Laborator Parazitologie

Examenul coproparazitologic
Examenul cuprinde o serie de investigatii care pot pune in evident o serie de paraziti
prin examinarea materiilor fecale. Elementele parazitoare sunt deobicei uniform raspandite in
masa materiei fecale; atat in partea dura a scaunului cat si in portiunea moale.
Datorita peristaltismului intestinal se produce omogenizarea materiilor fecale.
Recoltarea probei se face din orice portiune dar in special din portiunile mucosangvinolente, zonele cu puroi si multe alte elemente patogene.
Recoltarea se face in recipient de plastic, iar proba trebuie dusa in 30 de min la
examinare.
SCAUNUL NU SE AMESTECA CU URINA!!! Pentru ca urina este de cele mai
multe ori acida si distruge elementele parazitare, care sunt de doua feluri:
- forme vegetative ( acestea se distrug prima data)
- chisturile ( forma de rezistenta a parazitului si chiar de inmultire)
In formele cornice de boala sunt necesare mai multe probe, cel putin 3 recoltate, la
interval de timp de 1 zi. Proba pozitiva permite administrarea tratamentului.
Cand nu reusim sa trasmitem proba la laborator se apeleaza la fixarea materialului. Fixarea
are rolul de a prezerva forma si structura elementelor parazitare pentru a fi mai usor
recunoscute si inactivate.
Exista mai multe forme de fixare. Cea mai utilizata si cunoscuta fiind metoda de formol
10% deoarece:
- formolul este usor de preparat
- este utilizat intr-un mare interval de timp ( pana la 2 ani)
- nu interactioneaza cu reactivii
- bun fixator a concentratelor parazitare
- foarte ieftin, econom
EXAMINAREA SCAUNULUI:
MACROSCOPICA , permite 3 lucruri:
- stabilirea consistentei
- aspectului materiei fecale
- o apreciere aproximativa a eventualelor forme biologice parazitare
In scaunele apoase, neformate va fi posibila printr-o examinare interioara evidentierea
formelor vegetative, in timp ce scaunele formate, mai dure pot fi evidentiate eventualele
chisturi.
OOCHIST = Stadiu evolutiv din ciclul sporogonic al parazitilor din genul Plasmodium,
caracterizat printr-o forma-tiune chistica, sferica, refringenta, derivata din zigot si gazduita in
stomacul tantarului anofel. In urma fazei trofice de dezintegrare (cu durata de 12-16 zile), se
formeaza *sporo-zoiti.
HELMINT, helmini, = Nume generic al viermilor parazii.
PROGLT, proglote,= Fiecare dintre segmentele corpului unui vierme inelat,cestod.
Din evidentierea portiunilor sangvinolente se recolteaza probele de laborator
1

Laborator Parazitologie

o Evidentierea unor paraziti intregi sau a unor parti din corpul lor.
1. Oxyuris Vermicularis
2. Diphyllobothrium latum
(Da anemie severa, si determina aparitia bolii Botriocefaloza.)
3. Taenia -soium(prin consum de carne de porc)
-saginata ( consum de carne de vita)

MICROSCOPICA, implica :
Examenul direct de preparare intre lama si lamela
Tehnici de concentrare
Preparate fixate si colorate

1. Examenul direct de preparare intre lama si lamela:

cu ser fiziologic
sau cu solutie Lugol

Cu ser fiziologic, materialele folosite sunt:

clurura de sodiu NaCl 8.5g
apa distilata 1litru
lame
lamele
pipette pasteur

Examenul coproparazitologic pe preparate cu ser fiziologic

Se introduce cele 8,5 grame de clorura de sodium in 100 ml de apa si se grabeste
dizolvarea prin agitare usoara.
Tehnica :
Pe mijlocul unei lame de sticla, de microscopie, se pune o picatura de ser fiziologic.
Cu ajutorul unei baghete se recolteaza din proba fecala mai multe portiuni mici,
fragmentele acestea se amesteca prin miscari circulare in picatura de ser fiziologic pentru
a se obtine un material omogen si lama aceasta se acopera cu o lamela de sticla.
Se examineaza la inceput cu obiectivul de 10, ulterior cu un obiectiv mai mare de 20 sau
de 40. NU se folosesc obiectivele de 90 si de 100 cu lamella de sticla!
Cu ajutorul acestui frotiu pot fi recunoscute ouale helmintilor, chisturile si formele
vegetative ale protozoarelor. O observare atenta uneori pe durata de zeci de secunde
permite evidentierea miscarilor caracteristice amoebelor din genul Entamoeba
histolytica.
Daca lama de examinat si serul fiziologic au fost in prealabil incalzite atunci forma
pseudopodelor este si mai bine evidentiata.
Examenul coproparazitologic pe preparate proaspete cu solutie Lugol (5%)
Materiale necesare:
- iod metalic 5 grame
- iodura de porasiu 10 grame
- apa distilata 100 ml
- lame si lamele
- pipete Pasteur
2

