Sunteți pe pagina 1din 37

SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI

DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE


PATOLOGICA

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 1/37

CUPRINS:

1.Scop
2.Domeniu de aplicare
3.Documente de referinta
4.Definitii si abrevieri
5.Responsabilitati
6.Descrierea procedurii
7.Inregistrari si anexe
8.Istoricul versiunilor
Lista difuzare-retragere

Elaborat Verificat Aprobat


Nume : Ana Dutu Prof. Univ. Dr. Prof. Univ. Dr.
Maria Sajin Ctlin Florin
Crstoiu
Functia : Asistent Sef sectie Manager
coordonator Departament de
Anatomie Patologica

Semnatura:
Data: 14.01.2016 15.01.2016 18.01.2016
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 2/37

1. SCOP

Procedura are ca scop descrierea examenului histopatologic n


laboratorul de Anatomie Patologic n cadrul Spitalului Universitar de
Urgen Bucureti.

2. DOMENIU DE APLICARE

Procedura se aplic la efectuarea tuturor examinrilor de histopatologie


n Laboratorul de Anatomie Patologic n cadrul Spitalului Universitar de
Urgen Bucureti.

3. DOCUMENTE DE REFERINTA
3.1. SR EN ISO 15189:20013 Laboratorare medicale.Cerinte
particulare pentru calitate si competenta.
3.2. Norma metodologica din 01/04/2004 publicat in Monitorul
oficial, partea I nr.340 din 19/04/2004 de aplicare a Legii
nr.104/2003 privind manipularea cadavrelor umane si prelevarea
organelor si tesuturolor de la cadavre in vederea transplantului.
3.3. Maria Sajin: Aspecte histopatologice in cancerul colului uterin,
cap.IV din cancerul colului uterin, sub redactiaV.V. Horhoianu,
editura UniversitaraCarol Davila, Bucuresti.
3.4. Maria Sajin, Adrian Costache : Curs de Anatomie Patologica,
editia a II-a revizuita si adaugita, ed. Cermaprint, Bucuresti
2005
3.5. Manuela Pelmus, Adrian Badila, Ion Dinulescu, Paul Nicolescu,
Horia Orban, Radu Radulescu, Maria Sajin, : Patologie tumorala,
Editura Etna, Bucuresti 2004.
3.6. Maria Sajin: Colul uterin citohistopatologia leziunilor epiteliale,
editura Universitara Carol Davila.
3.7. Maria Sajin : Biopsia de endometru-histologie normala si
patologica, Editura Universitara Carol Davila.
3.8. Ghid de tehnici de histologie, citologie si imunohistochimie -
editura Medicala Universitara Craiova, 2003
3.9. Incursiune in problematica laboratorului de Anatomie Patologica-
Carmen Ardeleanu,Irina Draga Caruntu, Elena Lazar.
3.10. Robbins and Cotran Atlas of Pathology- Editura Sauders
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGICA

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 3/37

3.11. Stephen Ramsburg- Quick Compendium of Sugical Pathology


3.12. The WHO Classification of tumors of the central Nervous System
3.13. The WHO Classification of tumors of Haematopietic and
Lymphoid Tissue
3.14. The WHO Classification of Tumors Pathology and Genetics
Tumors of the Digestive System
3.15. The WHO Classification Pathology and Genetict Tumours of the
Breast and female Genital Organs
3.16. The WHO Classification of Tumors-Pathology and Genetics
Tumours of the Lung, Pleura, Thymus and Heart
3.17. The WHO Classification of Tumors Pathology and genetics
Tumours of Soft Tissue and Bone
3.18. Ordinul nr.1217/2010 privind aprobarea Ghidurilor de practica
medicala pentru specialitatea anatomie patologica. Tehnici
orientative de lucru pentru prelucare si colorare a preparatelor
citologice si histopatologice, anexa 1. Tehnici de prelevare, fixare,
transport si punere in lucru a biopsiilor si pieselor chirurgicale.

4. DEFINITII SI ABREVIERI

4.1. DEFINITII
Numerotare individuala - sistem de codificare numerica folosit pentru
identificarea probelor
Consumabile - toate materialele folosite n cursul operrii care trebuie
schimbate n mod regulat.
Rack metalic -suport pentru probe prin care acestea sunt introduse n
analizor.
Reactivi - substane chimice care folosesc la determinarea unei anumite
analize.
Repetare -comand de efectuare a aceleiai analize autorizat de utilizator
din diferite motive sau efectuat de aparat n mod automat.
Standby - stare a sistemului n care acesta nu efectueaz analize dar este
pregtit pentru pornire / operare imediat sau dup o iniializare
minimal.
Conformitate ndeplinirea de ctre un produs, proces sau serviciu a
unor cerine specificate.
Control intern de calitate tehnici i activiti operaionale din cadrul
unui laborator care sunt folosite pentru a ndeplini cerinele calitii.
Controlul intern va fi realizat de doua ori pe an de catre seful de laborator
pentru fiecare specialitate in parte. Aceasta procedura are ca scop
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 4/37

monitorizarea procesului de verificare a faptului c rezultatele msurrii


sunt suficient de sigure pentru a fi eliberate, ct i scopul de a elimina
cauzele performanelor nesatisfctoare.
Evaluarea extern a calitii determinarea performaneei msurrilor
efectuate n laborator cu ajutorul comparrilor inter-laboratoare.
Incercare determinarea uneia sau mai multor caracteristici ale unui
obiect (prob) n conformitate cu o procedur.
Prob unul sau mai multe porii luate dintr-un sistem i destinate
obinerii de informaii cu privire la sistem.
Prob de laborator prob primar sau sub-prob a acesteia preparat
pentru a fi trimis sau care a fost primit de laborator pentru a fi
procesata.
Test operaiune tehnic constnd n determinarea uneia sau mai multor
caracteristici ale unui produs, proces sau serviciu, n concordan cu o
anumit procedur.

4.2. ABREVIERI
N/A

5.RESPONSABILITATI

5.1 Sef Laborator

o verifica modul de executie a analizei prin consultarea inregistrarilor


emise sau efectuate in timpul si dupa executia analizelor medicale;
o in cazul unei executii necorepunzatoare a procedurii, va aplica
procedura pentru identificarea neconformitatilor;
o interpreteaza rezultatul controlului intern.

5.2 Responsabilul de Analiza

o instruieste si supravegheaza executantii analizelor in perioada de


formare initiala a acestora sau la introducerea unor
metode/proceduri sau echipamente noi;
o intocmeste si urmareste indeplinirea planului de intretinere a
echipamentelor si tine legatura cu firmele care asigura service-ul si
intretinerea acestora;
o raspunde de intocmirea a Fiselor de evidenta tehnica a
echipamentului.
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGICA

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 5/37

5.3 Asistentul medical

o executa analiza conform metodei descrise in prezenta procedura;


respecta intocmai si in toate aspectele sale metoda de lucru;
o efectueaza toate inregistrarile privitoare la executia analizelor
medicale in timp real;
o semnaleaza sefului de laborator cazul de analiza neconforma.
o raspunde de buna functionare a echipamentelor;
o urmareste activitatile de intretinere curenta a echipamentelor cu care
se lucreaza;
o efectueaza etapele descrise la capitolul 6.6 cu exceptia capitolului de
diagnosticare. Semnaleaza asistentului sef toate neconformitatile
aparute pe parcursul efectuarii procedurilor.

6. DESCRIERE PROCEDURA

6.1 Semnificaie clinic


Preparatul histologic final permite interpretarea corect n vederea
stabilirii diagnosticului anatomo-patologic.

6.2 Principiul determinrii


Impune transformarea unui prelevat dintr-un organ sau esut ntr-o
mas tisular opac, ntr-un preparat fin, translucid care permite
vizualizarea microscopic a detaliilor structural tisulare. Pentru
realizarea acestui principiu, prelevatul sufer transformri succesive:
- fixarea -previne alterarea i autoliza tesutului;
- procesarea esuturilor -prelucrarea histopatologic (deshidratare,
clarificare i impregnare cu parafin);
- includerea tesuturilor prelucrate n bloc de parafin;
- secionarea la microtom a prelevatului inclus la parafin;
- etalarea seciunilor pe lame n vederea obinerii preparatului
histologice necolorat;
- colorarea lamelor histologice;
- montarea lamelor histologice - permite protecia i conservarea
preparatului histologice.
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 6/37

Protocoalele de lucru histologice sunt orientative; pot fi folosii reactivi


diferii, timpul de aciune, concentraiile menionate n reete sunt
orientative i se adapteaz n funcie de condiiile locale. Tehnica folosit
este considerat corect dac se obin rezultatele preconizate prin
coloraia respectiv. Pot fi folosite i alte coloraii speciale pentru
evidenierea aceleiai structuri.

