Imunosenzor amperometric pentru

biomarkerii cancerului ovarian şi uterin

Directorul proiectului: prof dr. Robert Sandulescu

Catedra de Chimie Analitica, Facultatea de Farmacie
Universitatea de Medicina si Farmacie Iuliu Hatieganu
Cluj-Napoca
rsandulescu@umfcluj.ro
 Obiectivele proiectului

Cancerul • Prognoza nefavorabila, mortalitate ridicata

ovarian datorata depistarii tardive

Diagnosticare • Procent mai mare de

precoce supravietuire

Dispozitive de • O opțiune bună pentru

diagnosticare detectarea rapida si sensibila a
rapida
markerilor tumorali
• Dispozitive sensibile, pret
scazut și ușor de utilizat
Immunosenzori capabili să detecteze
concentratii scazute ale
markerilor tumorali
 Obiective principale
 Dezvoltarea de noi dispozitive, minim
invazive, pentru diagnosticarea precoce a
cancerului ovarian și pentru monitorizarea
terapiei care sunt mai specifice și sensibile
comparativ cu metodele utilizate în
prezent.

 Elaborarea de siruri de electrozi

(multiarray) pentru detectarea simultană
a mai multor biomarkeri.
 Imunosenzori pentru detectia
biomarkerilor tumorali
Markerii tumorali:
• Nivele crescute in ser –
asociate cu procesele
canceroase
• Rol important in:
• Screening
• Diagnostic
• Prognostic
• Stabilirea activitatii şi
complicatilor bolii
• Monitorizarea terapiei
 Mucine
MUCINELE
• Glicoproteine prezente in
tesuturile epiteliale – protectie
şi lubrifiere
• Mentinute intre valori normale
in conditii fiziologice
• Supraexprimate şi
hipoglicozilate in procesele
neoplazice
• Implicate in patogeneza
cancerului ovarian
(MUC1, MUC4, MUC16)
 Imunosenzori pentru
detectia MUC1
• Diverse configuratii utilizate pentru detectia MUC1:

 Nanoparticule magnetice

 Nanoparticule metalice (Au)

 Polimeri conductori functionalizati

 Imunosenzori pe baza de
nanoparticule magnetice

Anca Florea, Andrea Ravalli, Cecilia Cristea, Robert Sandulescu, Giovanna Marrazza, Aptasensor for multiplex detection of Mucin1
tumor marker addressable to hospital patients for cancer screening, Clinica Chimica Acta, accepted.
 Imunosenzori pe baza de
nanoparticule magnetice
Type of Linear LOD (ppb) R2 Average
assay range (ppb) RSD %

Antibody – 0-10 2.54 0.89 8

Antibody

Aptamer – 0-10 2.10 0.94 11

Antibody

Aptamer – 0-10 1.36 0.97 7

Aptamer
 Imunosenzori pe baza de
nanoparticule magnetice

Studii de selectivitate a senzorilor dezvoltati in diverse confıguratii, fata de alte

proteine din familia mucinelor: MUC1 (5 ng mL-1), MUC4 (5 ng mL-1) şi MUC16
(35 U mL-1) (configuratie Anticorp – Anticorp : histograme albe; Aptamer –
Anticorp : histograme gri inchis; Aptamer – Aptamer: histograme gri inchis).
 Imunosenzori pe baza de
nanoparticule metalice
Route A
-S- -S-
HS -
-S- -S-
-S- -S-
a) b) -S- c) -S- d)

Route B

HS -
-S- -S-

-S- -S-
a) f) h)
b)
-S- -S-
e) g
)

Gold nanoparticle HS - Thiolated aptamer

Methylene blue
MUC1 protein Mercaptohexanol

Anca Florea, Zahra Taleat, Cecilia Cristea, Mohammad Mazloum-Ardakani, Robert Săndulescu, Label free MUC1 aptasensors based on
electrodeposition of gold nanoparticles on screen printed electrodes, Electrochemistry Commun. , 33 (2013), 127-130.
 Imunosenzori pe baza de
nanoparticule metalice

Limite de detectie intre

3.6 ng mL-1 si 0.95 ng mL-1

Optimizarea parametrilor experimentali: (B) timp de incubare cu aptamerul (C)

concentratia aptameruluı (D) timp de incubare cu antigenul; pentru senzorul bazat
pe NP de Au-electrod planar de aur (E) timp de incubare cu aptamerul, pentru
senzorul bazat pe NP de Au-albastru de metilen
 Imunosenzor pe baza de
polimeri functionalizati

Sensibilitate 0.62 ppb

Domeniu de liniaritate 1-12 ppb

Zahra Taleat, Cecilia Cristea, Giovanna Marrazza, M. Mazloum-Ardakani, Robert Săndulescu, Electrochemical Immunoassay Based on
Aptamer-Protein Interaction and Functionalized Polymer for Cancer Biomarker Detection, Journal of Electroanalytical
Chemistry, Volumes 717–718, 2014, Pages 119-124.
 Senzor pe baza de
receptori mimetici 20
after elution
-15
3.8x10 M GMT
0 -13
3.8x10 M GMT

Current density (A/cm )

