UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE GR. T.

POPA

FACULTATEA DE MEDICIN DENTAR

DISCIPLINA: CARIOLOGIE I ODONTOTERAPIE RESTAURATOARE

NANOCARRIER-I POLIMERICI PENTRU

ADEZIUNEA LA DENTIN
Polymer Nanocarriers for Dentin Adhesion
R. Osorio, E. Osorio, A.L. Medina-Castillo and M. Toledano, J Dent Res
93(12):1258-1263, 2014.

Articol tradus de studentul ENOAIE MARIUS

Disciplina: Cariologie i Odontoterapie Restauratoare

Conductor departament: Prof. Univ. Dr. SORIN ANDRIAN

IAI - 2015
Rezumat

Pentru a obine o adeziune mai durabil la dentin i pentru a proteja mpotriva degradrii
fibrele de colagen din matricea dentinar, au fost ncorporate n sistemul adeziv dentar particule
cu eliberare de calciu i fosfat. Scopul studiului a fost de a ncorpora nanocarrier-i polimerici
ncrcai cu zinc ntr-un sistem adeziv dentar pentru a facilita inhibiia metaloproteinazelor
matriceale (MMPs) care sunt strns legate de degradarea colagenului i de a asigura ioni de
calciu n vederea depunerii de minerale la interfaa dentin-rin de adeziune. Nanoparticule
active de PolymP-n (nanoMyP) au fost ncrcate cu zinc prin intermediul imersiei n ZnCl2 timp
de 30 de minute i apoi a fost testat bioactivitatea prin imersia timp de 7 zile ntr-o soluie fluid
ce simula saliva (the Kokubo test). ncrcarea cu zinc i depunerea de fosfat de calciu a fost
examinat prin microscopia electronic de scanare i de transmisie, prin analiz a elementelor i
prin difracie cu raze x. apoi, au fost infiltrate nanoparticule prezente n soluie de etanol ntr-un
acid fosforic folosit pentru condiionarea dentinei umane i apoi a fost aplicat adezivul Single
Bond (3M/ESPE) pentru a determina n ce fel nanoparticulele interfer cu adeziunea. Batoane
dezlipite (debonded) au fost analizate prin microscopie electronic de scanare. S-a efectuat apoi
o testare a degradrii colagenului pe dentin infiltrat cu rin cu i fr nanoparticule prin
msurarea concentraiei telopeptidului C terminal (lanuri terminale carboxi- de colagen, CTX,
care acioneaz ca biomarkeri ai turn-overului) din colagenul de tip I (ICTP) dup 4 sptmni
de imersie n saliv artificial. Datele numerice au fost analizate prin calcularea varianei
(ANOVA) i testele multiple de comparaie Student-Newman-Keuls (p<0.05). Nanoparticulele
au fost efectiv ncorporate i s-a dovedit a avea un real efect de reinere, de legare a calciului
indiferent de ncrcarea zincului. Nanoparticulele nu au reuit s se infiltreze n dentina
intertubular demineralizat i au rmas la interfaa stratului hibrid cu dentina, fr s altereze
rezistena adeziunii. Ioni de calciul i fosfor au fost gsii acoperind nanoparticulele la nivelul
stratului hibrid dup 24 de ore. Aplicarea nanoparticulelor n dentina condiionat a redus
degradarea colagenului mediat de metaloproteinaze. Nanoparticulele testate pot fi ncorporate n
sistemele adezive dentare pentru a furniza un mediu adecvat n care degradarea colagenului de
ctre metaloproteinaze este inhibat i n care poate s apar creterea depunerii de minerale.

Cuvinte cheie: remineralizare, zinc, nanopolimeri, strat hibrid, adezivi dentari

INTRODUCERE

Ultima int n conceperea adezivilor dentari este de a asigura adeziune de durat la

dentin i de a proteja mpotriva degradrii reeaua de fibre de colagen rarefiate n urma
condiionrii acide. Re-ncorporarea de minerale n matricea dentinar demineralizat este
important din moment ce mineralele precipitate pot aciona ca un sit pentru o ulterioar
mineralizare, cristalizare i din moment ce esuturile remineralizate pot fi mai rezistente la
degradare (Liu i alii, 2011a).

Pentru a favoriza schimbul de ioni i precipitarea de minerale n interiorul stratului hibrid

au fost ncorporate n sistemele adezive dentare diferite particule: sticla bioactiv, ciment
Portland sau fosfat de calciu amorf (Osorio i alii, 2012; Profeta, 2014). Dar, pentru c
mineralele elueaz (proces de dizolvare i separare) din rini, se produce o scdere a
proprietilor mecanice i a rezistenei legturii n timp (Sauro i alii, 2013a, b). Nanosfere
bioactive ceramice, cum ar fi hidroxiapatita (HAp), au fost de asemenea propuse ca i filleri ai
rinilor (Besinis i alii, 2014), dar acestea nu posed capacitate de eliberare controlat i o
cinetic optim de degradare (Wu i alii, 2011). S-a raportat faptul c zincul acioneaz ca un
inhibitor al metaloproteinazelor matriceale (Osorio i alii, 2011) i c stimuleaz mineralizarea
esuturilor dure (Hoppe i alii, 2011; Lynch i alii, 2011).