6.3 Specificaii de performan n vederea aprecierii rezultatului


analizei. Acestea se refera la diferite aspecte specifice fiecrei etape de
lucru parcurs n timpul execuiei analizei.

n mod sintetic etapele sunt redate mai jos:


Etape de lucru Caracteristici de performan
Fixarea - transluciditate prob
Decalcifiere - demineralizare esut osos, consistena
elastic
Procesare probe - omogenitatea i maleabilitatea probei
Secionarea blocurilor de -absena inegalitilor pe seciuni, a
parafin vibraiilor, a urmelor de cuit i a pliurilor
Coloraia hematoxilin-eozin - nucleii - albastru/negru
- citoplasma-nuane de roz; fibrele
muscular-roz nchis/rou; hematii-
portocaliu/rou
Aspecte legate de deshidratare, -deshidratare i clarificare suficient;
clarificare, montare probe evitarea uscrii seciunilor; evitarea
montrii cu bule de aer; esut
corespunztor colorat.

6.4 Proba primara


esut proaspt (n cazul examenului extemporaneu) sau fixat n formol
neutru de 10%.

6.4.1 Tipul probei primare


- piese operatorii;
- material biopsic: biopsii de tract digestiv, bronice, hepatice,
pancreatice, renale, ganglionare, etc.
- fragmente tisulare recoltate la autopsie.
Probele necorespunztoare sau cele ale cror caracteristici pot influena
calitatea rezultatelor sunt identificate si nregistrate n Registrul de Probe
respinse, cod PG-03/F2b,V.1
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGICA

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 7/37

Modalitatea de trimitere a probelor histopatologice pentru examenul


extemporaneu

Personalul care aduce produsul destinat examenului extemporaneu,


prezint n secia de anatomie patologic, urmtoarele:
- tesut proaspat;
- fia de nsoire a materialului biopsic, cod PG-03/F5a,V.1 care
cuprinde:denumirea sectiei care solicita analiza, numele i prenumele
pacientului, sex, vrsta, codul numeric personal, numr foaie de
observaie, date clinice i tratamente aplicate anterior, rezultate
histopatologice anterioare, diagnostic prezumtiv, denumire pies trimis,
data interveniei chirurgicale, semntura i parafa medicului care solicit
examinarea; numele i prenumele n clar a asistentului care aduce proba
precum si numele asistentului care preia proba din cadrul seciei de
anatomie patologica, aceste mentiuni vor fi trecute la rubricile Adus de
i Primit de; ora i data aducerii probei.
- consimmntul pacientului semnat n dreptul fiecrei rubrici
existente, avnd cod PS-AP-01/F2,V.1. Excepie de la semnarea i luarea
la cunotin a acestui consimmnt sunt cazurile cu pacieni care
urmeaz intervenii chirurgicale n urgen sau sunt n incapacitatea de a
semna. Pentru acest lucru personalul medical care are cunotin de
asemenea cazuri are obligaia de a anuna verbal i scris personalul
medical care preia proba.
- caietul de eviden probe, care trebuie s cuprind:
numele i prenumele pacientului, denumire pies trimis, foaie observaie,
secia care solicit proba. n acest registru asistentul medical din
anatomie patologic va semna de primire i va consemna data i ora
recepiei probelor.

Probele vor fi aduse in recipiente de plastic cu capac; recipientele vor fi


achiziionate numai de la Departamentul de Anatomie Patologic. Este
interzis aducerea probelor n alte recipiente dect cele menionate mai
sus. Recipientele vor fi etichetate i inscripionate cu numele seciei i a
medicului care solicit analiza, datele de identificare ale pacientului,
denumirea piesei trimise, foaia de observaie.
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 8/37

Probele biologice se predau laboratorului de anatomie patologic conform


procedurii de mai sus.

Asistentul medical care primete proba, are obligaia de a verifica


concordana dintre datele nscrise in caietul de predare/primire a probelor
cu fia de nsoire a materialului biopsic cod PG-03/F5a,V. precum i
nscrierile de pe eticheta recipientului.

Medicul anatomo-patolog poate refuza examenul extemporaneu dac


esutul trimis este impropriu din punct de vedere tehnic examinarii la
ghea. De exemplu: os, zone calcificate, esut necrozat, piesa sau leziunea
trimis este foarte mic, existnd riscul prejudicierii diagnosticrii
histopatologice.

Rezultatul examenului extemporaneu se comunic telefonic seciei de


ctre medicul anatomo-patolog i conine afirmarea sau infirmarea
malignittii. Rezultatul diagnosticului va fi consemnat de ctre medicul
anatomo-patolog n fia de nsoire a materialului biopsic, cod PG-
03/F5a,V.1. Este obligatorie prelucrarea la parafin a fragmentului
tisular examinat la examenul extemporaneu.
Cazul se consemneaz n registrului eviden extemporaneu, cod PG-
03/F1b,V.1, avand numar de nregistrare din cadrul registrului.

Modalitatea de trimitere a probelor histopatologice

Departamentul de Anatomie Patologic ii rezerv dreptul de a stabilii i


comunica seciilor intervalul de timp n care se poate face recepia
probelor.

Probele operatorii se trimit n totalitate, fie neformolizate imediat de la


intervenie, fie in formol tamponat 10 %, n recipient de plastic cu capac
ce trebuie s conin un volum de 2-10 ori mai mare de formol dect
volumul piesei. Este obligatorie trimiterea pentru diagnostic histopatologic
n Departamentul de Anatomie Patologic, a tuturor fragmentelor tisulare
recoltate de la pacieni n cursul interveniei chirurgicale. Este obligatorie
recoltarea i efectuarea examenului histopatologic al fragmentelor tisulare
recoltate de la cadavre.

Probele operatorii destinate analizei histopatologice sunt aduse in


laborator de ctre personalul medical al seciei care solicit examinarea.
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGICA

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 9/37

Personalul care aduce produsul destinat examinrii prezint n secia de


anatomie patologic urmtoarele:
- esut proaspt sau fixat;
- fia de lnsoire a materialului biopsic, cod PG-03/F5a,V.1 care
cuprinde: denumirea sectiei care solicita analiza, numele i prenumele
pacientului, sex, vrsta, codul numeric personal, numr foaie de
observaie, date clinice i tratamente aplicate anterior, rezultate
histopatologice anterioare, diagnostic prezumtiv, denumire pies trimis,
data interveniei chirurgicale, semntura i parafa medicului care solicit
examinarea; numele i prenumele n clar a asistentului care aduce proba
precum si numele asistentului care preia proba din cadrul seciei de
anatomie patologica, aceste mentiuni vor fi trecute la rubricile Adus de
i Primit de; ora i data aducerii probei.
- consimtamantul pacientului semnat n dreptul fiecrei rubrici
existente, avnd cod PS-AP-01/F2,V.1. Excepie de la semnarea i luarea
la cunotin a acestui consimmnt sunt cazurile cu pacieni care
urmeaz intervenii chirurgicale n urgen sau sunt n incapacitatea de a
semna. Pentru acest lucru personalul medical care are cunotin de
asemenea cazuri are obligaia de a anuna verbal i scris personalul
medical care preia proba.
-caietul de eviden probe, care trebuie s cuprind:
numele i prenumele pacientului, denumire pies trimis, foaie observaie,
secia care solicit proba. n acest registru asistentul medical din
anatomie patologic va semna de primire i va consemna data i ora
recepiei probelor.

Probele vor fi aduse in recipiente de plastic cu capac; recipientele vor fi


achiziionate numai de la Departamentul de Anatomie Patologic. Este
interzis aducerea probelor n alte recipiente dect cele menionate mai
sus. Recipientele vor fi etichetate i inscripionate cu numele seciei i a
medicului care solicit analiza, datele de identificare ale pacientului,
denumirea piesei trimise, foaia de observaie.
Probele biologice se predau laboratorului de anatomie patologic conform
procedurii de mai sus.

