Activarea limfocitelor

GENERALITATI

LT LB

1. Semnal de activare: Ag 1. Semnal de activare: Ag (T-dep)

2. Semnal de co-stimulare: CD28 - B7 2. Semnal de co-stimulare: CD40-CD40L

3. Semnal 3: citokine (IL-2) 3. Semnal 3: citokine (IL-4)

LT activat LB activat
Proliferare & Diferentiere Proliferare & Diferentiere
Cuprins
• Activarea LT
• 3 semnale de activare
• Diferente LTh / LTc naiv
• Semnalizare intracelulara
• ZAP-70
• LAT

• Activare LB (Ag T-dep)

• 3 semnale de activare
• Semnalizare intracelulara
• SYK/ BTK
• BLNK

• De retinut - concluzii
Cuprins
• Activarea LT
• 3 semnale de activare
• Diferente LTh / LTc naiv
• Semnalizare intracelulara
• ZAP-70
• LAT

• Activare LB (Ag T-dep)

• 3 semnale de activare
• Semnalizare intracelulara
• SYK/ BTK
• BLNK

• De retinut - concluzii
1. Semnal de activare: Ag

SMAC (SupraMolecular Activation Complex) = Sinapsa Imunologica

• 50-100 MHC-pp  8000 – 30000 TCR

• semnalizare sustinuta ~ 30h
1a. Modificari - actina

SMAC (SupraMolecular Activation Complex) = Sinapsa Imunologica

• 50-100 MHC-pp  8000 – 30000 TCR

• semnalizare sustinuta ~ 30h
1b. Molecule de adeziune
LT APC
• LFA-1 (Cell-Cell; Cell-ECM) • ICAM-1, ICAM-2
• TCR/CD3/CD4 sau CD8 (src K) • MHC II sau I – Ag(pp)
• ICAM-3 • LFA-1
• CD2 (LFA-2) (Cell-Cell) • LFA-3 (CD42/CD48)

Conjugat LT - APC

• Polarizarea TCR & MHC spre SMAC

• Semnal sustinut TRC-MHC
• Ag legat prea slab la TCR 
NU activare
• Ag legat prea strans la TCR 

Proces dinamic
1c. Sinapsa imunologica

LT APC (LB)
2. Semnal de co-stimulare: CD28 – B7
LT Conjugat LT - APC APC
• LFA-1 (Cell-Cell; Cell-ECM) • ICAM-1, ICAM-2

• TCR/CD3/CD4 sau CD8 (src K) • MHC II sau I – Ag(pp)

•1  CD28 c • B7 +++

•CD28-B7  CD40L (TNFR) • CD40 (TNFR)

•  CTLA-4 • B7
 ICOS • ICOSL (LTh2)
• OX40L (LTh1)
 OX40
• CD70 (LT cu memorie)
CD27
• ICAM-3 • LFA-1
• CD2 (LFA-2) (Cell-Cell) • LFA-3 (CD42/CD48)
2. Semnal de co-stimulare: CD28 – B7
LT Conjugat LT - APC APC
• LFA-1 (Cell-Cell; Cell-ECM) • ICAM-1, ICAM-2

• TCR/CD3/CD4 sau CD8 (src K) • MHC II sau I – Ag(pp)

•1  CD28 c • B7 +++

•CD28-B7  CD40L (TNFR) • CD40 (TNFR)

•2-3 zile  CTLA-4 c • B7

 ICOS • ICOSL (LTh2)
• OX40L (LTh1)
 OX40
• CD70 (LT cu memorie)
CD27
• ICAM-3 • LFA-1
• CD2 (LFA-2) (Cell-Cell) • LFA-3 (CD42/CD48)
2. Semnal de co-stimulare: CD28 – B7
LT Conjugat LT - APC APC
• LFA-1 (Cell-Cell; Cell-ECM) • ICAM-1, ICAM-2

• TCR/CD3/CD4 sau CD8 (src K) • MHC II sau I – Ag(pp)

•1  CD28 c • B7 +++

•CD28-B7  CD40L (TNFR) • CD40 (TNFR)

•2-3 zile  CTLA-4 c • B7

 ICOS • ICOSL (LTh2)
CD28-B7
• OX40L (LTh1)
 OX40
• CD70 (LT cu memorie)
CD27
• ICAM-3 • LFA-1
• CD2 (LFA-2) (Cell-Cell) • LFA-3 (CD42/CD48)
2. Semnal de co-stimulare: CD28 – B7
LT Conjugat LT - APC APC
• LFA-1 (Cell-Cell; Cell-ECM) • ICAM-1, ICAM-2