O strategie alternativ n cadrul biomaterialelor este aceea de a utiliza particule

polimerice ca i materiale-depozit de calciu i fosfat (ex. particule de polimer carboxilate care
leag calciu). Aceti polimeri pot de asemenea s acioneze ca i carrier-i (purttori) ai altor
factori biologici implicai n managementul mineralizrii tisulare permind o rat de eliberare
controlat a ionilor (Leonor i alii, 2009; Wu i alii, 2011; Musyanovych i Landfester, 2014).

Scopul acestui studiu a fost s ncorporeze nanocarrier-i polimerici ncrcai cu zinc ntr-
un sistem adeziv dentar fr s afecteze rezistena legturii, s verifice dac zincul poate fi
eliberat n vederea inhibrii metaloproteinazelor matriceale care au legtur cu degradarea
colagenului i s observe dac favorizeaz schimburile de ioni n vederea precipitrii minerale la
nivelul stratului hibrid. Ipoteza nul care s-a testat a fost aceasta: (1) sferele polimerice nu sunt
bioactive (capabile s formeze un strat bogat n fosfat de calciu dup imersia ntr-o soluie
similar salivei) indiferent de ncrcarea de zinc; (2) ncorporarea de nanosfere n sistemele
adezive dentare nu afecteaz rezistena adeziunii la dentin; i (3) nanocarrierii ncrcai cu zinc
ncorporai n sistemele adezive nu inhib metaloproteinazele matriceale care au legtur cu
degradarea colagenului.

MATERIALE I METOD

Nanoparticulele active de polimerP-n (PolymP-n Active nanoparticles) au fost

achiziionate de la NanoMyP (Granada, Spain). Particulele au fost fabricate prin precipitarea
polimerizrii. Nanoparticulele au fost compuse din 2-hidroxietil metacrilat ca i schelet
monomer, din etilen glicol dimetacrilat ca i agent de reticulare i din acid metacrilic ca i
monomer funcional.

ncrcarea cu zinc i testul de bioactivitate

Din moment ce este dificil a examina suprafaa mineralizat la nivel de detalii

nanometrice, au fost incluse (doar n aceast parte a studiului!) microparticule cu aceeai
compoziie (PolymP- Active de la nanoMyP). Pentru ncrcarea cu zinc, 100 mg de particule au
fost incubate la temperatura camerei pentru 3 ore sub agitare uoar n 20 de ml de soluie de
ZnCl2 0.1 (w/w%) (pH 7,5), centrifugate, splate cu 20 ml de ap distilat i uscate ntr-un cuptor
cu vid la temperatur constant de 400 C. Micro i nanosfere cu i fr ncrctur de zinc au fost
scufundate n 20 de ml de soluie care simula saliva (substane prezente n 1000 de ml de saliv
artificial: 8.035 g de NaCl, 0.355 g de NaHCO3, 0.225 g de KCl, 0.231 g de K2HPO43H2O,
0.311 g de MgCl26H2O, 39 g de 1M HCl, 0.292 g de CaCl2, 0.072 g de Na2SO4, 118 g de Tris,
de la 0 la 5 mL de 1M HCl pentru ajustarea pH final de 7.45) n baloane de sticl sterile pentru 7
zile (Leonor i alii, 2009). Dup ce au fost scufundate n tot acest timp, suprafeele polimerice
au fost analizate la rezoluie nalt cu ajutorul microscopiei de scanare (SEM) (GEMINI, Carl
Zeiss SMT, Jena, Germania) la 3 Kv i la 4-pn la 5 mm distan de lucru. Nanosferele au fost
apoi examinate la microscopul electronic de transmisie (TEM) (LIBRA 120 PLUS, Carl Zeiss
SMT). Ambele microscoape au fost ataate sitemele de analiz energetic dispersiv (EDX)
(Inca 300 i 350, Oxford Instruments, Oxford, UK). Pentru a testa depozitele minerale amorfe
am fcut analiza prin difracie cu raze x a nanoparticulelor (Bruker D8 Advance, XRD Bruker
Corporation, Viena, Austria); condiiile au fost radiaii CuK ntr-o gam 2 Theta de la 00 la 600 .
Toate testele au fost efectuate de 3 ori.