Asistentul medical care primete proba, are obligaia de a verifica


concordana dintre datele nscrise in caietul de predare/primire a probelor
cu fia de nsoire a materialului biopsic cod PG-03/F5a,V. precum i
nscrierile de pe eticheta recipientului.
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 10/37

Asistentul medical din cadrul Departamentului de Anatomie Patologica


are urmtoarele obligatii:
- s se asigura c piesa operatorie conine solutie fixatoare, in caz contrar
va umple recipientul cu formol tamponat 10%, avand un volum de 2-10
ori mai mare de formol dect volumul piesei.
- schimb imediat la primire sau ori de cate ori e nevoie, soluia fixatoare.
- noteaz n dreapta sus a fiei de nsoire a materialului biopsic cod PG-
03/F5a,V.1, numele medicului anatomo-patolog i data n care s-a
orientat proba operatorie. n cazul n care proba operatorie este orientat
de medicul rezident, numele acestuia se va consemna n fia de nsoire a
materialului biopsic cod PG-03/F5a, lnga numele medicului anatomo-
patolog care a supraveghetat cazul.
- plaseaz cele trei tampile pe fia de nsoire a materialului biopsic, cod
PG-03/F5a,V.1, tampile cu urmtoarele semnificaii: numele asistenilor
care au efectuat procedura, proceduri codificate cu numrul de fragmente
ce urmeaza a fi prelucrate, completate de asistentul medical i proceduri
codificate destinate medicului anatomo-patolog, proceduri efectuate
pentru fiecare caz n parte, ( exemple coduri B=2.703 (cod biopsie);
L=2.70101(cod total lame); W=2.70103 (cod total lame coloratii speciale);
P.O.=2.70100 (cod, numr total de probe orientate); H=2.70102 (cod total
lame histopatologie); I=2.7501 (cod total fragmente incluse).

Piesele operatorii vor fi aezate pe masa de depozitare temporar, n


dreptul fiecrui medic anatomo-patolog care se ocup de caz.

Criterii de rezolvare in caz de neconfomitate a probei operatorie

Neconformitile vor fi identificate i rezolvate fr a prejudicia


diagnosticul histopatologic. Pentru probele care au material insuficient, se
va ncerca prelucrarea, consemnndu-se n fia de nsoire a materialului
biopsic, n caietul de predare/primire prob i n fia de neconformitate
PG-08/F1, urmtoarea meniune: fragment insuficient, se ncearc
prelucrarea. Consemnrile vor fi fcute de asistentul medical dup ce s-a
consultat n prealabil cu medicul anatomo-patolog.
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGICA

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 11/37

Toate neconformitile vor fi identificate i nregistrate n fia de


neconformitate PG-08/F1.

Pregtirea probei operatorii n vederea orientarii

Probele operatorii sunt pregtite de ctre asistentul medical, n vederea


orientrii lor de ctre medicul anatomo-patolog, i anume:
- probele sunt splate sub jet de ap, puse in acelai recipient n care au
fost preluate;
- se pregtete instrumentarul si materialele sanitare utilizate pentru
disecie;
- casetele de plastic, notate n prealabil cu numere de nregistrare din
registrul de histopatologie, sunt aezate pe hrtia de filtru sub hota de
orientat;
- numerele se vor scrie pe spaiul accesibil al casetei, ct mai lizibil
posibil.

6.4.2. Containere si aditivi: recipiente de plastic cu capac de diferite


dimensiuni pentru transportul i pstrarea probelor n laborator;

6.4.3 Pregatirea pacientului


Recoltarea probei se efectueaz n timpul operaiei. Recoltarea probelor
histologice trebuie fcuta cu atenie deosebit. Se recomand folosirea
unor instrumente adecvate, deoarece traciunile brutale, compresiunea
excesiv sau sfierea cu instrumente neadecvate, vor modifica
histoarhitectura organelor sau esuturilor, fcnd uneori imposibil
diagnosticul histopatologic.

6.5 Echipamente si reactivi


Ehipamente
- instrumentar pentru orientarea pieselor operatorii;
- casete de plastic de diferite dimensiuni i culori;
- hrtie de filtru;
- instrumentar pentru includerea fragmentelor la parafin;
- cuite de microtom;
- pensule de diferite dimensiuni;
- ace de disociere;
- suport plastic pentru susinerea lamelor cu seciune;
- rack pentru manevrarea si transportul lamelor;
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 12/37

- lame de diferite dimensiuni;


- lamele de diferite dimensiuni;
- tvi plastic pentru transportul lamelor histopatologice;
- arhiva inox pentru arhivare lame/blocuri;
- cuve de inox sau plastic pentru colorarea manual sau automat;
- hota de orientat;
- procesor de esuturi Donattello;
- aparat de includere : Canova si Lab Kits ;
- microtom seciune blocuri de parafin;
- platin cald ntindere seciuni;
- frigider pentru rcirea blocurilor de parafin;
- aparat de colorat Rafaello ;
- aparat extemporaneu Criomicrotom
- hota pentru montat;
- termostat;
- balant electronic;
- centrifug;
- microscoape.

Reactivii
- formol neutru de 10 %;
- substane pentru deparafinare si clarificare: toluen, xilen, ottix plus
(substituent pentru toluen, xilen);
- substane pentru hidratare, deshidratare i colorare: apa distilat, alcool
de diferite concentraii, ottix shaper (substituent pentru alcool); carbonat de
litiu; acid picric, fuxina acida; orange G; eozina B; eozina G, acid acetic
glacial.
- coloraie uzual: kit hematoxilin, kit eozin;
- kit substane pentru coloraii speciale: VanGieson; Van Gieson elastic;
PAS (acid clorhidric, metabisulfit de natriu sau potasiu, carbine active);
Tricromic; Schiff; Albastru alcian; Pearls (ferocianura de potasiu, acid
clorhidric, kernechtrot, fuxina acida, rosu neutru); Ziehl-Nielsen
( calbolfucsina, albastru de metilen !% sau verde lumina); Rosu de Congo
(hidroxid de potasiu sau hidroxid de sodiu); Giemsa (alcool izopropilic, acid
acetic glacial); Masson (hematoxilina Weigert, ponceau fucsina, acid
fosfomolibdenic, aniline orange sau verde lumina); Gomori (permanganate
de potasiu, metabisulfit de natriu sau potasiu, alaun feriamoniacal,
argento-amoniacala(Tollens), metabisulfit de natriu/potasiu, tiosulfat de
natriu).
- solutie decalcifiere acid azotic fumans; diadec; microdec.
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGICA

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 13/37

- solutie montare- balsam Canada; Micromount.


- parafina 56-58C.

6.6 Etape procedurale

6.6.1. Examen extemporaneu :


Examenul extemporaneu se face cu aparatul Criomicrotom, conform IL-AP-
01.

Generalitti procedur
Este o metod rapid de diagnostic microscopic, n decursul interveniilor
chirurgicale. Aceasta se efectueaz la cererea clinicianului i trebuie
anunat cu 24 de ore nainte. Rezultatul examenului se comunic seciei
telefonic si conine numai afirmarea sau infirmarea malignitii, fapt
consemnat pe fia de nsoire a materialului biopsic PG-03/F5a,V.1. Pentru
aceast analiz, esuturile trebuie aduse imediat i nefixate (fr formol).
Probele tisulare mpreun cu fia de nsoire a materialului biopsic cod, PG-
03/F5a,V.1, sunt aduse n Departamentul de Anatomie Patologic,
compartiment extemporaneu, de personalul medical care solicit analiza.
Solicitarea acestei analize se face marcnd n dreptul analizei
extemporaneu, csua de pe fia de nsoire a materialului biopsic, cod PG-
03/F5a,V.1

TEHNICA DE LUCRU:
- se modeleaza fragmentul de analizat, ndeprtnd pe ct posibil,
grsimea perilezional care se congeleaz greu;
- grosimea piesei trebuie s fie maxim 3-4 mm;
- piesele mici se includ n totalitate n mediul de nglobare pentru seciuni
la ghea;
- pe plcua metalic, portobiect se pune mediul de nglobare i apoi piesa
nefixat. Temperatura de ngheare a probelor se alege n funcie de natura
esutului, conform tabelului de mai jos.
- pentru piese mai groase se folosete dispozitiv de ngheare rapid;
- se asteapt 3-4 minute pn la ngheare (mediul de nglobare devine
alb-opac);
- dup ngheare se monteaz placua metalic n dispozitivul de prindere
al microtomului, se degroeaz i se secioneaz la 6 microni, cu un cuit
perfect ascutit, utilizand plcua de plexiglas anti-rol;
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 14/37

- seciunea se recolteaz direct pe o lam histologic aflat la temperatura


camerei;
- seciunea se coloreaza hematoxilin-eozin, sudan i albastru de
toluidin.
Se face cte o lam pentru fiecare coloraie.

Temperaturi de ngheat n criostat:


- 10C/ - 20C - ficat, rinichi, splin, tiroid, ganglion, uter, limb,
testicol;
- 20C/ - 30C - muchi, gland mamar fr grasime, plmn, intestine,
prostat, col uterin, pancreas, tegument fr esut adipos;
- 30C/ - 60C - esut adipos, gland mamara cu grsime, tegument cu
grsime.