Laborator Parazitologie

Intr-un recipient se pune iodura de potasiu peste care se adauga incet iodul metalic. Pentru a
usura dizolvarea iodului metallic se adauga cateva picaturi de apa distilata. Dupa ce intreaga
cantitate de iod metalic s-a dizolvat se adauga restul de apa distilata pana la 100 ml.
Tehnica:
Pe o lama de microscopie se depunde cu pipeta o picatura de Lugol. Cu ajutorul unei
baghete se recolteaza un mic fragment de materiale fecale. Se disociaza fragmentul cu
picatura de Lugol prin miscari circulare repetate,se acopera cu o lamela. Se examineaza cu
obiective uscate la inceput 10,20 si 40, fara 90 si 100, cu imersie.
Tehnica permite evidentierea unor elemente de structura ale formelor vegetative sau
chistice ale protozoarelor precum si ouale helmintilor dar nu permite evidentierea
eventualelor forme de miscare.
Amidonul nedigereat digerat in roz
Flora iodofila negru
Vacuole iodofile negre
Chisturile parazitolor brun
*Se recomanda ca examenul cu ser fiziologic si cu Lugol sa fie efectuat pe 2 sau 3
lame,materialul fiind recoltat din mai multe puncte ale materialului fecal. Rezultatul obtinut
in urma rezultatului direct, chiar daca sunt identificate eventuale forme parazitare nu au decat
un character provizoriu, orientativ. Sunt necesare tehnici de concentrare mai ales in infectii
usoare, cu un numar mic de paraziti.
TEHNICILE DE CONCENTRARE
Au menirea sa completeze examenul direct in cazul infectiilor usoare. Exista 2 mari tipuri de
tehnici:
1. Tehnica de concentrare prin centrifugare- sedimentare/ sedimentare
2. Tehnici prin flotare
1) Tehnica de concentrare prin sedimentare
Chisturile si oochistii protozoarelor , ouale helmintilor au o greutate specifica mai
mare decat a mediului in care materialele fecale sunt suspensionate, in mediu reprezentat
de apa sau ser fiziologic.Din acest motiv au tendinta de a se depune.
Separarea si depunerea elementelor parazitologice poate fi grabita printr-un tratament
chimic sau printr-o centrifugare usoare astfel inlaturandu-se resturile nedigerate din
materialele fecale.
I.
-

Sedimentarea cu formol 10% si eteri (sau acetat de etilic)

Materiale necesare:
formol 10% ( formalina)
eter sau acetat de etilic
apa distilata
ser fiziologic
solutie Lugol
sita din material textile
tuburi de centrifuga
pipete Pasteur
lame si lamele
3