Determinarea concentraiei telopeptidului C terminal din colagenul de tip I (ICTP)

Treizeci de molari 3 umani ne-erupi au fost extrai cu acordul i consimmntul

informat al donatorilor dup un protocol aprobat de Institutional Review Board. Au fost obinute
4 probe de dentin (0.75mm x 0.75mm x 5.0mm) din fiecare molar aa cum este descris i n
Osorio i alii (2012). Aceste probe au fost demineralizate apoi cu acid fosforic 10% (pH 1.0)
(Panreac Quimica, Barcelona, Spania) timp de 12 ore la 250 C. Probele de dentin demineralizat
au fost cltite n ap neionizat sub continu agitare la 40 C timp de 72 de ore. Probele de dentin
au fost distribuite n grupuri dup cum urmeaz: (1) far infiltrare cu rin; (2) infiltrare cu
Single Bond (3M ESPE, St. Paul, MN, USA) (SB); (3) infiltrare cu nanoparticule urmat de
Single Bond i (4) infiltrare cu nanoparticule ncrcate cu zinc urmat Single Bond. Pentru
infiltrarea cu nanoparticule probele de dentin au fost imersate ntr-o suspensie de etanol care
coninea nanoparticule (densitate: 32mg/mL) timp de 30 de secunde. Pentru infiltrarea cu rin,
probele au fost imersate n diferitele combinaii de rini timp de 12 ore sub agitare.
Demineralizarea i imersia n rin s-au efectuat la 250 C, pe ntuneric. Probele au fost apoi
iradiate n diferite poziii timp de 40 de secunde pn cnd ntreaga suprafa era expus. Lampa
a emis lumin 600mW/cm2. Dou probe de dentin din acelai grup au fost plasate n tuburi
Eppendorf care conineau saliv artificial. Probele de dentin au fost incubate n 500 L de
saliv artificial la 370 C. Dup 4 sptmni probe de cte 100 L de saliv au fost prelevate i s-
a analizat gradul de eliberare al produilor de degradare a colagenului (telopeptidul C terminal
din colagenul tip I) printr-un kit de radio-imuno-analiz (ICTP-RIA Cat. No. 68601, Orion
Diagnostica Oy, FI-02101 Espoo, Finlanda) (Osorio i alii 2012).

Rezistena adeziunii la microtraciune

Cinsprezece dini umani (molari 3) au fost secionai orizontal la nivelul jonciunii smal-
dentin i aplatizai (180 piese). Suprafeele de dentin au fost tratate dup instruciunile
productorului (condiionare cu acid fosforic, splare i uscare). nainte de a fi aplicat rina
Single Bond, o suspensie de etanol nanoparticule simple sau nanoparticule ncrcate cu zinc sau
doar etanol simplu a fost aplicat (30 sec) n fiecare dintre cele 3 grupuri diferite. Etanolul s-a
evaporate uor dup 30 de secunde i n final a fost aplicat rina Single Bond. Apoi, peste
aceste probe s-a fcut o construcie ccompozit (Tetric EvoCeram, Ivoclar-Vivadent, Schaan,
Liechtenstein). Specimenele obinute au fost apoi stocate n ap deionizat la 370 C timp de 24
de ore. Apoi, specimenele au fost secionate n 10 batoane (suprafa de 1 mm2) i s-au ataat la
un aparat modificat Bencor Multi-T testing (Danville Engineering Co., Danville, CA, USA) i s-
a testat rezistena la tensiune la un dispozitiv universal (Instron 4411; Instron Corporation,
Canton, MA, USA) la o vitez de 0,5 mm/min. Specimenele fracturate au fost examinate apoi cu
un stereomicroscop (Olympus SZ-CTV; Olympus, Tokyo, Japonia) la o magnificare 40X pentru
a determina modul de eec. Aceste probe au fost observate i la microscopul electronic de
scanare i apoi s-a fcut analiza energetic dispersiv (energy-dispersive analysis EDX).

Analiza statistic

Concentraiile telopeptidului C terminal din colagenul de tip I (ICTP) i valorile

rezistenei la microtraciune a adeziunii au fost analizate statistic prin analiza varianei
(ANOVA) i comparaia multipl Student-Newman-Keuls (p<0.05).