Coloraia Hematoxilin-Eozin pentru examenul extemporaneu


- deparafinare - toluen, xilen, ottix plus cteva secunde;
- hidratare in alcool absolut, alcool 96, alcool 70 sau ottix shaper - cteva
secunde;
- splare ap de robinet
- hematoxilin- 2 minute;
- virare carbonat de litiu 10 secunde;
- splare ap robinet;
- eozin 30 secunde;
- splare ap de robinet;
- deshidratare, alcool 70C, alcool 96C, alcool absolute sau ottix plus
cteva secunde;
- clarificare, toluen, xilen sau ottix plus - cteva secunde
- montare,

Coloratia Sudan grasimi


- fixare n formol 10-15% - 10 minute;
- splare ap de robinet;
- trecere in alcool 50C;
- trecere n soluie sudan 3-4 minute sau Scharlach 30 minute;
- splare alcool 50C;
- splare ap robinet;
- colorare hematoxilina Harris 2 minute;
- splare n apa de robinet;
- virare n carbonat de litiu 1%;
- splare n apa de robinet apoi- montare in fructoz sau glucoz 33%.
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGICA

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 15/37

Coloratia Albastru de Toluidina


- fixare n alcool absolut 30 secunde;
- splare ap robinet;
- colorare n albastru de toluidin 2 minute;
- splare ap robinet;
- montare cu fructoz sau glucoz 33%.

Rezultate: evidentiaza mastocite cu granulatii metacromatice rosu:


Citoplasma albastru deschis; hematii in galben; nuclei in albastru.

Dup diagnosticarea cazului, datele de identificare ale pacienilor i


rezultatul examenului extemporaneu sunt trecute nRegistrul pentru
examenul extemporaneu, cod PG-03/F1b,V.1, iar lamele sunt pstrate n
cutii. Restul de piese operatorii i fragmentul de la extemporaneu
mpreun cu actele care a nsoit proba, vor fi duse n laboratorul pentru
orientat probe, n vederea prelucrrii finale.

6.6.2 Orientarea piesei operatorii


Orientarea piesei operatorii se face la hota pentru orientare, conform IL-AP-
02.

Criterii de orientare piese operatorii


Medicul anatomo-patolog trebuie s vad nu numai aspectul microscopic al
leziunii ci i aspectul macroscopic al acesteia, raporturile cu alte organe i
esuturi, datele clinice i paraclinice consemnate n foaia de observaie.
Toate aceste date, absolut necesare, orienteaz diagnosticul microscopic.

Piesele recoltate, pot avea dimensiuni foarte mari sau foarte mici. De aceea
medicul anatomo-patolog trebuie s execute o prelevare cu mare atenie a
materialului biologic din piesa trimis, deoarece poate rata diagnosticul
histologic daca nu identific cu exactitate leziunea sau zona de interes
histopatologic.

Recoltarea pieselor histologice n timpul necropsiei prezint avantajul


medicului anatomo-patolog s observe ntinderea leziunii, aspectul
macroscopic, relatiile cu organele nvecinate, leziunile diseminate la
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 16/37

distan, permit acestuia elaborarea unui diagnostic histopatologic complet


i corect.
Prelevarea materialului biologic pentru studiu microscopic va fi precedat
de un studiu macroscopic al piesei recoltate, care se va consemna n fia de
nsoire a materialului biopsic.

Se vor meniona dimensiunile piesei, greutatea, aspectul macroscopic,


prezena i aspectul leziunilor macroscopice, ntinderea acestora, rapoartele
cu alte structuri sau organe.
Prelevarea trebuie s in cont de:
- orientarea leziunilor histologice;
- grosimea i suprafeele seciunilor;
- prezena i ntinderea leziunii;
- meninerea raporturilor anatomice i histologice ct mai aproape de starea
in vivo.

n timpul prelevrii materialului biologic se va ine cont de incidena


seciunilor care se vor executa la microtom. Grosimea seciunilor realizate
n timpul prelevrii, variaz de la un organ la altul, dar este indicat ca toate
piesele prelevate s aib o grosime sub 5 mm, deoarece peste aceasta
valoare, fixarea materialului histologic se va face cu dificultate, n centrul
piesei rmnnd zone nefixate, care se preteaz la multiple artefacte.

Suprafaa piesei nu mpiedic o bun fixare, dar o pies cu suprafaa prea


mare se va seciona greu la microtom i se va etala cu dificultate pe lama
portobiect. De accea se recomand ca suprafaa pieselor histologice s nu
depaeasc 4-5 cm.

n cazul prezenei n structura piesei recoltate a unor leziuni macroscopice


se recomand ca prelevarea s se faca n aa fel ncat piesele prelevate s
cuprind leziunea n ntregime sau o parte ct mai mare din ea. De
asemenea, este recomandat ca piesele prelevate s cuprind i o parte din
esuturile normale, vecine cu leziunea pentru a putea studia extinderea
microscopica a leziunii sau reacia esuturilor din jurul leziunii.

Proceduri generale de lucru


Orientarea se efectueaz dup protocoalele descrise n crile de
specialitate.
Orientarea probelor se face la hota de orientare, conform IL-AP-02.
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGICA

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 17/37

Probele vor fi prelevate zilnic de ctre medicul anatomo-patolog, care poate


solicita i prezena medicului operator la orientarea piesei.

Fiecare fragment orientat va fi aezat de ctre medic n casetele de plastic.


Asistentul medical va ine cont de indicaiile medicului. Trebuie evitat
uscarea probei. O caset poate s conin una sau mai multe probe.
esuturile nu trebuie strivite, se aleg casetele potrivite sau se secioneaz
proba ca s fie pe dimensiunea casetei. Fragmentele tisulare foarte mici 1-2
mm trebuie plasate pe bureti mici care se regsesc de obicei n casete.

n timpul prelevrii esuturilor/fragmentelor, medicul dicteaz asistentului


medical date de macroscopie ale produsului trimis; asistentul medical
consemneaza aceste date n fia de nsoire a materialului biopsic, cod PG-
03/F5a,V.1.

Dup acest proces fiecrui fragment i se va aloca un numar de nregistrare


cu ultimele dou cifre din anul in curs, urmat de / i numrul de ordine
din registrul de histopatologie (exemplu, 15/809654, 15 fiind ultimele dou
cifre ale anului n curs, urmat de numrul de nregistrare din registrul de
histopatologie).

Aceste numere sunt editate prin program excel, tiprite pe hrtie


fotografic, urmnd s fie aezate cu atenie de ctre asistent, deasupra
fragmentului secionat.

Medicul anatomo-patolog supravegheaz n timpul secionrii probelor,


dac consemnrile din fia de nsoire a materialului biopsic scrise de
asistentul medical, sunt corecte.

n vederea elaborrii diagnosticului histopatologic, medicul anatomo-


patolog decide tipul de coloraii sau teste suplimentare existente in cadrul
laboratorului.

Asistentul medical va consemna n fia de nsoire a materialului biopsic,


cod PG-03/F5a,V.1, numerele de nregistrare scrise lizibil i fr prescurtri
pentru fiecare pacient n parte i numarul total de fragmente secionate;

n fia de nsoire a materialului biopsic, cod PG-03/F5a,V.1 nu sunt


admise prescurtri care nu sunt cunoscute de personalul medical care
utilizeaz aceste documente.
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 18/37

Datele din fia de nsoire a materialului biopsic se vor consemna n


Registrul de Histopatologie, cod PG-03/F1a,V.1 completnd fiecare rubric
din registru. La rubrica Meniuni speciale se va trece daca proba
operatorie va rmne pe formol 10%, 24 ore ( formol - 24 h), sau alte
informaii utile probelor.

Casetele mpreun cu prelevatele se vor nchide cu atenie, urmnd a fi


puse n recipientul destinat procesrii automate. Pentru a evita uscarea,
recipientul cu probe rmne n formol 10% pana la preluarea lor n vederea
procesrii.
Piesele operatorii care conin carbonat de calciu/os, sunt destinate
procedurii de decalcifiere astfel, probele nu pot urma acelai curs de
procesare dect dup ce acestea vor avea consistena moale.

Dup finalizarea primei procedurii recipientul cu probe va fi dus in


urmtorul laborator, pentru procesarea automat.

Se va consemna n Registrul Eviden Probe, numrul total de fragmente


lucrate zilnic. Pe lamele de sticl, se va scrie numrul de nregistrare,
conform fiei de nsoire a materialului biopsic, cod PG-03/F5a,V.1. Lamele
inscripionate vor fi puse n cutie, urmnd a fi duse in compartimentul de
secionare blocuri de parafin;

Reorientarea probelor operatorii se va face cu acordul medicului ef de


secie, iar n lipsa acestuia de ctre medicul nlocuitor. Procedura de
reorientare va urma acelai curs mai sus menionat.

