VI.

NUCLEOTIDE, NUCLEOZIDE I BAZE PURINICE I

PIRIMIDINICE

Nucleotidele constituie elementele monomere ale acizilor nucleici aa

cum aminoacizii sunt elementele constitutive din macromoleculele proteice.
n acest capitol vom urmri structura i proprietile nucleotidelor, care nu
sunt numai elemente constitutive ale acizilor nucleici, dar au i funcii n
metabolismul intermediar.

VI.1. STRUCTURA NUCLEOTIDELOR

Unitile monomere ale ADN se numesc dezoxiribonucleotide, iar

cele din ARN se numesc ribonucleotide. Un nucleotid conine trei grupri
caracteristice dup cum urmeaz:
- o baz heterociclic azotat, care este un derivat purinic sau
pirimidinic;
- o pentoz (riboza sau dezoxiriboza)
- o molecul de acid fosforic.
-
OH OH
baza baza
HO-P-O-CH2 O HO-P-O-CH2 O
O O

OH OH OH
ribonucleozid-5'-fosfat desoxiribonucleozid-5'fosfat
Componentele majore ale acizilor dezoxiribonucleici sunt patru
dezoxiribonucleotide ce se deosebesc ntre ele doar prin baza azotat care le
d i numele. Cele patru baze caracteristice pentru dezoxiribonucleotide din

73
ADN sunt derivaii purinici adenina i guanina i bazele pirimidinice citozina
i timina. n mod asemntor n structura ribonucleotidelor intr patru baze
dintre care dou purinice adenina i guanina i bazele pirimidinice citozina i
uracilul. Timina, sau 5-metiluracilul se gsete n ADN i de obicei nu n
ARN, n timp ce uracilul este prezent doar n ARNm i foarte rar n ADN. n
afara lor s-au mai gsit i alte baze azotate ale acidului ribonucleic, ns n
cantitate mult mai mic dect primele. Punerea n eviden ale acestora a
ntmpinat, uneori, anumite dificulti. Dintre purine s-au descoperit, n
anumite cazuri, prezena 1-metil-adfeninei (Dunn, 1961), a 2-metil-adeninei,
a 6-dimetilaminopurinei (Littlefeld i Dunn, 1958), precum i derivai ai
guaninei: 1-metil.guanina, 6-hidroxi-2-metilaminopurina (Smith i Dunn,
1959).
Alturi de cele dou pirimidine de mai sus s-au putut identifica, n
unele hidrolizate ale acizilor ribonucleici, 5-metil-citozina (Amos i Korn,
1958).

NH2
OH
N N N N N N

N N N N H2N N N
H H H
purina adenina guanina

OH OH NH2
CH3
N N N N

N HO N HO N HO N
pirimidina uracil timina citozina

ntruct primele patru componente, i anume adenina, guanina,

citozina i uracilul, se gsesc ntotdeauna n hidrolizatele de ARN, ele sunt
considerate ca baze azotate principale, n timp ce derivaii lor, care se
ntlnesc n mod sporadic i totodat n cantiti mici, sunt denumite baze
azotate rare de ARN.
Prin ndeprtarea nucleului fosfat din nucleotid se obine o
nucleozid. Aadar nucleotidele sunt 5-fosfaii nucleozidelor