REZULTATE

ncrcarea cu particule de zinc i testul de bioactivitate

Imaginile de microscopie electronic de scanare i de transmisie (SEM i TEM) sunt

prezentate n figurile 1 i 2. Microparticulele au fost de aproximativ 2.5 m n diametru.
Nanoparticulele au fost de 350 nm n diametru i nu s-au adunat ntr-un loc mai multe.
Particulele au fost sferice (Fig. 1). Cteva structuri concentrice mai dense de subsuprafa au fost
gsite n cazul microparticolelor (Fig. 1b). n cazul nanoparticulelor nu s-a descoperit nici o urm
de elemente minerale de ctre microscopia de scanare sau de ctre analiza energetic dispersiv.
(SEM/EDX). S-a gsit calciu la SEM/EDX pe suprafaa microparticulelor dup imersia n saliva
artificial indiferent de ncrcarea cu zinc (Fig 1g, 1h). Aceste depozite au fost evideniate ca i
conglomerate rotunde uniform distribuite pe suprafaa microparticulelor. Microparticulele au
pierdut configuraia lor rotund dup ce a avut loc depunerea pe suprafa a depozitelor (Fig. 1g).
Nu au fost evideniate urme de zinc prin EDX/SEM. Analiza elementelor prin microscopie de
transmisie a fost realizat doar pentru cazurile cu nanoparticule i a confirmat efectiva adsorbie
a zincului (Fig. 2b). Ca2+ a fost identificat n cazurile cu nanoparticule care erau ncrcate cu
zinc, nainte de imersia n soluia salivar artificial (Fig. 2b). Calciul a fost detectat i de ctre
EDX/TEM n nanoparticule dup imersia n saliv artificial, indifferent de ncrcarea cu zinc
(Fig. 2c i 2d). Formarea de nanocristale a fost ntlnit n particulele fr zinc dup imersia n
saliv artificial (Fig. 2c). Modelele de analiz prin difracie cu raze x ale nanoparticulelor sunt
prezentate n figura 3c. Compoziia amorf este evideniabil n toate cazurile. Semne ale iniierii
formrii de cristale (vrfuri mici la 110 i 320) au fost observate doar n cazul nanoparticulelor
ncrcate cu zinc, dup imersia n saliv artificial.
Fig. 1. Microscopie electronic de scanare (SEM) imagini ale nanoparticulelor i ale microparticulelor; (a) Nanoparticule
naintea imersrii n saliv artificial au fost aproximativ de 350 nm n diametru, care nu se aglomereaz; (b)
microparticule naintea imersrii n saliv artificial au fost de 2.5g n diametru; au fost gsite structuri de subsuprafa
mai dense, concentrice; (c) nanoparticule dup imersia n 0.1 w/w% Zn Cl 2 pentru 3 ore (d) microparticule dup imersia n
0.1 w/w% Zn Cl2 pentru 3 ore (e) nanoparticule dup imersia n saliv artificial timp de 7 zile (f) nanoparticule ncrcate
cu zinc dup 7 zile de imersie n saliv artificial; depozite punctiforme au fost distribuite de-a lungul suprafeelor
nanoparticulelor (g) microparticule dup imersia n saliv artificial timp de 7 zile; microparticulele arat o compoziie
heterogenic cu reflecia unui electron central i cretere a desitii n jurul su; s-a ntlnit i o distribuie rotund, regulat
a conglomeratelor minerale (h) microparticule ncrcate cu zinc dup imersia n saliv artificial timp de 7 zile; s-au
dezvoltat depozite punctiforme de calciu uniform distribuite de-a lungul suprafeelor particulelor i alte formaiuni care au
dat natere unor linii poligonale; particulele au pierdut morfologia lor regular; calciul a fost identificat cnd spectrul n
cadrul analizei energetice dispersive a fost luat de la aglomerrile minerale dimprejur (Ep1a) i calciul nu era prezent n
aceste regiuni (Ep1b); Al i Mg la spectrul de la analiza dispersiv energetic au fost elemente contaminante.
Fig. 2 Imagini de microscopie electronic de transmisie (TEM) ale nanoparticulelor; obiectele circulare luminoase din
interiorul nanoparticulelor au fost artefacte din timpul transmisiei electronilor; Ni, Si i Ti n analiz dispersiv energetic (EDX)
au fost elemente contaminante ale probelor; scala a fost de la 1 micron la 500nm lungime. (a) nanoparticule nainte de ncrcarea
cu zinc-zincul i calciul lipsesc din interiorul spectrului EDX (Ep2a) (b) nanoparticule ncrcate cu zinc naintea imersiei n saliva
artificial; zincul i calciul au fost detecate prin analiza EDX (Ep2b) (c) nanoparticule dup imersia n saliv artificial timp de 7
zile; nanoparticule observabile pe suprafaa particulelor; a fost ientificat i calciul (Ep2c) (d) Nanoparticule ncrcate cu zinc
dup 7 zile de imersie n saliv artificial; calciul i zincul au fost identificate n spectrul EDX (Ep2d).