-20

2
Polimeri moleculari imprimati pe -40

baza de aminotiofenol pentru -60

-80

determinarea unui antineoplazic -100

implicat in tratamentul -120

-400 -200 0 200 400 600 800

cancerului ovarian, gemcitabina. Potential (mV vs SCE)

Domeniu linear: 3.8 fM - 38 nM

Limita de detectie: 0.003 fM.
 Organizare proiect
2 2

• Participanti: profesor
conferentiar
asistent
post doc
doctoranzi

1 1

Mobilitati

• Buget: 2013
Personal 2012
2011

Echipamente

0 20000 40000 60000 80000 100000120000140000

 Diseminare
• Articole ISI:
 I. Diaconu, C. Cristea, V. Hârceagă, G. Marrazza, I. Berindan-Neagoe, R. Sandulescu,
“Electrochemical immunosensors in breast and ovarian cancer”, Clin. Chim. Acta vol. 425, pp. 128-
138, 2013, IF 2,850.
 A. Florea, Z. Taleat, C. Cristea, M. Mazloum-Ardakani, R. Săndulescu, “Label free MUC1 aptasensors
based on electrodeposition of gold nanoparticles on screen printed electrodes” Electrochem. Comm.
Vol. 33, pp.127-130, 2013, IF 4,859.
 Z. Taleat, C. Cristea, G. Marrazza, M. Mazloum-Ardakani, R. Săndulescu, “Electrochemical
Immunoassay Based on Aptamer- Protein Interaction and Functionalized Polymer for Cancer
Biomarker Determination”, J. Electroanal. Chem., 717–718, Pages 119-124, 2014., IF 2,672.
 A. Florea, C. Cristea, R. Sandulescu, MUC1 marker for the detection of ovarian cancer. A review,
Farmacia, 62(1), 1-13, 2014, IF 0,669.
 Mihaela Tertis, Anca Florea, Robert Sandulescu and Cecilia Cristea, Carbon Based Electrodes
Modified with Horseradish Peroxidase Immobilized in Conducting Polymers for Acetaminophen
Analysis, Sensors, 2013, 13, 4841-4854; doi:10.3390/s130404841, IF 1,953.
 Adela Maghear, Cecilia Cristea, Ana Marian, Iuliu O. Marian, Robert Săndulescu, A novel biosensor
for acetaminophen detection with romanian clays and conductive polymeric films, Farmacia 61, vol 1 ,
2013, pages 1- 11. IF 0,669
 A. Florea, A. Ravalli, C. Cristea, R. Sandulescu, G. Marrazza, “Aptasensor for multiplex detection of
Mucin1 tumor marker addressable to hospital patients for cancer screening”, Clin Chim Acta,
accepted, 2014, IF 2,850.
 Mihaela Tertiş, Anca Florea, Bogdan Feier, Iuliu Ovidiu Marian, Luminţa Silaghi-Dumitrescu,
Alexandru Cristea, Robert Săndulescu, Cecilia Cristea, Electrochemical Impedance Studies on Single
and Multi Wall Carbon Nanotubes – Polymer Nanocomposites for Biosensors Development, Journal
of Nanoscience and Nanotechnology, accepted, IF 1,149.
 Diseminare
• Articole BDI si proceedings-uri indexate ISI:

 A. Ravalli, G. Marrazza, A. Florea, C. Cristea, R, Sandulescu, Electrochemical

immunoassay for mucine 1 detection as diagnostic tool in ovarian cancer, Sensors and
Microsystems in Lecture Notes in Electrical Engineering, Volume 268, pp 165-168, 2014,
Ed. Springer, DOI 10.1007/978-3-319-00684-0_31, ISBN 978-3-319-00683-3.
 Zahra Taleat, Cecilia Cristea, Giovanna Marrazza, Robert Săndulescu, Electrochemical
sandwich immunoassay for the ultrasensitive detection of human MUC1 cancer biomarkers,
International Journal of Electrochemistry, 2013, Article ID 740265, 6 pages,
http://dx.doi.org/10.1155/2013/740265
 Luminiţa Fritea, Anca Florea, Mihaela Tertiş, Alexandru Cristea, Robert Săndulescu and
Cecilia Cristea, Polymer based nanostructures for innovative bio and immunosensors
development, Meditech 2014, 21-23 Iunie, Cluj-Napoca, Romania
 Cecilia Cristea, Anca Florea, Ramona Galatus, Ede Bodoki, Robert Sandulescu, Daniel
Moga and Dorin Petreus, Innovative immunosensors for early stage cancer diagnosis and
therapy monitoring, The International Conference on Health Informatics IFMBE
Proceedings Volume 42, 2014, pp 47-50, ISBN 978-3-319-03005-0,
 Anca Florea, Mihaela Tertis, Alexandru Cristea, Robert Sandulescu, Cecilia Cristea,
Designing polymer-based immunosensing platforms for cancer biomarker detection EHB
2013, 21-13 noiembrie 2013, Iasi, Romania; E-Health and Bioengineering Conference
(EHB), 2013 Digital Object Identifier: 10.1109/EHB.2013.6707247 Publication Year: 2013,
Page(s): 1 - 4