Laborator Parazitologie

Prepararea solutiei de formol 10%

Se introduce intr-un flaconde 1000ml,100 ml formol si 900 ml apa distilata. Solutia
astefel preparata poate fi folosita pana la 2 ani.
Tehnica de sedimentare
Se recolteaza din mai multe puncte material fecal, o cantitate de forma unei nuci de marime
medie,se omogenizeaza si se suspensioneaza in 10 ml de ser fiziologic. Se filtreaza solutia
obtinuta printr-o sita din material textile intr-un tub de centrifuga cu fund conic.
Se centrifugheaza cu aproximativ 2000 rotatii/ minut.
Supernatantul se decanteaza iar sedimentul se reia in 10 ml de ser fiziologic. Se
centrifugheaza din nou. Aceste spalari se repeat pana cand supernatantul devine limpede.
Dupa ultima spalare sedimentul obtinut se reia in 10 ml de formol 10%, agitam si se lasa
cateva minute sa se depuna.
Adaugam 1-2ml de acetat de etil se inchide tubul si se agita puternic. Se recentrifugheaza
doar cu 1500 rotatii/min timp de 1 min. La sfarsitul centrifugarii in tub vor aparea
urmatoarele 4 straturi:
Cu ajutorul unui varf de pipeta se indeparteaza inelul elementelor nedigerate, se
decanteaza cele 2 straturi ( etil si formol) si ramane sedimentul.
Cu ajutorul unui varf de pipeta se etaleaza pe lame (2-3) din sedimentul obtinut in cate o
picatura de ser fiziologic sau solutie Lugol, se acopera cu o lamella si se examineaza.
! Sedimentarea aceasta poate fi aplicata si in cadrul probelor fixate cu PVA (polivinil alcool).
Lamele cu materialul de examinat trebuie pregatite cel mai tarziu intr-un interval de o ora
pentru a se evita uscarea materialului. Totusi pentru a preveni uscarea se recomanda
adaugarea unor picaturi de formol 10% peste sediment. Pot sa apara erori in rezultatele
obtinute atunci cand nu se foloseste o cantitate corespunzatoare de material fecal, fie prea
putin, fie prea mult.
II.
Sedimentarea cu HCl si eter
Principiul si modul de lucru este asemanator cu cel descris la tehnica de sedimentare cu
formol si eter, in locul solutiei de formol se utilizeaza HCl 90%.
III.
Sedimentarea cu solutie aceto-acetica si eter
Principiul si modul de lucru este asemanator cu cel descris la tehnica de sedimentare cu
formol si eter dar in aceasta tehnica formolul 10% este inlocuit cu o solutie aceto-acetica
preparata din :
- acetat de sodiu cristalizat 15 grame
- acid acetic 3,6 ml
- apa distilata 1000 ml
2) Tehnica de concetrare prin flotare
Principiul de baza la flotare este acela ca chisturile protozoarelor , oualale helmintilor
avand o greutate specifica mai mica pot fi recoltate de la suprafata unui lichid de
suspensie cu o greutate de lichid mai mare.

Laborator Parazitologie

Materiale necesare:
- solutie saturate de NaCl 40%
- recipienti cu deschidere sufficient de mare pentru a primi o lamella de 18/18 mm
- lamele de microscopie si lame
- baghete de sticla
Tehnica de lucru:
Intr-un recipient cu deschidere larga se introduce cateva mici fragmente din bolul fecal,
se adauga o mica cantitate din solutia saturate NaCl, se disociaza bolul fecal cu ajutorul unei
baghete de sticla. Se adauga in continuare solutie de NaCl pana la limita superioara a
recipientului. Cu ajutorul unei pense se depune o lamela de microscopie pe suprafata
lichidului. Depunerea se face cu grija astfel in cat lamella sa nu se scufunde. Dupa 30 de
minute se ridica lamella pastrandu-se paralelismul cu suprafata lichidului si se depunde pe
lama de examinare.
! Metoda aceasta nu este eficienta in depistarea oualor operculate de botriocefaloza.
Depasirea tehnicii de flotare in conditiile in care are loc un proces de evaporare la suprafata
lichidului poate favoriza depunerea cristalelor de clorura de sodium si ingreunarea oualor
,care se vor scufunda, nemaiputand fii recoltate.
TEHNICA AMPRENTEI ANALE
Tehnica este utilizata pentru evidentierea oualor de Enterobius vermicularis sau oxiuris
vermicularis. Pentru ca femele depun ouala in pliurile mucoasei anale,acestea nu pot fi
recoltate prin tehnici uzuale de depistare. Atunci a fost imaginata o tehnica speciala
amprenta anala sau bagheta cu ciolofan.
Materiale necesare:
- o banda adeziva, scoci transparent sau ciolofan
- baghete, eprubete de sticla
- lame,lamele
- ser fiziologic
- ulei de imersie sau glicerina
Unul din capetele baghetei de sticla se acopera pe o distant de 1-2cm cu banda
adeziva/ciolofan. In cel din urma caz acesta trebuie fixat/prins cu un inel de cauciuc pentru
stabilizare.
Bagheta astfel pregatita se introduce intr-o eprubeta de sticla fiind imobilizata cu un dop
de vata.
Se scoate bagheta cu ciolofan sau cu o banda adeziva din eprubeta, se apropie de zona
perianala a pacientului introducand capatul baghetei 1-3 mm in anus. Se roteste usor,fin,
bagheta astfel incat eventualele oua din pliurile mucoasei anale sa fie desprinse sis a adere de
folia de ciolofan. Dupa care se desprinde pelicual de ciolofan de pe bagheta si se depune pe o
lama de microscopie intr-o picatua de ser fiziologic, ulei de imersie sau de glicerina. Se
acopera cu o lamela, se examineaza la microscop cu obiectivul de 10x.
Recoltarea se face dimineata inaintea utilizarii toaletei si prealabil fara a se spala. In urma
unui rezultat pozitiv se recomanda si investigarea celorlalti membrii ai familiei (in special
copii).