Rezistena adeziunii la microtraciuni/ microocuri

Valorile medii ale rezistenei adeziunii la microtraciuni (TBS) i modurile de eec au

fost raportate n tabele. Valorile TBS ale rinii testate au fost similare pentru toate grupurile
testate, cu o medie a valorilor variind de la 32 la 27 megaPascali (MPa). Dup examinarea la
microscopia electronic de scanare (SEM) a suprafeelor probelor dezlipite (Fig. 3a, 3b), s-a
observat c nanoparticulele au rmas ncorporate n stratul hibrid i au fost omogen distribuite pe
suprafaa dentinei. Nanoparticulele nu s-au aglomerat i au penetrat n tubulii dentinari.
Nanoparticulele au crescut n mrime. Cteva nanoparticule polimerice au fost gsite ca fiind
acoperite de calciu i fosfor (Fig. 3; Ep3a), n timp ce altele mai dure i mai mari de asemenea au
ncorporat silicon (Fig. 3, Ep3b). Calciul a fost co-localizat mpreun cu siliciul n nanoparticule
la specimenele tratate cu adezivul Single Bond (Fig. 3, Ep3c).
Determinarea concentraiei telopeptidului C terminal din colagenul de tip I (ICTP)
Valorile medii ale concentraiilor telopeptidului C terminal din colagenul de tip I au fost
influenate de diferitele infiltraii ale rinilor (F=323.45; p<0.001). Mediile i deviaiile standard
ale concentraiilor telopeptidului C terminal din colagenul tip I eliberate din probele de dentin
sunt listate n tabel. Valorile ICTP la 4 sptmni au fost n urmtoarea ordine: fr rin>rin
simpl>rin cu nanoparticule>rin cu nanoparticule ncrcate cu zinc.

Figura 3. Imagini la microscopia electronic de scanare (SEM) ale suprafeelor dentinare dezlipite dup testarea cu
microtraciuni a adeziunii i difracia cu raze x a nanoparticulelor (a,b) dentina dezlipit infiltrat cu nanoparticule i Single Bond
dup testarea rezistenei; nanoparticulele au rmas ncorporate n stratul hibrid i au fost distribuite n mod omogen pe suprafaa
dentinei, acestea ne-aglomerndu-se, ci prnd c vor s ptrund n interiorul dentinei tubulare; cteva nanoparticule au crescut
ca i mrime ajungnd pn la 1 micron; cteva au fost acoperite cu calciu i fosfor (Ep3a), gsindu-se i nanoparticule ce au
ncorporat siliciu (Ep3b); (c) spectru de particule vizualizat prin dispersia cu raze x (XRD) dup 7 zile de imersie n saliv
artificial cu un schelet amorf i particule de zinc cu dou vrfuri distincte la 110 respectiv 320 determinnd astfel un spectru
compatibil cu cel iniial Scholzite de formare a cristalului. Scholzite este CaZn 2 (PO4)2.2H2O.
Tabel. Mediile i deviiile standard ale concentraiei telopeptidului C terminal din colagenul de tip I (ICTP) (g/L) din saliva
artificial dup 4 sptmni de imersie a probelor i rezistena adeziunii la dentin n faa microtraciunii/microocurilor (n
megaPascali MPa) i modul de eec al grupurilor experimentale

DISCUIE

Ipotezele nule testate au fost parial rejetate, ca fiind neadevrate din moment ce
nanosferele polimerice au fost cu succes ncrcate cu zinc i au fost capabile s lege calciul
indiferent de ncrctura de zinc. Nanoparticulele nu au fost active in vitro , dar au fost capabile
s sechestreze, depoziteze calciu i fosfat n prezena siliconului cnd efectiv s-au ncorporat n
stratul hibrid. ncorporarea nanoparticulelor nu a alterat rezistena adeziunii i a inhibat
activitatea metaloproteinazelor matriceale care degradeaz colagenul din dentin.