• TCR/CD3/CD4 sau CD8 (src K) • MHC II sau I – Ag(pp)

•1  CD28 c • B7 +++

•CD28-B7  CD40L (TNFR) • CD40 (TNFR)

•2-3 zile  CTLA-4 c • B7

 ICOS • ICOSL (LTh2)
CD28-B7
• OX40L (LTh1)
 OX40
CD27Daca nu se produce CD28-B7
• CD70
(LTANERGIE
cu memorie)

• ICAM-3 • LFA-1
• CD2 (LFA-2) (Cell-Cell) • LFA-3 (CD42/CD48)
 2. Molecule co-stimulatorii
1. CD28 3. CTLA4 (~ 75% str. CD28)
= homodimer (L activate, LTh, ½ LTc) = homodimer
- Afinitate moderata pt B7 - Afinitate mare pt B7
- Stabilizeaza mRNA pt IL-2 - Coada citoplasmatica: ITIM (SHP-2)
- LT repaus (Golgi)  la 2-6h Ag:
2. B7 vezicule la interfata SMAC  la 2-3
zile: pe S
- Inhiba G1-S
B7-1 (CD80) B7-2 (CD86)
- ↗ rapid - ↗ la 48h
4. ICOS (~ str./ fct. CD28)
- T = 96h - T = 72h
- Secretie de IL-4 , IL-10
 GM-CSF  IL-4 & limfotoxina α
- Stabilizeaza mRNA pt CD40-L

DC: CD40 (+ IFNγ, GM-CSF)  +++ B7-1

5. CD40L (TNFR)
LB: CD40  +++ B7-1 & B7-2
- Alte TNFR: OX40, 4-1BB

- Secretie: citokine
- Expresie: R pt citokine
3. Semnal: CITOKINE 1 + 2  3

Transcriptie genica

1. Gene immediate (T < 30 min)

F.T.: Gene precoce & tardive

2. Gene precoce (T = 30 min – 24 h)

CRITIC !!!
Citokine (IL-2, IL-3, IL-4, IL-5), chemokine, F de crestere
Supravietuire/ Apoptoza
R pt citokine (IL-2Rα / CD25)

3. Gene tardive (T > 24-48 h)

noi molecule de adeziune, factori citotoxici, molecule specifice LTefectorii

F.T. pt IL-2: IL-2R:

• NFAT • Heterodimer βγ (< afinitate)
• NH-kB • Heterotrimer αβγ(> afinitate)
• AP-1
• Oct-1
AUTOCRIN
Cuprins
• Activarea LT
• 3 semnale de activare
• Diferente LTh / LTc naiv
• Semnalizare intracelulara
• ZAP-70
• LAT

• Activare LB (Ag T-dep)

• 3 semnale de activare
• Semnalizare intracelulara
• SYK/ BTK
• BLNK

• De retinut - concluzii
 Activarea LTh naiv Activarea LTc naiv

De comparat
MHC-II-Ag(pp) MHC-II-Ag(pp)

Legenda:
Cuprins
• Activarea LT
• 3 semnale de activare
• Diferente LTh / LTc naiv
• Semnalizare intracelulara
• ZAP-70
• LAT

• Activare LB (Ag T-dep)

• 3 semnale de activare
• Semnalizare intracelulara
• SYK/ BTK
• BLNK

• De retinut - concluzii
SEMNALIZAREA INTRACELULARA
• ZAP70 – Zeta Associated Protein 70
• LAT – Linker for Activation of T cells

PI3K

PLC-γ
PIP3 SAPK/
JNK

Vav1 PKBAkt p38

Foxo
ATF c-myc
SEMNALIZAREA INTRACELULARA
1. CD45 (fosfataza)  LCK / FYN

2. LCK/ FYN  CD4-P/ CD3(ITAM-P)

3. LCK/ FYN  ZAP70-P

SEMNALIZAREA INTRACELULARA
4. ZAP70-P  LAT-P

5. LAT-P Vav1, PLC-γ, PI3K, ADAP

5(a) Vav1  Rac/Cdc42  Actina

PI3K

PLC-γ

Vav1
SEMNALIZAREA INTRACELULARA
5(b) ADAP  cell adhesion
5(c) PLC-γ  PIP2 …
5(d) PI3K  PIP2 …

