. Prima dintre acestea implic:
Alterarea tintei de actiune a fluconazolului respectiv enzima lanosterol-14-
demetilaza (ERG11) prin scaderea afinitatii enzimei lanosterol-14demetilaza fata de
fluconazol
Supraexprimarea enzimei lanosterol-14demetilaza
Supraexprimarea unor gene impicate in sinteza unor pompe de eflux (CDR-
Candida drug resistance, MDR-multidrug resistance)

Activarea unor molecule de stres care induc o crestere a viabilitatii celulare

Alte gene care sunt implicate in procesul de rezistenta sunt factorii de transcriptie atat
ai pompelor de eflux (PDR1) dar si ai caii de biosinteza a ergosterolului (UPC2). Astfel
deletia genei UPC2 conduce la cresterea sensibilitatii la fluconazol si ketoconazol iar
supraexprimarea genei conduce la cresterea rezistentei la azoli.
Si alte componente din structura membranei celulare sunt implicate in
sensibilitatea/rezistenta la azoli. Sfingolipidele sunt componente majoritare ale membranei
celulare si care joaca un rol important in mentinerea functiilor membranei plasmatice. Daca
se produce o deletie care implica un dezechilibrul la nivelul concentratiei de sifingolipide de
la suprafata membranei are loc si o scadere a activitatii pompelor de eflux astfel are loc o
scadere a rezistentei la azoli perturbare la nivelul pompelor de eflux
Amfotericina B
A fost sintetizata in 1957, este excretata pe cale renala si biliara. Amphotericin B este
produsa de specia Streptomyces nodosus.
17
 Prezinta un spectru larg de actiune: Candida, Aspergillus, Trichosporon beigelii, Fusarium.
Dezavantajul major este dat de nefrotoxicitatea ridicata, pentru scaderea toxicitatii s-a
adaugat o coada lipidica pt a impiedica legarea de colesterol (scadere cu 45-75%)
Nefrotoxicitatea amfotericinei B a fost propusa prin mai multe mecanisme:
-Datorita deoxicolatului de la nivelul vehicolului de transport prin care este administrata
amfotericina B
-Aparitia unor leziuni ischemice datorita reducerii fluxului sangvin renal si GFR
-Creterea concentraiei de sare din macula densa care duce la stimularea sporit a
feedback-ului tubuloglomerular, i vasoconstricie
- prin capacitatea de legare si de alti steroli de la nivelul membranei celulelor mamaliene
respectiv colesterol
Mecanismul de actiune al amfotericinei B
Amfotericina B are capacitatea de a se lega de ergosterolul de la suprafata mb. inducand o
depolarizare a mb. celulare cu formare de pori astfel are loc o crestere a permeabilitatii
cationilor monovalenti si bivalenti care induc moartea celulei.

Mecanismul de rezistenta dezvoltat de speciile din genul Candida

Scaderea concentratiei de ergosterol de la nivelul membranei plasmatice (in urma
aparitei unei mutatii la nivelul unor enzime implicate in biosinteza ergosterolului )
Cele mai frecvente mutatii apar la nivelul genelor care codifica pentru enzimele
implicate in ultimele etape ale sintezei ergosterolului. Mutatiile conduc la o scadere a
sensibilitatii la poliene fara o destabilizare a membranei celuare.
Deficienta de ergosterol a fost asociata cu o mutatie de tip missense (inversia unei
nucleotide dintr-un codon) aparuta la nivelul genei ERG6. Genele ERG6 si ERG11 fiind
implicate in adaugarea de lanosterol si eburicol la niv mb. cel in locul ergosterolului.
18
19