Sferele polimerice au fost cu succes ncrcate cu zinc (Fig. 2b). suprafeele acestor
particule au artat o mare concentraie de grupuri (COO-) capabile a se lega de cationi metalici.
Aceste particule imersate n soluie de ZnCl2 nu doar c au primit zinc, dar de asemenea au
reinut i calciu (Fig. 2b) datorit efectului de atracie exercitat de aceti polimeri cu terminaii
carboxil (Li i alii, 2013) i din cauza prezenei unor urme de calciu ca i impuriti din soluie.
Suprafaa grupurilor funcionale a fost de asemenea responsabil de prezena calciului n aceste
particole indiferent de ncrctura de zinc. Precipitri ale calciului au fost observate n
micorscopie electronic de scanare (SEM) i de transmisie (TEM) (Fig. 1g, 1h, 2c, 2d).
formaiuni de nanocristal au fost ntlnite pe suprafeele nanoparticulelor ncrcate cu zinc (Fig.
2c). Poate c prezena zincului a ntrziat cristalizarea compuilor de calciu (Horiuchi i alii
2009). Un schelet amorf de depozite de calciu a fost observat n analiza prin dispersie cu raze x
(XRD). Aceti compui amorfi furnizeaz o mbogire ionic local care poate fi considerat
favorabil pentru remineralizarea dentinei (Gu i alii, 2011; Liu i alii, 2011b). Vrfurile
caracteristice de scholzite [CaZn2 (PO4)2 . 2H2O] la 320 i 110 sunt observabile n spectrul
analizei prin disperie cu raze x a nanoparticulelor ncrcate cu Zn. Aceast substituire ionic
poate fi explicat pe baza diferenei radiaiei ionice a calciului (0.099 nm) i a zincului (0.074
nm). Dac radiaia ionic este mai mic atunci este uor a umple spaiile libere sau spaiile
interstiiale ale unei structuri cristaline (Song i alii, 2009, Osorio i alii 2014). Fosforul nu a
fost identificat, deci precipitatele de calciu (Fig. 1h) i formrile de cristale de calciu (Fig. 2c)
probabil corespund compui cu hidroxid de calciu i/sau compui cu carbonat de calciu
(precursori ai hidroxiapatitei) (Watson i alii, 2014). Formarea cristalelor nu a fost detectat n
analiza dispersiei cu raze x (XRD) din cauza mrimii lor foarte mici i din cauza proporiei cu
faza amorf. n spectrul dispersiei cu raze x raportul vrfurilor de intensiti variaz liniar ca
urmare raporturilor de greutate.

Cnd nanoparticulele au fost aplicate pe o dentin condiionat, acestea au rmas

ncorporate la suprafata al stratului hibrid (Fig 3a i 3b), i cu toate acestea nu au afectat
rezistena adeziunii la microtraciuni (TBS). Nanoparticulele testate au avut diametrul de 350
nm, mai mare dect limile spaiului interfibrilar ceea ce a prevenit trecerea lor n stratul hibrid
(Besinis i alii, 2012). Totui cnd au fost aplicate particule mai mici de 20 de nm, capacitatea
de infiltrare n adncuri, n dentina demineralizat a fost redus datorit aglomerrii particulelor
i/sau legrii particulelor de colagenul demineralizat (Besinis i alii, 2012). Legarea
nanoparticulelor de colagen este necesar pentru a exercita efectul de remineralizare.
Incapacitatea nanoparticulelor de a se lega de colagen va conduce la un potenial limitat de
remineralizare (Li i alii, 2013, Besinis i alii, 2014). Demineralizarea dentinei a dus la o
ncrcare pozitiv a colagenului (Besinis i alii, 2012), artnd o mare afinitate fa de
ncrcturile negative (-43.3 mV) ale nanoparticulelor polimerice testate i n final conducnd la
retenia particulelor la suprafaa dentinei. Particulele au fost observate fr a se aglomera
(datorit potenialului lor zeta negativ) n interiorul tubulilor dentinari i n interiorul stratului
hibrid (Fig 3a, 3b).

Au fost ntlnite diferite nanoparticule n interiorul stratului hibrid. Cteva nanoparticule

erau acoperite de Ca i P, n timp ce altele conineau de asemenea silicon i siliciu de la Single
Bond (Fig. 3a, 3b). Prezena siliconului poate fi important din moment ce se cunoate faptul c
siliconul faciliteaza depozitarea particulelor de CaP (Leonor i alii,2009) i joac un rol crucial
n legarea CaP la reeaua de colagen (Besinis i alii, 2014). Nanoparticulele cu siliciu s-a artat
c mediaz formarea precursorilor de CaP, necesari n etapele ulterioare de mineralizare,
acionnd ca un nucleu mineral (Watson i alii, 2014). Besinis i alii (2014) au aplicat
nanoparticule de silice i HAp pe dentina condiionat i au lansat ipoteza c fosforul se leag de
nanoparticulele de silice, sporind astfel remineralizarea cand se combin cu calciul ionic. Cu
toate acestea particulele de silice au fost acoperite cu calciu (Fig 3b; Ep3c), probabil formnd
calciu silicat, care este un compus bioactiv care poate lega fosforul (Profeta 2014).

Considernd complexitatea evenimentelor remineralizrii i multiplele tipuri de formare a

mineralelor care pot avea loc, dac nanoparticulele testate sunt capabile s promoveze formarea
mineral intrafibrilar rmne de constatat pe viitor. Nu este demonstrat dac mineralul este
restricionat la suprafa sau dac poate cltori pn n profunzimea dentinei i dac are loc
cuplarea dintre fibrele de colagen i calciul din nanocarrier-i. Cercetrile ulterioare ar trebui s
determine dac aceste nanoparticule pot funciona ca i analogi biomimetici. S-a artat c alti
polimeri pot mima funciile proteinelor dentinare (Li i alii, 2013). Sistemele biomimetice, cum
e combinaia de acizi policarboxilici (ex. acid poliacrilic sau acizii polimetacrilici) au contribuit
la asamblarea intrafibrilar a nanoapatitei (Gu i alii, 2011; Liu i alii 2011b).