Probele operatorii pstrate dup orientare sunt depozitate temporar n


laborator n recipiente cu capac, inscripionate cu datele de identificare ale
pacientului cu data punerii n lucru sau numrul de nregistrare. O dat pe
saptamana, probele sunt transportate ctre spaiul destinat pstrarii lor,
timp trei luni. Probele mai vechi de trei luni se distrug, conform Legii
104/2003 privind manipularea cadavrelor umane, Art 8 alin.c.
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGICA

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 19/37

6.6.3 Procesare piese operatorii

Probele vor fi prelucrate cu procesorul de esuturi Donattello, conform IL-


AP-03.
Generalitti soluia fixatoare
A. Fixarea are ca obiectiv:
- oprirea fenomenelor vitale din esuturi i celule ntr-o anumit etap
biologic;
- mpiedic alterararea structurilor celulare i tisulare scoase din
organism prin prevenirea fenomenelor de autoliz;
- pregtirea celulelor i esuturilor pentru o colorare adecvat.
Un bun fixator trebuie s ndeplineasc mai multe condiii:
- s pstreze ct mai aproape de starea in vivo structurile esuturilor
biologice ce urmeaz a fi fixate, s nu altereze raporturile dintre diversele
componente tisulare, deci s nu produc artefacte;
- s aib o mare putere de ptrundere n materialul biologic recoltat;
- s ofere o anumit consisten materialului biologic, necesar secionrii
i prelucrrii n continuare;
- s permit evidenierea structurilor histologice prin tehnica de colorare
dorit.

B. Deshidratarea- ndeprtarea apei din probele fixate i splate n ap de


robinet. n timpul deshidratrii are loc ntrirea pieselor mai mult sau mai
puin pronunat, precum i micorarea lor n volum. Deshidratarea se
face prin trecerea pieselor operatorii n alcooluri de concentraie din ce n
ce mai mari, sau n subtitueni ai alcoolului, ottix shaper i ottix plus.

C. Clarificarea - piesa operatorie este impregnat cu un solvent al


parafinei, toluen, ottix plus. Aprecierea clarificrii este dat de
transluciditatea piesei operatorii.

D. Parafinarea- ptrunderea pieselor cu parafin topit de 56-58C, pn


n cele mai mici interstiii. Soluia de parafin are menirea s le ofere o
consisten omogen fr de care obinerea unor seciuni plane i subiri
nu este posibil.
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 20/37

Procesare automat- piese operatorii la aparatul Donatello, IL-AP-03.


1. Formol neutru 10 % - timp calculat de aparat.
2. Apa robinet -1h.30 -presiune/vacum(P/V)
3. Ottix Shaper - 1h - presiune (P)
4. Ottix Plus - 1h.00 - presiune (P)
5. Ottix Plus - 1h.00 - presiune (P)
6. Ottix Plus - 1h.00 - presiune (P)
7. Ottix Plus - 1h.30 - presiune (P)
8. Parafin - 1h.30
9. Parafin - 1h.30
10.Parafin -1h.30

Laboratorul ii rezerv dreptul de a schimba ori de cate ori e nevoie tehnica


de procesare.

Procesorul Donattello este pornit n fiecare zi lucrtoare, dup finalizarea


procedurii de orientare.
Procesarea se finalizeaz a-doua-a zi diminea. Recipientul este scos din
aparat i probele distribuite n aparatul de inclus Canova i Labkits.

6.6.4 Includerea probelor operatorii


Includerea probelor se face cu aparatele de inclus Canova sau Labkits, IL-
AP-04.

Generaliti pregtire procedur de includere


nainte de includere, asistentul medical pornete staiile de rcire i
nclzire ale aparatului, pregtete instrumentarul i materialele necesare
acestei proceduri.
Asistenii care vor include la parafin probele, vor avea n vedere
urmtoarele aspecte:
- includerea probelor se face cu verificarea consemnrilor din fia de
nsoire a materialului biopsic, cod PG-03/F5a,V.1 pentru fiecare caz n
parte;
- casetele se deschid cu atenie;
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGICA

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 21/37

- capacele se arunc, nu nainte de a verifica dac exist resturi de


fragmente sau numere;
- dup fiecare manevr a fragmentului, instrumentarul se va terge cu
tifon curat pentru a evita transportul resturilor de fragmente de la o prob
la alta;
- la nevoie este indicat i prezena medicului anatomo-patolog.

Tehnica de includere:

- se alege o matrice dup mrimea fragmentului ce se vrea inclus;


- ntre piesa i marginile formei trebuie s rmn un spaiu de 2 mm
pentru a asigura unui bun suport n timpul secionrii;
- se pune matricea pe placa nclzit, sub dispenserul de parafin cald;
- se apas uor pe clapet de eliberare parafin;
- se toarn parafin lichid n matrice, se ia cu pensa cald fragmentul de
esut se amplaseaz n forma metalic n poziia dorit, se fixeaz cu
pensa fr a traumatiza proba; parafina fiind lichid permite aranjarea
probei n pozitia dorit pentru secionare; se va cuta ca suprafaa de
secionare a probei s vin pe fundul matricei deoarece de acolo va ncepe
secionarea; trebuie inut cont c piesa trebuie pozitionat n mijlocul
matricei pentru a forma la secionare banda de parafin cu esut.
- deasupra fragmentului se pune caseta de plastic cu numrul de
nregistrare;
- se toarn suficient parafin care reprezint baza de fixare a viitorului
bloc de parafin;
-rcirea probei se face treptat pentru a evita fisurarea probei i a
parafinei; n cazul n care blocul de parafin prezint fisuri sau dac piesa
nu este aliniat convenabil, proba deja inclus se poate retopi i procesul
se poate relua.
- dup rcire probele sunt scoase din matrice; marginea casetei i
matricea se cur de excesul de parafin;
- blocurile de parafin se pun n ordine n tvie la rece pentru a fi
secionate.
- matricele metalice curate de excesul de parafin, vor fi puse n ordine
n modulul de prenclzire a matricelor.

Aparatul va fi curat conform IL-AP-04.


SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 22/37

Pe fiele de nsoire a materialului biopsic, cod PG-03/F5a,V.1, n dreptul


tampilei cu proceduri se va trece numele asistentului care a inclus
probele i al asistentului care a ajutat la desfacerea lor din matrice,
urmnd ca aceste fie s fie duse n compartimentul destinat secionrii
blocurilor de parafin.

6.6.5 Secionarea blocurilor de parafin


Secionarea blocurilor de parafin se face cu microtomul, IL-AP-05.

Generalitti pregatire blocuri de parafin pentru secionare:


- blocurile de parafin rmn n frigider pn la secionare;
- dup rcire probele se scot pe rnd din frigider pe tava de ghea i se
pun lng microtom;
- se va avea n vedere c secionarea blocurilor de parafin se face cu
verificarea consemnrilor din fia de nsoire a materialului biopsic, cod
Pg-03/F5a,V.1 pentru fiecare caz n parte;

Tehnica de secionare a blocurilor de parafin.


- blocul de parafin se fixeaz n menghina dispozitivului;
- deplasarea portobiectului se face n plan vertical;
- se deblocheaz volantul microtomului situat n dreapta aparatului;
- portobiectul cu proba efectueaz micri succesive n plan vertical i de
naintare spre cuit;
- se niveleaz la circa 15-20m; fragmentul este reliefat n ntregime,
resturile de parafin i esut ce nu intereseaz, vor fi ndeprtate cu
ajutorul unei pensule, n tvia de colectare deeuri a microtomului.
- se potrivete numrul de microni la care se va face secionarea, prin
rotirea unui disc gradat care regleaz pasul de naintare a portpiesei;
- prin rotirea volantului microtomului, dup cteva micri, vor aprea
seciuni, la nceput numai cu parafin, apoi coninnd i poriuni de pies;
- secionarea se face n lungul structurii esutului;
- seciunile apar seriate sub forma unor panglici nentrerupte;
- se trece la secionarea propriu-zis a fragmentului care se face la 3-5m;
- dup ce s-au obtinut 10-12 seciuni, panglicile sunt luate cu atenie de
pe portobiect cu ajutorul acelor de disociere sau alte instrumente
ajuttoare, puse pe o tav acoperit cu hrtie de culoare neagr, pentru a
evidenia seciunile i a alege fragmentele cele mai reprezentative;
- lamele de sticl care au fost deja inscripionate cu numrul de
nregistrare, se vor pune pe o plac care ajut la ntinderea seciunilor
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGICA

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 23/37

alese. Peste lame se pune ap de robinet, se vor alege cele mai


concludente seciuni, subiri i fr pliuri, care vor fi ntinse uor pe apa
rece, tragnd cu atentie de marginile de parafin fr a rupe fragmetul.
Lamele sunt trecute pe placa cald care are rolul de a nclzi apa i de a
ntinde perfect proba cu parafin;
- dup ce seciunea este perfect ntins, se scurge apa i se sterge
surplusul de ap; lamele sunt lsate cteva minute pe placa cald pentru
a adera mai bine seciunea pe lam. Lamele cu seciuni vor fi distribuite
individual n rastel.
- resturile de seciuni de pe tav ce nu intereseaz vor fi aruncate n
recipientul destinat colectrii deeurilor infecioase; tava se va sterge cu
tifon uscat sau pensul, dup fiecare prob prelucrat, pentru a evita
transportul resturilor de esut de la un caz la altul;
- pe prima lam din rastel se va nota tipul coloraiei ce urmeaz a se
procesa;
-la finalul procedurii lamele vor fi puse in termostat la +58C + 60C,
peste noapte pentru fixarea optim a seciunii pe lam.
-aparatul va fi curat conform, IL-AP-05.

