PARTEA PRACTICĂ

SCOP
Determinarea concentrației optime de vancomicină pentru recuperarea tulpinilor de enterococci
rezistenți la vancomicină (VRE) din gunoi de grajd.

MATERIALE ȘI METODE
În vederea experimentului s-a folosit ca matrice gunoi de grajd în cantitate de 3 grame. 1 Probele
au fost contaminate cu tulpină bacteriană VRE cu soluție salină sterilă(vancomycin-resistance
enterococci) și incubată în mediul de îmbogățire cu bulion azidă de sodiu (NaN3) pentru 24 de
ore.
Pentru metoda de direct plating s-au utilizat plăci cu mediu selectiv VRE, AFS (apă fiziologică
sterilă), soluție McFarland 0.5 la 1,5x108 UFC/mL și antibioticul de interes, vancomicină, ce are
ca efect reducerea background-ul.
S-au folosit mai multe concentrații de VER: 4mg/mL, 8mg/mL, 16mg/mL și 32mg/mL.
Concentrațiile minime inhibitorii (MIC) au fost interpretate utilizând următoarele puncte de
sensibilitate conform standardelor CLSI: vancomicină ≤ 4 𝜇g/mL (sensibil), 8-16 𝜇g/mL
(intermediar), ≥ 32 𝜇g/mL (rezistent).2
În 9 tuburi se pun aproximativ 3 grame de gunoi de grajd cu o densitate de 105 UFC/mL.și 27 de
mL de mediu, din care 26 mL mediu și 1mL suspensie bacteriană VRE în soluție salină sterilă.
Din cele 9 tuburi, 4 nu prezintă ținta, mai exact tulpina VRE. Din cele 5 tuburi rămase unul este
cel control și nu conține antibioticul vancomicină. Atât tuburile fără țintă, cât și cele cu țintă,
sunt numerotate în funcție de concentrațiile folosite de vancomicină: 4mg/L, 8mg/mL, 16mg/mL
și 32mg/mL.
Se va realiza un volum total de 60 mL de mediu pentru cele două categorii de tuburi, cele cu țintă
și fără țintă, cât și pentru fiecare concentrație în parte.
Cantitatea de antibiotic folosită este de 100mg/mL diluție 1/100
1
info despre recoltarea probei: cand a fost recoltata, in ce conditii a fost pastrata, etc
2
e corect cu micro???