Activitatea metaloproteinazelor matriceale a fost redus dup infiltrarea rinii pe dentina

complet condiionat (Osorio i alii, 2012). La control s-a observat c dentina condiionat a
eliberat 220 g/L de concentraie a telopeptidului C terminal din colagenul de tip I (ICTP).
Probele infiltrate cu rin au eliberat doar 14,4 g/L ICTP. Aceast reducere spectaculoas a
eliberrii de ICTP poate a fost datorat faptului c rina a acoperit n mod fizic matricea
prevenind astfel difuziunea oricror fragmente de telopetid rezultat n urma degradrii. Sau
rina se poate s fi infiltrat n siturile active ale metaloproteinazelor matriceale, astfel
inactivndu-le. Probele condiionate care au fost tratate cu nanoparticule i apoi infiltrate cu
rini au eliberat semnificativ mai puin ICTP dect au fcut-o probele tratate doar cu rin.
Probele condiionate i tratate cu nanoparticule ncrcate cu zinc i care apoi au fost infiltrate cu
rini, au artat nivele i mai mici ale eliberrii de ICTP chiar dect probele care aveau
nanoparticule fr zinc. S-a artat faptul c zincul a exercitat un rol de protecie fa de
degradarea metaloproteinazelor matriceale (Osorio i alii, 2011) i c induce remineralizarea la
interfaa de legtur (Toledano i alii, 2012, 2013). Efectul tratamentului cu nanoparticule sau
nanoparticule ncrcate cu zinc fr ulterioar infiltrare cu rin nu a fost testat. Ulterioare studii
experimentale ar trebui s determine efectele particulelor de NanoMyP utilizat ca filler singular,
fr rin de infiltrare, urmrindu-se eliberarea de ICTP. Skarja i alii (2009) au raportat c
polimerii hidroxamici scad activitatea enzimatic a metaloproteinazelor matriceale activate. O
interaciune fizic i un mecanism de legtur ntre situl activ pentru zinc al metaloproteinazelor
matriceale i grupele funcionale COO- ale acidului hidroxamic la suprafaa nanoparticulelor a
fost demonstrat. Nanoparticulele testate ar produce un efect inhibitor similar. Cu toate acestea,
cteva metaloproteinaze matriceale din dentin au fost inaccesibile grupurilor COO- datorit
faptului ca nanocarrierii nu au putut penetra n spaiul interfibrilar. n plus, reducerea cu 62 % a
eliberrii de ICTP (cnd nanoparticulele ne-ncrcate cu zinc au fost folosite) pot fi puse de
asemenea i pe seama altor factori i nu atribuite doar abilitii gruprii COO- de a se lega de
metaloproteinazele matriceale.

Cercetri ulterioare ar trebui efectuate cu privire la activitatea nanoparticulelor de a

elibera diferii ioni ntr-o manier susinut i s determine cum concentraia mare de ioni de zinc
nu produce citotoxicitate celular. Nanoparticulele pot fi de asemenea conjugate cu diferite
molecule terapeutice. Un sistem sferic polimeric capabil s combine bioactivitatea cu o
capacitate de control a eliberrii de droguri sau proteine este ideal nu doar pt dini ci i pt
regenerarea osoas (Wu i alii, 2011).

Aceast investigaie confirm abilitatea nanoparticulelor ncrcate cu zinc de a se lega de

dentina condiionat, demineralizat i de a rmne n stratul hibrid dup infiltrarea rinii.
Infiltrarea rinii reduce foarte mult rata de eliberare a ICTP din matricea dentinar, care atinge
valori minime cnd sunt prezeni nanocarrier-i ncrcai cu zinc. Nanoparticulele polimerice pot
fi utile n adeziunea la dentin cnd sunt utilizai adezivii condiioneaz i spal.
 BIBLIOGRAFIE