Pe fiele de nsoire a materialului biopsic, cod PG-03/F5a.V1 n dreptul


tampilei cu proceduri se va trece numele asistentului care a efectuat
procedura de secionare i numele asistentului care a etalat fragmentele
pe lame, urmnd ca aceste fie s fie duse n urmtorul compartiment
destinat colorrii probelor.

Resecionarea blocurilor de parafin se face cu acordul medicului ef de


secie sau n lipsa acestuia, de ctre medicul nlocuitor, urmnd s i se
aduc la cunotin i medicului sef de sectie.
Resecionarea blocurilor de parafin se va consemna pe fia de nsoire a
materialului biopsic.

6.6.6 Colorarea lamelor de histopatologie


Colorarea lamelor de histopatologie se face cu aparatul de colorat
Raffaello, IL-AP-06.

Pregtire prob pentru colorare:


- lamele cu seciuni se vor scoate din termostat i vor fi puse n soluia de
deparafinare, ottix plus pentru indepartarea surplusul de parafin, timp
aproximativ 30 minute -1 or, timp n care asistentul pornete aparatul,
verific soluiile din cuve.
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 24/37

- lamele sunt scoase din ottix plus i introduse n dispozitivul de colorat.

Tehnica de colorare automat a lamelor histopatologice


Coloratia uzual hematoxilin - eozin
- soluia de deparafinare ottix plus, timp de 10 de minute pentru fiecare
cuv, avnd rolul de a ndeprta definitiv surplusul de parafin;
- dup expirarea timpului acestea vor trece n cuva de ottix shaper, timp
de 10 minute;
- splarea probelor n ap de robinet, pentru a exclude excesul de soluie,
n vederea pregtii lor pentru urmtorul pas;
- colorare cu hematoxilin, 10 minute;
- splarea probelor n ap de robinet, 5 minute
- colorare cu a doua soluie eozin timp de1minut;
- deshidratare ottix shaper, 1minut; (ndeprtarea apei din esut)
- clarificare soluie ottix plus,10 minute;
- probele sunt scoase din aparat i trasferate n cuvele cu soluie de
clarificare, ottix plus, inute 5-10 minute, urmnd a fi montate;
Rezultate: nuclei-albastru, citoplasma-rou/roz.

Coloraia special Van Gieson


- lamele sunt inute n dou cuve cu soluie de deparafinare ottix plus,
timp de 10 de minute pentru fiecare cuv n parte, pentru ndeprtarea
definitiv a surplusului de parafin;
- dup expirarea timpului acestea vor trece n ottix shaper, timp de 10
minute;
- splarea probelor n ap de robinet, pentru a exclude excesul de soluie,
n vederea pregtii lor pentru urmtorul pas;
- colorare cu soluie VanGieson, timp de 20 minute;
- splarea probelor n apa de robinet, 5 minute;
- a doua coloraie cu picrofuxin, 5-10 minute;
- splarea probelor cu ap de robinet;
- deshidratare ottix shaper, 1minut; (ndeprtarea apei din esuturi)
- clarificare soluie ottix plus,10 minute;
- probele sunt scoase din aparat i trasferate n cuvele cu soluie de
clarificare, ottix plus, inute 5-10 minute, urmnd a fi montate
Rezultate: nuclei-negru, citoplasma-galben, colagen-rou.
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGICA

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 25/37

Coloratia special Periodic Acid Schiff (PAS)


- lamele sunt inute n dou cuve cu soluie de deparafinare ottix plus, timp
de 10 de minute pentru fiecare cuv n parte, pentru ndeprtarea definitiv
a surplusului de parafin;
- dup expirarea timpului acestea vor trece n ottix shaper, timp de 10
minute;
- oxidare cu acid periodic 0,5-1%, timp 5 -10 minute;
- trecere ap distilat;
- reactiv Schiff 5-15 minute;
- splare ap robinet;
- colorare Hematoxilina Mayer 2-5 minute;
- splare ap robinet;
- contrastare in soluie saturat de carbonat de litiu;
- splare ap robinet;
- deshidratare ottix shaper 1minut; (ndeprtarea apei din esuturi)
- clarificare soluie ottix plus,10 minute;
- probele sunt scoase din aparat i trasferate n cuvele cu soluia de
clarificare, ottix plus, 5-10 minute, urmand a fi montate;

Reactiv Schiff- se aduc 100ml ap distilat la fierbere. Se dizolv 0,5 g


fuxin bazic mojarat (diamant fuxin). Se rcete la 50oC i se adaug
10ml acid clorhidric 1N. Se rcete la 25oC i se adaug 0,5g metabisulfit
de natriu sau potasiu. Se etaneaz vasul, se nvelete n hrtie neagr i
se pstreaz 24h la ntuneric (la temperatura camerei sau la frigider la
4oC). A doua zi se adaug 0,5-1 g crbune activ, se agit i se las 2 minute
n repaus. Se filtreaz. Se pstreaz n sticle brune la frigider. Culoarea
reactivului trebuie s fie de la galben pai la incolor. Vasele trebuie s fie
cltite cu ap distilat i perfect uscate; nu se lucreaz n atmosfer de
formol.

Rezultate: nuclei-albastru, polizaharide sau complex de polizaharide-


magenta, membrane bazale-rou.

Coloraia Giemsa
- lamele sunt inute n dou cuve cu soluie de deparafinare, toluen/ottix
plus, timp de 10 de minute, pentru ndepartarea definitiv a surplusului de
parafin;
- dup expirarea timpului acestea vor trece n cuva de hidratare, alcool
absolut, alcool 96 sau ottix shaper, timp de 10 minute;
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 26/37

- splare ap distilat;
- colorare Giemsa (o parte Giemsa+4 prti ap)- 20-30 minute;
- splare n ap distilat n care se pun 7-8 picturi de acid acetic glacial la
100 ml ap distilat;
- difereniere cu alcool 96% (pn preparatul devine roz);
- deshidratate i clarificare n alcool izopropilic;
- clarificare - toluen
- montare
Rezultate: nuclei - violet, citoplasma bazofil-albastru, citoplasma acidofil-
rou, mastocite-violet, Helicobacter pylori- albastru nchis.

Coloraia Perls
- deparafinare toluen/ottix plus
- hidratare alcool absolut, alcool 96, alcool 70/ottix shaper;
- splare ap distilat;
- imersie n soluie - soluie ferocianur de potasiu 2%
- soluie acid clorhidric 2%
(raport soluie 1/1 incubare timp de 30 minute, 56-60 C)
- splare ap distilat -10 minurte;
- supracolorare cu Kenerchtrot-3 minute sau fuxin acid 1%-1 minut sau
rou neutru 1% -5 minute;
- splare ap robinet;
- deshidratare alcool 70, alcool 96, alcool absolut sau ottix shaper;
- clarificare toluen/ottix plus;
- montare
Se prepar extemporaneu 1,5 g ferocianur de potasiu n 75 ml ap
distilat i 48 ml acid clorhidric 1N cu 27 ml ap distilat.
Rezultate - depozite de fier - albastru, nuclei-rou.

Coloraia Ziehl-Nielsen
- deparafinare -imersia frotiului n ap distilat;
- carbolfucsina- 10-20 minute (incalzire la intervale de timp egale pn la
emisia de vapori);
- splare ap robinet;
- tratare cu decolorant acid-alcool 3 minute;
- splare ap robinet;
- contracolorare cu soluie de metilen 1% sau verde lumin 30-60 secunde;
- splare ap robinet;
- deshidratare- alcool 70, alcool 96, alcool absolut sau ottix shaper;
- clarificare- ottix plus, toluen;
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGICA

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 27/37

- montare
Rezultate: bacili alcool rezisteni rou, albastru sau verde.