74
corespunztoare. Vom vedea mai departe c esterificarea se poate realiza i
cu dou sau cu trei resturi de acid fosforic i de aici vine prefixul mono .
O alt diferen ntre compoziia celor dou feluri de acizi nucleici
este dat de natura pentozei din structura acizilor. Dezoxiribonucleotidele
conin 2-dezoxi-D-riboza n timp ce ribonucleotidele conin D-riboz.
Ambele riboze se afl n structura nucleotidelor sub form furanozic.
Pentoza se leag de baza azotat printr-o legtur -N-glicozil ntre atomul
de carbon numrul 1 al pentozei i atomul de azot numrul 9 al bazelor
purinice, respectiv cu atomul de azot numrul 1 al bazelor pirimidinice.
Gruparea fosfat a nucleotidelor este esterificat cu gruparea hidroxil de la
atomul de carbon 5 din molecula pentozei.
Vom examina proprietile componentelor nucleotidelor, ncepnd cu
bazele azotate, deoarece ele confer nucleotidelor individualitatea.
Combinaiile de la care deriv cele dou baze azotate din nucleotide sunt
combinaiile heterociclice purina i pirimidina, care au un pronunat caracter
aromatic. Purina nsi poate fi considerat ca derivat al pirimidinei, fiind
format dintr-un ciclu pirimidinic condensat cu un ciclu imidazolic. Bazele
azotate majore din nucleotide sunt trei derivai pirimidinici i doi derivai
purinici aa cum am artat mai sus.
Pirimidinele sunt molecule plane iar purinele sunt molecule aproape
plane, cu o foarte uoar deviaie. Eseniale pentru funciile biologice ale
acizilor nucleici sunt nu numai dimensiunile bazelor dar i capacitatea
acestora de a forma legturi de hidrogen. Gruprile funcionale care
formeaz legturi de hidrogen sunt gruprile amino din adenin, guanin i
citozin, gruprile -NH- din poziia 1 din ciclul adeninei i guaninei i din
poziia 3 a ciclului pirimidinic, atomii de oxigen puternic electronegativi din
poziia 2 a citozinei, poziia 4 a timinei i uracilului i poziia 6 a guaninei.
Bazele pirimidinice i purinice libere sunt aproape insolubile n ap.
Ele sunt compui slab bazici, care pot exista n dou sau mai multe forme
tautomere, n funcie de pH. Uracilul, de exemplu, exist n forma lactam i
lactim; la pH 7 predomin forma lactam. i celelalte baze purinice sau
pirimidinice prezint tautomerie, iar la pH 7 predomin forma lactamic.
Toate aceste forme sunt responsabile de formarea legturilor de hidrogen
dintre bazele din moleculele de ADN nativ.
Pe lng bazele obinuite, n acizii nucleici se mai gsesc, n cantiti
mici, i ali numeroi derivai purinici sau pirimidinici, aa numitele baze rare
sau minore. Printre pirimidinele rare sunt 5-metilcitozina i 5-
hidroximetilcitozina; dintre purinele rare amintim 6-metiladenina i 2-
metilguanina.

75
 O OH OH

HN HN N

O N O N HO N
H

Dou purine mai puin importante:

NHCH3 OH

N N N N

N
N H3CHN N N
H H
N-metiladenina N-metilguanina

Dou pirimidine mai puin importante:

NH2 NH2
CH3 CH2OH
N N

O N O N
H H
5-metilcitozina 5-hidroximetilcitozina

Toate bazele purinice i pirimidinice din acizii nucleici absorb puternic

n ultraviolet, n regiunea 250 - 280 nm. Aceast proprietate este foarte
important n detectarea i analiza cantitativ a bazelor libere, precum i a
nucleotidelor i a nucleozidelor. Bazele purinice i pirimidinice se separ uor
prin metode cromatografice sau electroforetice

VI.2. NUCLEOZIDE

Denumirea de nucleozide a fost atribuit de Levene i Iaccobs (1909)

derivailor obinui din hidrolizatele de ARN de drojdie, care erau constituii
dintr-o baz purinic i un hidrat de carbon .

76
 Exist dou serii de nucleozide: ribonucleozidele care conin ca i
grupare glucidic D-riboza i dezoxiribonucleozidele, care conin 2-dezoxi-
D-riboz. Ca i purinele i ca pirimidinele nucleozidele se gsesc n celule n
cantiti infime ca i produi de hidroliz enzimatic a nucleotidelor.
Nucleozidele sunt mult mai solubile n ap dect bazele corespunztoare. Ca
i glicozidele nucleozidele sunt relativ stabili n alcalii. Nucleozidele purinice
sunt hidrolizate destul de uor de ctre acizi, formnd baze libere i pentoze.
Nucleozidele pirimidinice sunt rezistente la hidroliza acid. Ambele tipuri de
nucleozide sunt hidrolizate specific de ctre nucleozidaze.
n afar de acetia, din ARN de diferite origini s-au mai izolat
nucleozidele corespunztoare bazelor rare, denumite pentru acest motiv
nucleozide rare sau minore.