1. BESINIS A, VAN NOORT R, MARTIN N (2012). Infiltration of demineralized dentin with silica
and hydroxyapatite nanoparticles. Dent Mater 28:1012-1023.
2. BESINIS A, VAN NOORT R, MARTIN N (2014). Remineralization potential of fully demineralized
dentin infiltrated with silica and hydroxyapatite nanoparticles. Dent Mater 30:249-262.
3. GU LS, KIM YK, LIU Y, TAKAHASHI K, ARUN S, WIMMER CE, ET AL. (2011). Immobilization of
a phosphonated analog of matrix phosphoproteins within cross-linked collagen as a templating
mechanism for biomimetic mineralization. Acta Biomater 7:268-277.
4. HOPPE A, GLDAL NS, BOCCACCINI AR (2011). A review of the biological response to ionic
dissolution products from bioactive glasses and glassceramics. Biomaterials 32:2757-2774.
5. HORIUCHI S, ASAOKA K, TANAKA E (2009). Development of a novel cement by conversion of
hopeite in set zinc phosphate cement into biocompatible apatite. Biomed Mater Eng 19:121-131.
6. LEONOR IB, BALAS F, KAWASHITA M, REIS RL, KOKUBO T, NAKAMURA T (2009). Biomimetic
apatite deposition on polymeric microspheres treated with a calcium silicate solution. J Biomed
Mater Res B Appl Biomater 91:239-247.
7. LI J, YANG J, LI J, CHEN L, LIANG K, WU W, ET AL. (2013). Bioinspired intrafibrillar
mineralization of human dentine by PAMAM dendrimer. Biomaterials 34:6738-6747.
8. LIU Y, LI N, QI YP, DAI L, BRYAN TE, MAO J, ET AL. (2011a). Intrafibrillar collagen
mineralization produced by biomimetic hierarchical nanoapatite assembly. Adv Mater 23:975-
980.
9. LIU Y, TJDERHANE L, BRESCHI L, MAZZONI A, LI N, MAO J, ET AL. (2011b). Limitations in
bonding to dentin and experimental strategies to prevent bond degradation. J Dent Res 90:953-
968.
10. LYNCH RJ, CHURCHLEY D, BUTLER A, KEARNS S, THOMAS GET AL. (2011). Effects of zinc
and fluoride on the remineralisation of artificial carious lesions under simulated plaque fluid
conditions. Caries Res 45:313-322.
11. MUSYANOVYCH A, LANDFESTER K (2014). Polymer micro- and nanocapsules as biological
carriers with multifunctional properties. Macromol Biosci 14:458-477.
12. OSORIO R, YAMAUTI M, OSORIO E, RUIZ-REQUENA ME, PASHLEY DH, TAY FR, ET AL. (2011).
Zinc reduces collagen degradation in demineralized human dentin explants. J Dent 39:148-153.
13. OSORIO R, YAMAUTI M, SAURO S, WATSON TF, TOLEDANO M (2012). Experimental resin
cements containing bioactive fillers reduced MMPs mediated dentin collagen degradation. J
Endod 38:1227-1232.
14. OSORIO R, OSORIO E, CABELLO I, TOLEDANO M (2014). Zinc induces apatite and Scholzite
formation during dentin remineralization. Caries Res 48:276-290.
15. PROFETA AC (2014). Dentine bonding agents comprising calcium-silicates to support
proactive dental care: origins, development and future. Dent Mater J 33:443-452.
16. SAURO S, OSORIO R, FULGENCIO R, WATSON TF, CAMA G, THOMPSON I, ET AL. (2013a).
Remineralisation properties of innovative light-curable resinbased dental materials containing
bioactive micro-fillers. J Mater Chem B 1:2624-2638.
17. SAURO S, OSORIO R, OSORIO E, WATSON TF, TOLEDANO M (2013b). Novel lightcurable
materials containing experimental bioactive micro-fillers remineralise mineral-depleted bonded-
dentine interfaces. J Biomater Sci Polym Ed 24:940-956.
18. SKARJA GA, BROWN AL, HO RK, MAY MH, SEFTON MV (2009). The effect of a hydroxamic
acid-containing polymer on active matrix metalloproteinases. Biomaterials 30:1890-1897.
19. SONG W, TIAN M, CHEN F, TIAN Y, WAN C, YU X (2009). The study on the degradation and
mineralization mechanism of ion-doped calcium polyphosphate in vitro. J Biomed Mater Res B
Appl Biomater 89:430-438.
20. TOLEDANO M, YAMAUTI M, RUIZ-REQUENA ME, OSORIO R (2012). A ZnOdoped adhesive
reduced collagen degradation favouring dentine remineralization. J Dent 40:756-765.
21. TOLEDANO M, SAURO S, CABELLO I, WATSON T, OSORIO R (2013). A Zn-doped etch-and-
rinse adhesive may improve the mechanical properties and the integrity at the bonded-dentin
interface. Dent Mater 29:e142-e152.
22. WATSON TF, ATMEH AR, SAJINI S, COOK RJ, FESTY F (2014). Present and future of glass-
ionomers and calcium-silicate cements as bioactive materials in dentistry: biophotonics-based
interfacial analyses in health and disease. Dent Mater 30:50-61.
23. WU C, ZHANG Y, FAN W, KE X, HU X, ZHOU Y, ET AL. (2011). CaSiO3 microstructure
modulating the in vitro and in vivo bioactivity of poly(lactide-co-glycolide) microspheres. J
Biomed Mater Res Part A 98:122-131