Coloraia Masson
- deparafinare- toluen/ottix plus;
- ap distilat;
- hematoxilin Weigert 7-10 minute;
- splare n ap i carbonat de litiu -5 secunde;
- ponceau fucsina (2 pri ponceau 1%, 1 parte fuxin acid 1%, 1 parte
acid acetic glacial) - 4 minute;
- splare ap distilat;
- acoperire cu acid fosfomolibdenic 1% - 10 minute;
- anilin orange verde lumina - 5 minute (lama nu se spal nainte);
- splare n ap distilat;
- deshidratare rapid n alcool absolut !%;
- clarificare- toluen/ottix plus;
- montare

Ponceau 1%: Rou Ponceau 1 g n 99 ml ap distilat;


Fucsin acid 1 %: 1 g fucsin acid n 99 ml ap distilat;
Acid fosfomolibdenic 1 %: 1 g acid fosfomolibdenic n 99 ml ap distilat;
Anilin orange: 0,5 g anilina blue, 2 g orange G, 2,5 ml acid acetic glacial,
95 ml ap distilat;
- Verde lumina: 0,1 g verde lumin n 100 ml. acid acetic 1 %.
Rezultate: nucleii-albastru (negru), colagen , mucus-albastru/verde,
citoplasma-rou cramiziu, eritrocite-rou-portocaliu.

Coloratia Gmri
- deparafinare -toluen/ ottix plus;
- hidratare -alcool absolut, alcool 96, alcool 70/ottix shaper;
- splare ap de robinet;
- oxidare cu permanganat de potasiu 1% (se filtreaz);
- splare ap de robinet;
- decolorare rapida cu metabisulfit de natriu sau potasiu 2 %;
- splare ap de robinet;
- mordansare - cu alaun feriamoniacal 2% - 2 minute;
- splare ap de robinet;
- impregnare- cu solutie argento-amoniacala (tollens);
- splare ap distilat 2 bi rapide;
- reducere- formol neutru 10 %;
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 28/37

- ap;
- reducere- cu metabisulfit de natriu/ potasiu 2 %- 1 minut, facultativ;
- ap;
- fixare- tiosulfat de natriu 1 %- 1 minut;
- splare ap robinet;
- deshidratare alcool absolut, alcool 96, alcool 70 sau ottix shaper;
- clarificare- toluen/ ottix plus;
- montare

Soluia extemporaneu argento-amoniacala(tollens): se cntresc 500 mg


AgNO3 + 5 ml ap distilat+1 ml hidroxid de natriu 10 % + soluie amoniac
(picatur cu picatur) pn la dizolvarea complet a precipitatului. Se
dubleaz volumul soluiei cu ap distilat.
Rezultate: fibrele de reticulin - negru-brun

Coloratia Rou de Congo


- deparafinare- toluen/ ottix plus;
- hidratare- alcool absolut, alcool 96, alcool 70/ottix shaper;
- splare ap distilat;
- colorare cu soluie Rou de Congo , 0,5 %- 10 -30 minute;
- splare n ap distilat;
- difereniere n soluie de KOH/NaOH (hidroxid de potasiu sau hidroxid de
sodiu);
- colorare n hematoxilin 2-5 minute;
- splare ap robinet;
- contrastare n soluie suprasaturat de carbonat de litiu;
- splare ap robinet;
- deshidratare alcool 70, alcool 96, alcool absolut/ottix shaper;
- clarificare - toluen/ ottix plus;
- montare biomount.
Solutie Rou de Congo 0,5 %: Rou de Congo n 100 ml alcool etilic 50 %
Rezultate: nuclei- albastru, amiloid-rou crmiziu.

Coloratia Van Gieson elastic


- deparafinare-toluen/ottix plus;
- hidratare - alcool absolut, alcool 96, alcool 70/ottix plus;
- imersie rapid n alcool etilic 96;
- imersie- soluie rezorcin - fucsin (30 minute-1h)
- splare ap distilat;
- difereniere alcool 96;
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGICA

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 29/37

- coloratie van Gieson


Rezultate: fibre elestice-negru, nuclei-negru, colagen-rou, muchi-galben

Coloratia Albastru Alcian


- deparafinare - toluen/ottix plus;
- hidratare - alcool absolut, alcool 96, alcool 70/ottix shaper;
- soluie albastru alcian- 20 minute;
- splare ap robinet;
- contracolorare cu hematoxilin Mayer 2-5 minute;
- splare ap robinet;
- difereniere rapid cu alcool acid clorhidric;
- splare ap robinet;
- deshidratare- alcool 70, alcool 96 alcool absolut sau ottix shaper;
- clarificare- toluen/ottix plus;
- montare.
- Solutie Albastru alcian pH1: albastru alcian 1gr+99 ml ap distilat+acid
clorhidric 1N pn la ph1;
- Soluie albastru alcian PH 2,5: albastru alcian 1g+50 ml alcool etilic
absolut+50 ml ap distilat+acid acetic glacial pn la pH 2,5.
Rezultate: nuclei-albastru, polizaharide acide-albastru.

Coloraiile speciale vor fi consemnate n registrul de coloraii speciale, cod


PG-03/F1g,V.1. Solicitrile kit-urilor pentru coloraiile speciale se vor face
pe cererea de solicitare coloraii speciale, cod PS-AP-01/F3,V.1

Laboratorul i rezerv dreptul de a schimba procedura de colorare n


momentul n care probele finale nu sunt satisfacatoare.

Medicul anatomo-patolog decide teste suplimentare i ctre alte instituii in


cazul n care sectia nu dispune de analizele necesare stabilirii cu precizie a
diagnosticului anatomo-patologic.

Aceste coloratii se folosesc n funcie de natura probei si de obiectivul


urmrit. Alegerea coloraiei speciale este stabilita de medicul anatomo-
patolog.

Solutiile din aparat vor fi schimbate conform, IL-AP-06.


Aparatul va fi curat conform, IL-AP-06;
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 30/37

6.6.7 Montarea lamelor histopatologice


Montarea lamelor histopatologice se face cu hota pentru montat, vezi IL-AP-
07.

Pregtire prob pentru montare lame:


Asistentul care se ocup de probe pregtete urmtoarele:
- pornete hota de montat, conform IL-AP-07;
- aeaz hrtie de filtru pe masa de lucru;
- pregtete materialele de lucru (fei, instrumente); lamelele de diferite
dimensiuni, soluia de montat.

Tehnica de montare a lamelor histopatologice


- se pun lamelele pe hrtia de filtru;
- pe lamele se picur cantitate suficienta de solutie de montat, circa 2-3
picturi;
- se scoate lama cu esut din soluia de clarificare, se scurge excesul de
soluie, fr a usca proba, apoi lama este pus peste lamel ntr-un unghi
de 45, astfel toate bulele de aer i excesul de soluie sunt eliminate. n
cazul n care pe proba de lucru exist bule de aer sau exces de balsam,
acestea sunt ndeprtate cu ajutorul unei ac de disociere, apsnd uor de
sus n jos faa lamelei; se terge cu tifon curat excesul de produs;
- lamele montate se las pe hrtia de filtru la uscat;

Lamele vor fi puse pe tvile de plastic i distribuite medicilor care se ocup


de cazurile respective.
Instrumentarul se cur de soluia de montat; recipientul cu soluia de
montat se pstreaz in dulap; hrtia de filtru si materialele sanitare
contaminate cu soluia de montat sunt puse n recipientul destinat
deeurilor infecioase.

6.6.8 Citirea lamelor histopatologice


Citirea lamelor cu esut se face la Microscop Nikon E 200, conform IL-AP-
08.
Lamele montate mpreun cu fiele de nsoire a materialului biopsic sunt
predate medicului anatomo-patolog pentru elaborarea diagnosticului
histopatologic.
La microscop se folosete la nceput un obiectiv mic (X4 maxim X10)
pentru a evidenia structura de ansamblu a leziunii; Obiectivul mare (X40)
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGICA

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 31/37

este folosit pentru a cuantifica pleomorfismul nuclear i numrul de


mitoze, criterii obligatorii n definirea gradning-ului tumoral.

6.7. Controlul de calitate


Controlul intern are ca scop verificarea etapelor histopatologice ale
analizei privind fixarea, decalcifierea, procesarea, includerea, secionarea,
colorarea precum i a diagnosticul histopatologic pentru a se asigura
gradul de ndeplinire a calittii dorite pentru rezultate emise de laborator.

Controlul intern este gestionat de eful de secie care este responsabil


pentru partea de diagnostic histopatologic i verific o dat la ase luni
pentru fiecare specialitate n parte, diagnosticul emis de medicul
anatomo-patolog din cadrul seciei.

Controlul extern care are ca scop evaluarea performanelor laboratorului i


este gestionat de eful de secie. El const n participarea la programe de
comparare interlaboratoare.