PI3K

PLC-γ
PIP3 SAPK/
JNK

Vav1 PKBAkt p38

Foxo
ATF c-myc
SEMNALIZAREA INTRACELULARA

5(c) PLC-γ  PIP2  IP3 + DAG

PI3K

PLC-γ

Vav1

c-myc
SEMNALIZAREA INTRACELULARA

5(c) PLC-γ  PIP2  IP3 + DAG

PI3K

PLC-γ

Vav1

c-myc
SEMNALIZAREA INTRACELULARA

5(c) PLC-γ  PIP2  IP3 + DAG

PI3K

PLC-γ

Vav1

c-myc

NF-kB  IL-2
SEMNALIZAREA INTRACELULARA

5(c) PLC-γ  PIP2  IP3 + DAG

PI3K

PLC-γ

Vav1

c-myc

AP-1  Il-2, bcl-XL

c-myc
SEMNALIZAREA INTRACELULARA
5(d) PI3K  PIP2  PIP3  SAPK / JNK (stress activated protein kinase/ c-jun N-terminal kinase)
 p38
 Akt

PI3K

PLC-γ
PIP3 SAPK/
JNK

Vav1 PKBAkt p38

AP-1
Foxo
ATF c-myc

Foxo, ATF, AP-1, c-myc

LTnaïve vs LTmemorie
LTnaive : DC  ggli limfatici

LTmemorie : DC, LB, Macrofage  oriunde

• [Ag] de 10-50 x mai mica

• T semnalizare sustinuta <

• T co-stimulare < : exprima deja CD28, CD40L

• Nr mare de aggregate mb (lipids rafts)

• LTc memorie activate fara LTh

• Activate  prolifereazaa rapid, T >

Cuprins
• Activarea LT
• 3 semnale de activare
• Diferente LTh / LTc naiv
• Semnalizare intracelulara
• ZAP-70
• LAT

• Activare LB (Ag T-dep)

• 3 semnale de activare
• Semnalizare intracelulara
• SYK/ BTK
• BLNK

• De retinut - concluzii
1. Activare LB
1. Semnal: Ag
2. Semnal: CD40 – CD40L
- Domeniu intracitoplasmatic:
TRAF2/3  NF-kB
a. Activare
b. Comutare de clasa
c. Fm centrilor germinali

3. Semnal: citokine
LB: +++ IL-4R
(LTh activat: IL-4)
1. Activare LB
1. Semnal: Ag
2. Semnal: CD40 – CD40L
- Domeniu intracitoplasmatic:
TRAF2/3  NF-kB
a. Activare
b. Comutare de clasa
c. Fm centrilor germinali

3. Semnal: citokine
LB: +++ IL-4R
(LTh activat: IL-4)

Il-2,-4,-5, -10, TGFβ  proliferare LB activate

Il-2,-6  plasmocite
1. Activare LB
1. Semnal: Ag
2. Semnal: CD40 – CD40L
- Domeniu intracitoplasmatic:
TRAF2/3  NF-kB
a. Activare
b. Comutare de clasa
c. Fm centrilor germinali

3. Semnal: citokine
LB: +++ IL-4R
(LTh activat: IL-4)

Daca nu se produce CD40-CD40L 

ANERGIE
Cuprins
• Activarea LT
• 3 semnale de activare
• Diferente LTh / LTc naiv
• Semnalizare intracelulara
• ZAP-70
• LAT

• Activare LB (Ag T-dep)

• 3 semnale de activare
• Semnalizare intracelulara
• SYK/ BTK
• BLNK

• De retinut - concluzii
2. Semnalizare LB

LB LT

• CD45  src Kinaze (LYN, BLK, FYN) • CD45  src Kinaze (LCK, FYN)

• ITAM (Igα, Igβ) • ITAM (CD3), CD4

• SYK sau BTK • ZAP-70

• BLNK (proteina adaptor) • LAT (proteina adaptor)

• PLC-γ (IP3, DAG, Ras), Vav1 • PLC-γ (IP3, DAG, Ras), Vav1, PI3K..

F.T.
NFAT, NF-kB, AP-1(c-jun, c-fos), c-myc
De retinut
LT, LB: 3 semnale de activare
1. Ag
2. CD28 – B7 (LT) si CD40-CD40L (LB) !!! Activare/ Anergie
3. Citokine: IL-2 (LT) si IL-4 (LB) !!! Supravietuire/ Apoptoza
T: ore-zile (LT), min-ore (LB)

Calea de semnalizare intracelulara:

- motive ITAM – src kinase
- Kinaze “cheie”: ZAP-70 (LT) si SYK/ BTK (LB)
- Proteine adaptor “ancora”: LAT (LT) si BLNK (LB)
- Factori Transcriptionali: NFAT, NF-kB, AP-1, c-myc  citokine,
Rcitokine, proteine de adeziune etc..