NH2 NH2

N N N N

N N N N
HOH2C O HOH2C O

OH OH OH
adenozina 2'-desoxiadenozina

VI.3. NUCLEOTIDE

Ribonucleotidele i dezoxiribonucleotidele libere se gsesc n celule n

cantiti nsemnate i sunt esteri fosforici ai nucleozidelor. Termenul de
nucleotid a fost propus pentru prima dat de Levene i Mandel (1908),
pentru a numi compuii izolai din hidrolizatele acide de ale acidului nucleic
din timus. Din produii de hidroliz a acidului ribonucleic, Levene i Harris
(1932) au separat patru nucleotide: adenozin-3-fosfatul, guanizin-3-
fosfatul, citidin-3-fosfatul i uridin-3-fosfatul.
Gruprile lor fosforice sunt relativ puternice: la pH=7 nucleotidele se
gsesc n special sub form ionizat N-O-PO3-2 unde N este nucleozid. Dat
fiind prezena bazei pirimidinice sau purinice, toate nucleotidele absorb

77
puternic n ultraviolet n regiunea 250 - 280 nm, ceea ce este foarte util n
analiza cantitativ. Nucleotidele se separ i se determin uor prin
cromatografie cu schimb ionic.
Carter i Cohn (1949), Cohn (1950), precum i ali cercettori au
dovedit c, n urma hidrolizei alcaline a acidului ribonucleic, se obine un
amestec de 2 i 3 nucleotide izomere, corespunztoare celor patru baze
azotate principale. n ceea ce privete nucleozidele fosforilate n poziia 5, ei
pot fi obinui cel mai bine prin intermediul hidrolizei acidului ribonucleic
efectuat cu fosfodiesteraza din veninul de arpe.
Nucleotidele i nucleozidele conin dou cicluri aproape plane, cel al
bazei i a ribofuranozei. n conformaia cea mai stabil, cele dou cicluri a
unei nucleotide nu sunt coplanare ci aproape perpendiculare unul pe cellalt.

VI.3.1. Nucleozid 5-difosfai i 5-trifosfai

Toate ribonucleozidele i dezoxiribonucleozidele obinuite exist n

celule nu numai ca 5-monofosfai, ci ca 5-difosfai i 5-trifosfai, adic
esteri 5-pirofosforici i 5-trifosforici ai nucleozidelor.
Astfel avem trei serii de nucleozide 5-fosforilate; n cazul adenozinei,
ele sunt: adenozin monofosfat (AMP), adenozin difosfat (ADP) i adenozin
trifosfat (ATP). Gruprile fosfat a acestor compui sunt notate cu , i .
Acizii nucleici difosforici i trifosforici, notai cu NDP, respectiv NTP, sunt
acizi relativ tari i elibereaz din gruprile fosfat condensate trei i respectiv
patru protoni. Gruprile fosfat condensate din NDP i NTP formeaz
compleci cu cationii bivaleni, Mg+2 i Ca+2. Datorit concentraiei relativ
mari de Mg+2 din citoplasm, nucleozid difosfaii i trifosfaii exist n celule
intacte ndeosebi sub form de compleci cu magneziu. Gruparea fosfat
terminal din NDP i NTP poate fi ndeprtat selectiv cu ajutorul unor
enzime specifice, fr a desface alte legturi. Mai mult, gruprile i fosfat
din NTP i gruparea -fosfat din NDP sunt hidrolizate cu formare de acid
fosforic prin nclzire la fierbere n HCl 1N, 7 minute; gruparea -fosfat din
NMP este stabil n aceste condiii. Aceast diferen permite determinarea
sumei NTP + NDP aflat n amestec cu NMP, ndeosebi sub form de
compleci cu magneziu. Gruparea fosfat terminal din NDP i NTP poate fi
ndeprtat selectiv cu ajutorul unor enzime specifice, fr a desface alte
legturi.

78
 baza OH OH OH
CH2-O-P-O-P-O-P-OH
O O O

OH OH
NMP
NDP
NTP

Tabel nr. VI.1.Prescurtri pentru ribonucleozidfosfai

Baz Mono- Di- Tri-
adenin AMP ADP ATP
guanin GMP GDP GTP
citozin CMP CDP CTP
uracil UMP UDP UTP

Tabel nr. VI.2.Prescurtri pentru dezoxinucleozidfosfai.