Controlul extern, privind aspectele de diagnostic, presupune primirea


unor lame colorate cu seciuni provenite de la diferii pacieni cu diferite
afeciuni/diagnostice. Lamele sunt nsoite de date clinice. Laboratorul
participant evalueaz lamele n contextul datelor clinice i emite
diagnosticul. Datele obinute sunt expediate la furnizorul schemei de
comparri care le analizeaz i evalueaz performana laboratorului
(evalueaz concordana diagnosticului).

Acest control extern vizeaz examenul histopatologic avnd ca rezultat


diagnosticul anatomopatologic pentru diverse tipuri de patologii (patologia
tubului digestiv, patologia glandei mamare, dermatopatologie etc). Din
analiza rezultatelor la comparri interlaboratoare, laboratorul va stabili
dac perfomana sa n comparaie cu alte laboratoare este acceptabil n
ce privete diagnosticul histopatologic n cazul diferitelor tipuri de
patologii.

6.8.Interferene

Pentru examenul extemporaneu interferenele apar n urmtoarele


cazuri:
- cand esutul trimis este impropriu din punct de vedere tehnic;
- esutul este necrozat sau conine os;
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 32/37

- leziunea este foarte mic existand riscul prejudicierii diagnosticului la


examenul extemporaneu;
- esutul a fost fixat n formol;

Pentru procedura de orientare, interferentele apar n urmtoarele cazuri:


- soluia de fixare este diluat greit;
- piesa nu este fixat n prima jumatate de or astfel apar alterri la nivel
celular i tisular prin blocajul reaciilor enzimatice, astfel includerea i
colorarea nu mai este realizat corespunztor;
- apare autoliza unde celulele i organele se lichefieaz, enzimele proprii
actioneaz asupra celulelor i esuturilor producnd o autodigestie;
- suprafixarea - n cazul pieselor imersate n formol mai mult de 3-7 zile i
are drept consecin formarea excesiv de legturi ncruciate de metilen;
- subfixarea - fixare insuficient se datoreaz unei fixri prea scurte i de
regul, survine atunci cnd se scurteaz prelucrarea histopatologic;
- fixarea n formol netamponat - impune modificarea metodelor de
pretratare.

Pentru procedura de procesare piese operatorii, inerferentele apar n


urmtoarele cazuri:
- deshidratare incorect, concentraiile incorecte ale alcolului etilic nu
extrage apa din esuturi;
- clarificare inadecvat duce la eliminarea defectuoas din esuturi a
alcolului etilic, nemiscibil cu parafina;
- parafina - se aditiveaz cu 5-10% ceara de albine care mbuntaete
consistena blocului, lipsa acesteia duce la un tesut dur, blocurile de
parafin devenind casante, imposibil de secionat. Lipsa hidrocarburilor
alifatice din parafin face imposibil procesarea i includerea pieselor
operatorii.

Pentru procedura de colorare a tesuturilor, interferenele apar atunci


cand nu se respect tehnica de colorare stabilite n laborator. Coloranii
nu sunt schimbai la timp, astfel puterea de ptrundere n esut este mai
slab, microscopic esutul este colorat inadecvat ducnd la confuzia
componentelor importante n diagnosticarea examenului histopatologic.

n cazul montrii probelor, interferenele apar atunci cnd ntre lam i


lamel apare aer, lamelele sunt crpate, murdare; seciunea este zgriat n
timpul manevrrii de montare a lamelei pe lam; lama cu esut este spart
i lipsesc pri importante din fragment; soluia de montare are
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGICA

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 33/37

consistenta groas, nepermind difuzarea soluiei pe ntreaga lam.

6.9. Interval biologic de referin


6.9.1 Tumora benign:
- chisturi (noduli cu lichid);
- lipoame (noduli de celule grase)
- papiloame (dezvoltat din piele sau membrana intern a celulelor);
- hemangiom (ca urmare a creterii excesive a vaselor de snge );
- fibroame (noduli de esuturi fibroase);
- hematom (nodul format de scurgeri de snge n caz de vnti).

6.9.2 Tumori maligne;


- carcinom (tumori care se dezvolt n celule epiteliale);
- sarcom (tumori n esut conjuctiv);
- blastom (tumori care cresc n esut embrionar);
- limfom (noduli limfatici)

6.10 Interpretare clinic de laborator


Diagnosticul anatomopatologic st la baza diagnosticului clinic pe care l
orienteaz n privina tratamentului, a evoluiei i prognosticului bolii care
a necesitat biopsia (fragment mic sau piesa operatorie). Vezi crile de
specialitate.

6.11. Surse poteniale de variaie


- numerotare greit n casetele cu esut;
- consemnri greite n formularul de nregistrare;
- orientare greit (ncurcarea probelor);
- casete cu defeciuni la nchidere (risc de a pierde esutul n timpul
procesrii);
- probe primite necorespunztor;
- probe aduse n alte recipiente greu de manevrat sau altele dect prevede
regulamentul de transport probe;
- piese operatorii de dimeniuni mari aduse n recipiente de dimensiuni
mici;
- pierderea sau distrugerea probelor pe parcursul procedurilor;
- instrumente contaminate cu resturi de esut si necuratee (riscul de a
transporta esut de la o prob la alta)
- fasonarea greit a blocurilor de parafin;
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 34/37

- etalare greit a seciunilor pe lamele de sticl (neconcordana ntre lama


i blocul de parafin);
- lame cu esut i blocuri de parafin pstrate necorespunztor;
- lame transportate neadecvat;
- neconcordane ntre lamele cu esut i fiele de nsoire a materialului
biopsic;
- codificare greit a diagnosticului.
- nregistrri greite a diagnosticului histopatologic.
Factorii care pot influena rezultatul analizei sunt cunoscui i inui sub
control.

6.12. Sigurana, precauii i consideraii privind mediul

Reactivii si probele trebuie manipulate ca fiind potential infectioase avand


nivel II de biosecuritate.
Personalul implicat in efectuarea analizelor trebuie sa tina seama de
urmatoarele aspecte referitoarea la securitate si protectie:
- reactivii utilizati sunt destinati diagnosticului imunohistochimic;
- nu se pipeteaza reactivi sau probe cu gura ;
- se foloseste echipament de protectie (manusi, masti, ochelari de
protectie si halate) in timpul lucrului ;
- se evita contactul reactivilor cu pielea si cu mucoasele;
- nu se mannca, nu se bea si nu se fumeaza in camera de lucru ;
- unii reactivi pot contine azida de sodiu si in caz de contact cu pielea se
spala cu apa si se cere sfatul medicului ;
- se vor citi cu atentie informatiile referitoare la reactivii toxici sau cu risc
biologic specificate in prospectul de lucru al reactivului.
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGICA

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 35/37

7. NREGISTRRI I ANEXE

7.1 Inregistrari
Registrul pentru examenul extemporaneu
Registrul histopatologic
Fisa de insotire a materialului biopsic
Consimtamantul pacientului
Registrul evidenta probe lucrate zilnic
Cerere eliberare lame/blocuri parafina in consult
Registru evidenta lame/blocuri in consult
Buletin de diagnostic histopatologic
Registru coloratii speciale
Cerere solitare coloratii speciale

7.2 Anexe
Anexa 1: Diagrama de flux pentru examenul histopatologic, cod PS-AP-
01/F1.V1
Anexa 2: Consimtamantul pacientului, cod PS-AP-01/F2.V1
Anexa 3: Cerere solicitare coloratii speciale, cod PS-AP-01/F3.V1
Anexa 4: Registru probe procesate , cod PS-AP-01/F4.V1
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 36/37

8. ISTORICUL VERSIUNILOR

Versiune Data Descrierea Nume si prenume/ functia


versiunii modificarii
Elaborat Verificat Aprobat
1 18.01.2016 prima Asistent Sef sectie Manager/ Prof.
aparitie Medical Departament de Univ. Dr.
Principal Anatomie Ctlin Florin
coordonator Patologica - Prof. Crstoiu
Ana Dutu Univ. Dr. Maria
Sajin
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGICA

Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 37/37

LISTA DIFUZARE RETRAGERE

LISTA DIFUZARE RETRAGERE

Cod Vers. Copia Difuzare Retragere


document nr.
Nume Semnatura/ Nume Semnatura/
Prenume/ Prenume/
Functia Data Functia Data

Manager/ Prof.
Univ. Dr.
PS-AP-01 1 1 Ctlin Florin
Crstoiu 18.01.2016
Director
Medical
PS-AP-01 1 2 Dr. Drago
Davioiu 18.01.2016
Sef sectie
Departament
de Anatomie
PS-AP-01 1 3 Patologica -
Prof. Univ. Dr.
Maria Sajin 18.01.2016
PS-AP-01 1 4 RENAR