Baz Mono- Di- Tri-
adenin dAMP DADP dATP
guanin dGMP DGDP dGTP
citozin dCMP DCDP dCTP
timin dTMP DTDP dTMP

NTP au o serie de funcii foarte importante. ATP este un transportor

de fosfat i pirofosfat n cteva reacii enzimatice implicate n transferul
energiei chimice. ADP rezultat prin defosforilarea ATP este refosforilat la
ATP n procesul de respiraie. Sistemul ADP - ATP este sistemul principal
pentru transferul grupei fosfat n celul, dar i celelalte NTP, i anume: GTP,
UTP i CTP au rol de a canaliza energia chimic pe anumite ci biosintetice
specifice.

79
 CH2OH O
O
H N
OH
HO O O O
N
HO O-P-O-P-O-CH
2
O
- -
O O

OH OH
uridindifosfatglucoza (UDPG)

NH2

N
O O O
N
+(CH ) N-CH -CH -O-P-O-P-O-CH
3 3 2 2 2
O
O- O-

OH OH
citidindifosfatcolina

A doua funcie major a NTP i NDP este cea de transportori

energizani tip coenzim ai unor anumite elemente constitutive. De exemplu
uridindifosfatul (UDP) este un transportor specific pentru glucide n procesul
de biosintez a polizaharidelor; uridindifosfat glucoza este donor specific de
glucoz n biosinteza enzimatic a glicogenului. n mod asemntor,
citidindifosfat colina este donorul de fosfocolin n biosinteza enzimatic a
fosfogliceridelor care conin colin.
A treia funcie major a NTP i dNTP este aceea de precursori bogai
n energie a nucleotidelor n biosinteza enzimatic a AND i ARN. n acest
proces, NTP i dNTP i pierd gruprile pirofosfat terminale, transformndu-
se n resturi de nucleozid monofosfai, elemente constitutive ale acizilor
nucleici. n toate cele trei funcii ale NTP i dNTP, energia chimic a
legturilor fosfat i este folosit pentru formarea unor legturi covalente
noi.

80
 VI.3.2. Alte nucleotide

Pe lng nucleozidfosfaii descrii mai sus, n natur mai exist i

nucleotide avnd gruprile fosfat n alte poziii. Ribonucleozid-23-ciclic-
fosfaii sunt intermediari, iar ribonucleozid-3-fosfaii sunt produi finali ai
hidrolizei unor anumite legturi ribonucleotidice din ARN sub aciunea
ribonucleazelor.
Se admite c cei doi izomeri: nucleozid-2 i 3-fosfai pui n
eviden n urma hidrolizei alcaline a acidului ribonucleic iau natere dintr-un
intermediar comun ciclic. n soluie alcalin, izomerii 2 i 3 sunt stabili, n
timp ce n soluie acid ei sufer un proces de interconversiune, fapt care a
determinat ca n primele lucrri s nu se poat stabili exact poziia gruprii
fosfat.

adenina adenina
HO-CH2 HO-CH2
O O

OH O O O
P
O=P-OH
O OH
OH acid adenozin-2',3'-fosforic
acid adenozin-2'-fosforic ciclic

Dou nucleotide foarte importante au un rol cheie n aciunea

biochimic a unor hormoni: adenozin 35-ciclic-fosfatul (prescurtat AMP
ciclic sau AMPc) i guanizin 35-ciclic-fosfatul (GMP ciclic sau GMPc).
AMP ciclic se formeaz, n celule eucariote, din ATP, prin aciunea unei
enzime din membrana celular, adenilat ciclaz, stimulat de anumii
hormoni adui pe calea sangvin. AMP ciclic este denumit i al doilea
mesager, ntruct el transmite i amplific n celul semnalele chimice
transmise pe calea sngelui de ctre hormoni, primii mesageri. Alte dou
nucleotide, care particip la reglarea transcripiei genelor sunt guanizin 5-
difosfat 3-difosfat (prescurtat ppGpp) i guanizin 5trifosfat 3difosfat
(pppGpp).
Un rol important n procesele metabolice de introducere a gruprilor
metil l joac metionina activat sub form de S-adenozil-metionin sau
SAM.

81
 NH2

N N

N N
+
HOOC-CH-CH2-CH2-S-CH2
H3C H
NH2 H
H H
OH OH

82